CN109187998A - 一种测定载脂蛋白c-ⅱ浓度的试剂盒及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法。本发明采用的技术方案是:一种测定载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，其中试剂R2中加入了生物素和链霉亲和素,且生物素结合载脂蛋白C‑Ⅱ抗体比例为2：1，链霉亲和素结合生物素‑载脂蛋白C‑Ⅱ抗体比例为1:1。本发明的优点是:本发明的测定载脂蛋白C‑Ⅱ浓度的试剂盒，采用级联放大反应，即载脂蛋白C‑Ⅱ抗体连接生物素1:2，再与链霉亲和素1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到2‑100mg/L。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法。
背景技术
载脂蛋白一般分为载脂蛋白A、载脂蛋白B、载脂蛋白C、载脂蛋白D、载脂蛋白E和载脂蛋白(a)，每种又分为若干亚型。载脂蛋白的主要功能有：①维持脂蛋白的结构与脂类运输；②调控脂代谢有关酶的活性；③作为细胞表面脂蛋白受体的配体而参与脂蛋白的代谢。载脂蛋白C(apoC)是血浆中一组水溶性的低分子量蛋白质，包括四个亚类：载脂蛋白CⅠ、CⅡ、CⅢ和CⅣ，它们主要分布在极低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜微粒(CM)和高密度脂蛋白(HDL)。载脂蛋白C-Ⅱ(apoCⅡ)可促进LPL催化乳糜微粒(CM)及极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)水解为甘油和脂肪酸。它是冠心病的保护因子。载脂蛋白C-Ⅱ参与脂蛋白代谢的调节，尤其在调节血浆富含TG脂蛋白的分解代谢中起重要作用。高浓度的载脂蛋白C-Ⅱ将抑制富含TG脂蛋白的水解，或影响肝脏受体对富含TG脂蛋白的摄取，引起血浆TG水平升高，导致高TG血症的形成。载脂蛋白C-Ⅱ还可抑制卵磷脂胆固醇酰基转移酶的活性。目前采用的免疫透射比浊法测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒存在大量的非特异反应，且试剂应用的灵敏度和重复性差，已越来越不能满足使用要求。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是：提供一种灵敏度高，重复性好的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒及制备方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2的各组分及浓度包括：
进一步的技术方案：
所述试剂R1中的第一缓冲液A和第一缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。
所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种或几种的组合。
所述试剂R2中第二缓冲液A和第二缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。
所述试剂R2中稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、甘露醇中的一种或几种的组合。
所述试剂R2中的助悬剂为葡萄糖、D-海藻糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、丙三醇中的一种或几种的组合。
所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞等中的一种。
所述R1试剂pH在6.00-8.50之间，所述R2试剂pH在6.00-8.50之间。
所述生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1-4:1之间，链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为0.5:1-4:1之间。
测定载脂蛋白C-Ⅱ的试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
A)、试剂R1制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以0.8-3.2g/L标准，边搅拌边投入第一缓冲液A，以8.75-24.31g/L的标准投入第一缓冲液B，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-8.50之间，之后以5.8-20.0g/L标准，投入氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以40-120g/L、0.8％-2.0％的标准，依次投入PEG 6000、Proclin-950,投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以0.5-2.8g/L的标准，边搅拌边投入第二缓冲液A，以8.75-24.31g/L的标准，投入第二缓冲液B，注意不要让水溅出,搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-8.50之间，之后以5.8-20.0g/L标准投入氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以1-10g/L、5-30g/L、0.8-2.0ml/L的标准依次投入稳定剂、助悬剂和第二防腐剂，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀；
烧杯中以5-20g/L的标准加入生物素于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以25-75ml/L的标准，边搅拌边加入载脂蛋白C-Ⅱ抗体，搅拌1-4h反应，反应结束后透析去除未结合的游离抗体，以5-20g/L标准加入链霉亲和素反应1-4h，反应结束后透析去除未结合的生物素-抗体；
最后把偶联有链霉亲和素-生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体加入配液罐中，继续搅拌5-30分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀。
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。
由于上述技术方案的应用，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明的测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，在试剂R2中加入了生物素和链霉亲和素采用级联放大反应，即载脂蛋白C-Ⅱ抗体连接生物素1:2，再与链霉亲和素1:1混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到2-100mg/L。
附图说明
图1是本发明实施例4未采用级联放大反应R2试剂的定标曲线图。其中X轴表示标准品浓度，Y轴表示吸光度。
图2是本发明实施例4采用级联放大反应R2试剂的定标曲线图。其中X轴表示标准品浓度，Y轴表示吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：
一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括作为第一缓冲液A的二水合磷酸二氢钠，其浓度为0.8g/L，作为第一缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为24.31g/L，作为第一电解质的氯化钠，其浓度为5.8g/L,作为第一高分子促进剂的PEG 6000，其浓度为40g/L，以及作为第一防腐剂的Proclin-950，其浓度为2.0％，所述试剂R2的各组分及浓度包括作为第二缓冲液A的二水合磷酸二氢钠，其浓度为0.5g/L，作为第二缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为23.4g/L，作为第二电解质的氯化钠，其浓度为5.8g/L，作为第二稳定剂的牛血清白蛋白，其浓度为10g/L，作为第二助悬剂的D-海藻糖，其浓度为5g/L，作为第二防腐剂的Proclin-950，其浓度为0.8ml/L，以及载脂蛋白C-Ⅱ抗体、链霉亲和素和生物素，这三者的浓度分别为25ml/L、5g/L和5g/L。
以上测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
A)、试剂R1制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入浓度为0.8g/L二水合磷酸二氢钠和浓度为24.31g/L的十二水合磷酸氢二钠，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值为6.00，之后投入浓度为5.8g/L的氯化钠，待物料完全溶解后，再按照上述投料方式依次投入PEG 6000和Proclin-950，以上两者的浓度分别为40g/L和2.0％，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入浓度为0.5g/L的二水合磷酸二氢钠和浓度为23.4g/L的十二水合磷酸氢二钠，注意不要让水溅出,搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到8.5，之后投入浓度为5.8g/L的氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以浓度为10g/L、5g/L、0.8ml/L的标准依次投入牛血清白蛋白、D-海藻糖和Proclin-950，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀；
烧杯中以5g/L的标准加入生物素于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以25ml/L的标准，边搅拌边加入载脂蛋白C-Ⅱ抗体，搅拌1-4h反应，反应结束后透析去除未结合的游离抗体，以5g/L标准加入链霉亲和素反应1-4h，反应结束后透析去除未结合的生物素-抗体；
最后把偶联有链霉亲和素-生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体加入配液罐中，继续搅拌5-30分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为2：1，链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1。
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。
实施例2
一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括作为第一缓冲液A的二水合磷酸二氢钠，其浓度为3.2g/L，作为第一缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为8.75g/L，作为第一电解质的氯化钠，其浓度为20.0g/L,作为第一高分子促进剂的PEG 6000，其浓度为80g/L，作为第一防腐剂的Proclin-300，其浓度为0.8％，所述试剂R2的各组分及浓度包括作为第二缓冲液A的二水合磷酸二氢钠，其浓度为2.8g/L，作为第二缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为11.5g/L，作为第二电解质的氯化钠，其浓度为20.0g/L，作为第二稳定剂的酪蛋白，其浓度为1g/L，作为第二助悬剂的葡萄糖，其浓度为30g/L，作为第二防腐剂的Proclin-300，其浓度为2.0ml/L，以及载脂蛋白C-Ⅱ抗体、链霉亲和素和生物素，这三者的浓度分别为75ml/L、20g/L和20g/L。
以上测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
A)、试剂R1制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入浓度为3.2g/L二水合磷酸二氢钠和浓度为8.75g/L的十二水合磷酸氢二钠，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值为7.00，之后投入浓度为20g/L的氯化钠，待物料完全溶解后，再按照上述投料方式依次投入PEG 6000和Proclin-300，以上两者的浓度分别为80g/L和0.8％，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入浓度为2.8g/L的二水合磷酸二氢钠和浓度为11.5g/L的十二水合磷酸氢二钠，注意不要让水溅出,搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到7，之后投入浓度为20.0g/L的氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以浓度为1g/L、30g/L、2.0ml/L的标准依次投入酪蛋白、葡萄糖和Proclin-300，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀；
烧杯中以20g/L的标准加入生物素于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以75ml/L的标准，边搅拌边加入载脂蛋白C-Ⅱ抗体，搅拌1-4h反应，反应结束后透析去除未结合的游离抗体，以20g/L标准加入链霉亲和素反应1-4h，反应结束后透析去除未结合的生物素-抗体；
最后把偶联有链霉亲和素-生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体加入配液罐中，继续搅拌5-30分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为2：1，链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1。
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。
实施例3
一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括作为第一缓冲液A的二水合磷酸二氢钠，其浓度为2g/L，作为第一缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为16g/L，作为第一电解质的氯化钠，其浓度为12g/L,作为第一高分子促进剂的PEG 6000，其浓度为120g/L，作为第一防腐剂的硫柳汞，其浓度为1％，所述试剂R2的各组分及浓度包括作为第二缓冲液A的二水合磷酸二氢钠，其浓度为1.5g/L，作为第二缓冲液B的十二水合磷酸氢二钠，其浓度为17g/L，作为第二电解质的氯化钠，其浓度为13g/L，作为第二稳定剂的明胶，其浓度为5g/L，作为第二助悬剂的麦芽糖，其浓度为18g/L，作为第二防腐剂的硫柳汞，其浓度1.3ml/L，以及载脂蛋白C-Ⅱ抗体、链霉亲和素和生物素，这三者的浓度分别为50ml/L、12/L和12g/L。
以上测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的制备方法，包括如下步骤，
A)、试剂R1制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入浓度为2g/L二水合磷酸二氢钠和浓度为16g/L的十二水合磷酸氢二钠，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值为6.00，之后投入浓度为12g/L的氯化钠，待物料完全溶解后，再按照上述投料方式依次投入PEG 6000和硫柳汞，以上两者的浓度分别为120g/L和1％，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入浓度为1.5g/L的二水合磷酸二氢钠和浓度为17g/L的十二水合磷酸氢二钠，注意不要让水溅出,搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6，之后投入浓度为13g/L的氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以浓度为5g/L、18g/L、1.3ml/L的标准依次投入明胶、麦芽糖和硫柳汞，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀；
烧杯中以12g/L的标准加入生物素于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以50ml/L的标准，边搅拌边加入载脂蛋白C-Ⅱ抗体，搅拌1-4h反应，反应结束后透析去除未结合的游离抗体，以12g/L标准加入链霉亲和素反应1-4h，反应结束后透析去除未结合的生物素-抗体；
最后把偶联有链霉亲和素-生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体加入配液罐中，继续搅拌5-30分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀。生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为2：1，链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1。
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。
实施例4
本发明一种测载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的应用，其工作原理是:样本中的载脂蛋白C-Ⅱ与试剂中相应抗体(羊抗人载脂蛋白C-Ⅱ抗体)在液相中相遇，结合成抗原-抗体复合物，形成一定的浊度。该浊度的高低在足量抗体存在时与样本中APO C-Ⅱ的浓度成比例，将吸光度变化与已知浓度的校准品比较，抗原定量得出样本品中APO C-Ⅱ的含量。
采用R2试剂未采用级联放大反应的试剂盒，使用标准品进行定标，结果如表1所示，定标曲线如图1所示。
表1、R2试剂未采用级联放大反应定标结果：
| 校准品浓度(g/L) | dOD(吸光度) |
| 0 | -0.0006 |
| 6.36 | 0.0735 |
| 15.73 | 0.1241 |
| 31.24 | 0.2194 |
| 57.60 | 0.2930 |
| 103.07 | 0.2688 |
结果解析：如图1和表1所示，校准品浓度大于57.60g/L时出现hook效应。
R2试剂采用级联放大反应的试剂盒，使用标准品进行定标，结果如表2所示，定标曲线如图2所示。
表2、R2试剂采用级联放大反应定标结果：
| 校准品浓度(g/L) | dOD(吸光度) |
| 0 | -0.0024 |
| 6.36 | 0.0898 |
| 15.73 | 0.1784 |
| 31.24 | 0.3036 |
| 57.60 | 0.5372 |
| 103.07 | 0.7436 |
结果解析：如图2和表2所示，线性范围可做到2-100g/L。
实施例5
精密度CV检测:
R2试剂未采用级联放大反应的试剂盒，随机取3份临床血清样本，使用全自动生化分析仪对同一样本重复检测10次，检测结果如表3所示。
表3：检测样本的载脂蛋白C-Ⅱ含量(10次)及变异系数
结果解析：精密度CV＞5％。
R2试剂采用级联放大反应的试剂盒，随机取3份临床血清样本，使用全自动生化分析仪对同一样本重复检测10次，检测结果如表4所示。
表4：检测样本的载脂蛋白C-Ⅱ含量(10次)及变异系数
结果解析：精密度CV＜3％。
结论:采用级联放大反应，即1份的载脂蛋白C-Ⅱ抗体连接2份的生物素，再与1份的链霉亲和素混合反应，可明显改善重复性和灵敏度，线性范围可做到2-100mg/L。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进或替换，这些改进或替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2的各组分及浓度包括：
2.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述试剂R1和R2中的第一缓冲液A、第一缓冲液B、第二缓冲液A以及第二缓冲液B均为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓液中的一种或几种的组合。
3.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种或几种的组合。
4.根据权利要求2所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述第一缓冲液A和第二缓冲液A为二水合磷酸二氢钠，第一缓冲液B和第二缓冲液B为十二水合磷酸氢二钠。
5.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中稳定剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶、甘露醇中的一种或几种的组合。
6.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的助悬剂为葡萄糖、D-海藻糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、丙三醇中的一种或几种的组合。
7.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞等中的一种。
8.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述R1试剂pH在6.00-8.50之间，所述R2试剂pH在6.00-8.50之间。
9.根据权利要求1所述的一种测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒，其特征在于：所述生物素结合载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为1:1-4:1之间，链霉亲和素结合生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体比例为0.5:1-4:1之间。
10.如权利要求1-9任一测定载脂蛋白C-Ⅱ浓度的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，
A)、试剂R1制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以0.8-3.2g/L标准，边搅拌边投入第一缓冲液A，以8.75-24.31g/L的标准投入第一缓冲液B，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-8.50之间，之后以5.8-20.0g/L标准，投入氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以40-120g/L、0.8％-2.0％的标准，依次投入PEG 6000、Proclin-950,投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积；
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；
B)、试剂R2制备；
在配液罐中先加入适量纯化水于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以0.5-2.8g/L的标准，边搅拌边投入第二缓冲液A，以8.75-24.31g/L的标准，投入第二缓冲液B，注意不要让水溅出,搅拌5-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-8.50之间，之后以5.8-20.0g/L标准投入氯化钠，待物料完全溶解后再按照上述投料方式分别以1-10g/L、5-30g/L、0.8-2.0ml/L的标准依次投入稳定剂、助悬剂和第二防腐剂，投料完成后，继续搅拌5-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀；
烧杯中以5-20g/L的标准加入生物素于磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，以25-75ml/L的标准，边搅拌边加入载脂蛋白C-Ⅱ抗体，搅拌1-4h反应，反应结束后透析去除未结合的游离抗体，以5-20g/L标准加入链霉亲和素反应1-4h，反应结束后透析去除未结合的生物素-抗体；
最后把偶联有链霉亲和素-生物素-载脂蛋白C-Ⅱ抗体加入配液罐中，继续搅拌5-30分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀。
溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。
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