CN104547898A - 以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方 - Google Patents

以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方 Download PDF

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Abstract

一种以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫的中药组方，主要成分鲜竹沥；其他组分：青蒿、钩藤、黄芩、黄柏、黄连、甘草、黄芪、酒大黄、黑丑、皂角、莪术、槟榔，各组分按重量份数为：鲜竹沥15-20、青蒿2-5、钩藤10-15、黄芩10-15、黄柏1-5、黄连2-5、甘草1-5、黄芪1-5、酒大黄5-10、黑丑5-10、皂角1-5、大枣10-13、莪术5-10、槟榔3-8。

Description

以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方
技术领域
本发明通过动物实验，以抗球虫指数(ACI)为判断标准，评价抗球虫病效果，筛选出了以鲜竹沥为主要成分的抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方。
背景技术
鸡球虫病是一种对养鸡业危害最大的原虫病，是影响养鸡业发展的三大疾病之一，它可以引起鸡只死亡，发育停滞，产蛋减少，饲料报酬降低等，给养鸡业造成了严重经济损失。
目前，化学药物和抗生素类药物是控制球虫病的主要手段，自1939年研究发现磺胺药在临床上具有抗球虫效果以来，临床上已经出现了百余种抗球虫药。据统计从2000年起，英国每年使用的抗球虫药高达230吨。我国有二十多种常用的抗球虫药物，主要有地克珠利、百球清、盐霉素和磺胺类药物等。随着抗球虫药的长期使用，耐药性柔嫩艾美耳球虫虫株也相继出现，而且，有的球虫产生了针对药物表现出了多重耐药性和交叉耐药性。近来研究证实，几乎针对所有使用过的抗球虫药物都会有耐药虫株出现。孔繁瑶等人通过对全国多个地区的数十种柔嫩艾美耳球虫虫株的五种抗球虫药物敏感性进行检测，结果发现，只有杀球灵具有普遍敏感性，而氯苯胍、莫能菌素等常用抗球虫药物均不敏感。汪明等人通过对山东、广东等地区的多种不同的柔嫩艾美耳球虫虫株对百球清等常用抗球虫药物进行治疗，发现各地虫株都存在较为严重的耐药性，其中盐霉素最为明显，且有明显的交叉耐药性。虽然通过交替使用不同的抗球虫药物可以缓解耐药性的出现，但这种缓解只是暂时的，并非长久之计。耐药性是一种遗传学现象，一旦在某一虫株建立，将会保持很多年。随着耐药性、药物残留等问题日益严重，欧盟通过决议于2013年1月1日起禁止使用抗球虫药物，同时也禁止从其他各国进口含有抗球虫药物残留的肉鸡及其产品，这对我国肉鸡出口造成了严重的影响，我国虽然允许使用抗球虫药，但是人民群众也对药物残留等一系列问题越来关注。
为了避免抗球虫药物带来的负面影响，疫苗和中药成为当今控制球虫病的首选。疫苗的研究和开发引起了国内外专家和学者的高度关注。目前效果较好的是不同虫株活球虫的混合疫苗，如Coccivac等。但由于疫苗中所用的虫株是未经致弱的虫株，易引发球虫病的发生，因此，人们探索艾美耳球虫致弱，经过科学家的共同努力，已经取得了一些成效，有Immucox苗、Paracox和Liva-cox苗等。但是，野生疫苗如果使用不当的话，有可能存在潜在的散毒风险，弱毒球虫活疫苗存在一些特殊性，如只能经口免疫、摄入量不均、疫苗毒性返强、在短期内难以达到良好地效果，并具有生产成本高、周期长、毒性不稳定等缺点。因此，现在球虫疫苗并没有广泛应用于商品鸡。
柔嫩艾美耳球虫在中兽医属虫积范畴，属于虚症，由湿症引起，湿热困脾，进而引起其他病症。根据鸡球虫病的特点，在治疗当中采取清热燥湿为主、辅以止血活血、补血补气、杀虫抑虫等方法并依据中兽医辨证再进行组方治疗配伍。为了更好的解决球虫耐药性问题和降低球虫病的发生。国内外科研人员对中药防治球虫病进行了大量的研究，普遍认为中药抗球虫的作用机理：是通过调节动物机体的免疫功能，产生非特异性免疫以增强机体抗病力，达到消除病原体及减轻其对组织细胞的损伤恢复机体正常生理功能。中草药中含生物碱成分有杀灭或抑制病原微生物的作用，增强白细胞的吞噬能力，激发机体的抗感染免疫力。马海利等研究发现，中药可明显提高免疫器官中T淋巴细胞、B淋巴细胞的活性和数量，并提高肉鸡外周血液的淋巴细胞尤其是T淋巴细胞的数量，从而提高机体的体液及细胞免疫的水平，增强机体抗球虫的能力。Emilio研究发现，青蒿素能够显著减少球虫卵囊的产量和病变计分。Muhammad等人用甘蔗汁和甘蔗渣的水性和酒精提取物进行了抗球虫保护性免疫应答反应试验，发现甘蔗提取物具有抗球虫免疫和治疗作用。也有报道其具有相关的生物学和免疫学特性，包括对免疫应答的辅助作用和对艾美耳球虫感染的治疗作用，以及对鸡的免疫刺激和免疫调节作用，通过使用甘蔗提取物(水提取物和酒精提取物)可降低盲肠扁桃体CD4+T细胞的量，增强机体对球虫的抵抗力，诱导体液免疫应答，使体重增加，提高ACI百分比，同时减少卵囊排出和损伤评分。王芝英用马鞭草、黄柏、郁金、栀子等中药对柔嫩艾美耳球虫感染鸡的免疫水平研究发现，接种柔嫩艾美耳球虫后，感染不给药组CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群数目及百分比均低于感染给中药组。近年来，对中药有效成分的研究越来越多，如苦参含有苦参素，常山含有常山碱，大蒜含有大蒜素。大蒜、苦参、常山、青蒿、白头翁等都具有抗球虫作用，可作复方制剂或单独使用。
目前，临床上治疗球虫病主要有5类药物，常用的杀虫药有雄黄、青蒿、槟榔、仙鹤草和常山等。清热燥湿类有龙胆草、黄柏、黄连、黄芩和白头翁等。清热解毒常用药物有穿心莲、大青叶，蒲公英、地锦草和败酱草等。补益气血类药物，如党参、当归、熟地、黄芪等。活血止血类有地榆炭、仙鹤草、丹参、丹皮、蒲黄和白及等。其中，青蒿、常山等一般用作复方制剂的主药；黄柏、黄芪、甘草和黄连等一般用作复方制剂的辅药。研究发现，多种单味中药对柔嫩艾美耳球虫有治疗效果。青蒿一直被认为有很好的抗球虫作用，可以改善红细胞压积，调节免疫功能，促进淋巴细胞增加，产生非特异性免疫，清除自由基，加强抗氧化作用恢复机体的正常生理功能的作用，减轻各种临床症状，提高相对增重率。马海利研究发现，青蒿为主的复方中药对体外柔嫩艾美耳球虫卵囊的孢子化率有明显抑制作用，并且随着药物作用时间延长而降低，柔嫩艾美耳球虫卵囊经青蒿药液处理后接种鸡未发现有临床症状，说明以青蒿为主的复方中药对孢子化卵囊具有明显的杀灭作用。
大量研究表明，中草药具有不易产生药物残留、耐药性和毒副作用小等优点。因此，寻找安全有效的中草药防治鸡球虫病，是目前防治球虫病的主要措施。我们根据中兽医理论，通过动物实验，以ACI为判断标准，盲肠黏膜IgA为参考来评价抗球虫病的效果，筛选出了有效的抗球虫病中药方剂。
发明内容
本发明在于提供了以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方。
一种以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫的中药组方，主要成分鲜竹沥；其他组分：青蒿、钩藤、黄芩、黄柏、黄连、甘草、黄芪、酒大黄、黑丑、皂角、莪术、槟榔，柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊悬液经口接种，当天用药，至第8天捕杀，计算增重率、存活率、卵囊值、病变值及抗球虫指数(ACI)。经过多次筛选，确定了有效的抗柔嫩艾美耳球虫感染中药方剂，具体组方如下：各组分按重量份数为：鲜竹沥15-20、青蒿2-5、钩藤10-15、黄芩10-15、黄柏1-5、黄连2-5、甘草1-5、黄芪1-5、酒大黄5-10、黑丑5-10、皂角1-5、大枣10-13、莪术5-10、槟榔3-8。
有益效果
寻找安全有效的防治鸡球虫病的中药组方，减少在防治鸡球虫病中出现的耐药性、药物残留、疫苗免疫效果不佳等问题，促进养鸡业的健康发展。
具体实施方式
实施例1
一种以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫的中药组方，主要成分鲜竹沥；其他组分：青蒿、钩藤、黄芩、黄柏、黄连、甘草、黄芪、酒大黄、黑丑、皂角、莪术、槟榔，各组分按重量份数为：
1.实验虫株
BJ4株柔嫩艾美耳球虫，其孢子化卵囊感染8日龄雏鸡，收集6-8天的粪便，经饱和食盐水漂浮法纯化分离卵囊，将卵囊置于2.5％的重铬酸钾溶液中，有氧条件下孢子化48h，经卵囊计数后4℃下恒温保存。
2.实验动物
1日龄无球虫雏鸡，购于昌平养鸡场，饲养于无球虫鸡笼中，饲料和饮水无球虫污染。雏鸡饲料中未添加抗球虫药及其他抗生素。
实验分组及给药
中药方剂分3个实验组：高剂量组30g/L、中剂量组15g/L、低剂量组5g/L，均采取饮水给药。第4组：地克珠利攻虫用药组，第5组：攻虫不用药组，第6组：不攻虫不用药组。第7组中药饮水不攻虫组，以20g/L的剂量饮水。
将体重均匀的12日龄小公鸡分为7组，每组6只，每个样本重复3次。将第1、2、3和7组鸡进行中药给药组，第4组为化学药物地克珠利对照组，按预防剂量0.1ml/L给药自由饮水，第6组为不感染不用药对照组。2天后将14日龄鸡逐只空腹称重、编号。除第6、7组外，其它各组鸡于当天经口接种含4×104个柔嫩艾美耳孢子化卵囊悬液，至第8天捕杀。称重记录，捕杀，剖开腹腔取盲肠，记录盲肠病变，将盲肠匀浆，计算盲肠内卵囊数。
3.测定指标
无球虫环境中饲养12日龄开始攻虫，攻虫后第8天，鸡只称重记录，捕杀，剖开腹腔取盲肠，记录盲肠病变，将盲肠匀浆，计数盲肠内卵囊数。统计存活率、相对增重率、病变值、卵囊值等，计算抗球虫指数(ACI)。
(1)相对增重率(％)
相对增重率＝感染不给药组或用药组的平均增重÷不攻虫不用药鸡的平均增重×100％，不攻虫不用药组的相对增重率为100％。
(2)存活率(％)
存活率＝实验结束每组鸡只数÷实验初始每组鸡只数×100％
(3)病变记分及病变值
Johnson Reid(1970)制定的标准对盲肠病变进行评定记分。病变值＝组内平均病变记分×10。具体方法为：两侧盲肠病变不一致时，以严重的一侧为准。
肠道病变记分：
0：粪便、肠道正常
1：稀便，便中无可见血丝，黏膜有小出血点，肠道大小正常
2：粪便中有血丝，黏膜有小出血点，肠道大小正常
3：粪便中有较多血液，黏膜有出血斑
4：粪便中有大量血液，或者全为血液，或者为干酪样凝块，或者肠道极度萎缩，肠壁增厚
病变值＝各实验组平均病变记分×10
(4)卵囊值
取盲肠匀浆，根据McMaster的方法计算卵囊的数量，算出卵囊比，按日本角田清教授的方法换算卵囊值，卵囊比与卵囊值的关系：
卵囊比＝感染给药组粪便匀浆中卵囊÷感染不给药组粪便匀浆中卵囊×100％
卵囊比＜1.0，卵囊值0
卵囊比1-25，卵囊值1
卵囊比26-50卵囊值10
卵囊比51-75卵囊值20
卵囊比76-≥100卵囊值40
(5)抗球虫指数(ACI)根据美国默克(Merck)公司计算方法。
ACI＝(相对增重率+存活率)一(病变值+卵囊值)。
4.药效判定标准
ACI＞180为高效：160＜ACI≤180为中效；120≤ACI≤160者为低效；ACI＜120为无效。
抗球虫药效结果
本研究筛选的中药方剂在不同浓度的情况下ACI结果存在较大的差异，中剂量为169，高剂量163和低剂量的145。根据药效判定标准：ACI在180以上为高效；180-160之间为中效；160-120为低效；120以下为无效。因此，通过动物实验筛选出了以鲜竹沥为主要成分的抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方。

Claims (3)

1.一种以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫的中药组方，主要成分鲜竹沥；其他组分：青蒿、钩藤、黄芩、黄柏、黄连、甘草、黄芪、酒大黄、黑丑、皂角、莪术、槟榔，各组分按重量份数为：鲜竹沥15-20、青蒿2-5、钩藤10-15、黄芩10-15、黄柏1-5、黄连2-5、甘草1-5、黄芪1-5、酒大黄5-10、黑丑5-10、皂角1-5、大枣10-13、莪术5-10、槟榔3-8。
2.如权利要求1所述的以鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫的中药组方，其特征在于，该组方15～20g/L的中剂量和5g/L低剂量，其抗球虫指数高于高剂量，有明显的抗球虫效果。
3.如权利要求1所述的鲜竹沥为主要成分抗柔嫩艾美耳球虫的中药组方在治疗鸡柔嫩艾美耳球虫病上的应用。
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