CN109200084A - 花榈木叶提取物及其应用 - Google Patents

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Abstract

一种花榈木叶提取物及其应用，是以乙醇对粉碎的花榈木叶进行超声提取，再采用慢性不可预知性应激建立小鼠抑郁模型以研究花榈木叶提取物的抗抑郁作用。通过糖水偏爱检测、空场实验、新奇环境抑制摄食实验和悬尾行为学实验检测得知，花榈木提取物具有明显有抗抑郁作用，为临床研究提供了依据。

Description

花榈木叶提取物及其应用
技术领域
本发明涉及花榈木叶提取物，同时还涉及该提取物在制备抗抑郁药物中的应用。
背景技术
花榈木属于豆科蝶形花亚科红豆属植物，广泛分布于安徽、浙江、江西、湖北、湖南、广东、四川、贵州和云南等地。花榈木木材为高档家具、雕刻和珍贵装饰品的树种，也是一种中药材，据《全国中草药汇编》中记载，它的根、茎、皮、叶等树体各器官均可入药，用于跌打损伤、腰肌劳损、风湿关节痛、产后血瘀疼痛、白带。目前对花榈木叶的抗抑郁作用研究尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提供一种花榈木叶提取物，同时还提供该花榈木叶提取物的应用。
为达上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种花榈木叶提取物，该提取物通过如下步骤制备得到：
a.取干燥的花榈木叶，粉碎，按1g花榈木叶加10-15mL质量浓度为70％的乙醇的比例，于粉碎的花榈木叶中加入乙醇，超声提取后减压回收乙醇，得水溶液；
b.于水溶液中加入石油醚进行萃取，至醚层无色，弃去石油醚层，水层调pH为2.5-3.5，上AB-8大孔吸附树脂的层析柱，上样完毕后静置30min，先用水洗脱至流出液为无色，然后用质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集洗脱液；
c.将洗脱液于减压回收乙醇，冷冻干燥，即得花榈木叶提取物。
上述步骤a中超声提取的温度为25℃-35℃，次数为3次，每次提取的时间为30min，并将提取液抽滤、合并后再进行减压回收乙醇。
上述步骤a和步骤c中提及的减压回收乙醇的温度为50℃-55℃。
上述步骤b中的上样流速为2-4BV/h；乙醇的洗脱速度为3-4BV/h。
上述步骤b中水层调pH值的方法为现有技术，如采用盐酸调pH值。
本发明同时提供上述花榈木叶提取物在制备抗抑郁药物中的应用。
本发明先对花榈木叶以乙醇进行超声提取，再采用慢性不可预知性应激建立小鼠抑郁模型以研究花榈木叶提取物的抗抑郁作用。通过糖水偏爱检测(花榈木高剂量能明显升高小鼠糖水偏爱指数)、空场实验(花榈木提取物低、中、高剂量能明显增加小鼠活动时间)、新奇环境抑制摄食实验(花榈木提取物高剂量能明显减少小鼠摄食潜伏期)和悬尾行为学实验(花榈木提取物中、高剂量能明显延长小鼠悬尾活动时间、减少静止时间)检测得知，花榈木提取物具有明显有抗抑郁作用，为临床研究提供了依据。
具体实施方式
实施例1花榈木叶提取物的制备
取干燥的花榈木叶原料1000g，粉碎，按1g花榈木叶加12mL质量浓度为70％的乙醇的比例，于粉碎的花榈木叶中加入乙醇于30℃超声提取3次，每次30min，将提取液抽滤并合并，55℃减压回收乙醇，得水溶液2L；然后将水溶液用石油醚萃取至醚层无色，弃去石油醚层，水层调pH为3，以2-4BV/h的流速通过装有800ml AB-8大孔吸附树脂的层析柱，上样完毕后静置30min，先用水洗至流出液为无色，然后用4000ml质量浓度为70％的乙醇以3-4BV/h流速洗脱，收集洗脱液，55℃减压回收乙醇后冷冻干燥，得花榈木叶提取物。
实施例2花榈木叶提取物的制备
取干燥的花榈木叶原料1000g，粉碎，按1g花榈木叶加10mL质量浓度为70％的乙醇的比例，于粉碎的花榈木叶中加入乙醇于35℃超声提取3次，每次30min，将提取液抽滤并合并，50℃减压回收乙醇，得水溶液；然后将水溶液用石油醚萃取至醚层无色，弃去石油醚层，水层调pH为2.5，以2-4BV/h的流速通过装有800ml AB-8大孔吸附树脂的层析柱，上样完毕后静置30min，先用水洗至流出液为无色，然后用4000ml质量浓度为70％的乙醇以3-4BV/h流速洗脱，收集洗脱液，50℃减压回收乙醇后冷冻干燥，得花榈木叶提取物。
实施例3花榈木叶提取物的制备
取干燥的花榈木叶原料1000g，粉碎，按1g花榈木叶加15mL质量浓度为70％的乙醇的比例，于粉碎的花榈木叶中加入乙醇于25℃超声提取3次，每次30min，将提取液抽滤并合并，52℃减压回收乙醇，得水溶液；然后将水溶液用石油醚萃取至醚层无色，弃去石油醚层，水层调pH为3.5，以2-4BV/h的流速通过装有800ml AB-8大孔吸附树脂的层析柱，上样完毕后静置30min，先用水洗至流出液为无色，然后用4000ml质量浓度为70％的乙醇以3-4BV/h流速洗脱，收集洗脱液，52℃减压回收乙醇后冷冻干燥，得花榈木叶提取物。
实施例4花榈木叶提取物的抗抑郁作用
采用慢性不可预知性应激法建立小鼠抑郁模型，观察花榈木提取物对慢性不可预知应激模型影响，为临床研究提供依据。
1.1供试品
花榈木叶提取物，按本发明方法制备得到。
1.2阳性对照品
盐酸氟西汀分散片，购自苏州有限公司。
1.3实验动物
雄性ICR小鼠70只，体重18.0～22.0g，动物质量合格证号：43004700048590，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2011-0003；在湖南省药物安全评价研究中心屏障环境饲养，实验动物使用许可证号：SYXK(湘)2015-0016。
1.4主要试剂
0.9％氯化钠注射液，购自湖南康源制药有限公司。
1.5主要仪器
小动物悬尾测试仪，购自成都泰盟科技技术有限公司。
2.试验方法
2.1慢性不可预知应激致小鼠抑郁模型的建立
雄性ICR小鼠70只，体重18.0～22.0g，除正常对照组10只外，将其余小鼠进行慢性不可预知应激，包括禁食(12h)、禁水(12h)、强迫游泳(10min)、频闪(12h)、噪声(30min)、束缚(12h)(置于50ml离心管内，管直径为3.0cm,长约10cm，管壁有6～7个直径为0.5mm的通风口)、倾笼(12h)、湿笼(12h)、昼夜颠倒等，见表1，束缚期间动物禁食禁水。
表1慢性不可预知性刺激时间表
2.2分组与给药
动物连续造模28天后根据糖水偏爱检测结果兼顾体重进行随机分组为：模型对照组、盐酸氟西汀组、花榈木提取物低、中、高剂量组，正常对照组和模型对照组每天灌胃给予蒸馏水，其余各组分别给予相应药液，给药体积为20mL/kg，连续给药35天，给药后小鼠继续进行慢性不可预知性应激，分别于末次给药后对小鼠进行糖水偏爱检测、空场、新奇环境抑制摄食和悬尾行为学检测。
2.3检测指标
2.3.1糖水偏爱测试
小鼠进行糖水偏爱检测，糖水偏爱测试分为训练期和测试期。测试前2天作为训练期，使动物充分适应蔗糖饮水，第1个24h给予动物两瓶1％蔗糖水。第2个24h也是训练期，给予小鼠1瓶1％蔗糖水，1瓶纯水。测试前不禁食，禁水8h。测试期，同时给予小鼠1瓶1％蔗糖水，1瓶纯水，测试15h内动物分别饮用糖水和纯水水量。测试中间，将两瓶位置互换以避免位置偏爱影响因素。测试结束，计算糖水偏爱指数(糖水偏爱指数＝糖水消耗/总液体消耗×100％)。
2.3.2空场测试
糖水偏爱测试后进行空场检测，将动物放入测试箱中，适应3min后开始检测，检测10min内小鼠自发活动。
2.3.3新奇环境抑制摄食
空场检测后进行新奇抑制摄食检测，实验总共分2天，第1天为适应期，将动物放入方形敞箱适应10min。在动物禁食(不禁水)24h后进行新奇抑制摄食实验检测，在敞箱中心放一食丸，将动物背对食丸放入，保持每次同一位置、同一方向，观察记录动物自放入笼中至首次摄取食物的时间(即摄食潜伏期)，每次5min，以动物开始咬食食丸为摄食标准。
2.3.4悬尾
新奇环境抑制摄食检测后对小鼠进行悬尾测试。将小鼠倒置，尾部固定于悬尾装置上，头部距桌面约5cm，使小鼠前后左右均无攀抓的地方，小鼠间有挡板隔开视线，以防止互相干扰，检测每只动物4min的活动情况。
2.4剂量设置
根据文献报道设置花榈木提取物低、中、高剂量分别为50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg。盐酸氟西汀临床用量20mg，根据动物与人临床剂量换算成小鼠剂量为：20mg*0.0026/0.02kg＝2.6mg/kg，采用临床等效剂量2倍，即5.2mg/kg作为小鼠给药剂量，详见表2。
表2试验分组和剂量设计
2.5统计学方法
采用SPSS16.0进行统计分析，统计学意义的水平设定为P≤0.05，计量资料采用均数±标准差表示，用Leven’s test方法检验正态性和方差齐性，如果符合正态性和方差齐性(P>0.05)，用单因素方差分析(ANOVA)和LSD test进行统计分析；如果不符合正态性和方差齐性(P<0.05)，则用Kruskal-Wallis检验，如果Kruskal-Wallis检验有统计学意义(P<0.05)，则用Dunnett’s Test(非参数方法)进行比较分析。评价时考虑统计学差异和生物学意义。
3实验结果
3.1花榈木提取物对抑郁模型小鼠糖水偏爱指数的影响
如表3所示，与正常对照组比较，模型对照组小鼠糖水偏爱指数明显降低(P＜0.05)。与模型对组比较，花榈木提取物低、中剂量组小鼠糖水偏爱指数有明显升高趋势，但无显著性差异；花榈木提取物高剂量组小鼠糖水偏爱指数明显升高(P＜0.05)；盐酸氟西汀组小鼠糖水偏爱指数明显升高(P＜0.01)。
表3花榈木提取物对抑郁小鼠糖水偏爱的影响
注：与正常对照组比较+P＜0.05，++P＜0.01，与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。3.2花榈木提取物对抑郁小鼠空场自主活动的影响
如表4所示，与正常对照组比较，模型对照组小鼠活动无明显变化。与模型对照组比较，花榈木提取物高剂量组小鼠总路程明显增加(P＜0.05)；花榈木提取物低、中、高剂量组小鼠活动时间明显增加(P＜0.05或P＜0.01)。
表4花榈木提取物对抑郁小鼠空场活动的影响
注：与正常对照组比较+P＜0.05，++P＜0.01，与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。3.3花榈木提取物对抑郁小鼠新奇环境抑制摄食的影响
如表5所示，与正常对照组比较，模型对照组小鼠摄食潜伏期明显延长(P＜0.01)。与模型对照组比较，花榈木提取物高剂量组小鼠摄食潜伏期明显减少(P＜0.05)；盐酸氟西汀组小鼠摄食潜伏期明显减少(P＜0.01)。
表5花榈木提取物对抑郁小鼠摄食潜伏期的影响
注：与正常对照组比较+P＜0.05，++P＜0.01，与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。3.4花榈木提取物对抑郁小鼠悬尾测试的影响
如表6所示，与正常对照组比较，模型对照组小鼠活动时间明显减少(P＜0.05)，静止时间明显延长(P＜0.01)；与模型对照组比较，花榈木提取物中、高剂量活动时间明显延长(P＜0.01)静止时间明显减少(P＜0.01)；盐酸氟西汀组小鼠活动时间明显延长(P＜0.05)，静止时间明显减少(P＜0.01)。
表6花榈木提取物对抑郁小鼠悬尾的影响
注：与正常对照组比较+P＜0.05，++P＜0.01，与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。4.实验小结
上述结果表明，花榈木提取物高剂量能明显升高小鼠糖水偏爱指数、减少小鼠摄食潜伏期。花榈木提取物低、中、高剂量能明显增加小鼠活动时间。花榈木提取物中、高剂量能明显延长小鼠活动时间、减少静止时间。
综上所述，花榈木提取物具有明显有抗抑郁作用。

Claims (6)

1.一种花榈木叶提取物，其特征在于，该提取物通过如下步骤制备得到：
a.取干燥的花榈木叶，粉碎，按1g花榈木叶加10-15mL质量浓度为70％的乙醇的比例，于粉碎的花榈木叶中加入乙醇，超声提取后减压回收乙醇，得水溶液；
b.于水溶液中加入石油醚进行萃取，至醚层无色，弃去石油醚层，水层调pH为2.5-3.5，上AB-8大孔吸附树脂的层析柱，上样完毕后静置30min，先用水洗脱至流出液无色，然后用质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集洗脱液；
c.将洗脱液于减压回收乙醇，冷冻干燥，即得花榈木叶提取物。
2.如权利要求1所述的花榈木叶提取物，其特征在于，所述步骤a中超声提取的温度为25℃-35℃，次数为3次，每次提取的时间为30min，并将提取液抽滤、合并后再进行减压回收乙醇。
3.如权利要求1所述的花榈木叶提取物，其特征在于，所述步骤a和步骤c中的减压回收乙醇的温度为50℃-55℃。
4.如权利要求1所述的花榈木叶提取物，其特征在于，所述步骤b中的上样流速为2-4BV/h。
5.如权利要求1所述的花榈木叶提取物，其特征在于，所述步骤b中乙醇的洗脱速度为3-4BV/h。
6.权利要求1-5中任一项所述的花榈木叶提取物在制备抗抑郁药物中的应用。
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CN109796510B (zh) * 2019-02-21 2021-11-12 湖南农业大学 高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化花榈木叶提取物中具抗抑郁作用的化合物的方法

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