CN109321472A - 一种金线莲菌根真菌的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了金线莲菌根真菌的分离方法，首先选取十株金线莲菌根在28℃水箱中培养箱中培养3d；借一株金线莲菌根去除，捣烂；无菌条件下培养20天，培养温度24‑28度；待测菌种菌丝小块分别接种于培养基中，每个菌种制作6个重复。在28℃恒温培养箱中培养至第4d开始观察；所述的28℃恒温培养箱中培养，是指在人工光照的条件下进行的。所述的恒温培养箱中培养是指在改造的人工摇床上进行的。所述的生理盐水，其加入量为使得体系的pH值在8～10之间。所述的捣烂，是指在100‑200rpm的转速条件下进行的。本发明所用的制备工艺简单，耗时短，还具有良好的稳定性和持久性。
Description
技术领域
本发明涉及菌的分离领域，特别是涉及一种金线莲菌根真菌的分离方法。
背景技术
自然界大部分植物或其生活史中一定阶段可与真菌发生共生关系并构成复杂的植物微生态系统，以兰科植物为例，Bernard在1903年首次发现了真菌能够促进鸟巢兰(Neottia)种子萌发，自然情况下，只有被适宜的真菌感染的兰科植物种子才能够成功萌发。这些被侵染的兰科植物多数有共生菌根，可以提高植物的抗逆性和有效成分含量。
金线莲(Anoectochilus roxburghii (Wall.)Lindl)是兰科植物中的一种，在野生种中同样与多种真菌共生[76]，筛选促进金线莲生长发育的菌根真菌，对研究它们之间的相互作用以及提升金线莲大批量培养的成活率有着重大的现实意义。核糖体DNA(rDNA)转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)常用于真菌种属分类，可以弥补形态学分类的主观性。前人已使用该方法分离鉴定出多种金线莲菌根真菌，其中不乏对金线莲生长有明显促进作用的菌根真菌[87]。但在金线莲栽培中，不管是在大棚设施栽培还是在林下仿生境生态栽培常受病害困扰，严重时大量减产甚至绝收，为控制病害发生和发展，需使用大量的杀菌剂，导致产品受到农药污染。野生金线莲由于与菌根菌共生，具有较强的抗病及抗逆性，因此本章以福建邵武野生金线莲为实验材料，分离并鉴定与金线莲共生的菌根菌，为后期实验打下基础。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明目的在于提供一种制备工艺简单、绿色环保、成本低的金线莲菌根真菌的分离方法。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
1、选种：选取十株金线莲菌根在28℃水箱中培养箱中培养3d；
2、借助肉眼将形态生长良好的一株金线莲菌根去除，捣烂；
3、取捣烂的金线莲菌根移至灭菌后融化的培养基上无菌条件下培养20天，培养温度24-28度；
4、无菌条件下用接种针将分离到的待测菌种菌丝小块分别接种于培养基中，每个菌种制作6个重复。在28℃恒温培养箱中培养至第4d开始观察；
所述的28℃恒温培养箱中培养，是指在人工光照的条件下进行的。
所述的恒温培养箱中培养是指在改造的人工摇床上进行的。
所述的生理盐水，其加入量为使得体系的pH值在8～10之间。
所述的捣烂，是指在100-200rpm的转速条件下进行的。
本发明本方法所使用的原料野生绿色品种，生产工艺简单，不需要复杂的生产设备，容易实现大规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行具体阐述。实施例并不表示本发明仅限于此范围。
实施例1
1、选种：选取10株金线莲菌根在30℃水箱中培养箱中培养3d；
2、借助肉眼将形态生长良好的一株金线莲菌根去除，捣烂；
3、取捣烂的金线莲菌根移至灭菌后融化的培养基上无菌条件下培养20天，培养温度24-28℃；
4、无菌条件下用接种针将分离到的待测菌种菌丝小块分别接种于培养基中，每个菌种制作6个重复。在28℃恒温培养箱中培养至第4d开始观察；
所述的28℃恒温培养箱中培养，是指在人工光照的条件下进行的。
所述的恒温培养箱中培养是指在改造的人工摇床上进行的。
所述的生理盐水，其加入量为使得体系的pH值在8～10之间。
所述的捣烂，是指在200rpm的转速条件下进行的。
菌根真菌经过分离纯化后，依据来源进行编号和初步形态观察，并进行初步筛选。先排除那些生长过快，1~2天就可以长满整个培养皿的菌株。这些菌株生长过快，有可能会与金线莲植株争夺生长空间与养分，初步判定为有害菌，故排除。
实施例2
1、选种：选取6株金线莲菌根在30℃水箱中培养箱中培养6d；
2、借助肉眼将形态生长良好的一株金线莲菌根去除，捣烂；
3、取捣烂的金线莲菌根移至灭菌后融化的培养基上无菌条件下培养20天，培养温度24℃；
4、无菌条件下用接种针将分离到的待测菌种菌丝小块分别接种于培养基中，每个菌种制作6个重复。在28℃恒温培养箱中培养至第4d开始观察；
所述的24℃恒温培养箱中培养，是指在人工光照的条件下进行的。
所述的恒温培养箱中培养是指在改造的人工摇床上进行的。
所述的生理盐水，其加入量为使得体系的pH值在8～10之间。
所述的捣烂，是指在100rpm的转速条件下进行的。
菌根真菌经过分离纯化后，依据来源进行编号和初步形态观察，并进行初步筛选。先排除那些生长过快，1~2天就可以长满整个培养皿的菌株。这些菌株生长过快，有可能会与金线莲植株争夺生长空间与养分，初步判定为有害菌，故排除。
Claims (5)
1.一种金线莲菌根真菌的分离方法，其特征在于：
1） 选种：选取十株金线莲菌根在28℃水箱中培养箱中培养3d；
2）借助肉眼将形态生长良好的一株金线莲菌根去除，捣烂；
3）取捣烂的金线莲菌根移至灭菌后融化的培养基上无菌条件下培养20天，培养温度24-28度；
4）无菌条件下用接种针将分离到的待测菌种菌丝小块分别接种于培养基中，每个菌种制作6个重复，在28℃恒温培养箱中培养至第4d开始观察。
2.根据权利要求1所述的一种金线莲菌根真菌的分离方法，其特征在于所述的28℃恒温培养箱中培养，是指在人工光照的条件下进行的。
3.根据权利要求1所述的一种金线莲菌根真菌的分离方法，其特征在于所述的恒温培养箱中培养是指在改造的人工摇床上进行的。
4.根据权利要求1所述的一种金线莲菌根真菌的分离方法，其特征在于所述的生理盐水，其加入量为使得体系的pH值在8～10之间。
5.根据权利要求1所述的一种金线莲菌根真菌的分离方法，其特征在于所述的捣烂，是指在100-200rpm的转速条件下进行的。
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| CN201811269202.0A CN109321472A (zh) | 2018-10-29 | 2018-10-29 | 一种金线莲菌根真菌的分离方法 |
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|---|---|
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111471618A (zh) * | 2020-04-13 | 2020-07-31 | 厦门德运科技有限公司 | 一种金线莲共生菌的提取及纯化方法 |
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2018
- 2018-10-29 CN CN201811269202.0A patent/CN109321472A/zh active Pending
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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