CN108088839B - 一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，所述试剂盒包括尿肌酐检测试剂和尿微量白蛋白检测试剂，所述尿肌酐检测试剂包括用于消除内源性肌酸和肌氨酸的试剂R1、用于将肌酐转化成肌酸的试剂R2和用于检测过氧化氢的发光底物1；尿微量白蛋白检测试剂包括固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体、用于使尿微量白蛋白与固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体结合的试剂R3、用于与尿微量白蛋白结合的碱性磷酸酶标记试剂R4和用于检测碱性磷酸酶的发光底物2。本发明对尿微量白蛋白和尿肌酐均采用化学发光的方法检测，并且发光都是辉光，所以该检测方法不但可以使两个指标都在化学发光仪上检测，而且能使测量更精准、更方便、更快捷。

Description

一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒。

背景技术

ACR(尿微量白蛋白/尿肌酐比值)在评判糖尿病肾病早期诊断中起着重要的作用，现在检测该指标主要有两种方法：一是通过尿微量白蛋白/尿肌酐的尿液分析测试卡对ACR值进行测量，二是分别测量尿微量白蛋白和尿肌酐的值，然后通过计算得到其值。尿微量白蛋白测量方法有酶联免疫法，放射免疫法、免疫比浊法、胶体金法、透射比浊法和免疫浊度法；肌酐检测方法主要有干化学和酶法。

对ACR的检测的现有技术和测量方法存在的缺点主要体现在以下几个方面：

1)测量不精确，有些方法通过直观的颜色深浅对ACR进行判断，而不能通过仪器读数获得更精确的值；

2)测量受到仪器的限制，实际临床中为了得到更为准确的ACR值，对尿微量白蛋白和尿肌酐分别测量，然后计算其比值，由于尿微量白蛋白和尿肌酐的测量方法是在不同的方法学基础上建立起来的，所以要用不同的仪器分别测量。

3)测量步骤繁琐，由上一点提到的需要用到不同的仪器，必然导致对同一样本分别进行处理，才能保证分别测量尿微量白蛋白和尿肌酐的值的准确；

4)测量干扰大，有些肌酐和尿微量白蛋白的测量方法，最终的结果是基于显色反应，由于尿样本身带有不同程度的颜色，所以必然会给检测带来干扰。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供了一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，以解决ACR测量繁琐、测量结果不精确的问题。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，所述试剂盒包括尿肌酐检测试剂和尿微量白蛋白检测试剂，所述尿肌酐检测试剂包括用于消除内源性肌酸和肌氨酸的试剂R1、用于将将肌酐转化成肌酸的试剂R2和用于检测过氧化氢的发光底物1，所述试剂R1包括肌酸酶和肌氨酸氧化酶，所述试剂R2包括肌酐酶；尿微量白蛋白检测试剂包括固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体、用于使尿微量白蛋白与固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体结合的试剂R3、用于与尿微量白蛋白结合的碱性磷酸酶标记的试剂R4和用于检测碱性磷酸酶的发光底物2，所述试剂R4包括碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体。

所述兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板或反应杯中。

本发明的试剂盒主要包括对肌酐的检测和对尿微量白蛋白的检测。

肌酐检测主要通过酶法-化学发光法进行检测，肌酐在肌酐酶的作用下生成肌酸、肌酸在肌酸酶的作用下生成肌氨酸、肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成过氧化氢，过氧化氢通过和发光底物1，2-二氧杂环丁烷硼酸在碱性条件下发生反应，从而产生恒定的辉光。

尿微量白蛋白的检测通过酶促化学发光免疫分析法对其进行测量，固定在发光板上的兔抗人血清白蛋白多克隆抗体能特异性的捕获尿液中的尿微量白蛋白，碱性磷酸酶标记的特异性抗体又能与尿液中的尿微量白蛋白结合，从而形成夹心结构，然后在体系中加入特异性发光底物9，10-二氢吖啶衍生物，在进行磷酸酶的作用下产生恒定的辉光。

上述检测试剂盒中操作简单，由于ACR指标中，肌酐和尿微量白蛋白的检测都是通过化学发光的方法来实现，所以两种物质的检测能在同一台化学发光仪上同时进行检测，便于该指标的自动化；试剂盒测量结果更加精确，由于ACR中两物质都是通过化学发光的方法实现，并所选用的发光底物都能产生恒定的辉光，所以比一般的测量方法线性更宽，测量更准确；干扰少，该发明是通过检测相对发光值而达到物质含量的测定的目的，所以不像其它测量方法一样，需要排除样本本身颜色的干扰。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述发光底物1为1，2-二氧杂环丁烷硼酸；所述发光底物2为9，10-二氢吖啶衍生物。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的实施方式，所述试剂R1包括下述浓度的组分：肌酸酶5～30KU/L和肌氨酸氧化酶2～10KU/L；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：肌酐酶10～30KU/L；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：甘氨酸1～10g/L和氧化三甲胺2～15g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.001～0.1mg/L。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂R1包括下述浓度的组分：肌酸酶8～20KU/L和肌氨酸氧化酶5～8KU/L；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：肌酐酶20～30KU/L；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：甘氨酸2～7g/L、氧化三甲胺5～10g/L。

所述试剂R4包括下述浓度的组分：碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.025～0.075m g/L。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂盒还包括缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、表面活性剂和防腐剂。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述缓冲液为磷酸缓冲液、HEPES缓冲液或TAPS缓冲液；抗干扰试剂为维生素C氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的至少一种；酶保护剂为海藻糖、蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种；表面活性剂为吐温20、tritonX-100、十二烷基-β-D麦芽糖苷中的至少一种；防腐剂为叠氮钠、生物防腐剂中的至少一种。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述生物防腐剂为KY100或Proclin300。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂R1包括下述浓度的组分：缓冲液0.01～0.1mol/L、肌酸酶5～30KU/L、肌氨酸氧化酶2～10KU/L、酶保护剂0.1～2wt％、表面活性剂0.005～0.01wt％、抗干扰试剂0.1～26KU/mL、DMSO 0.5～4wt％和防腐剂0.005～0.2wt％；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：缓冲液0.01～0.1mol/L、肌酐酶10～30KU/L，NaN₃ 0.001～0.01wt％、表面活性剂0.005～0.01wt％、酶保护剂0.1～2wt％和防腐剂0.005～0.2wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：缓冲液0.005～0.05mol/L、牛血清白蛋白0.05～20wt％、甘氨酸1～10g/L和氧化三甲胺2～15g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：缓冲液0.01～1mol/L、牛血清白蛋白0.1～5wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.001～0.1mg/L和防腐剂0.005～0.2wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述维生素C氧化酶的浓度为1～20KU/L、胆红素氧化酶的浓度为0.5～5KU/L和过氧化氢酶的浓度为0.1～1KU/L。

作为本发明所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂R1中的缓冲液的pH为6.0～8.0；试剂R2中的缓冲液的pH为7.5～8.5；所述试剂R3中的缓冲液的pH为7.0～8.0；所述试剂R4中的缓冲液的pH为7.0～8.0。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1)操作简单，由于ACR指标中，肌酐和尿微量白蛋白的检测都是通过化学发光的方法来实现，所以两种物质的检测能在同一台化学发光仪上同时进行检测，便于该指标的自动化；

2)测量更加精确，由于ACR中两物质都是通过化学发光的方法实现，并所选用的发光底物都能产生恒定的辉光，所以比一般的测量方法线性更宽，测量更准确；

3)干扰少，该发明是通过检测相对发光值而达到物质含量的测定的目的，所以不像其它测量方法一样，需要排除样本本身颜色的干扰。

附图说明

图1为本发明试剂盒的检测方法。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

HEPES为羟乙基呱嗪乙硫磺酸，非离子两性缓冲液，能较长时间控制恒定的pH范围；

TAPS为三羟甲基甲胺基丙磺酸；

ACR：尿微量白蛋白/尿肌酐比值。

实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

固定化抗体：Dako兔抗人血清白蛋白多抗；

兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

碱性磷酸酶标记抗体：鼠抗鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体(抗体编号，4T24-1A9)

1,2-二氧杂环丁烷硼酸(HyPerBlu，Lumigen Inc)；

9，10-二氢吖啶衍生物(Lumigen APS-5)；

生物防腐剂KY100购自科跃中楷。

实施例1

作为本发明所述尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的一种实施例，本实施例的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒为：

固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体：兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

试剂R1包括下述浓度的组分：HEPES缓冲液0.02mol/L(pH为7.0)、肌酸酶20KU/L、肌氨酸氧化酶10KU/L、海藻糖2wt％、吐温20 0.003wt％、过氧化氢酶1.0KU/L、胆红素氧化酶2.0KU/L、维生素C氧化酶10KU/mL、DMSO0.5wt％和Proclin300 0.045wt％；

试剂R2包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液0.05mol/L(pH为8.0)、肌酐酶30KU/L、NaN₃ 0.006wt％、吐温80 0.008wt％、海藻糖1.0wt％和Proclin3000.045wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

试剂R3包括下述浓度的组分：PBS缓冲液0.01mol/L(pH为7.0)、牛血清白蛋白0.1wt％、甘氨酸2g/L、氧化三甲胺2g/L、吐温20 0.2wt％、Proclin3000.045wt％；

试剂R4包括下述浓度的组分：PBS缓冲液0.05mol/L(pH为7.5)、牛血清白蛋白2.0wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.025m g/L、吐温20 0.2wt％和Proclin300 0.045wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

实施例2

作为本发明所述尿肌酐/尿微量白蛋白检测试剂盒的一种实施例，本实施例的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒为：

固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体：兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

试剂R1包括下述浓度的组分：Tris-HCl缓冲液0.01mol/L(pH为6.0)、肌酸酶10KU/L，肌氨酸氧化酶5KU/L、海藻糖2wt％、十二烷基-β-D麦芽糖苷0.005wt％、过氧化氢酶0.1KU/L、胆红素氧化酶3KU/L、维生素C氧化酶5KU/mL、DMSO 0.5wt％和Proclin3000.2wt％；

试剂R2包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液0.05mol/L(pH为8.0)、肌酐酶10KU/L、十二烷基-β-D麦芽糖苷0.005wt％、海藻糖2wt％和Proclin300 0.2wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

试剂R3包括下述浓度的组分：PBS缓冲液0.05mol/L(pH为8.0)、牛血清白蛋白1wt％、甘氨酸5g/L、吐温20 0.1wt％、氧化三甲胺2g/L、Proclin300 0.2wt％；

试剂R4包括下述浓度的组分：PBS缓冲液0.01mol/L(pH为7.0)、牛血清白蛋白0.5wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.035m g/L、吐温20 0.1wt％和Proclin300 0.2wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

实施例3

作为本发明所述尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的一种实施例，本实施例的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒为：

固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体：兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

试剂R1包括下述浓度的组分：PBS缓冲液0.1mol/L(pH为7.5)、肌酸酶20KU/L，肌氨酸氧化酶8KU/L、海藻糖0.5wt％、十二烷基-β-D麦芽糖苷0.005wt％、胆红素氧化酶1KU/L、维生素C氧化酶5KU/mL、DMSO 2wt％和Proclin300 0.045wt％；

试剂R2包括下述浓度的组分：PBS缓冲液0.1mol/L(pH为7.5)、肌酐酶30KU/L、十二烷基-β-D麦芽糖苷0.005wt％、海藻糖0.1wt％和Proclin300 0.045wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

试剂R3包括下述浓度的组分：磷酸缓冲液0.01mol/L(pH为7.5)、牛血清白蛋白1wt％、甘氨酸2g/L、吐温20 0.05wt％、氧化三甲胺5g/L和KY100 0.1wt％；

试剂R4包括下述浓度的组分：磷酸缓冲液0.01mol/L(pH为7.5)、牛血清白蛋白1wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.045m g/L、吐温20 0.05wt％和KY100 0.1wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

实施例4

作为本发明所述尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的一种实施例，本实施例的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒为：

固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体：兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

所述试剂R1包括下述浓度的组分：磷酸缓冲液0.05mol/L(pH为8.0)、肌酸酶5KU/L、肌氨酸氧化酶15KU/L、蔗糖0.1wt％、十二烷基-β-D麦芽糖苷0.008wt％、维生素C氧化酶0.1KU/mL、DMSO 1wt％和Proclin300 0.1wt％；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：磷酸缓冲液0.05mol/L(pH为7.5)、肌酐酶10KU/L，NaN₃ 0.001～0.01wt％、吐温20 0.008wt％、蔗糖0.1wt％和Proclin300 0.2wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：磷酸缓冲液0.005mol/L、(pH为7.5)牛血清白蛋白0.05wt％、甘氨酸1g/L和氧化三甲胺5g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：磷酸缓冲液0.01mol/L(pH为7.5)、牛血清白蛋白5wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.1mg/L和叠氮钠0.1wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

实施例5

作为本发明所述尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的一种实施例，本实施例的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒为：

固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体：兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

所述试剂R1包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液0.01mol/L(pH为6.0)、肌酸酶30KU/L、肌氨酸氧化酶5KU/L、蔗糖0.1wt％、聚乙二醇0.5wt％、triton X-100 0.075wt％、胆红素氧化酶5KU/mL、DMSO 1.5wt％和Proclin300 0.01wt％；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液0.05mol/L(pH为8.5)、肌酐酶20KU/L，NaN₃ 0.001～0.01wt％、triton X-100 0.01wt％、海藻糖0.15wt％和KY100 0.01wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液0.01mol/L(pH为7.0)、牛血清白蛋白5wt％、甘氨酸5g/L和氧化三甲胺15g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液0.05mol/L(pH为7.0)、牛血清白蛋白0.1wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.075mg/L和KY100 0.2wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

实施例6

作为本发明所述尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒的一种实施例，本实施例的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒为：

固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体：兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在发光板上；

所述试剂R1包括下述浓度的组分：HEPES缓冲液0.1mol/L(pH为7.0)、肌酸酶8KU/L、肌氨酸氧化酶8KU/L、海藻糖1wt％、吐温20 0.01wt％、维生素C氧化酶20KU/L、胆红素氧化酶5KU/L、过氧化氢酶1KU/L、DMSO 2wt％和KY100 0.005wt％；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：HEPES缓冲液0.1mol/L(pH为8.0)、肌酐酶30KU/L、NaN₃ 0.001～0.01wt％、十二烷基-β-D麦芽糖苷0.005wt％、甘露醇2wt％和叠氮钠0.005wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：HEPES缓冲液0.05mol/L(pH为8.0)、牛血清白蛋白20wt％、甘氨酸10g/L和氧化三甲胺2g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：TAPS缓冲液1mol/L(pH为8.0)、牛血清白蛋白1wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.001mg/L和Proclin3000.005wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

本发明描述的尿肌酐/尿微量白蛋白检测试剂的使用方法的主要流程如图1所示：

将检测样本稀释10倍后，分别取5μL样本加入反应杯1和反应杯2中，所述兔抗人血清白蛋白多克隆抗体包被在反应杯2中，在反应杯1中加入100μL试剂R1，并同时在反应杯中2中加入200μL试剂R3，37摄氏度震荡孵育。反应杯1在37摄氏度震荡孵育5min后加入50μL试剂R2，37摄氏度继续震荡孵育10min；加入10μL发光底物1孵育3min后立即在化学发光仪上进行检测，根据标准曲线获得肌酐的结果。反应杯2在37摄氏度震荡孵育30min后，加入洗涤液洗涤后，在反应杯2中加入100μL试剂R4，继续震荡孵育20min，之后加入100μL发光底物2，立即在化学发光仪上检测，根据标准曲线获得尿微量白蛋白的结果。从而进一步获得尿微量白蛋白/尿肌酐值(ACR)的值。

试剂盒性能测定

一、准确性实验：

为了验证试剂盒的准确性，且由于试剂盒分别测量两种物质，用实施例1～3中所得的试剂分别测量肌酐质控(自制，含高值和低值，已用试剂盒对其进行定制)和Dako尿微量白蛋白的质控品(含高值和低值)重复测量3次，结果如表1所示。

表1Dako质控样本尿微量白蛋白测定结果和本发明自制质控样本尿肌酐测定结果

注：Dako高值质控靶值：83mg/L，Dako低值质控靶值：14mg/L，肌酐高值质控靶值：20012uM，X±2S＝19153uM～22794uM；肌酐低值质控靶值：1975uM，X±2S＝1863uM～2014uM；

由表1结果可知，本发明所述试剂盒在质控X±2S范围内，符合《体外诊断试剂通用要求》。虽然市场上缺乏相应的尿肌酐标准品和质控品，但本发明自制肌酐质控品，用市售试剂进行赋值，有较为完整的值传递链。实施例1、2、3中的试剂分别对尿微量白蛋白和肌酐指控品进行测量，测量结果符合要求，准确性好。

二、抗干扰性实验：

配置含高浓度肌酐和白蛋白的基础样本，分成5份，分别往其中4份中加入不同的干扰物质，使其在基础样本中达到表2中的要求，分别用实施例1～3中所得的试剂对五份不同的样本进行检测，结果如表2所示。

相对偏差(％)＝(干扰样本测定值均值-对照样本测定均值)/对照样本的测定均值×100％

表2不同实施例试剂抗干扰性能比较

由表2可知，当胆红素≤500μM，血红蛋白≤15mg/L、抗坏血酸≤2000μM时，对测定结果没有明显干扰。与传统的比色试剂盒相比，本发明的试剂盒的采用化学发光法，检测不受试剂颜色的干扰，样本中存在的血红蛋白、色素均不会影响检测结果，因而本发明的试剂盒具有较强的抗干扰性能，有效提高了本发明的试剂检测的特异性和准确度。

三、稳定性实验

用实施例1～3中的试剂分装为14份，在37摄氏度放置，进行加速稳定性实验。每天两个稳定的样本进行测量每个浓度测定2次，测定后取平均值，测定结果如表3

表3样品重复性测定结果

通过表3可知，实施例1～3中的试剂，通过加速稳定性实验，其测定样本的值没有明显的变化，证明该试剂比较稳定。且阿伦尼乌斯公式，试剂在37摄氏度能稳定14天基本等价于在4摄氏度条件下稳定2年。

四、临床样本检测

取20例临床样本(含肾病病人的尿样)进行尿微量白蛋白/尿肌酐值的测定。由于市售试剂盒暂还没有ACR检测试剂盒出售，分别选用已批准上市的某尿微量白蛋白检测试剂盒(免疫比浊法)和肌酐检测试剂盒(酶法)分别测定尿微量白蛋白和尿肌酐。尿微量白蛋白和尿肌酐分别按照各自说明书进行测定。

该市售尿微量白蛋白检测试剂盒的主要组成为：

缓冲液(R1)：

聚乙二醇 6％w/v

Tris-HCl缓冲液 20mmol/L，pH7.4

NaCl 150mmol/L

抗体试剂(R2)：

抗人白蛋白抗体 20mmol/L，pH7.4

Tris-HCl缓冲液 150mmol/L，pH7.4

NaCl 150mmol/L

质控品：缓冲液基质，白蛋白。

该市售肌酐检测试剂盒的主要组成成分为：

试剂1：

N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)缓冲液:30mmol/L；

肌酸酶(微生物):≥332μkat/L；

肌氨酸氧化酶(微生物):≥132μkat/L；

抗坏血酸氧化酶(微生物)：≥33μkat/L；

2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸(HTIB)：1.2g/L；

洗涤剂；

防腐剂。

试剂2：

TAPS缓冲液：50mmol/L，pH8.0；

抗坏血酸氧化酶：≥498μkat/L；

过氧化酶(辣根)：≥16.6μkat/L；

4-氨基安替比林：0.5g/L；

六氰合化铁钾：60mg/L；

洗涤剂；

防腐剂。

选用实施例3中的试剂对20例临床样本进行测定。测定如表4所示

表4临床尿样本检测数据

注：(-)经过临床确证无肾病的患者，(+-)经过临床确证为糖尿病肾病患者(早期)，(+)临床确认为肾病中晚期患者。

根据欧洲推荐标准，正常人中ACR的正常范围＜2.5mg/mol，糖尿病肾病早期患者ACR在2.5～25之间。由表4可知，临床测定的结果与确诊结果一致。但是用两种不同厂家的试剂分别对尿微量白蛋白和尿肌酐的值进行测量，然后通过计算获得ACR值，其结果有两例与实际确诊结果不一致(样本2和样本14)，证明使用本发明的试剂盒测定ACR时，更加准确，能更好适用于临床诊断。

综上所述，1)本发明的试剂盒检测操作简单，由于ACR指标中，肌酐和尿微量白蛋白的检测都是通过化学发光的方法来实现，所以两种物质的检测能在同一台化学发光仪上同时进行检测，便于该指标的自动化；测量更加精确，由于ACR中两物质都是通过化学发光的方法实现，并所选用的发光底物都能产生恒定的辉光，所以比一般的测量方法线性更宽，测量更准确；干扰少，该发明是通过检测相对发光值而达到物质含量的测定的目的，所以不像其它测量方法一样，需要排除样本本身颜色的干扰。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (8)

1.一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括尿肌酐检测试剂和尿微量白蛋白检测试剂，所述尿肌酐检测试剂包括用于消除内源性肌酸和肌氨酸的试剂R1、用于将肌酐转化成肌酸的试剂R2和用于检测过氧化氢的发光底物1，所述试剂R1包括肌酸酶和肌氨酸氧化酶，所述试剂R2包括肌酐酶；尿微量白蛋白检测试剂包括固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体、用于使尿微量白蛋白与固定化兔抗人血清白蛋白多克隆抗体结合的试剂R3、用于与尿微量白蛋白结合的碱性磷酸酶标记的试剂R4和用于检测碱性磷酸酶的发光底物2，所述试剂R4包括碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体；所述试剂R3包括甘氨酸和氧化三甲胺；所述发光底物1为1，2-二氧杂环丁烷硼酸；所述发光底物2为9，10-二氢吖啶衍生物。

2.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：肌酸酶5～30KU/L和肌氨酸氧化酶2～10KU/L；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：肌酐酶10～30KU/L；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：甘氨酸1～10g/L和氧化三甲胺2～15g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.001～0.1mg/L。

3.根据权利要求1所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：肌酸酶8～20KU/L和肌氨酸氧化酶5～8KU/L；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：肌酐酶20～30KU/L；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：甘氨酸2～7g/L、氧化三甲胺5～10g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.025～0.075mg/L。

4.根据权利要求1～3任一项所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、表面活性剂和防腐剂。

5.根据权利要求4所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为磷酸缓冲液、HEPES缓冲液或TAPS缓冲液；抗干扰试剂为维生素C氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的至少一种；酶保护剂为海藻糖、蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种；表面活性剂为吐温20、triton X-100、十二烷基-β-D麦芽糖苷中的至少一种；防腐剂为叠氮钠、生物防腐剂中的至少一种。

6.根据权利要求4所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：缓冲液0.01～0.1mol/L、肌酸酶5～30KU/L、肌氨酸氧化酶2～10KU/L、酶保护剂0.1～2wt％、表面活性剂0.005～0.01wt％、抗干扰试剂0.1～26KU/mL、DMSO0.5～2wt％和防腐剂0.005～0.2wt％；

所述试剂R2包括下述浓度的组分：缓冲液0.01～0.1mol/L、肌酐酶10～30KU/L，NaN30.001～0.01wt％、表面活性剂0.005～0.01wt％、酶保护剂0.1～2wt％和防腐剂0.005～0.2wt％；

发光底物1：1，2-二氧杂环丁烷硼酸；

所述试剂R3包括下述浓度的组分：缓冲液0.005～0.05mol/L、牛血清白蛋白0.05～20wt％、甘氨酸1～10g/L和氧化三甲胺2～15g/L；

所述试剂R4包括下述浓度的组分：缓冲液0.01～1mol/L、牛血清白蛋白0.1～5wt％、碱性磷酸酶标记的鼠抗人血清白蛋白单克隆抗体0.001～0.1mg/L和防腐剂0.005～0.2wt％；

发光底物2：9，10-二氢吖啶衍生物。

7.根据权利要求6所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述抗干扰试剂为维生素C氧化酶、胆红素氧化酶和过氧化氢酶，所述维生素C氧化酶的浓度为1～20KU/L、胆红素氧化酶的浓度为0.5～5KU/L和过氧化氢酶的浓度为0.1～1KU/L。

8.根据权利要求6所述的尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液的pH为6.0～8.0；试剂R2中的缓冲液的pH为7.5～8.5；所述试剂R3中的缓冲液的pH为7.0～8.0；所述试剂R4中的缓冲液的pH为7.0～8.0。