CN109100512A - 一种检测egfr的化学发光试剂盒 - Google Patents
一种检测egfr的化学发光试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109100512A CN109100512A CN201810872768.6A CN201810872768A CN109100512A CN 109100512 A CN109100512 A CN 109100512A CN 201810872768 A CN201810872768 A CN 201810872768A CN 109100512 A CN109100512 A CN 109100512A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- kit
- reagent
- chemical luminescence
- egfr
- slip mat
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 71
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 54
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 54
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 8
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 8
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract description 10
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract description 10
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 abstract description 9
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KQDJTBPASNJQFQ-UHFFFAOYSA-N 2-iodophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1I KQDJTBPASNJQFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- -1 potassium ferricyanide Chemical compound 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(F)C([N+]([O-])=O)=C1 LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 229920000832 Cutin Polymers 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003669 immune deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000002796 luminescence method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6881—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from skin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
- G01N2333/485—Epidermal growth factor [EGF] (urogastrone)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/71—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种检测EGFR的化学发光试剂盒，包括试剂盒盒体、试剂盒盒体内的试剂瓶，试剂盒盒体包括盒本体、盒盖，盒盖罩盖在盒本体上；试剂盒盒体为PMMA材质，坚固耐用，在运输过程中不会轻易损坏，盒盖上表面设有第一缺口，盒本体下表面设有防滑垫，防滑垫与第一缺口相匹配，若干试剂盒堆叠在一起时，节省空间，便于运输，设有减震垫和固定垫，能起到固定和保护试剂瓶的作用，本发明辣根过氧化物酶标记的EGFR抗体与微孔板上包被的EGFR抗体和待测样品形成“固相包被抗体‑待测抗原‑酶标抗体”的夹心复合物结构，用辣根过氧化物酶催化发光底物鲁米诺，灵敏度大大提高，可为临床诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。
Description
技术领域
本发明涉及医学免疫体外诊断试剂领域，具体涉及一种检测EGFR的化学发光试剂盒。
背景技术
表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor；EGFR)是表皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体。EGFR是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体，细胞膜贯通，分子量170kDa。在科研和生产过程中，需要测定溶液中EGFR蛋白含量变化，来监控实验条件和监控生产过程。EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。
目前EGFR测定方法有胶体金免疫层析(GICA)；蛋白质印迹(WB)；酶联免疫吸附试验(ELISA)，化学发光法免疫分析(CLIA)；GICA、ELISA、WB的优点是相对成本低廉，缺点是灵敏度低，EGFR蛋白含量少的情况下检测不出，CLIA作为非放射性的免疫分析法，具有灵敏度高、所需时间短、无污染、检测范围宽等特点，随着各种自动发光分析仪器面世，以及不同类型的化学发光免疫分析试剂盒的不断推出，成为时间分辨、放射免疫、酶联免疫分析的取代者，但目前市场上针对EGFR的化学发光试剂盒还很少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测EGFR的化学发光试剂盒，填补了市场上EGFR的化学发光试剂盒的空白，具有检测结果灵敏度高、检测范围宽等优点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测EGFR的化学发光试剂盒，包括试剂盒盒体、试剂盒盒体内的试剂瓶和固相载体，所述试剂瓶包括2个大号试剂瓶、3个中号试剂瓶、8个小号试剂瓶，2个大号试剂瓶中分别装有浓缩洗涤液、稀释液，3个中号试剂瓶分别装有酶标抗体、化学发光底物液A、化学发光底物液B，8个小号试剂瓶分别装有阳性对照、阴性对照、6个标准品溶液，所述试剂盒盒体包括盒本体、盒盖，所述盒盖罩盖在盒本体上，盒盖内表面设有一圈密封垫，盒盖外表面的四个顶角处设有第一缺口，第一缺口的截面为正方形结构，第一缺口的高度为d1,盒本体内部设有固定垫、减震垫，所述固定垫、减震垫上均设有13个试剂瓶孔，固定垫、减震垫试剂瓶孔的位置相对应，减震垫位于固定垫下方，固定垫与减震垫通过第一连接条相连接，盒本体下表面四个顶角处设有防滑垫，防滑垫的截面为正方形结构，防滑垫的大小、形状与第一缺口相匹配，防滑垫的高度为d2,d2＝d1。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述试剂盒盒体为PMMA材质。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述密封垫为橡胶材质。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述减震垫、固定垫、第一连接条为泡沫材质。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述防滑垫为PVC材质、PU材质、硅胶材质中的一种。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述固相载体为聚苯乙烯材质的96孔微量滴定板。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述固相载体包被EGFR抗体，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的EGFR抗体，化学发光底物液A为含有5ug/mL对碘苯酚、5.0mg/mL鲁米诺的Tris-HCl缓冲液(0.1M、pH＝8.5)，化学发光底物液B为含有100mg/mL过氧化氢、15mg/mL辣根过氧化氢酶的柠檬酸缓冲液(0.1M、pH＝4.5)。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述稀释液是将100ml牛血清白蛋白、20ml重量百分比浓度为1％的硫柳汞、10ml浓度为0.1M铁氰化钾、0.5ml的吐温-20、10ml浓度为10mg/ml的庆大霉素、余量为PBS缓冲液(0.01M、pH＝7.4)定容至1000ml混合得到的溶液。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述浓缩洗涤液是将重量为2.96g的NaH2PO4·2H2O、重量为29g的Na2HPO4·12H2O、重量为234g的NaCl和20ml吐温-20，加双蒸水定容至1000ml混合得到的溶液。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述阳性对照由EGFR阳性血清配制，所述阴性对照由健康人血清配制，所述标准品溶液为6个浓度梯度的EGFR抗原，所述浓度依次为：0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、250ng/ml、500ng/ml和1000ng/ml。
本试剂盒使用时还需用到包被缓冲液、封闭液，所述包被缓冲液为碳酸盐缓冲液(0.03mol/L、pH＝9.6)，所述封闭液是将0.01g叠氮化钠、10g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.03mol/L磷酸盐溶液(pH＝7.4)混合得到的溶液。
本发明具有有益效果：本发明辣根过氧化物酶标记的EGFR抗体与微孔板上包被的EGFR抗体和待测样品形成“固相包被抗体-待测抗原-酶标抗体”的夹心复合物结构，因此本发明采用的双抗体夹心法，既有效地利用了化学发光技术原理，又应用辣根过氧化物酶催化发光底物鲁米诺，检测鲁米诺产生的光信号，灵敏度大大提高，比现今的酶联免疫吸附分析灵敏度提高约10倍，可为临床诊断提供更为特异、快速、可靠的依据。
附图说明
图1为本发明结构示意图；
图2为图1的俯视图；
图3为盒盖上表面示意图；
图4为图3的仰视图；
图5为固定垫、减震垫、第一连接条示意图；
图6为试剂瓶示意图；
图中：1-盒本体，2-大号试剂瓶，3-中号试剂瓶，4-小号试剂瓶，5-盒盖，6-密封垫，7-第一缺口，8-固定垫，9-减震垫,10-试剂瓶孔，11-第一连接条，12-防滑垫。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、化学发光试剂盒的结构
如图1-6所示，一种检测EGFR的化学发光试剂盒，包括试剂盒盒体、试剂盒盒体内的试剂瓶和固相载体，所述试剂瓶包括2个大号试剂瓶、3个中号试剂瓶、8个小号试剂瓶，2个大号试剂瓶中分别装有浓缩洗涤液、稀释液，3个中号试剂瓶分别装有酶标抗体、化学发光底物液A、化学发光底物液B，8个小号试剂瓶分别装有阳性对照、阴性对照、6个标准品溶液，所述试剂盒盒体包括盒本体1、盒盖5，所述盒盖罩盖在盒本体上，盒盖内表面设有一圈密封垫6，盒盖外表面的四个顶角处设有第一缺口7，第一缺口的截面为正方形结构，第一缺口的高度为d1,盒本体内部设有固定垫8、减震垫9，所述固定垫、减震垫上均设有13个试剂瓶孔10，固定垫、减震垫试剂瓶孔的位置相对应，减震垫位于固定垫下方，固定垫与减震垫通过第一连接条11相连接，盒本体下表面四个顶角处设有防滑垫12，防滑垫的截面为正方形结构，防滑垫的大小、形状与第一缺口相匹配，防滑垫的高度为d2,d2＝d1。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述试剂盒盒体为PMMA材质。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述密封垫为橡胶材质。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述减震垫、固定垫、第一连接条为泡沫材质。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述防滑垫为PVC材质、PU材质、硅胶材质中的一种。
上述一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其中，所述固相载体为聚苯乙烯材质的96孔微量滴定板。
本试剂盒盒体为PMMA材质，更加坚固耐用，在运输过程中不会轻易损坏，盒盖上表面设有第一缺口，盒本体下表面设有防滑垫，防滑垫与第一缺口相匹配，若干试剂盒堆叠在一起时，一方面节省空间，另一方面不会轻易倒塌，便于运输，盒盖内表面设有密封垫，试剂盒盒体内设有减震垫和固定垫，能起到固定和保护试剂瓶的作用。
实施例2、化学发光试剂盒的组成
本试剂盒包括述浓缩洗涤液、稀释液、酶标抗体、化学发光底物液A、化学发光底物液B，阳性对照、阴性对照、标准品溶液、包被缓冲液、封闭液。
所述固相载体包被EGFR抗体，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的EGFR抗体，化学发光底物液A为含有5ug/mL对碘苯酚、5.0mg/mL鲁米诺的Tris-HCl缓冲液(0.1M、pH＝8.5)，化学发光底物液B为含有100mg/mL过氧化氢、15mg/mL辣根过氧化氢酶的柠檬酸缓冲液(0.1M、pH＝4.5)。
所述稀释液是将100ml牛血清白蛋白、20ml重量百分比浓度为1％的硫柳汞、10ml浓度为0.1M铁氰化钾、0.5ml的吐温-20、10ml浓度为10mg/ml的庆大霉素、余量为PBS缓冲液(0.01M、pH＝7.4)定容至1000ml混合得到的溶液。
所述浓缩洗涤液是将重量为2.96g的NaH2PO4·2H2O、重量为29g的Na2HPO4·12H2O、重量为234g的NaCl和20ml吐温-20，加双蒸水定容至1000ml混合得到的溶液。
所述阳性对照由EGFR阳性血清配制，所述阴性对照由健康人血清配制，所述标准品溶液为6个浓度梯度的EGFR抗原，所述浓度依次为：0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、250ng/ml、500ng/ml和1000ng/ml。
本试剂盒使用时还需用到包被缓冲液、封闭液，所述包被缓冲液为碳酸盐缓冲液(0.03mol/L、pH＝9.6)，所述封闭液是将0.01g叠氮化钠、10g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.03mol/L磷酸盐溶液(pH＝7.4)混合得到的溶液。
实施例3、试剂盒的制备方法
以EGFR阳性血清配制阳性对照，以健康人血清配制阴性对照，以EGFR阳性血清配制标准品，微量滴定板包被EGFR抗体，辣根过氧化物酶标记EGFR抗体，配制化学发光底物液A和B，配制浓缩洗涤液和稀释液，分装上述组份，以及组装为成品。
(1)包被：用30mM pH值为9.6的碳酸盐缓冲液配制成包被浓度为2ug/ml的EGFR抗体包被缓冲液，并将包被缓冲液负载于微量滴定板(100ul/孔)，2-8℃包被18-24小时。
(2)封闭：用0.01g叠氮化钠、10g牛血清白蛋白和100mL浓度为0.03mol/L磷酸盐溶液(pH＝7.4)混合得到的封闭液封闭上述洗涤后的微量滴定板。
(3)酶标抗体：取HRP5mg溶于0.2mol/L，pH＝5.6醋酸盐缓冲液1ml中，加入1％DNFB无水乙醇溶液0.1ml，室温下轻微搅拌1h，加入新鲜配置的0.1mol/LNaIO4 0.5ml，此时溶液由原棕色变为墨绿色，4℃放置30min，此时溶液由原棕色变为墨绿色，加入2.5％乙二醇1ml，室温下轻微搅拌1h，终止反应，加入待标记的抗体5-10mg，用1mol/L，pH＝9.5碳酸盐缓冲液，调节pH值至9.0，混匀，置4℃过夜；加入硼氢化钠溶液0.1ml，混匀，4℃放置3h，对0.01mol/L，pH＝7.4磷酸盐缓冲液，4℃透析过夜，换液3次，3000r/min离心30min，去除沉淀物，收集上清液即为酶标抗体。
(4)化学发光底物：化学发光底物液A为含有5ug/mL对碘苯酚、5.0mg/mL鲁米诺的Tris-HCl缓冲液(0.1M、pH＝8.5)，化学发光底物液B为含有100mg/mL过氧化氢、15mg/mL辣根过氧化氢酶的柠檬酸缓冲液(0.1M、pH＝4.5)。
实施例4、本试剂盒的使用方法
(1)从2-8℃冰箱中取出包被后的微量滴定板，室温放置15分钟。
(2)设阳性对照、阴性对照、标准品各2孔每孔50ul，待测样本50ul，振荡混匀后37℃温育30分钟。
(3)甩去反应液，每孔加满稀释后的洗涤液，洗板5次，最后在干净的吸水纸上扣干。
(4)每孔分别加入100uL酶标抗体，37℃温育20分钟。
(5)甩去反应液，每孔加满稀释后的洗涤液，洗板5次，最后在干净的吸水纸上扣干。
(6)每孔加化学发光底物液A、B各50μL，用微量震荡器充分振荡混合均匀，室温(20～25℃)避光反应5分钟。
(7)必须于加化学发光底物液后的第5～20分钟内测量，在化学发光测量仪上测量各孔的发光强度(RLU)，测量时间1秒/孔。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其特征在于，包括试剂盒盒体、试剂盒盒体内的试剂瓶和固相载体，所述试剂瓶包括2个大号试剂瓶、3个中号试剂瓶、8个小号试剂瓶，2个大号试剂瓶中分别装有浓缩洗涤液、稀释液，3个中号试剂瓶分别装有酶标抗体、化学发光底物液A、化学发光底物液B，8个小号试剂瓶分别装有阳性对照、阴性对照、6个标准品溶液，所述试剂盒盒体包括盒本体、盒盖，所述盒盖罩盖在盒本体上，盒盖内表面设有一圈密封垫，盒盖外表面的四个顶角处设有第一缺口，第一缺口的截面为正方形结构，第一缺口的高度为d1,盒本体内部设有固定垫、减震垫，所述固定垫、减震垫上均设有13个试剂瓶孔，固定垫、减震垫试剂瓶孔的位置相对应，减震垫位于固定垫下方，固定垫与减震垫通过第一连接条相连接，盒本体下表面四个顶角处设有防滑垫，防滑垫的截面为正方形结构，防滑垫的大小、形状与第一缺口相匹配，防滑垫的高度为d2,d2＝d1。
2.如权利要求1所述的一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒盒体为PMMA材质。
3.如权利要求1所述的一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其特征在于，所述密封垫为橡胶材质。
4.如权利要求1所述的一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其特征在于，所述减震垫、固定垫、第一连接条为泡沫材质。
5.如权利要求1所述的一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其特征在于，所述防滑垫为PVC材质、PU材质、硅胶材质中的一种。
6.如权利要求1所述的一种检测EGFR的化学发光试剂盒，其特征在于，所述固相载体为聚苯乙烯材质的96孔微量滴定板。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810872768.6A CN109100512A (zh) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810872768.6A CN109100512A (zh) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109100512A true CN109100512A (zh) | 2018-12-28 |
Family
ID=64848206
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810872768.6A Pending CN109100512A (zh) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109100512A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113495086A (zh) * | 2020-04-03 | 2021-10-12 | 深圳市帝迈生物技术有限公司 | Poct血细胞分析仪及试剂盒 |
Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030175803A1 (en) * | 2001-09-10 | 2003-09-18 | Michael Tsionsky | Assay buffer, compositions containing the same, and methods of using the same |
| CN101196518A (zh) * | 2006-12-07 | 2008-06-11 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 丙型肝炎病毒抗体化学发光法诊断试剂盒及其制备方法 |
| US20080261829A1 (en) * | 2006-09-21 | 2008-10-23 | Prometheus Laboratories Inc. | Antibody-based arrays for detecting multiple signal transducers in rare circulating cells |
| CN101373188A (zh) * | 2007-09-26 | 2009-02-25 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 肿瘤相关抗原19-9化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
| CN101419238A (zh) * | 2008-12-04 | 2009-04-29 | 山东莱博生物科技有限公司 | 丙型肝炎病毒核心抗原化学发光酶联免疫检测试剂盒 |
| US20090208932A1 (en) * | 2004-11-16 | 2009-08-20 | Edouard Collins Nice | Methods Of Detecting An Analyte In A Sample |
| CN101571544A (zh) * | 2008-04-29 | 2009-11-04 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种胰岛细胞抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
| CN102183636A (zh) * | 2010-12-30 | 2011-09-14 | 王滔 | 抗a族链球菌dna酶b抗体化学发光法诊断试剂盒及其使用方法 |
| US20140147936A1 (en) * | 2011-04-25 | 2014-05-29 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for determining prognosis of renal failure |
| JP2015105858A (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-08 | ウシオ電機株式会社 | 化学発光酵素免疫測定方法及び化学発光酵素免疫測定キット |
| WO2016011852A1 (zh) * | 2014-07-25 | 2016-01-28 | 北京普恩光德生物科技开发有限公司 | 膀胱肿瘤相关抗原检测试剂盒 |
| CN208476939U (zh) * | 2018-08-02 | 2019-02-05 | 宁波奥丞生物科技有限公司 | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 |
-
2018
- 2018-08-02 CN CN201810872768.6A patent/CN109100512A/zh active Pending
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030175803A1 (en) * | 2001-09-10 | 2003-09-18 | Michael Tsionsky | Assay buffer, compositions containing the same, and methods of using the same |
| US20090208932A1 (en) * | 2004-11-16 | 2009-08-20 | Edouard Collins Nice | Methods Of Detecting An Analyte In A Sample |
| US20080261829A1 (en) * | 2006-09-21 | 2008-10-23 | Prometheus Laboratories Inc. | Antibody-based arrays for detecting multiple signal transducers in rare circulating cells |
| CN101196518A (zh) * | 2006-12-07 | 2008-06-11 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 丙型肝炎病毒抗体化学发光法诊断试剂盒及其制备方法 |
| CN101373188A (zh) * | 2007-09-26 | 2009-02-25 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 肿瘤相关抗原19-9化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
| CN101571544A (zh) * | 2008-04-29 | 2009-11-04 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 一种胰岛细胞抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
| CN101419238A (zh) * | 2008-12-04 | 2009-04-29 | 山东莱博生物科技有限公司 | 丙型肝炎病毒核心抗原化学发光酶联免疫检测试剂盒 |
| CN102183636A (zh) * | 2010-12-30 | 2011-09-14 | 王滔 | 抗a族链球菌dna酶b抗体化学发光法诊断试剂盒及其使用方法 |
| US20140147936A1 (en) * | 2011-04-25 | 2014-05-29 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for determining prognosis of renal failure |
| JP2015105858A (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-08 | ウシオ電機株式会社 | 化学発光酵素免疫測定方法及び化学発光酵素免疫測定キット |
| WO2016011852A1 (zh) * | 2014-07-25 | 2016-01-28 | 北京普恩光德生物科技开发有限公司 | 膀胱肿瘤相关抗原检测试剂盒 |
| CN208476939U (zh) * | 2018-08-02 | 2019-02-05 | 宁波奥丞生物科技有限公司 | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 甘晓玲 等: "《免疫学检验技术》", 31 August 2012 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113495086A (zh) * | 2020-04-03 | 2021-10-12 | 深圳市帝迈生物技术有限公司 | Poct血细胞分析仪及试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106053791A (zh) | 抗缪勒氏管激素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN108088839B (zh) | 一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒 | |
| CN101377514A (zh) | 胰岛素自身抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN106918708A (zh) | 一种用于检测胰岛素的竞争法胶乳增强免疫透射比浊试剂盒 | |
| CN107807240A (zh) | 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN108205059A (zh) | 一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法 | |
| CN102207501A (zh) | 生物素化牛血清白蛋白和链霉亲和素酶标反应板及其制备方法 | |
| CN101539576A (zh) | 乙型肝炎病毒前s1抗原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN107632162A (zh) | 一种复合检测抗原及其应用 | |
| CN102226808A (zh) | 胰蛋白酶原-2化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| Li et al. | Micro-plate magnetic chemiluminescence immunoassay and its applications in carcinoembryonic antigen analysis | |
| CN208476939U (zh) | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 | |
| CN101363861A (zh) | 乙型肝炎病毒表面抗原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN102721813A (zh) | 前列腺特异抗原均相发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN203688563U (zh) | 一种胃蛋白酶原i酶联免疫一步法检测试剂盒 | |
| CN109100512A (zh) | 一种检测egfr的化学发光试剂盒 | |
| JP2006234676A5 (zh) | ||
| WO2012092708A1 (zh) | 一种测定抗ra33抗体igg的方法及试剂装置 | |
| CN106501519A (zh) | 人类免疫缺陷病毒抗原抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN101968483A (zh) | 一步半双抗原夹心免疫检测法 | |
| CN111398590B (zh) | 基于荧光传感器的单克隆抗体分泌细胞筛选方法 | |
| CN102749461B (zh) | 游离β人绒毛膜促性腺激素化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN111693721A (zh) | 基于普鲁士蓝纳米酶标记物的酶联免疫吸附实验的制备方法及应用 | |
| CN111610333A (zh) | 一种基于指尖血的酶联免疫分析方法 | |
| CN109061181A (zh) | 一种血管内皮细胞生长因子化学发光检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |