CN107519220A - 一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,包括以下步骤:将干燥的黄蜀葵花用10‑30倍量水加热回流提取0.5‑2h得提取液;加热回流时,控制蒸汽压力在0.01‑0.5Mpa、水温在108℃以上;将提取液减压浓缩,得60℃时比重1.00‑1.10的浸膏;减压浓缩温度为60‑90℃,真空度为0.05‑0.10Mpa;将浸膏进行带式干燥,干燥温度为60‑120℃,即得黄蜀葵花黄酮提取物。本发明还提供了一种黄蜀葵花提取物。该提取方法工艺简单、成本低廉、易于控制、提取物干燥迅速、有效成分完全,适合工业化大生产,产业化生产中运用本发明制备方法,能够使黄蜀葵花提取物的生产周期大大缩短,大大提高了生产效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,属于植物提取技术领域。
背景技术
黄蜀葵又名黄葵、秋葵、黄芙蓉、黄花莲等,拉丁文名:Abelmoschus manihot(Linn.) Medicus,为锦葵科、秋葵属一年生或多年生粗壮直立草本植物。历代医藉及《中药大辞典》对其药理功效均有明确记载。黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵的干燥花,黄蜀葵花及花蕾为锥形黄色,含黄酮类化合物、粘液质、花青素、鞣酸、生物碱等。性味甘寒滑,无毒,具有解毒消炎、清利湿热之功效,内治淋浊水肿,肾炎;外治痈疽肿毒,水、火烫伤等,其花蕾在民间使用也很普遍,一些地方作为蔬菜食用,安全无毒。
黄葵为锦葵科植物黄蜀葵花总黄酮的提取物,目前黄蜀葵花总黄酮提取物的制备方法归纳为四种:
1、先用水或醇提取,将回收溶剂的提取物混悬于水中,分别用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇提取,分成几个提取部分,再用硅胶柱或葡聚糖凝胶柱层析、分离成单组分物质。
2、用乙醇提取,合并提取液,滤过,滤液浓缩,浓缩液加适量水稀释,通过大孔树脂柱或通过聚酰胺柱,用醇水溶液梯度洗脱,洗脱液浓缩,干燥,粉碎后得总黄酮提取物,如申请号200410035741.X发明专利文件中所述的黄蜀葵花总黄酮提取物的制备方法。
3、用乙醇提取,合并提取液,提取液减压浓缩至60℃时比重为1.13-1.16的浸膏,加入沸水分次溶解,静置,过滤,滤液通过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱层析,用甲醇洗脱,收集洗脱液;洗脱液减压浓缩,真空干燥得黄蜀葵花总黄酮提取物粗品;总黄酮提取物粗品精制,用醋酸乙酯-乙醇提取,回收溶剂,减压干燥或真空干燥得到黄蜀葵花总黄酮提取物,如申请号200610097615.6发明专利文件中所述的黄蜀葵花总黄酮提取物的制备方法。
4、用乙醇回流提取,回流液过滤,合并滤液回收乙醇至尽,浓缩,冷藏,除去冷藏液上层的油层,调节pH值,干燥除去上层油层的冷藏液,即得黄蜀葵花提取物。如申请号201110283352.9发明专利文件中所述的黄蜀葵花总黄酮提取物的制备方法。
上述第一种方法是实验室研究单一黄酮成分的方法,不适合总黄酮的制备;第二种方法制备过程中应用大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱的吸附技术,虽然大孔树脂或聚酰胺是富集有效成分、去除杂质的一种有效纯化精制方法,但是其致孔剂和降解产物有毒性,且该技术应用于大生产中成本高、周期长,不易于大生产产业化流程;第三种方法制备过程中同样应用了大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱的吸附技术,不适用于大生产产业化流程,另减压干燥过程中,黄蜀葵花总黄酮提取物容易结块,而真空干燥周期长,焦化现象严重,直接影响黄蜀葵花总黄酮提取物的含量、质量,最终导致制剂一次服用的剂量大;第四种方法制备过程适合于大生产,但是需要冷藏,除去冷藏液上层的油层,调节pH 值等步骤,周期较长,成本偏高,过程繁琐,直接影响了生产进程。
鉴于上述情况,急需一种操作简便、安全可靠、工艺合理可行、生产周期短、质量稳定的黄蜀葵花总黄酮制备方法,适合企业大生产要求,更提高了黄蜀葵花生产效率,降低成本,适应于现代化生产进程,方便患者、造福患者。
发明内容
技术问题:为了解决现有技术的缺陷,本发明提供了一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法。
技术方案:本发明提供的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,包括以下步骤:
(1)将干燥的黄蜀葵花用10-30倍量水加热回流提取0.5-2h得提取液;加热回流时,控制蒸汽压力在0.01-0.5Mpa、水温在108℃以上;
(2)将提取液减压浓缩,得60℃时比重1.00-1.10的浸膏;减压浓缩温度为60-90℃,真空度为0.05-0.10Mpa;
(3)将浸膏进行带式干燥,干燥温度为60-120℃,即得黄蜀葵花黄酮提取物。
步骤(1)中,将干燥的黄蜀葵花用20倍量水加热回流提取46min得提取液;加热回流时,控制蒸汽压力在0.2Mpa、水温在110℃以上。
步骤(2)中,将提取液减压浓缩,得60℃时比重1.06的浸膏;减压浓缩温度为70-90℃,真空度为0.08-0.10Mpa。
步骤(3)中,将浸膏进行带式干燥,干燥温度为80-100℃,即得黄蜀葵花黄酮提取物。
优选地,所述黄蜀葵花黄酮提取物中,按重量百分比计,总黄酮含量为70%-90%。
优选地,按重量百分比计,所述总黄酮包括:槲皮素-3-洋槐糖苷1.0-5.0%、金丝桃苷8.0-24.0%、异槲皮苷7.0-20.0%、槲皮素-3′-葡萄糖苷5.0-15.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷3.0-10.0%、杨梅素0.5-5.0%、棉皮素0.5-5.0%、槲皮素2.0-8.0%,余量为其它黄酮类成分。
优选地,所述黄蜀葵花黄酮提取物中,按重量份计,总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
本发明还提供了一种黄蜀葵花提取物,其总黄酮含量为70%-90%。
优选地,所述黄蜀葵花提取物,其总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
优选地,所述黄蜀葵花中黄酮类提取物中,总黄酮包括:槲皮素-3-洋槐糖苷1.0-5.0%、金丝桃苷8.0-24.0%、异槲皮苷7.0-20.0%、槲皮素-3′-葡萄糖苷5.0-15.0%、棉皮素-3′- 葡萄糖苷3.0-10.0%、杨梅素0.5-5.0%、棉皮素0.5-5.0%、槲皮素2.0-8.0%,余量为其它黄酮类成分。
本发明还提供了上述黄蜀葵花中黄酮类提取物在制备治疗肾炎药物中的应用。
有益效果:本发明提供的黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法工艺简单、成本低廉、易于控制、提取物干燥迅速、有效成分完全,适合工业化大生产,产业化生产中运用本发明制备方法,能够使黄蜀葵花提取物的生产周期大大缩短,大大提高了生产效率。
本发明提供的黄蜀葵花提取物为黄蜀葵花及花蕾的总黄酮提取物,其为棕褐色的粉末,性味甘寒滑,无毒,具有解毒消炎、清利湿热之功效,用于慢性肾炎之湿热证,具有降低肾小球肾炎动物的尿蛋白含量和血清肌酐含量的作用。
附图说明
图1为黄蜀葵花总黄酮提取物和对照品的薄层色谱图(自然光下)。
图2为黄蜀葵花总黄酮提取物和对照品的薄层色谱图(紫外灯下)。
图3为黄蜀葵花总黄酮提取物的高效液相色谱图。
图4为黄蜀葵花总黄酮提取物的指纹图谱,其中S1的提取液为乙醇,S2的提取液为水,其他条件相同。
具体实施方式
下面通过实施例对黄蜀葵花总黄酮提取物提取方法作进一步详述。
实施例1
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水20倍量,控制蒸汽压力在0.20Mpa,加热回流提取1次,每次46min,控制回流水温在110℃以上;过滤,70℃、0.09Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.06);90℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为95%,按重量百分比提取物收率为28.9%。提取物中黄酮成分含量比为:槲皮素-3-洋槐糖苷1.5%、金丝桃苷22.0%、异槲皮苷11.8%、槲皮素-3′-葡萄糖苷10.4%、棉皮素-3′-葡萄糖苷7.0%、杨梅素1.0%、棉皮素1.5%、槲皮素6.0%,余量为其它黄酮类成分。
鉴定黄蜀葵花提取物:
(1)对黄蜀葵花进行薄层鉴别:
黄蜀葵花的薄层鉴别方法:取本品约1g,加醋酸乙酯50ml,加热回流提取1小时,滤过,滤液挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取槲皮素对照品,加乙醇制成,每1ml含0.2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铝溶液,置紫外光灯(365)nm下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图1和2。
(2)水分:应不得过9.0%(附录IXH第二法)。
(3)其他:应符合相应制剂项下有关的规定。
(4)含量测定:
色谱条件与系统适应性试验:用十八烷基键合硅胶为填充剂;以流动相A:乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85),流动相B:乙腈-0.1%磷酸溶液(25∶75),按下表进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;检测波长为360nm;柱温为30℃,理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于35000。
对照品溶液的制备:取经120℃真空干燥至恒重的金丝桃苷对照品约10mg,精密称定,置100ml量瓶中,加流动相A液约70ml,于水浴上微热使溶解,放冷,加流动相A稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,研细,取0.1g,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇约15ml,超声处理30分钟,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜滤过(0.45μm),取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10~20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。结果见图3。
总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
(5)黄蜀葵花总黄酮提取物的指纹图谱测试:结果见图4,结果显示:水提和醇提主要的成分几乎完全一致,但是水提更具有以下3点优势:1、水提比醇提成本上大大的降低了;2、水提比醇提三废污染更少了,几乎无污染;3、水提浸膏粉比醇提浸膏粉的引湿性有了很大的改善,水提浸膏粉几乎不吸湿。
实施例2
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水15倍量,控制蒸汽压力在0.05Mpa,加热回流提取1次,每次1小时,控制回流水温在108℃以上;过滤,90℃、0.08Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.00);60℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为86%,按重量百分比提取物收率为26.6%;提取物中黄酮成分含量比为:槲皮素-3-洋槐糖苷2.0%、金丝桃苷22.0%、异槲皮苷11.8%、槲皮素-3′-葡萄糖苷11.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷7.5%、杨梅素0.5%、棉皮素1.0%、槲皮素6.5%,余量为其它黄酮类成分。
总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
薄层色谱、液相色谱、指纹图谱与实施例1一致。
实施例3
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水20倍量,控制蒸汽压力在0.20Mpa,加热回流提取1次,每次1小时,控制回流水温在108℃以上;过滤,70℃、0.10Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.10);80℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为78%,按重量百分比提取物收率为25.9%。提取物中黄酮成分含量比为:槲皮素-3-洋槐糖苷1.0-5.0%、金丝桃苷22.0%、异槲皮苷11.8%、槲皮素-3′- 葡萄糖苷5.0-15.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷3.0-10.0%、杨梅素0.5-5.0%、棉皮素0.5-5.0%、槲皮素2.0-8.0%,余量为其它黄酮类成分。
总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
薄层色谱、液相色谱、指纹图谱与实施例1一致。
实施例4
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水30倍量,控制蒸汽压力在0.50Mpa,加热回流提取1次,每次1小时,控制回流水温在108℃以上;过滤,80℃、0.09Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.06);100℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为77%,按重量百分比提取物收率为26.9%。提取物中黄酮成分含量比为:槲皮素-3-洋槐糖苷2.0%、金丝桃苷22.0%、异槲皮苷11.8%、槲皮素-3′-葡萄糖苷12.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷8.0%、杨梅素2.0%、棉皮素0.5%、槲皮素8.0%,余量为其它黄酮类成分。
总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
薄层色谱、液相色谱、指纹图谱与实施例1一致。
实施例5
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水24倍量,控制蒸汽压力在0.30Mpa,加热回流提取2次,每次2小时,控制回流水温在108℃以上;过滤,合并提取液,60℃、0.05Mpa 下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.07);100℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为85%,按重量百分比提取物收率为27.2%。提取物中黄酮成分含量比为:槲皮素-3-洋槐糖苷1.0%、金丝桃苷8.0%、异槲皮苷7.0%、槲皮素-3′-葡萄糖苷5.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷10.0%、杨梅素0.5-5.0%、棉皮素5.0%、槲皮素2.0%,余量为其它黄酮类成分。
薄层色谱、液相色谱、指纹图谱与实施例1一致。
实施例6
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水10倍量,控制蒸汽压力在0.01Mpa,加热回流提取1次,每次0.5小时,控制回流水温在108℃以上;过滤,60℃、0.07Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.04);120℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为70%,按重量百分比提取物收率为26.8%。提取物中黄酮成分含量比为:槲皮素-3-洋槐糖苷5.0%、金丝桃苷24.0%、异槲皮苷20.0%、槲皮素-3′-葡萄糖苷15.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷3.0%、杨梅素0.5%、棉皮素0.5%、槲皮素8.0%,余量为其它黄酮类成分。
薄层色谱、液相色谱、指纹图谱与实施例1一致。
对比例1
黄蜀葵花用95%的乙醇,回流提取2次,每次1小时,过滤,合并滤液回收乙醇至尽,浓缩滤液至比重1.20,浓缩液在0℃~4℃静置24~48小时,去除冷藏液的油层,调pH值6.0,将冷藏液缓慢加入薄层快速干燥滚筒槽内,使滚筒槽内冷藏液液面与滚筒体表面刚接触为止,预热滚筒体表面温度至140℃~150℃,气压为0.4~0.5Mpa,打开滚筒滚动启动按钮,筒体转速为3~3.5分钟/转,将滚下的浸膏液体涂布在聚四氟乙烯板上降温,待烘干物料冷却变脆,敲碎,装入洁净双层塑料袋中,即得黄蜀葵花提取物。
其总黄酮含量为45%,按重量百分比提取物收率为21.9%。
对比例2
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加乙醇20倍量,控制蒸汽压力在0.20Mpa,加热回流提取1次,每次46min,控制回流水温在110℃以上;过滤,70℃、0.09Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.06);90℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为59%,按重量百分比提取物收率为22.9%。
对比例3
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水20倍量,控制蒸汽压力在0.65Mpa,加热回流提取1次,每次46min,控制回流水温在110℃以上;过滤,70℃、0.09Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.12);90℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为42%,按重量百分比提取物收率为23.4%。
对比例4
将黄蜀葵花5kg置提取罐中,加水20倍量,控制蒸汽压力在0.55Mpa,加热回流提取1次,每次46min,控制回流水温在110℃以上;过滤,70℃、0.09Mpa下减压浓缩,得浸膏(60℃时比重为1.14);90℃下进行真空带式干燥、粉碎得到黄蜀葵花总黄酮提取物。
其总黄酮含量为44%,按重量百分比提取物收率为23.2%。
上述黄蜀葵花提取物,可与任何一种或一种以上符合药用标准的辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、滑石粉、硫酸钙、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、羟丙基-β-环糊精等混合制成各种剂型,包括口服制剂和注射制剂,如片剂、缓释片、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊剂、滴丸、糖浆剂、注射剂、输液剂、粉针剂等。优选剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、粉针剂。
通过本发明所述的黄蜀葵花总黄酮制备方法,在不降低黄蜀葵花总黄酮的含量前提下,能够缩短生产周期,减少过程的繁琐,提高了生产效能。
Claims (10)
1.一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)将干燥的黄蜀葵花用10-30倍量水加热回流提取0.5-2h得提取液;加热回流时,控制蒸汽压力在0.01-0.5Mpa、水温在108℃以上;
(2)将提取液减压浓缩,得60℃时比重1.00-1.10的浸膏;减压浓缩温度为60-90℃,真空度为0.05-0.10Mpa;
(3)将浸膏进行带式干燥,干燥温度为60-120℃,即得黄蜀葵花黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:步骤(1)中,将干燥的黄蜀葵花用20倍量水加热回流提取46min得提取液;加热回流时,控制蒸汽压力在0.2Mpa、水温在110℃以上。
3.根据权利要求1所述的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:步骤(2)中,将提取液减压浓缩,得60℃时比重1.06的浸膏;减压浓缩温度为70-90℃,真空度为0.08-0.10Mpa。
4.根据权利要求1所述的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:步骤(3)中,将浸膏进行带式干燥,干燥温度为80-100℃,即得黄蜀葵花黄酮提取物。
5.根据权利要求1所述的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:所述黄蜀葵花黄酮提取物中,按重量百分比计,总黄酮含量为70%-90%。
6.根据权利要求5所述的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:按重量百分比计,所述总黄酮包括:槲皮素-3-洋槐糖苷1.0-5.0%、金丝桃苷8.0-24.0%、异槲皮苷7.0-20.0%、槲皮素-3′-葡萄糖苷5.0-15.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷3.0-10.0%、杨梅素0.5-5.0%、棉皮素0.5-5.0%、槲皮素2.0-8.0%,余量为其它黄酮类成分。
7.根据权利要求1所述的一种黄蜀葵花中黄酮类化合物的提取方法,其特征在于:所述黄蜀葵花黄酮提取物中,按重量份计,总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g。
8.一种黄蜀葵花中黄酮类提取物,其特征在于:总黄酮含量为70%-90%。
9.根据权利要求8所述的一种黄蜀葵花中黄酮类提取物,其特征在于:总黄酮含量以金丝桃苷计不少于11.5mg/g;所述总黄酮包括:槲皮素-3-洋槐糖苷1.0-5.0%、金丝桃苷8.0-24.0%、异槲皮苷7.0-20.0%、槲皮素-3′-葡萄糖苷5.0-15.0%、棉皮素-3′-葡萄糖苷3.0-10.0%、杨梅素0.5-5.0%、棉皮素0.5-5.0%、槲皮素2.0-8.0%,余量为其它黄酮类成分。
10.权利要求8至9任一项所述的黄蜀葵花中黄酮类提取物在制备治疗肾炎药物中的应用。
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