CN104771451B - 一种具有抗抑郁作用的中药提取物及其应用 - Google Patents
一种具有抗抑郁作用的中药提取物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种假蒟总提取物和活性部位,及其制备方法和在制备预防或治疗抑郁症的药物或食品中的应用。本发明优点在于:本发明的假蒟提取物及其乙酸乙酯萃取部位具有显著抗抑郁活性,可用于制备抗抑郁药物或食品;用药安全,无中枢兴奋或抑制作用;本发明寻找到了高效低毒的治疗抑郁症的药物,为寻求新的抗抑郁药物提供了一种新的来源。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体地说,是具有抗抑郁作用的假蒟提取物及其在预防或治疗抑郁症药物或食品中的应用。
背景技术
抑郁症(depression)是一种常见的精神疾病,严重危害人们的身心健康。其可由各种原因引起,以显著而持久的心境低落为主要临床特征,以情绪低落、丧失兴趣、悲观失望为主,伴有精神运动性激越或迟滞自我评价过低、食欲减退和失眠等症状,严重者可出现自杀念头和行为。统计显示,抑郁症终生犯病率为6%~9%,人群中约有13%~20%的人在一生的某个时期会受其影响。患抑郁症除了付出严重的感情和社会代价之外,经济代价也是巨大的。据世界卫生组织统计,抑郁症已成为世界第4大疾病,预计到2020年,可能成为仅次于冠心病的第二大疾病。抑郁症正成为一个严重的全球问题,同时也酝酿着无限的商机。高发且难以根治的抑郁症正在构建可观的抗抑郁药市场,这也正是近年来国内外对中枢神经系统类药物的研究开发特别活跃的主要原因之一。
目前,临床上应用的抗抑郁药物主要是氟西汀、帕罗西汀和舍曲林等5-羟色胺重摄取抑制剂,但由于抑郁症发病机制复杂,诱发原因较多,针对某一单一环节的药物往往难以取得满意疗效,合成的抗抑郁药大多存在抗抑郁谱窄、副作用大、药价高和停药易复发等缺陷。因此,国内外在抗抑郁药的研究与开发方面越来越注重从天然产物中寻找有活性的先导化合物,通过结构修饰发现新的抗抑郁药物。
假蒟为胡椒科胡椒属植物假蒟Piper sarmentosum Roxb.的干燥茎、叶或全草。又名蛤蒟,不拔子,假荖,蛤荖,假蒌,蛤蒌,大柄蒌,荜拔子,猪拔菜,钻骨凤,臭蒌,山蒌,马蹄蒌。生于山谷密林中或村旁湿润处。在我国主要分布于广西、贵州、云南、广东、福建、海南及西藏南部地区等地。味苦、性温。具有祛风散寒,行气止痛,活络,消肿等功效。用于治疗风寒咳嗽,风湿痹痛,脘腹胀满,泄泻痢疾,产后脚肿,跌打损伤。《本草求原》、《广西本草选编》、《广西民间常用中草药手册》、《广东中草药》、《广西民族药简编》、《生草药性备要》等均有记载。(中华本草编委会.中华本草[M].第3册.上海:上海科学技术出版社,1999:445.)现代药理研究表明假蒟具有抗动脉粥样硬化(Amran A A,Zakaria Z,Othman F,et al.Aqueousextract of Piper sarmentosum decreases atherosclerotic lesions in highcholesterolemic experimental rabbits[J].Lipids in health and disease,2010,9(1):44.)、抗氧化(Hussain K,Ismail Z,Sadikun A,et al.Standardization and invivo antioxidant activity of ethanol extracts of fruit and leaf of Pipersarmentosum[J].Planta medica,2010,76(5):418-425.)、增强骨质疏松的骨折愈合(Estai M A,Suhaimi F H,Das S,et al.Piper sarmentosum enhances fracturehealing in ovariectomized osteoporotic rats:a radiological study[J].Clinics,2011,66(5):865-872.)、抗虫(Sawangjaroen N,Sawangjaroen K,Poonpanang P.Effectsof Piper longum fruit,Piper sarmentosum root and Quercus infectoria nut gallon caecal amoebiasis in mice[J].Journal of Ethnopharmacology,2004,91(2):357-360.)、抗结核(Mohamad S,Zin N M,Wahab H A,et al.Antituberculosis potential ofsome ethnobotanically selected Malaysian plants[J].Journal ofethnopharmacology,2011,133(3):1021-1026.)、抗癌(Ariffin S H Z,Omar W H H W,Ariffin Z Z,et al.Intrinsic anticarcinogenic effects of Piper sarmentosumethanolic extract on a human hepatoma cell line[J].Cancer Cell Int,2009,9(6):10.1186.)等作用。
中国专利公开号CN102038007A公开了一种假蒟提取物及其在制备杀虫抑菌剂中的应用。但至今未见有假蒟及其提取物用于抗抑郁方面的相关报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足,提供一种假蒟总提取物的应用。
本发明的第二个目的是,提供一种假蒟提取物乙酸乙酯部位的应用。
本发明的第三个目的是,提供一种假蒟总提取物及其制备方法。
本发明的第四个目的是,提供一种假蒟提取物乙酸乙酯部位及其制备方法。
本发明的第五个目的是,提供一种预防或治疗抑郁症的药物或食品。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案是:假蒟总提取物在制备预防或治疗抑郁症的药物或食品中的应用。所述的假蒟提取物的制备方法为:将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇加热回流提取3次,每次溶媒用量为生药量的8~10倍,每次提取时间为1~2小时,合并提取液后浓缩至干燥得假蒟总提取物。
为实现上述第二个目的,本发明采取的技术方案是:假蒟提取物乙酸乙酯部位在制备预防或治疗抑郁症的药物或食品中的应用。所述的假蒟提取物乙酸乙酯部位的制备方法为:(1)将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇加热回流提取3次,每次溶媒用量为生药量的8~10倍,每次提取时间为1~2小时,合并提取液后浓缩至干燥得假蒟总提取物;(2)将假蒟总提取物溶于水,分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇萃取3~5次,按照所用溶剂的极性由小到大的先后顺序进行萃取,极性由小到大依次为:石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇,得到假蒟提取物乙酸乙酯部位。
为实现上述第三个目的,本发明采取的技术方案是:一种假蒟总提取物,所述的假蒟总提取物的制备方法为:将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇加热回流提取3次,每次溶媒用量为生药量的8~10倍,每次提取时间为1~2小时,合并提取液后浓缩至干燥得假蒟总提取物。
为实现上述第四个目的,本发明采取的技术方案是:一种假蒟提取物活性部位,所述的假蒟提取物活性部位的制备方法为:将权利要求5制备得到的假蒟总提取物溶于水,分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇萃取3~5次,按照所用溶剂的极性由小到大的先后顺序进行萃取,极性由小到大依次为:石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇,得到假蒟提取物乙酸乙酯部位。
为实现上述第五个目的,本发明采取的技术方案是:一种预防或治疗抑郁症的药物或食品,所述的预防或治疗抑郁症的药物或食品中的活性成分为所述的假蒟总提取物或假蒟提取物活性部位。
本发明优点在于:
1、本发明提供了一种新的具有抗抑郁活性的假蒟提取物、其活性部位的制备方法和应用,药效实验结果显示,本发明的假蒟提取物及其乙酸乙酯萃取部位具有显著抗抑郁活性,可用于制备抗抑郁药物或食品;
2、本发明的假蒟提取物及其活性部位对小鼠正常生理情况基本没影响,保证了用药安全;且对小鼠的自主活动无明显影响,提示其无中枢兴奋或抑制作用;
3、本发明寻找到了一种高效低毒的治疗抑郁症的药物,为寻求新的抗抑郁药物提供了一种新的来源。
附图说明
图1.假蒟提取物在开野实验中对小鼠自主活动的影响(mean±SEM,n=10),注:control:空白组,FLX:氟西汀组,PSL:假蒟低剂量组,PSM:假蒟中剂量组,PSH:假蒟高剂量组。
图2.假蒟提取物在小鼠强迫游泳实验中对小鼠不动时间的影响(mean±SEM,n=10),注:control:空白组,FLX:氟西汀组,PSL:假蒟低剂量组,PSM:假蒟中剂量组,PSH:假蒟高剂量组。其中与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图3.假蒟提取物在小鼠悬尾实验中对小鼠不动时间的影响(mean±SEM,n=10),注:control:空白组,FLX:氟西汀组,PSL:假蒟低剂量组,PSM:假蒟中剂量组,PSH:假蒟高剂量组。其中与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01。
图4.假蒟提取物不同萃取部位在开野实验中对小鼠自主活动的影响((mean±SEM,n=10),注:control:空白组,FLX:氟西汀组,HP:贯叶连翘组,PSS:假蒟提取物石油醚部位组,PSR:假蒟提取物二氯甲烷部位组,PSY:假蒟提取物乙酸乙酯部位组,PSZ:假蒟提取物正丁醇部位组。
图5.假蒟提取物不同萃取部位在小鼠强迫游泳实验中对小鼠不动时间的影响(mean±SEM,n=10),注:control:空白组,FLX:氟西汀组,HP:贯叶连翘组,PSS:假蒟提取物石油醚部位组,PSR:假蒟提取物二氯甲烷部位组,PSY:假蒟提取物乙酸乙酯部位组,PSZ:假蒟提取物正丁醇部位组。其中与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图6.假蒟提取物不同萃取部位在小鼠悬尾实验中对小鼠不动时间的影响(mean±SEM,n=10),注:control:空白组,FLX:氟西汀组,HP:贯叶连翘组,PSS:假蒟提取物石油醚部位组,PSR:假蒟提取物二氯甲烷部位组,PSY:假蒟提取物乙酸乙酯部位组,PSZ:假蒟提取物正丁醇部位组。其中与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
具体实施方式
本发明提供了一种假蒟提取物该提取物,是将假蒟茎、叶原料粉碎,用含水乙醇提取,减压浓缩至干,得假蒟提取物,并进一步用乙酸乙酯萃取,得假蒟提取物乙酸乙酯部位。
本发明提供的一种假蒟提取物,其制备方法为:
将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇加热回流提取3次,每次溶媒用量约为生药量的8~10倍,每次提取时间为1~2小时,合并提取液后浓缩至干,得假蒟总浸膏,即假蒟总提取物。
再将假蒟总提取物溶于水后,分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇萃取3~5次,按照所用溶剂的极性由小到大的先后顺序(极性由小到大依次为:石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇)进行萃取。得到假蒟提取物乙酸乙酯部位。
本发明还提供了上述假蒟提取物在制备预防或治疗抑郁症药物或食品中的应用。
本发明采用了开野实验动物模型(徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2001:802.)、小鼠强迫游泳实验(Porsolt R D,Anton G,BlavetN,et al.Behavioural despair in rats:a new model sensitive to antidepressanttreatments[J].European journal of pharmacology,1978,47(4):379-391.)、小鼠悬尾实验(Steru L,Chermat R,Thierry B,et al.The tail suspension test:a new methodfor screening antidepressants in mice[J].Psychopharmacology,1985,85(3):367-370.),观察本发明提供的假蒟提取物灌胃给药的治疗作用。实验结果显示,假蒟提取物2g/kg(生药量)灌胃给药后,对小鼠正常生理情况基本没影响,从而保证了用药安全;在开野实验中,空白对照组、阳性药组及假蒟提取物组的实验结果之间没有显著性差异,表明假蒟提取物对小鼠的自主活动无明显影响,提示假蒟提取物无中枢兴奋或抑制作用。在小鼠强迫游泳实验和小鼠悬尾实验中,空白对照组与阳性药组的实验结果存在显著性差异,动物模型造模成功,而假蒟提取物组与空白组比较,小鼠的不动时间显著降低,表明假蒟提取物对抑郁症有较好的治疗作用。在进一步的实验研究中,对假蒟总提取物不同萃取部位的抗抑郁活性进行比较,结果显示乙酸乙酯部位为假蒟提取物抗抑郁的主要活性部位。
本发明寻找到了高效低毒的治疗抑郁症的药物。
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1:假蒟提取物的制备
将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇热提3次,每次溶媒用量约为生药量的10倍,每次提取时间为2小时,合并提取液后浓缩至干,并进一步干燥,得假蒟总浸膏,即本发明的假蒟提取物。
再将假蒟总提取物溶于水后,分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇萃取3~5次,按照所用溶剂的极性由小到大的先后顺序(极性由小到大依次为:石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇)进行萃取。得到本发明的假蒟提取物乙酸乙酯部位,以及假蒟提取物石油醚部位、假蒟提取物二氯甲烷部位、假蒟提取物正丁醇部位。
实施例2:假蒟提取物的抗抑郁药效学实验
2.1实验材料
ICR小鼠,雄性,体重18~22g,上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证号:SCXK(沪)2012-0002。自由饮水进食,室温(25±2)℃,12h昼夜节律。阳性对照药物盐酸氟西汀分散片(礼来苏州制药有限公司,批号:2842A,规格:20mg)。电子天平(AL104),梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司,旋转蒸发仪(RE-52C),上海青浦沪西仪器厂。
2.2实验分组与给药
2.2.1假蒟总提取物实验分组与给药
将小鼠按照体重随机分组,每组10只,分为空白对照组(给予同体积蒸馏水);阳性药盐酸氟西汀组(20mg/kg);假蒟低、中、高剂量组(分别给予50,100,200mg/kg假蒟醇提物,采用实施例1的方法制备)。灌胃给药,每天1次,连续给药7d。假蒟提取物与阳性药均用蒸馏水溶解成一定浓度,从而使灌胃量统一为0.4ml/d。
2.2.2假蒟提取物不同萃取部位实验分组与给药
将小鼠按照体重随机分组,每组10只,分为空白对照组(给予同体积蒸馏水);阳性药盐酸氟西汀组(20mg/kg);阳性药贯叶连翘提取物(250mg/kg);假蒟提取物石油醚萃取部位(PSS)低、中、高剂量组(分别给予30,60,120mg/kg假蒟提取物石油醚萃取部位);假蒟提取物二氯甲烷萃取部位(PSR)低、中、高剂量组(分别给予12.5,25,50mg/kg假蒟提取物二氯甲烷萃取部位);假蒟提取物乙酸乙酯萃取部位(PSY)低、中、高剂量组(分别给予12.5,25,50mg/kg假蒟提取物乙酸乙酯萃取部位);假蒟提取物正丁醇萃取部位(PSZ)低、中、高剂量组(分别给予20,40,80mg/kg假蒟提取物正丁醇萃取部位),假蒟提取物不同萃取部位采用实施例1的方法制备。
2.3开野实验
开野实验(open field test,OFT)是为了检测药物对小鼠自主活动的影响而设计的实验,若是药物对自主活动有影响,即对中枢有兴奋或抑制作用,会造成抗抑郁实验假阳性、假阴性的结果。将第7d灌胃1h后的小鼠放入画有7cm×7cm网格,50cm×50cm×30cm的敞箱中。实验在安静的环境中进行,室温环境(25±2)℃。将小鼠单只放入敞箱中,适应环境1min,然后记录从1min末到4min末时间段内小鼠穿行的网格数,小鼠四肢全部跨入一个方格计1分;直立(两前肢离地站立)一次计1分;攀附墙壁计1分;清洗整理(擦脸、舔爪子、清洗整理身体)计1分。每只小鼠测试结束后,处理排泄物,以免对下一只小鼠产生干扰。
2.4强迫游泳实验
强迫游泳实验(forced swimming test,FST)是目前应用最广泛的抗抑郁症动物模型。主要用于筛选具有抗抑郁活性的药物、研究抑郁症相关的受体。将第7d灌胃1h后的小鼠置于高30cm、水深10cm、直径15cm的透明柱形容器中,水温(25±2)℃。测试时间为6min,前2min为适应时间,在计时第2min末到第6min末的时间段内,测评小鼠的游泳行为和不动行为,记录下小鼠的不动行为的累计时间。所谓的不动行为是指:小鼠在水中停止挣扎,呈漂浮状态,除了为避免没入水中,使头部保持浮在水面以上,鼻孔露出水面而仅有的细小的肢体运动之外,无其他运动行为。
2.5悬尾实验
悬尾实验(Tail Suspension Test,TST)是研究抗抑郁的另一个经典模型。在小鼠第7d给药1h后,将小鼠的尾端(距离尾尖1cm处)用胶布固定住,使小鼠呈头部向下的悬挂状态。其头部距离平台面15cm,每只小鼠之间用板隔开其视线,避免相互间的干扰。小鼠会为了克服不正常体位而产生挣扎活动,但活动一段时间后出现不动状态,显示绝望状态。不动状态定义为:小鼠被动悬挂,完全不动。悬尾实验共进行6min,前2min为适应时间,记录从第2min末到第6min末时间段内不动状态的累计时间。
2.6实验结果
采用SPSS19.0对数据进行单因素方差分析(One-Way ANOVA),组间差异以LSD-t法或Dunnett’s t-test法进行比较,P<0.05时认为差异有统计学意义。
(1)假蒟提取物对小鼠自主活动的影响
实验结果表明,如图1所示,各剂量的假蒟提取物的实验结果与空白组、阳性药组均无显著性差异,表明假蒟提取物对小鼠的自主活动无明显影响,提示假蒟提取物无中枢兴奋或抑制作用。
(2)假蒟提取物对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响
小鼠在强迫游泳模型中出现的不动状态反映了动物的绝望行为,可模拟人类的抑郁状态。实验结果表明,如图2所示,假蒟提取物(50,100,200mg/kg)与空白组相比均能显著缩短小鼠的不动时间,具有统计学意义,表明假蒟提取物具有较好的抗抑郁作用。
(3)假蒟提取物对小鼠悬尾实验不动时间的影响
在悬尾实验中,实验结果如图3所示,假蒟提取物(100,200mg/kg)与空白对照组相比能显著缩短小鼠的不动时间,表明具有抗抑郁作用。
(4)假蒟提取物不同萃取部位对小鼠自主活动的影响
如图4所示,假蒟提取物石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的实验结果与空白组及阳性药组并无显著性差异,表明假蒟提取物各萃取部位对小鼠的自主活动无明显影响,无中枢兴奋或抑制作用。
(5)假蒟提取物不同萃取部位对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响
如图5所示,在FST中,PSS(30,60,120mg/kg)、PSR(50mg/kg)、PSY(12.5,25,50mg/kg)与空白组相比,小鼠的不动时间显著缩短,表明具有抗抑郁作用。
(6)假蒟提取物不同萃取部位对小鼠悬尾实验不动时间的影响
如图6所示,在TST中,PSY(12.5,25,50mg/kg)与空白组相比,小鼠的不动时间显著缩短,表明具有抗抑郁作用。
鉴于上述药效实验结果,本发明的假蒟提取物具有显著抗抑郁活性,且提取物的乙酸乙酯萃取部位为其发挥抗抑郁作用的活性部位,因此可用于制备抗抑郁药物或食品。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.假蒟总提取物在制备预防或治疗抑郁症的药物中的应用,所述的假蒟提取物的制备方法为:将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇加热回流提取3次,每次溶媒用量为生药量的10倍,每次提取时间为2小时,合并提取液后浓缩至干燥得假蒟总提取物。
2.假蒟提取物乙酸乙酯部位在制备预防或治疗抑郁症的药物中的应用,所述的假蒟提取物乙酸乙酯部位的制备方法为:(1)将假蒟茎、叶粉碎后,投入提取罐,用80%的乙醇加热回流提取3次,每次溶媒用量为生药量的10倍,每次提取时间为2小时,合并提取液后浓缩至干燥得假蒟总提取物;(2)将假蒟总提取物溶于水,分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇萃取3~5次,按照所用溶剂的极性由小到大的先后顺序进行萃取,极性由小到大依次为:石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯,正丁醇,得到假蒟提取物乙酸乙酯部位。
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热带植物次生物质杀虫生物活性研究;刘红芳;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)农业科技辑》;20051015(第6期);第II、18、34页 * |
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Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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