CN109369650A - 中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法 - Google Patents

中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法 Download PDF

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戈兆松
彭凯
宋龙云
胡荣敏
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
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  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，以吴茱萸为原料，制备吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法：取原料，加入一定量的溶剂，通过过滤萃取进行提取，回收溶剂先过一边中压层析柱，然后将提取液上到中压制备色谱上，同时纯化得到高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱，再用进行结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体。本发明的目的是为了提供一种生产工艺简单、成本低、易于工业化的方法，吴茱萸碱和吴茱萸次碱纯度均达99％以上，收率大于70％。

Description

中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法
技术领域
本发明涉及色谱技术领域，具体的说，是一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法。
背景技术
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.、石虎Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吴茱萸Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果实，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻之功效，主治厥阴头痛、寒疝腹痛、寒湿脚气、经行腹痛、脘腹胀痛、呕吐吞酸、五更泄泻；外治口疮、高血压。吴茱萸所含化学成分复杂，有生物碱类、柠檬苦素类、挥发油类、脂肪酸类、氨基酸类等。其中吴茱萸生物碱为其主要药效成分，吴茱萸生物碱中，又以吴茱萸碱和次碱为主要生物碱。吴茱萸碱和吴茱萸次碱有镇痛、抗炎、止呕、扩张血管及强心等作用，吴茱萸次碱还有抗胃黏膜损伤的作用。吴茱萸碱在吴茱萸中含量为0.4％左右，吴茱萸中含有挥发油和果糖，提取分离吴茱萸碱难度较大。目前提取纯化吴茱萸碱方法多是乙醇回流提取氨化或乙醇回流提取，硅胶柱分离。也有一些现代化手段运用很大程度简化了工艺方法，如《中国医院药学杂志》2003第23巻刘文等发表了"超临界流体萃取吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱"，该方法用乙醇做夹带提取，提高了效率。但是超临界提取对设备要求比较严格而不易工业化。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其具体步骤为：
步骤(1):首先将吴茱萸粉碎成末状后，用筛子筛取透过的的吴茱萸粉末，将吴茱萸粉末加入到醇溶剂，加热回流数次，经过滤除渣，滤液减压回收除去醇溶剂后，得到水悬浮液；
吴茱萸粉末与醇溶剂的质量1:10；
步骤(2):溶剂萃取将步骤(1)所得水悬浮液，先用2-5体积的石油醚萃取，所得下层水相含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱组分，下层水相再用氯仿或者二氯甲烷萃取，每次用量按体积比萃取数次，石油醚层回收，石油醚下层弃去，合并氯仿或者二氯甲烷层萃取液，在30-40℃温度下经减压浓縮得到黑色浓浸膏；
步骤(3):色谱柱层析将步骤(2)所得的黑色浓浸膏甲醇溶解干法拌样后进行中压色谱柱层析；梯度洗脱所选用的洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯的混合溶剂，所述石油醚:乙酸乙酯的体积比在50:1到50:50之间，按体积比由高到低，分段收集半成品；
步骤(4)：将步骤(3)分段收集的半成品合并后，加入甲醇至刚好溶解，再经中压制备色谱进行梯度洗脱得到吴茱萸碱和吴茱萸次碱馏分，梯度洗脱所选用的洗脱剂为有机相和水的混合溶剂，其中有机相与水相比例在30:70到90:10之间,有机相主要为甲醇、乙腈和乙醇；
步骤(5)：将步骤(4)馏分分别经过减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，即得高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱。
本发明为一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其进一步优选的技术方案如下：
(1)将吴茱萸粉末按质量1:10的比例溶于95％乙醇水溶液中，60℃加热回流3次，每次2小时，经过滤除渣，再用50微米滤膜过滤，滤液减压回收除去乙醇溶剂后，得到粗提液；其中所用有机相为乙醇，毒性小，易回收；
(2)所得粗提液先用2倍体积比的石油醚萃取，下层水相再用5倍体积的二氯甲烷萃取，萃取5次，石油醚层回收石油醚下层弃去，合并二氯甲烷层萃取液，35℃经减压浓縮得到黑色浓浸膏；所用溶剂成本低，易回收，对样品粗提效果好；
(3)将所得的黑色浓浸膏用甲醇溶解干法拌样后进行中压色谱柱层析。上样到直径50mm、粒径300目的硅胶柱，用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中流动相A:石油醚，流动相B:乙酸乙酯；洗脱梯度为初始梯度5％B保留5min，然后40min至50％，根据出峰情况分段收集半成品；此技术步骤目的主要是把含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱从复杂的粗提液中分离出来，方便之后的中压制备；
(4)收集的组分，以反相十八烷基硅垸键合硅胶(C18)为固定相；检测波长为225nm进行线性洗脱，其中流动相A:水，流动相B:甲醇；洗脱梯度为初始梯度50％B，然后60min至90％B，分别含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分；此技术步骤的优点在于甲醇毒性小且便于回收；
(5)将含有有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分分别经过减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，即得；所用旋转蒸发仪旋蒸水浴温度在30℃至35℃，真空度在-0.09Mbar；所得水溶液经过-50℃预冻，再进行冻干处理得到纯度99％以上的吴茱萸碱和吴茱萸次碱样品。此技术步骤的优点在于能快速的不经减少了有机溶剂的使用量，而且可以在段时间内得到成品，缩短纯化工艺时间；
与现有技术相比，本发明的积极效果是：
1、纯化分离步骤少，耗时短，得率高，操作简便，易于工业化生产。
2、溶剂消耗少，提取、萃取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂都可回收再利用。
3、经济效益好，且工序简便，仅包括5个步骤，易于控制，分离效率高。
具体实施方式
以下提供本发明一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法的具体实施方式。
实施例1
一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其步骤如下：
(1)称取粉碎后的300目以下吴茱萸药材10g，加入120ml95％乙醇溶剂，60℃加热回流3次，每次2小时，经过滤除渣，再用50um滤膜过滤，滤液减压回收除去乙醇溶剂后，得到粗提液50ml；
(2)所得粗提液先用100ml的石油醚萃取，水相再250ml二氯甲烷萃取5次，石油醚层回收，石油醚下层弃去，合并二氯甲烷层萃取液，30℃减压浓縮得到黑色浓浸膏；
(3)将所得的黑色浓浸膏用100ml甲醇溶解干法拌样后进行中压色谱柱层析。上样到500mm*30mm、粒径300目的硅胶柱，用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中流动相A:石油醚，流动相B:乙酸乙酯；洗脱梯度为初始梯度5％B保留5min，然后40min至50％，根据出峰情况分段收集半成品。
(4)收集的组分，以30um反相十八烷基硅垸键合硅胶(C18)为固定相，色谱柱规格为250mm*30mm；检测波长为225nm进行线性洗脱，其中流动相A:水，流动相B:甲醇，流速为40ml/min；洗脱梯度为初始梯度50％B，然后60min至90％B，根据紫外吸收图谱分别收含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分；
(5)将含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分分别经过减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，除去甲醇和水，即得到分别得到纯度99％以上的吴茱萸碱和吴茱萸次碱。
实施例2
一种中压制备色谱同时纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其步骤如下：
(1)称取粉碎后的300目以下吴茱萸药材50g，加入600ml95％乙醇溶剂，60℃加热回流3次，每次2小时，经过滤除渣，再用50um滤膜过滤，滤液减压回收除去乙醇溶剂后，得到粗提液200ml；
(2)所得粗提液先用400ml的石油醚萃取，水相再1000ml二氯甲烷萃取5次，石油醚层回收，石油醚下层弃去，合并二氯甲烷层萃取液，30℃减压浓縮得到黑色浓浸膏；
(3)将所得的黑色浓浸膏用200ml甲醇溶解干法拌样后进行中压色谱柱层析。上样到500mm*50mm、粒径300目的硅胶柱，用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中流动相A:石油醚，流动相B:乙酸乙酯；洗脱梯度为初始梯度5％B保留5min，然后40min至50％，根据出峰情况分段收集半成品。
(4)收集的组分，以30um反相十八烷基硅垸键合硅胶(C18)为固定相，色谱柱规格为250mm*50mm；检测波长为225nm进行线性洗脱，其中流动相A:水，流动相B:甲醇，流速为100ml/min；洗脱梯度为初始梯度50％B，然后60min至90％B，根据紫外吸收图谱分别收含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分；
(5)将含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分分别经过减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，除去甲醇和水，即得到分别得到纯度99％以上的吴茱萸碱和吴茱萸次碱。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其特征在于，其具体步骤为：
步骤(1):首先将吴茱萸粉碎成末状后，用筛子筛取透过的的吴茱萸粉末，将吴茱萸粉末加入到醇溶剂，加热回流数次，经过滤除渣，滤液减压回收除去醇溶剂后，得到水悬浮液；
步骤(2):溶剂萃取将步骤(1)所得水悬浮液，先用2-5体积的石油醚萃取，所得下层水相含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱组分，下层水相再用氯仿或者二氯甲烷萃取，每次用量按体积比萃取数次，石油醚层回收，石油醚下层弃去，合并氯仿或者二氯甲烷层萃取液，在30-40℃温度下经减压浓縮得到黑色浓浸膏；
步骤(3):色谱柱层析将步骤(2)所得的黑色浓浸膏甲醇溶解干法拌样后进行中压色谱柱层析；梯度洗脱所选用的洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯的混合溶剂，所述石油醚:乙酸乙酯的体积比在50:1到50:50之间，按体积比由高到低，分段收集半成品；
步骤(4)：将步骤(3)分段收集的半成品合并后，加入甲醇至刚好溶解，再经中压制备色谱进行梯度洗脱得到吴茱萸碱和吴茱萸次碱馏分，梯度洗脱所选用的洗脱剂为有机相和水的混合溶剂；
步骤(5)：将步骤(4)馏分分别经过减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，即得高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱。
2.如权利要求1所述的一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其特征在于，吴茱萸粉末与醇溶剂的质量1:10。
3.如权利要求1所述的一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其特征在于，有机相与水相比例在30:70到90:10之间,有机相主要为甲醇、乙腈和乙醇。
4.如权利要求1所述的一种中压制备色谱且纯化高纯吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，其特征在于，
(1)将吴茱萸粉末按质量1:10的比例溶于95％乙醇水溶液中，60℃加热回流3次，每次2小时，经过滤除渣，再用50微米滤膜过滤，滤液减压回收除去乙醇溶剂后，得到粗提液；
(2)所得粗提液先用2倍体积比的石油醚萃取，下层水相再用5倍体积的二氯甲烷萃取，萃取5次，石油醚层回收石油醚下层弃去，合并二氯甲烷层萃取液，35℃经减压浓縮得到黑色浓浸膏；
(3)将所得的黑色浓浸膏用甲醇溶解干法拌样后进行中压色谱柱层析，上样到直径50mm、粒径300目的硅胶柱，用石油醚:乙酸乙酯混合溶剂进行梯度洗脱，其中流动相A:石油醚，流动相B:乙酸乙酯；洗脱梯度为初始梯度5％B保留5min，然后40min至50％，根据出峰情况分段收集半成品；
(4)收集的组分，以反相十八烷基硅垸键合硅胶为固定相；检测波长为225nm进行线性洗脱，其中流动相A:水，流动相B:甲醇；洗脱梯度为初始梯度50％B，然后60min至90％B，分别含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分；
(5)将含有有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的馏分分别经过减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，即得；所用旋转蒸发仪旋蒸水浴温度在30℃至35℃，真空度在-0.09Mbar；所得水溶液经过-50℃预冻，再进行冻干处理得到纯度99％以上的吴茱萸碱和吴茱萸次碱样品。
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