CN109394563A - 一种干细胞培养基脂质体的制备方法及在护肤品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种干细胞培养基脂质体的制备方法及在护肤品中的应用。该方法由以下三个步骤组成：（1）将干细胞培养基中的营养物质通过脂质体包裹；（2）脂质体携带营养物质进入皮肤，被皮肤吸收；（3）经过皮肤吸收以后，脂质体包裹的营养物质可以活化皮肤细胞。本发明利用脂质体能对营养物质进行包裹的特点，将干细胞培养基中的营养物质作为脂质体包裹的对象；利用脂质体对于皮肤表皮的高渗透性的特点，携带营养物质的脂质体会高效渗透入表皮，将营养物质传递给皮肤细胞，从而刺激皮肤中各类细胞的功能，发挥美容护肤的作用。

Description

一种干细胞培养基脂质体的制备方法及在护肤品中的应用
技术领域
本发明属于美容护肤技术领域，具体涉及一种干细胞培养基脂质体的制备方法及在护肤品中的应用，利用脂质体包裹细胞培养基中的营养物质，进入皮肤，刺激皮肤干细胞，从而达到再生修复皮肤的目的。尤其适用于美容护肤品的生产制备。
背景技术
皮肤的损伤衰老是由细胞问题所导致，表皮基底层干细胞对于皮肤细胞的新陈代谢起到至关重要的作用：皮肤外层的表皮终身不断自我更新，其基底部的干细胞持续增殖分化以取代外层终末分化细胞，从而进行组织结构的更新，外层细胞的死亡脱落与基底干细胞的分裂维持一定的平衡，这是维持正常的组织结构和细胞内环境稳定的基本要求。
干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进多种来源的人类干细胞的生长，如骨髓、脐带、皮肤。干细胞培养基可促进人类干细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。具有以下特点：无菌、无血清、不含异源动物成分，所有成分都是明确的，包括无机离子，氨基酸，蛋白质，不含抗生素；能够培养不同来源的人类间充质干细胞；能维持人类干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态；极低的背景分化率；维持干细胞的自我更新及多向分化潜能。
脂质体是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25-1000nm不等。脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部。脂质体能高效渗透到皮肤基底层，比一般护肤品吸收更快效果更佳,运用于基础护肤品中，效力自然比传统护肤品更胜一筹。
利用脂质体能对营养物质进行包裹的特点，将干细胞培养基中的营养物质作为脂质体包裹的对象；利用脂质体对于皮肤表皮的高渗透性的特点，携带营养物质的脂质体会高效渗透入表皮，将营养物质传递给皮肤细胞，从而刺激皮肤中各类细胞的功能，发挥美容护肤的作用。
发明内容
本发明之目的在于将脂质体包裹技术与干细胞培养基结合，利用脂质体的包裹能力与高效渗透性，将干细胞培养基的有效成分传递到皮肤，刺激皮肤细胞，从而达到修复皮肤细胞，美容护肤的目的。提供了一种美容护肤的思路。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种干细胞培养基脂质体，由脂质体包裹干细胞培养基提取物组成。
包括以下原料：磷脂0.5-1g；胆固醇0.1-0.5g；乙醚30-40mL，干细胞培养基溶液20-30 mL，所述干细胞培养基溶液的浓度为10mg/mL。
制备方法包括以下步骤：将磷脂和胆固醇置于小烧杯中，加入乙醚，在磁力搅拌器上加热至溶解，加入干细胞培养基溶液继续搅拌、乳化，直至乙醚挥发尽，成为淡黄色或白色的乳状液体。
所述磷脂包括天然磷脂和合成磷脂。
所述天然磷脂为豆磷脂或卵磷脂中的一种。
所述合成磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种。
将上述制得的干细胞培养基脂质体应用于护肤品的制备中。
本发明的优点在于：
（1）本发明提供的是一种从干细胞培养基中提取营养物质用制备于美容护肤产品的方法，使用本方法可以有效刺激皮肤干细胞，从而达到皮肤修复或是抗衰的目的；
（2）本发明利用的干细胞培养基化学成分明确，使用安全可靠；
（3）本发明利用的脂质体包裹技术，已广泛运用于药品，化妆品等行业，使用安全可靠；
（4）脂质体能高效渗透进皮肤，将干细胞培养基通过脂质体包裹进入皮下，解决了大分子物质无法透过皮肤角质层的问题，同时脂质体自身具有护肤价值，也使所制得护肤品同时具备保湿、延缓衰老的效果，从而使产品作用更直接有效，具有重要的应用价值；
（5）脂质体所含有的磷脂和胆固醇，在加热状态下与干细胞培养基中的有效成分充分融合、反应，使制备得到的成品具有更好的刺激干细胞增殖的效果。
附图说明
图1为以透射电子显微镜在80kV电子束加速电压下进行观察，脂质体纳米粒粒径在100nm左右，为囊状或圆球状结构。标示：100nm。
图2为在荧光显微镜下进行观察。A：未经包裹的活性蛋白物质，荧光区域仅存留于皮肤表面；B：经过脂质体包裹的活性蛋白物质，在皮肤下层形成荧光。
图3为不同培养体系人成纤维细胞增殖特点。将培养至第3代的人成纤维细胞，分别悬浮于含1%FCS的DMEM/F12（Negative）、含10%FCS的DMEM/F12（positive）及含10%干细胞培养基脂质体的DMEM/F12中，培养72小时后MTT实验测定细胞活力。纵坐标：OD值。横坐标：实验分组。
具体实施方式
本发明提供的是一种从干细胞培养基中提取营养物质用制备于美容护肤产品的方法，用于美容护肤品的制备，尤其是干细胞相关美容护肤品的制备。
以下是利用本发明方案为基础的实施例。实施例给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述实施例。
下述实施例及试验中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实施例1干细胞培养基营养物质的脂质体制备
1. 实验材料：豆磷脂，0.75g。乙醚，35ml。胆固醇，0.25g。干细胞培养基溶液，25ml。`磷酸盐缓冲液（PBS），常规方法配置。
2. 制备方法：称取豆磷脂，0.75g。胆固醇，0.25g，置150ml小烧杯中，加入35ml乙醚，在磁力搅拌器上搅拌溶解，加入干细胞培养基溶液，25ml，继续搅拌，乳化，直到乙醚挥发尽，成为淡黄色或白色乳状液体，即为干细胞培养基脂质体。
3. 实验结果：结果如图1所示，本品以透射电子显微镜在80kV电子束加速电压下进行观察，脂质体纳米粒粒径在100nm左右，为囊状或圆球状结构。形态学分析结果显示，所获得的脂质体包封率好,粒径较小且分布均匀。
实施例2 脂质体进入皮肤切片试验
1. 实验材料：
（1）离体皮肤的预处理：断颈处死小鼠，剔除背部毛后取颈背部皮肤，除去皮下组织和脂肪，生理盐水漂洗，-80℃冰箱保存备用；
（2）荧光标记：将干细胞培养基中的表皮生长因子使用异硫氰酸荧光素(FITC)进行标记，离心，去除未被脂质体包裹的表皮生长因子；
2. 体外透皮试验：
将预处理好的小鼠皮肤固定在扩散池与接受池之间，接受池液面与皮肤充分接触，无气泡。给药池为脂质体。打开磁力搅拌器和恒温水浴锅，保持300r/min速度，37℃温度，12小时；
对照组使用无包裹脂质体的表皮生长因子，经FITC标记进行；
3. 实验结果：结果如图2所示，本品在荧光显微镜下进行观察，经过脂质体包裹的表皮生长因子，在皮肤下层形成荧光（B）。未经包裹的表皮生长因子，荧光区域仅存留于皮肤表面（A）。
实施例3脂质体刺激干细胞增殖试验（MTT实验）
1.材料与试剂
（1）细胞：同上所述使用无血清培养基培养的人成纤维细胞系HEF-1，第三代，来源于健康人；
（2）MTT和DMSO均为Sigma公司产品；
（3）以含10%胎牛血清（FCS）的DMEM/F12培养基为阳性对照，以含1%胎牛血清（FCS）的DMEM/F12为阴性对照。
2.实验方法
（1）胰蛋白酶消化法收集人成纤维细胞，悬浮于无血清培养基中，计细胞数。调整细胞密度至2.0×107/ml；
（2）取三个1.5mlEP管，分别标示为1、2和3。按照下述表格分别加入不同的培养基。
表1. MTT实验分组
（3）将细胞悬液转移至96孔板，每孔含20000个细胞，总体积为100µl。将细胞置于37℃，5%CO2条件下培养72小时后，每孔加入MTT（1mg/ml）10µl，继续培养4小时。吸除培养上清，每孔加入二甲基亚砜100µl。酶联免疫仪上测定每孔光密度值，测定波长为490nm；
（4）取每组OD值的平均值及标准差。t检验分析平均值差异显著性。
3、实验结果及分析
结果如图3所示。统计学分析显示，与阴性对照组比较，干细胞培养基脂质体组和阳性对照组OD值显著高于阴性对照组（P<0.001）；干细胞培养基脂质体组OD值与阳性对照组OD值无显著差别（P=0.08）。结果提示，干细胞培养基脂质体组与含10%FCS的DMEM/F12（标准对照）比较，两者促成纤维细胞增殖活性相当，说明干细胞培养基经脂质体包裹后，具有优良的刺激干细胞增殖效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (7)

1.一种干细胞培养基脂质体，其特征在于，由脂质体包裹干细胞培养基提取物组成。
2.根据权利要求1所述一种干细胞培养基脂质体，其特征在于，包括以下原料： 磷脂0.5-1g；胆固醇0.1-0.5g；乙醚30-40mL，干细胞培养基溶液20-30 mL，所述干细胞培养基溶液的浓度为10mg/mL。
3.根据权利要求1所述一种干细胞培养基脂质体，其特征在于，制备方法包括以下步骤：将磷脂和胆固醇置于小烧杯中，加入乙醚，在磁力搅拌器上加热至溶解，加入干细胞培养基溶液继续搅拌、乳化，直至乙醚挥发尽，成为淡黄色或白色的乳状液体。
4.根据权利要求3所述一种干细胞培养基脂质体，其特征在于，所述磷脂包括天然磷脂和合成磷脂。
5.根据权利要求4所述一种干细胞培养基脂质体，其特征在于，所述天然磷脂为豆磷脂或卵磷脂中的一种。
6.根据权利要求4所述一种干细胞培养基脂质体，其特征在于，所述合成磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种。
7.如权利要求1-6任一所述一种干细胞培养基脂质体在制备护肤品中的应用。
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