CN109100443A - 同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法 - Google Patents

同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，该方法包括以下步骤：(1)去除待测样品中的蛋白质，得提取液；(2)采用吸附剂对提取液进行净化，得净化液，将净化液干燥后用上样溶剂定容，获得待测液；吸附剂由质量比为10:6:3的无水硫酸镁、N‑丙基乙二胺和C18粉末混合而成；(3)绘制标准曲线；(4)将待测液在预设的液相色谱串联质谱条件下进样，根据标准曲线和待测液的检测结果计算待测液中相应新型烟碱类药物或代谢物的含量。本申请采用分散固相萃取净化技术对提取液进行净化，步骤简便，易于操作，绿色友好，净化仅需5‑10分钟，提取效率高，耗材只需5‑7元/次，成本低。

Description

同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的 方法
技术领域
本发明属于蜂产品质量检测和安全监控技术领域，具体涉及一种同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法。
背景技术
新型烟碱类杀虫剂在全球市场上占有很高的份额，其广泛用于水稻、玉米、南瓜等农作物的害虫防治。自上世纪80年代第一个烟碱类杀虫剂吡虫啉问世，到目前为止已有十几个产品商品化或即将商品化，如呋虫胺(dinotefuran)、噻虫胺(clothianidin)、吡虫啉(imidacloprid)、啶虫脒(acetamiprid，又名吡虫清)等。
由于新型烟碱类杀虫剂的使用会污染蜜源植物，进而被富集在蜜蜂体内，对蜜蜂的身体机能产生危害，已有研究发现，当蜜蜂接触新型烟碱类杀虫剂时，会迷失回巢方向，并且，蜂王繁殖能力显著下降，从而导致蜂群的数量明显减少。蜜蜂体内的药物残留还有极大可能会导致蜂产品(如蜂蜜、蜂王浆)受到污染，进而威胁消费者的身体健康。
为此欧盟和日本法规规定了蜂蜜及其他蜂产品中该类药物的残留限量要求：(1)啶虫脒及其代谢物N-去甲基啶虫脒之和，氟啶虫酰胺及其代谢物4-(三氟甲基)烟酰胺之和，吡虫啉：50μg/kg；(2)噻虫胺，呋虫胺，烯啶虫胺，噻虫嗪(噻虫嗪与噻虫胺之和)：10μg/kg；(3)噻虫啉：200μg/kg；(4)啶虫脒(日本)：200μg/kg。伴随着人民生活水平和食品安全意识的提高，人们对蜂王浆保健需求逐渐增加，新型烟碱类农药在蜂王浆中的残留问题也日益突出。因此建立蜂王浆中多种烟碱类药物及其代谢物残留量测定的方法，具有重要的科学意义和社会意义。
众所周知，蜂王浆产品中除了含有杂质外，还含有大量的蛋白质，而这些蛋白质的存在会对烟碱类药物的检测产生严重干扰，因此在对蜂王浆中多种烟碱类药物及其代谢物残留量进行测定时，需要先对样品进行蛋白质沉淀和杂质净化。如申请号为CN201710386451.7的中国发明专利申请公开了一种液相色谱串联质谱法同时测定蜂王浆中10种烟碱类药物残留量的方法，该方法先采用甲醇和水去除待测样品中的蛋白质，再利用固相萃取技术进行净化。
但固相萃取技术中使用到的HLB固相萃取柱的价格较高，一般市场上的价格在70元/根左右(且为一次性使用)，每次过柱的时间都至少要30-40分钟，预处理时间过长；净化所需的设备成本和时间成本均较高。
发明内容
本申请的发明目的是提供一种设备成本和时间成本均较低的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法。
为实现上述发明目的，本申请的技术方案如下：
一种同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，包括以下步骤：
(1)在待测样品中添加蛋白质去除剂，涡旋，离心取上清，获得提取液；
(2)将所述的提取液与吸附剂混合，涡旋，离心取上清，获得净化液，将净化液干燥后用上样溶剂定容，过滤后，获得待测液；
所述的吸附剂由质量比为10:6:3的无水硫酸镁、N-丙基乙二胺和C18粉末混合而成；
(3)配制含有吡蚜酮、呋虫胺、烯啶虫胺、噻虫嗪、氟啶虫酰胺、吡虫啉、噻虫胺、氯噻啉、啶虫脒、噻虫啉、4-(三氟甲基)烟酰胺和N-去甲基啶虫脒的标准混合溶液，将标准混合溶液进行梯度稀释，获得标准混合工作溶液系列；
(4)将所述的标准混合工作溶液系列和所述的待测液在预设的液相色谱串联质谱条件下分别进样，根据标准混合工作溶液系列的检测结果绘制标准曲线，再根据标准曲线和待测液的检测结果计算待测液中相应新型烟碱类药物或其代谢物的含量。
本申请在进行蛋白质沉淀后，采用分散固相萃取净化技术对提取液进行净化，与HLB固相萃取净化技术相比，本申请的分散固相萃取净化技术净化过程简便，易于操作，只需“向提取液中加吸附剂-涡旋-离心-取上清”即可，并且净化过程直接在提取液中进行，无需额外添加有机试剂，绿色友好，符合绿色化学理念；整个净化过程仅需5-10分钟，仅为HLB固相萃取净化技术的1/4；而且分散剂成本低，只需5-7元/次，仅为HLB固相萃取净化技术的1/10。
本申请的吸附剂采用质量比为10:6:3的无水硫酸镁、N-丙基乙二胺和C18 粉末混合而成，其中无水硫酸镁能够去除提取液中的水分，而N-丙基乙二胺和 C18粉末则能够去除提取液中绝大部分干扰物，如有机酸、脂肪酸、碳水化合物等。在该组份配比下，吸附剂不仅能够有效去除提取液中的干扰杂质，而且对各待测烟碱类药物及其代谢物的回收率均达到85％以上，有的甚至达到90％以上，表明吸附剂对待测烟碱类药物及其代谢物的吸附影响较小，确保了最终的检测结果的准确性和灵敏性。
作为优选，步骤(1)中，先向待测样品中添加相应待测烟碱类药物的内标物，再添加所述的蛋白质去除剂。外标法和同位素内标稀释法双重定量使得最终的检测结果更加准确。
所述的内标物为呋虫胺-D3、噻虫嗪-D3、吡虫啉-D4、噻虫胺-D3、啶虫脒-D3和噻虫啉-D4内标物。
作为优选，步骤(1)中，所述的蛋白质去除剂为水和甲醇。具体地，先在待测样品中加入水，涡旋混匀后，静置一段时间，以便水溶性蛋白质充分溶解至水中；然后再加入甲醇，涡旋混匀，高速离心，促使蜂王浆中的蛋白质迅速沉淀，取上清液获得提取液。甲醇沉淀可以视情况重复多次进行，以尽可能多地去除蛋白质。
作为优选，步骤(2)中，所述的上样溶剂由体积比为9：1的0.15％甲酸水溶液与甲醇混合而成。上样溶剂与质谱开始时所采用的流动相一致。
作为优选，步骤(2)中，吸附剂与提取液的质量体积比为70-100mg：1mL。若吸附剂用量过低，则易导致杂质吸附不完全，提取液中杂质留存量过多；若吸附剂用量过高，则不仅造成吸附剂浪费，而且还有可能降低待测物质的回收率，进而影响检测准确率和灵敏度。
作为优选，步骤(4)中的液相条件为：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱，150mm×4.6mm，5μm；
流动相A：0.15％甲酸水溶液，含5mmol乙酸铵；
流动相B：甲醇；
流速：0.4mL/min；
进样量：10μL；
柱温：40℃；
梯度洗脱程序：①0min：90％A，10％B；②6.0min：30％A，70％B；③12.0min： 30％A，70％B；④14.0min：90％A，10％B；⑤15.0min：90％A，10％B；
质谱条件为：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
监测方式：多反应监测；
电喷雾电压：3000V；
干燥气温度：高纯氮气，150℃；
干燥气流量：高纯氮气，14L/min；
雾化气压力：高纯氮气，275.8kPa；
鞘气温度：高纯氮气，350℃；
鞘气流量：高纯氮气，10L/min；
质谱参数为：
⑥吡蚜酮：定量离子对为218.1/105.2，碰撞能量为25V；定性离子对为 218.1/78.2，碰撞能量为42V；
⑦呋虫胺：定量离子对为203.1/129.1，碰撞能量为10V；定性离子对为 203.1/157.1，碰撞能量为5V；
⑧烯啶虫胺：定量离子对为271.1/225.1，碰撞能量为10V；定性离子对为 271.1/99.1，碰撞能量为16V；
⑨噻虫嗪：定量离子对为292.1/211.1，碰撞能量为11V；定性离子对为 292.1/132.1，碰撞能量为28V；
⑩氟啶虫酰胺：定量离子对为230.1/203.1，碰撞能量为19V；定性离子对为230.1/174.1，碰撞能量为19V；
吡虫啉：定量离子对为256.1/175.1，碰撞能量为21V；定性离子对为 256.1/209.1，碰撞能量为17V；
噻虫胺：定量离子对为250.1/169.1，碰撞能量为12V；定性离子对为 250.1/132.1，碰撞能量为20V；
氯噻啉：定量离子对为262.1/181.2，碰撞能量为13V；定性离子对为 262.1/122.2，碰撞能量为35V；
啶虫脒：定量离子对为223.1/126.1，碰撞能量为25V；定性离子对为223.1/56.1，碰撞能量为18V；
噻虫啉：定量离子对为253.1/126.1，碰撞能量为23V；定性离子对为 253.1/186.1，碰撞能量为14V；
4-(三氟甲基)烟酰胺：定量离子对为191.1/98.1，碰撞能量为36V；定性离子对为191.1/171.1，碰撞能量为20V；
N-去甲基啶虫脒：定量离子对为209.1/126.1，碰撞能量为18V；定性离子对为209.1/90.1，碰撞能量为40V；
呋虫胺-D3：离子对为206.1/132.0，碰撞能量为10V；
噻虫嗪-D3：离子对为295.0/214.2，碰撞能量为12V；
吡虫啉-D4：离子对为260.2/179.0，碰撞能量为22V；
噻虫胺-D3：离子对为253.1/172.1，碰撞能量为12V；
啶虫脒-D3：离子对为226.1/126.1，碰撞能量为24V；
噻虫啉-D4：离子对为257.1/126.1，碰撞能量为25V。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本申请在进行蛋白质沉淀后，采用分散固相萃取净化技术对提取液进行净化，与HLB固相萃取净化技术相比，本申请的分散固相萃取净化技术净化过程简便，易于操作，只需“向提取液中加吸附剂-涡旋-离心-取上清”即可，并且净化过程直接在提取液中进行，无需额外添加有机试剂，绿色友好，符合绿色化学理念；整个净化过程仅需5-10分钟，仅为HLB固相萃取净化技术的 1/4；而且分散剂成本低，只需5-7元/次，仅为HLB固相萃取净化技术的1/10。
(2)本申请的吸附剂采用质量比为10:6:3的无水硫酸镁、N-丙基乙二胺和 C18粉末混合而成，其中无水硫酸镁能够去除提取液中的水分，而N-丙基乙二胺和C18粉末则能够去除提取液中绝大部分干扰物，如有机酸、脂肪酸、碳水化合物等。在该组份配比下，吸附剂不仅能够有效去除提取液中的干扰杂质，而且对各待测烟碱类药物及其代谢物的回收率均达到85％以上，有的甚至达到 90％以上，表明吸附剂对待测烟碱类药物及其代谢物的吸附影响较小，确保了最终的检测结果的准确性和灵敏性。
(3)本本申请经水稀释样品并初步沉淀蛋白、甲醇进一步沉淀蛋白和提取、分散固相萃取技术进行净化的前处理过程，采用液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法和同位素内标稀释法定量。以S/N等于10计，对蜂王浆样品中各待测烟碱类药物及其代谢物的检测定量限分别是2.5μg/kg(吡蚜酮和呋虫胺)，5.0μg/kg (烯啶虫胺、氯噻啉、啶虫脒和噻虫啉)和12.5μg/kg(噻虫嗪、氟啶虫酰胺、吡虫啉、噻虫胺、4-(三氟甲基)烟酰胺和N-去甲基啶虫脒)。方法线性关系良好，相关系数大于0.996；总体回收率81.2％～119％；相对标准偏差1.7％～ 12.2％。
(4)本申请的检测方法绿色环保、简便快捷，消耗资源小，检测成本低，所提及的前处理过程、涉及化合物以及测定所用仪器可以与已有方法进行很好的互补，适用于蜂王浆中新型烟碱类药物及其代谢物残留量同时测定的要求，可以为维护食品安全和保障蜂王浆质量进一步提供有力的技术保障。
附图说明
图1为空白蜂王浆添加目标化合物的加标回收实验测试的总离子流图；
图2a为空白蜂王浆添加吡蚜酮(218.1/105.2)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2b为空白蜂王浆添加吡蚜酮(218.1/78.2)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2c为空白蜂王浆添加呋虫胺(203.1/129.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2d为空白蜂王浆添加呋虫胺(203.1/157.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2e为空白蜂王浆添加呋虫胺-D3(206.1/132.0)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2f为空白蜂王浆添加烯啶虫胺(271.1/225.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2g为空白蜂王浆添加烯啶虫胺(271.1/99.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2h为空白蜂王浆添加噻虫嗪(292.1/211.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2i为空白蜂王浆添加噻虫嗪(292.1/132.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2j为空白蜂王浆添加噻虫嗪-D3(295.0/214.2)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2k为空白蜂王浆添加氟啶虫酰胺(230.1/203.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2l为空白蜂王浆添加氟啶虫酰胺(230.1/174.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2m为空白蜂王浆添加氟啶虫酰胺吡虫啉(256.1/175.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2n为空白蜂王浆添加吡虫啉(256.1/209.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2o为空白蜂王浆添加吡虫啉-D4(260.2/179.0)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2p为空白蜂王浆添加噻虫胺(250.1/169.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2q为空白蜂王浆添加噻虫胺(250.1/132.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2r为空白蜂王浆添加噻虫胺-D3(253.1/172.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2s为空白蜂王浆添加氯噻啉(262.1/181.2)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2t为空白蜂王浆添加氯噻啉(262.1/122.2)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2u为空白蜂王浆添加啶虫脒(223.1/126.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2v为空白蜂王浆添加啶虫脒(223.1/56.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2w为空白蜂王浆添加啶虫脒-D3(226.1/126.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2x为空白蜂王浆添加噻虫啉(253.1/126.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2y为空白蜂王浆添加噻虫啉(253.1/186.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图2z为空白蜂王浆添加噻虫啉-D4(257.1/126.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图3a为空白蜂王浆添加4-(三氟甲基)烟酰胺(191.1/98.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图3b为空白蜂王浆添加4-(三氟甲基)烟酰胺(191.1/171.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图3c为空白蜂王浆添加N-去甲基啶虫脒(209.1/126.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
图3d为空白蜂王浆添加N-去甲基啶虫脒(209.1/90.1)的加标回收实验测试的选择性离子流图；
其中，加标浓度分别为：5μg/kg(吡蚜酮、呋虫胺、烯啶虫胺、氯噻啉)， 12.5μg/kg(噻虫嗪、氟啶虫酰胺、噻虫胺、啶虫脒、N-去甲基啶虫脒、4-(三氟甲基)烟酰胺)，25μg/kg(吡虫啉)和100μg/kg(噻虫啉)。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案做进一步详细说明。
实施例1
本实施例一种同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，本实施例可以同时对蜂王浆中10种新型烟碱类药物和2种代谢物的残留量进行检测，这10种新型烟碱类药物和2种代谢物的基本信息如表1所示。
表1各类化合物的基本信息
该方法包括以下步骤：
(1)在待测样品中添加蛋白质去除剂，涡旋，离心取上清，获得提取液；
对蜂王浆样品中新烟碱类药物残留进行检测时，样品中蛋白沉淀是前处理的关键步骤，本实施例将三氯乙酸沉淀蛋白和有机溶剂沉淀蛋白进行比对，确定最优的蛋白质沉淀方式，比较结果如下：
在蜂王浆中直接加入三氯乙酸溶液进行蛋白沉淀时，其提取溶剂较难通过减压浓缩进行去除，且呋虫胺和噻虫啉无法被有效的提取，啶虫脒提取回收率仅为30％左右。
有机溶剂沉淀蛋白试验分别考察甲醇和乙腈沉淀蛋白的情况，研究发现甲醇沉淀蛋白的效果好于乙腈，且乙腈作为沉淀提取剂时，呋虫胺、吡蚜酮和烯啶虫胺的提取回收率小于50％，甲醇作为沉淀提取剂时的提取回收率均大于80％。最后选择甲醇作为蛋白沉淀剂和提取溶剂。
具体操作方法为：称取蜂王浆样品2.00g(精确至0.01g)于50mL聚塞离心管中，加入同位素内标物(如表2所示)，加入10mL水，涡旋，混匀，静置 5min，加入甲醇至20mL，涡旋，混匀，高速离心，取上清液0.5mL，加甲醇至10mL，涡旋，混匀，静置，高速离心，取上清液1.0mL，获得待净化的提取液。
(2)将提取液与吸附剂混合，涡旋，离心取上清，获得净化液，将净化液干燥后用上样溶剂定容，过滤后，获得待测液；
本实施例分别考察N-丙基乙二胺(PSA)、无水硫酸镁、C18粉末和石墨化碳黑(GCB)四种吸附剂的净化效果，考察结果如下：
a、N-丙基乙二胺(PSA)吸附净化：对比30mg，50mg，100mg N-丙基乙二胺(PSA)对各化合物的净化回收率无明显差异，大于78％；
b、无水硫酸镁吸附净化：对比50mg，75mg，150mg无水硫酸镁对各化合物的净化回收率无明显差异，均大于80％；
c、C18粉末吸附净化：对比15mg，25mg，50mg C18粉末对各化合物的净化回收率无明显差异，大于78％；
d、石墨化碳黑(GCB)吸附净化：对比10mg，15mg，20mg石墨化碳黑 (GCB)的净化情况，其中吡蚜酮的净化回收率小于20％，其他化合物的净化回收率大于80％。
并且，不同比例配比的N-丙基乙二胺(PSA)、无水硫酸镁、C18粉末混合而成的吸附剂对各化合物的净化回收率无明显差异。以绿色环保、节约检测成本为基点出发选择30mgN-丙基乙二胺(PSA)，15mg C18粉末和50mg无水硫酸镁为本实施例的吸附剂。
具体操作为：取提取液1.0mL，转移至内含上述吸附剂的15mL聚塞离心管中，涡旋，混匀，高速离心，转移全部上清液用氮气吹至近干；再用甲醇： 0.15％甲酸水溶液(体积比为1：9)定容至1mL，涡旋，混匀，过0.22μm滤膜，获得待测液，用于进行液相色谱-质谱/质谱仪测定。
(3)配制含有吡蚜酮、呋虫胺、烯啶虫胺、噻虫嗪、氟啶虫酰胺、吡虫啉、噻虫胺、氯噻啉、啶虫脒、噻虫啉、4-(三氟甲基)烟酰胺和N-去甲基啶虫脒(各化合物的基本信息如表1)的标准混合溶液，将标准混合溶液进行梯度稀释，获得标准混合工作溶液系列；
(4)将标准混合工作溶液系列和所述的待测液在预设的液相色谱串联质谱条件(如表2和表3)下分别进样，根据标准混合工作溶液系列的检测结果绘制标准曲线，再根据标准曲线和待测液的检测结果计算待测液中相应新型烟碱类药物或其代谢物的含量。
表2各类化合物的质谱参数
表3液相色谱串联质谱的仪器条件参数
需要注意的是，绘制标准曲线时，所有化合物均以质量浓度X为横坐标，对于加有内标物的化合物，以峰面积的比值Y为纵坐标，而未加有内标物的化合物则以峰面积Y为纵坐标。
在上述色谱条件下，判断样品中是否存在相应的被测物，需要满足如下条件：待测液中出现的质量色谱峰保留时间与标准混合工作溶液一致，允许偏差小于±2.5％，该色谱峰所对应的待测物在表2中的质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的混合基质标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可确定含有该待测物。
实施例2回收率试验
向不含有上述10种新型烟碱类药物和2种代谢物的蜂王浆中分别添加已知量的新型烟碱类药物和代谢物，并按照实施例1的方法对蜂王浆作前处理，获得待测液；根据实施例1的标准曲线、采用实施例1的液相色谱串联质谱条件检测待测液中各新型烟碱类药物和代谢物的含量，进行回收率实验：
回收率(％)＝(回收量-空白样品中含量)/加标量×100％；
每次试验平行重复六次，回收率试验结果如表4所示。
总离子流图如图1所示，各化合物的选择性离子流图如图2a-2z和图3a-3d所示。
表4蜂王浆中10种新型烟碱类药物和2种代谢物添加水平、回收率和精密度 (n＝6)
从表4中可以看出，12种待测物的回收率都达到了80％以上，相对标准偏差在1.7％-12.2％之间，表明本发明的检测方法对于检测蜂王浆中10种新型烟碱类药物和2种代谢物具有较高的准确性、重现性和实用性。
对比例1
本实施例采用HLB固相萃取柱对提取液进行净化(参见申请号为CN201710386451.7的中国发明专利申请中公开的相应内容)，其余步骤与实施例 1相同。HLB固相萃取净化与实施例1分散固相萃取净化的比对如表5所示。
表5 HLB固相萃取净化与实施例1分散固相萃取净化的比对情况

Claims (8)

1.一种同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在待测样品中添加蛋白质去除剂，涡旋，离心取上清，获得提取液；
(2)将所述的提取液与吸附剂混合，涡旋，离心取上清，获得净化液，将净化液干燥后用上样溶剂定容，过滤后，获得待测液；
所述的吸附剂由质量比为10:6:3的无水硫酸镁、N-丙基乙二胺和C18粉末混合而成；
(3)配制含有吡蚜酮、呋虫胺、烯啶虫胺、噻虫嗪、氟啶虫酰胺、吡虫啉、噻虫胺、氯噻啉、啶虫脒、噻虫啉、4-(三氟甲基)烟酰胺和N-去甲基啶虫脒中的至少两种的标准混合溶液，将标准混合溶液进行梯度稀释，获得标准混合工作溶液系列；
(4)将所述的标准混合工作溶液系列和所述的待测液在预设的液相色谱串联质谱条件下分别进样，根据标准混合工作溶液系列的检测结果绘制标准曲线，再根据标准曲线和待测液的检测结果计算待测液中相应新型烟碱类药物或其代谢物的含量。
2.如权利要求1所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，步骤(4)中的液相条件为：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱，150mm×4.6mm，5μm；
流动相A：0.15％甲酸水溶液，含5mmol乙酸铵；
流动相B：甲醇；
流速：0.4mL/min；
进样量：10μL；
柱温：40℃；
梯度洗脱程序：①0min：90％A，10％B；②6.0min：30％A，70％B；③12.0min：30％A，70％B；④14.0min：90％A，10％B；⑤15.0min：90％A，10％B；
质谱条件为：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
监测方式：多反应监测；
电喷雾电压：3000V；
干燥气温度：高纯氮气，150℃；
干燥气流量：高纯氮气，14L/min；
雾化气压力：高纯氮气，275.8kPa；
鞘气温度：高纯氮气，350℃；
鞘气流量：高纯氮气，10L/min；
质谱参数为：
⑥吡蚜酮：定量离子对为218.1/105.2，碰撞能量为25V；定性离子对为218.1/78.2，碰撞能量为42V；
⑦呋虫胺：定量离子对为203.1/129.1，碰撞能量为10V；定性离子对为203.1/157.1，碰撞能量为5V；
⑧烯啶虫胺：定量离子对为271.1/225.1，碰撞能量为10V；定性离子对为271.1/99.1，碰撞能量为16V；
⑨噻虫嗪：定量离子对为292.1/211.1，碰撞能量为11V；定性离子对为292.1/132.1，碰撞能量为28V；
⑩氟啶虫酰胺：定量离子对为230.1/203.1，碰撞能量为19V；定性离子对为230.1/174.1，碰撞能量为19V；
吡虫啉：定量离子对为256.1/175.1，碰撞能量为21V；定性离子对为256.1/209.1，碰撞能量为17V；
噻虫胺：定量离子对为250.1/169.1，碰撞能量为12V；定性离子对为250.1/132.1，碰撞能量为20V；
氯噻啉：定量离子对为262.1/181.2，碰撞能量为13V；定性离子对为262.1/122.2，碰撞能量为35V；
啶虫脒：定量离子对为223.1/126.1，碰撞能量为25V；定性离子对为223.1/56.1，碰撞能量为18V；
噻虫啉：定量离子对为253.1/126.1，碰撞能量为23V；定性离子对为253.1/186.1，碰撞能量为14V；
4-(三氟甲基)烟酰胺：定量离子对为191.1/98.1，碰撞能量为36V；定性离子对为191.1/171.1，碰撞能量为20V；
N-去甲基啶虫脒：定量离子对为209.1/126.1，碰撞能量为18V；定性离子对为209.1/90.1，碰撞能量为40V。
3.如权利要求2所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，步骤(1)中，先向待测样品中添加相应待测烟碱类药物的内标物，再添加所述的蛋白质去除剂。
4.如权利要求3所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，所述的内标物为呋虫胺-D3、噻虫嗪-D3、吡虫啉-D4、噻虫胺-D3、啶虫脒-D3和噻虫啉-D4内标物。
5.如权利要求3所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，各内标物的质谱参数为：
呋虫胺-D3：离子对为206.1/132.0，碰撞能量为10V；
噻虫嗪-D3：离子对为295.0/214.2，碰撞能量为12V；
吡虫啉-D4：离子对为260.2/179.0，碰撞能量为22V；
噻虫胺-D3：离子对为253.1/172.1，碰撞能量为12V；
啶虫脒-D3：离子对为226.1/126.1，碰撞能量为24V；
噻虫啉-D4：离子对为257.1/126.1，碰撞能量为25V。
6.如权利要求1所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的蛋白质去除剂为水和甲醇。
7.如权利要求1所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的上样溶剂由体积比为9：1的0.15％甲酸水溶液与甲醇混合而成。
8.如权利要求1所述的同时测定蜂王浆中多种新型烟碱类药物及其代谢物残留量的方法，其特征在于，步骤(2)中，吸附剂与提取液的质量体积比为70-100mg：1mL。
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