CN109239348A - 胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及试剂盒 - Google Patents

胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及试剂盒，其包括含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体，还包括含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体；含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2。其目的是提供一种特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果准确可靠的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及胃泌素释放肽前体检测试剂盒。

Description

胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及试剂盒
技术领域
本发明涉及一种胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及胃泌素释放肽前体检测试剂盒。
背景技术
现有的用于定量检测人血清中的胃泌素释放肽前体（ProGRP）的胃泌素释放肽前体检测试剂盒的灵敏度较低，并且其获得检测结果的时间较长，操作方式较为复杂。
发明内容
本发明的目的是提供一种特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果准确可靠的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及试剂盒。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体，包括含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体，或称含荧光素FITC标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体，还包括含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体，或称含辣根过氧化物酶HRP标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体；
含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2；
所述结合物1采用以下方法制成：
1、称取设定重量的荧光素FITC，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解荧光素FITC，得到荧光素FITC溶液；
2、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为15-20倍的步骤1得到的荧光素FITC溶液，立刻混匀；
3、将步骤2得到的混匀液室温避光反应1小时，得到纯化交联物；
4、将步骤3得到的纯化交联物进行透析、脱盐处理，得到液态的结合物1；
所述结合物2采用以下方法制成：
1、称取设定重量的含辣根过氧化物酶HRP，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解含辣根过氧化物酶HRP，得到含辣根过氧化物酶HRP溶液；
2、用过量的NaIO4溶液氧化步骤1得到的含辣根过氧化物酶HRP溶液2—3小时，然后用乙二醇终止反应；
3、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为10-15倍的步骤2得到的溶液，立刻混匀；
4、将步骤3得到的混匀液在2℃—8℃下搅拌反应6—12小时，然后用NaBH4终止反应；
5、用饱和硫酸铵溶液纯化交联物，沉淀复溶后得到液态的结合物2。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体，其中所述结合物1用结合物1稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1，结合物1稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液；
所述结合物2用结合物2稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2，结合物2稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒，包括包被板、校准品、含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体含荧光素FITC标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体、含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体、发光底物液A、发光底物液B和20倍浓缩洗液，其中发光底物液A含有鲁米诺钠盐，发光底物液B含有过氧化脲，20倍浓缩洗液含有磷酸盐，其特征在于：所述包被板包被有鼠源性荧光素单克隆抗体，含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2；
所述结合物1采用以下方法制成：
1、称取设定重量的荧光素FITC，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解荧光素FITC，得到荧光素FITC溶液；
2、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为15-20倍的步骤1得到的荧光素FITC溶液，立刻混匀；
3、将步骤2得到的混匀液室温避光反应1小时，得到纯化交联物；
4、将步骤3得到的纯化交联物进行透析、脱盐处理，得到液态的结合物1；
所述结合物2采用以下方法制成：
1、称取设定重量的含辣根过氧化物酶HRP，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解含辣根过氧化物酶HRP，得到含辣根过氧化物酶HRP溶液；
2、用过量的NaIO4溶液氧化步骤1得到的含辣根过氧化物酶HRP溶液2—3小时，然后用乙二醇终止反应；
3、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为10-15倍的步骤2得到的溶液，立刻混匀；
4、将步骤3得到的混匀液在2℃—8℃下搅拌反应6—12小时，然后用NaBH4终止反应；
5、用饱和硫酸铵溶液纯化交联物，沉淀复溶后得到液态的结合物2。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒，其中所述结合物1用结合物1稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1，结合物1稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/LpH 6.5磷酸盐稀释液；
所述结合物2用结合物2稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2，结合物2稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及胃泌素释放肽前体检测试剂盒，其反应时间短，仅15min，灵敏度高，空白检出限测试结果0.0373pg/mL，线性范围10-2000pg/ml；精密性及重复性高，质控测试结果CV1=6%，CV2=4%。因此，本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒具有特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果极其准确可靠的特点，其相对于现有产品具有突出的实质性特点和显著的进步。
下面对本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体及胃泌素释放肽前体检测试剂盒作进一步详细说明。
具体实施方式
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体，包括含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体，或称含荧光素FITC标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体，还包括含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体，或称含辣根过氧化物酶HRP标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体；
含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2；
所述结合物1采用以下方法制成：
1、称取设定重量的荧光素FITC，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解荧光素FITC，得到荧光素FITC溶液；
2、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为15-20倍的步骤1得到的荧光素FITC溶液，立刻混匀；
3、将步骤2得到的混匀液室温避光反应1小时，得到纯化交联物；
4、将步骤3得到的纯化交联物进行透析、脱盐处理，得到液态的结合物1；
所述结合物2采用以下方法制成：
1、称取设定重量的含辣根过氧化物酶HRP，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解含辣根过氧化物酶HRP，得到含辣根过氧化物酶HRP溶液；
2、用过量的NaIO4溶液氧化步骤1得到的含辣根过氧化物酶HRP溶液2—3小时，然后用乙二醇终止反应；
3、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为10-15倍的步骤2得到的溶液，立刻混匀；
4、将步骤3得到的混匀液在2℃—8℃下搅拌反应6—12小时，然后用NaBH4终止反应；
5、用饱和硫酸铵溶液纯化交联物，沉淀复溶后得到液态的结合物2。
上述结合物1用结合物1稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1，结合物1稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液；
所述结合物2用结合物2稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2，结合物2稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒，包括包被板、校准品、含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体含荧光素FITC标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体、含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体、发光底物液A、发光底物液B和20倍浓缩洗液，其中发光底物液A含有鲁米诺钠盐，发光底物液B含有过氧化脲，20倍浓缩洗液含有磷酸盐，其特征在于：所述包被板包被有鼠源性荧光素单克隆抗体，含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2；
所述结合物1采用以下方法制成：
1、称取设定重量的荧光素FITC，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解荧光素FITC，得到荧光素FITC溶液；
2、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为15-20倍的步骤1得到的荧光素FITC溶液，立刻混匀；
3、将步骤2得到的混匀液室温避光反应1小时，得到纯化交联物；
4、将步骤3得到的纯化交联物进行透析、脱盐处理，得到液态的结合物1；
所述结合物2采用以下方法制成：
1、称取设定重量的含辣根过氧化物酶HRP，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解含辣根过氧化物酶HRP，得到含辣根过氧化物酶HRP溶液；
2、用过量的NaIO4溶液氧化步骤1得到的含辣根过氧化物酶HRP溶液2—3小时，然后用乙二醇终止反应；
3、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为10-15倍的步骤2得到的溶液，立刻混匀；
4、将步骤3得到的混匀液在2℃—8℃下搅拌反应6—12小时，然后用NaBH4终止反应；
5、用饱和硫酸铵溶液纯化交联物，沉淀复溶后得到液态的结合物2。
上述结合物1用结合物1稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1，结合物1稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液；
所述结合物2用结合物2稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2，结合物2稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒采用双抗体夹心法定量检测人血清中的胃泌素释放肽前体ProGRP，其检验原理为：
用荧光素单克隆抗体包被微孔板制成固相，一株特异性胃泌素释放肽前体抗体用荧光素(FITC)进行标记，与之配对的另一株胃泌素释放肽前体抗体用辣根过氧化物酶（HRP）进行标记；免疫反应时，待检血清样本中的胃泌素释放肽前体与荧光素标记抗体、酶标记抗体形成抗原抗体复合物，此复合物通过荧光素与包被在微孔板上的荧光素单克隆抗体特异性结合，15min反应结束后，洗板除去未结合物质，加入发光底物，其发光强度（RLU）与血清中的ProGRP浓度成正相关。使用化学发光免疫分析仪检测发光强度（RLU）即可判断ProGRP的多少。
目前，国际上公认的最方便、最先进的早期筛查方法是采用化学发光免疫分析（CLIA）。化学发光免疫分析试剂因具有灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染等优点，是目前最理想的免疫分析方法。配合大型自动板式化学发光免疫分析仪，能够快速而准确的给出检验结果，自动化程度很高，而且通量比磁微粒化学发光更有优势。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒，采用辣根过氧化物酶（Horseradishperoxidase，HRP）的化学发光体系，试剂盒规格为96T，由固相（包被FITC抗体的微孔板）、结合物1（含FITC标记ProGRP抗体）、结合物2（含HRP标记ProGRP抗体）、校准品、20倍浓缩洗涤液、发光底物液等组成。
固相制备工艺：保存白色聚苯乙烯（Polystyrene，PS）微孔板物理吸附FITC抗体，包被量为100μL/孔，放置2～8℃环境下吸附18～24小时；封闭量为250μL/孔，放置2～8℃环境下封闭18～24小时；放置温度≤35℃、湿度≤35%的条件下干燥5～8小时，用铝箔袋封装。
结合物1制备工艺：抗体置换缓冲液后与FITC交联，终止反应并纯化，得到结合物1浓缩液；浓缩液用结合物稀释液（含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液）稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1。
结合物2制备工艺：抗体置换缓冲液后与用过碘酸钠氧化后的HRP交联，终止反应并纯化，得到结合物2浓缩液；浓缩液用结合物稀释液（含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH6.5磷酸盐稀释液）稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2。
校准品制备：抗原用校准品稀释液（含2％BSA的0.025 mol/L pH 7.4 Tris稀释液）稀释系列校准品浓度，冻干后为试剂盒用校准品。校准品各点：0，25.00，125.00，250.00，1000.00，2000.00pg/mL。
本发明的胃泌素释放肽前体检测试剂盒与同类产品相比，其反应时间短，仅15min，灵敏度高，空白检出限测试结果0.0373pg/mL，线性范围10-2000pg/ml；精密性及重复性高，质控测试结果CV1=6%，CV2=4%。

Claims (4)

1.胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体，其特征在于：包括含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体，还包括含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体；
含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2；
所述结合物1采用以下方法制成：
1、称取设定重量的荧光素FITC，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解荧光素FITC，得到荧光素FITC溶液；
2、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为15-20倍的步骤1得到的荧光素FITC溶液，立刻混匀；
3、将步骤2得到的混匀液室温避光反应1小时，得到纯化交联物；
4、将步骤3得到的纯化交联物进行透析、脱盐处理，得到液态的结合物1；
所述结合物2采用以下方法制成：
1、称取设定重量的含辣根过氧化物酶HRP，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解含辣根过氧化物酶HRP，得到含辣根过氧化物酶HRP溶液；
2、用过量的NaIO4溶液氧化步骤1得到的含辣根过氧化物酶HRP溶液2—3小时，然后用乙二醇终止反应；
3、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为10-15倍的步骤2得到的溶液，立刻混匀；
4、将步骤3得到的混匀液在2℃—8℃下搅拌反应6—12小时，然后用NaBH4终止反应；
5、用饱和硫酸铵溶液纯化交联物，沉淀复溶后得到液态的结合物2。
2.如权利要求1所述的胃泌素释放肽前体检测试剂盒用抗体，其特征在于：所述结合物1用结合物1稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1，结合物1稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液；
所述结合物2用结合物2稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2，结合物2稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液。
3.胃泌素释放肽前体检测试剂盒，包括包被板、校准品、含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体含荧光素FITC标记的胃泌素释放肽前体ProGRP抗体、含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体、发光底物液A、发光底物液B和20倍浓缩洗液，其中发光底物液A含有鲁米诺钠盐，发光底物液B含有过氧化脲，20倍浓缩洗液含有磷酸盐，其特征在于：所述包被板包被有鼠源性荧光素单克隆抗体，含荧光素标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物1，含辣根过氧化物酶标记鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体简称结合物2；
所述结合物1采用以下方法制成：
1、称取设定重量的荧光素FITC，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解荧光素FITC，得到荧光素FITC溶液；
2、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为15-20倍的步骤1得到的荧光素FITC溶液，立刻混匀；
3、将步骤2得到的混匀液室温避光反应1小时，得到纯化交联物；
4、将步骤3得到的纯化交联物进行透析、脱盐处理，得到液态的结合物1；
所述结合物2采用以下方法制成：
1、称取设定重量的含辣根过氧化物酶HRP，加入10-20倍重量的二甲基甲酰胺DMF溶解含辣根过氧化物酶HRP，得到含辣根过氧化物酶HRP溶液；
2、用过量的NaIO4溶液氧化步骤1得到的含辣根过氧化物酶HRP溶液2—3小时，然后用乙二醇终止反应；
3、将设定重量的鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体保存在5-10倍重量的交联缓冲液中，向保存有鼠源性胃泌素释放肽前体单克隆抗体的交联缓冲液中加入摩尔比为10-15倍的步骤2得到的溶液，立刻混匀；
4、将步骤3得到的混匀液在2℃—8℃下搅拌反应6—12小时，然后用NaBH4终止反应；
5、用饱和硫酸铵溶液纯化交联物，沉淀复溶后得到液态的结合物2。
4.如权利要求3所述的胃泌素释放肽前体检测试剂盒，其特征在于：所述结合物1用结合物1稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物1，结合物1稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液；
所述结合物2用结合物2稀释液稀释到适宜浓度，配制成试剂盒用结合物2，结合物2稀释液为含0.5%酶水解明胶的0.02mol/L pH 6.5磷酸盐稀释液。
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