CN109078051B - 一种药物组合物在制备抗病毒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种药物组合物在制备抗病毒药物中的应用，属于药物领域。该药物组合物是通过将质量比为1：0.2～5的细果角茴香和棘豆混合提取所得的提取物。这种药物组合物为细果角茴香和棘豆的混合提取物，具有较佳的抗病毒作用，可用于制备抗病毒的药物或者制备上呼吸道感染的药物，应用前景广阔。

Description

一种药物组合物在制备抗病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种药物组合物在制备抗病毒药物中的应用。

背景技术

上呼吸道感染简称上感，又称普通感冒。是包括鼻腔、咽或喉部急性炎症的总称，其有70~80%由病毒感染引起，包括流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、腺病毒、流感和副流感病毒、呼吸道合胞病毒、埃可病毒、柯萨奇病毒等。

目前，治疗上呼吸道感染的抗病毒药物绝大部分为合成药物，例如利巴韦林和奥司他韦等，在其长期使用过程中，可造成病毒的耐药现象，使其抗病毒疗效一般、且副作用大。鉴于此，特提出本专利。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物组合物的新用途，这种药物组合物为细果角茴香和棘豆的混合提取物，具有较佳的抗病毒作用，可用于制备抗病毒的药物或者制备上呼吸道感染的药物，应用前景广阔。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种药物组合物在制备用于抗病毒药物中的应用，该药物组合物是通过将质量比为1：0.2~5的细果角茴香和棘豆混合提取所得的提取物。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述棘豆为镰形棘豆或轮叶棘豆。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述药物组合物中，原阿片碱的含量为0.1~0.8% ；隐品碱的含量为0.1~0.8%；细果角茴香碱的含量为0.1~0.8%。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与棘豆形成的混合药材与70~100% 乙醇溶液按照料液比1：15~25混合回流提取2~4次，每次0.5~1.5h，将所得提取液浓缩、烘干。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述病毒包括流感病毒、奇昆古尼亚病毒。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述流感病毒为甲型流感病毒。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述甲型流感病毒为H1N1亚型病毒。

一种药物组合物在制备用于治疗上呼吸道感染的药物中的应用，上述药物组合物包括质量比为1：0.2~5的细果角茴香和棘豆。

进一步地，在本发明较佳的实施方式中，上述上呼吸道感染为病毒感染所致。

一种治疗病毒性上呼吸道感染的液体制剂，其通过将上述药物组合物与无菌水混合形成5~500 g/L的溶液并过滤制得。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明提供了一种药物组合物的新用途，这种药物组合物为细果角茴香和棘豆的混合提取物。发明人研究发现，这种药物组合物能够降低流感病毒感染小鼠的肺指数，对流感病毒有抑制作用；且能延长流感病毒感染小鼠的存活时间，降低流感病毒的致死率。此外，这种药物组合物也具有抗奇昆古尼亚病毒的功效。由此提示，该药物组合物可用于制备抗病毒的药物或者制备上呼吸道感染的药物，应用前景广阔。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本实施方式提供一种药物组合物，其是通过将质量比为1：0.2~5的细果角茴香和棘豆混合提取所得的提取物。

进一步地，细果角茴香和棘豆的质量比为1：0.4~3；或者为1：0.5~3；或者为1：0.8~1.2；或者为1：0.9~1.1。

其中，细果角茴香，为罂粟科植物节裂角茴香Hypecoum leptocarpum Hook.f.etThoms.的全草。具有清热解毒、凉血的功效。

棘豆，为豆科植物镰形棘豆OxytropisfalcataBunge或轮叶棘豆O.chiliophyllaRoyle的干燥全草，具有清热解毒，生肌愈疮，涩脉止血、通便的功效。较为优选地，以镰形棘豆入药。

这种药物组合物中标志性的活性成分为原阿片碱、隐品碱和细果角茴香碱，其结构式如下所示：

较为优选地，这种药物组合物中，上述三种有效成分的含量为：

原阿片碱的含量为0.1~0.8%，或者为0.3~0.6%，或者为0.4~0.5%；

隐品碱的含量为0.1~0.8%，或者为0.3~0.6%，或者为0.4~0.5%；

细果角茴香碱的含量为0.1~0.8%，或者为0.3~0.6%，或者为0.4~0.5%。

进一步地，该药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与棘豆形成的混合药材与70~100% 乙醇溶液按照料液比1：15~25混合回流提取2~4次，每次0.5~1.5h，将所得提取液浓缩、烘干。

优选地，回流提取的温度为60~80℃，或者为65~75℃，或者为70℃。

优选地，料液比为1：17~24，或者为1：19~22，或者为1：20。

优选地，乙醇溶液浓度为80~100%，或者为90~100%，或者为95%。

优选地，提取2~3次，每次0.8~1.2h；或者提取3次，每次1h。

本实施方式还提供一种治疗病毒性上呼吸道感染的液体制剂，其是通过将上述药物组合物与无菌水混合形成5~500 g/L的药液并过滤制得。

优选地，药液的浓度为10~300 g/L；或者为50~200 g/L；或者为100 g/L。

优选地，对药液进行过滤时，采用0.2~0.4μm的滤膜进行过滤，或者采用0.22μm的滤膜进行过滤。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：

实施例1

本实施例提供一种药物组合物，其包括质量比为1：1的细果角茴香和镰形棘豆。

这种药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与镰形棘豆按照质量比1：1混合，并与95%的乙醇按照料液比1：20混合，于70℃下回流提取3次，每次1h。回收上清液后浓缩，烘干，粉碎，即得。

实施例2

本实施例提供一种药物组合物，其包括质量比为1：5的细果角茴香和镰形棘豆。

这种药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与镰形棘豆按照质量比1：5混合，并与无水乙醇按照料液比1：15混合，于80℃下回流提取2次，每次1.5h。回收上清液后浓缩，烘干，粉碎，即得。

实施例3

本实施例提供一种药物组合物，其包括质量比为5：1的细果角茴香和镰形棘豆。

这种药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与镰形棘豆按照质量比5：1混合，并与70%的乙醇按照料液比1：25混合，于60℃下回流提取3次，每次0.5h。回收上清液后浓缩，烘干，粉碎，即得。

实施例4

本实施例提供一种药物组合物，其包括质量比为2：1的细果角茴香和镰形棘豆。

这种药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与镰形棘豆按照质量比2：1混合，并与80%的乙醇按照料液比1：17混合，于75℃下回流提取2次，每次1.2h。回收上清液后浓缩，烘干，粉碎，即得。

实施例5

本实施例提供一种药物组合物，其包括质量比为1：3的细果角茴香和镰形棘豆。

这种药物组合物的制备方法包括：

将细果角茴香与镰形棘豆按照质量比1：3混合，并与70%的乙醇按照料液比1：22混合，于65℃下回流提取3次，每次0.8h。回收上清液后浓缩，烘干，粉碎，即得。

下面结合药效学实验对本发明实施例提供的药物组合物的药效进行评价。

实验例一

药物组合物对感染H1N1流感病毒小鼠肺部病变的影响

取KM小鼠若干，按体重分层随机分为6组，分别为正常对照组、模型组、病毒唑组、药物高、中、低剂量组（以实施例1提供的药物组合物为受试药物，高中低剂量分别为340、170、85 mg/Kg），雌雄各半。在乙醚轻度麻醉下，以15个LD50病毒液滴鼻感染，每鼠4滴，约0.05毫升。各给药组在病毒攻击2h后开始给药，连续给药4d，每天一次，每次按10mL/Kg灌胃给药。正常对照组和模型组给予等容积生理盐水。感染后第4d，禁食禁水4小时后杀剖小鼠。称小鼠体重，腋下动脉放血处死后取出鼠肺，记录病变程度，将肺放在盛有生理盐水的平碟中洗涤二次，用吸水纸吸干表面水分，称出肺重。计算出肺指数与抑制率，比较组间结果差异。结果见表1。

由表1可知，模型组与正常对照组相比，肺指数显著升高，说明造模成功。病毒唑对照组与模型组相比，肺指数显著降低，肺指数抑制率为36.9%，说明本次模型是可靠的。受试药物高、低二个剂量也能有效降低肺指数，肺指数抑制率分别为17.4%、18.4%，与模型组相比有统计学显著性差异。中剂量也有降低肺指数的作用，肺指数抑制率为13.1%。由此说明，该药物组合物能降低甲型流感病毒感染小鼠肺指数，对流感病毒有抑制作用。

实验例二

药物组合物对感染H1N1甲型流感病毒小鼠死亡保护作用

取KM小鼠若干，雌雄各半，按体重分层随机分为组，分别为模型组、病毒唑组、药物高、中、低剂量组（以实施例1提供的药物组合物为受试药物，高中低剂量分别为340、170、85mg/Kg），雄雌各半。各组小鼠在乙醚轻度麻醉下，以5个LD50病毒液滴鼻感染，每鼠4滴，约0.05 mL。各给药组在病毒感染前1d开始给药，病毒攻击6小时后连续给药10d，每天一次，每次按10mL/Kg灌胃给药。模型组给予等容积生理盐水。连续观察动物15d，记录发病情况和死亡数，统计死亡率，并按下式计算死亡保护率和延长生命率，比较组间差异。结果见表2。

观察发现，各组小鼠感染甲型流感病毒4天后发病，没有发现明显的差别。感染小鼠出现耸毛，卷缩，毛无光泽，活动减少，食量减少，体重减轻，逐渐衰竭死亡。模型组大多于第6d后大面积死亡。与之相比，各用药组多数症状减轻，少数症状重，最后死亡。

由表2可知，模型组死亡率为100%，且平均存活时间为4.3±0.7d，说明此模型成功。病毒唑组与模型组相比，具有显著性差异，平均存活时间为11.45d，说明此模型是可靠的。药物组合物高、中、低三个剂量对流感病毒感染小鼠均有较好的保护作用。其中药物组合物高剂量组的死亡率为60%，平均生存时间为11.7±1.1d，中剂量组的死亡率为60%，平均生存时间为9.5±1.7d，低剂量的死亡率为60%，平均生存时间为8.7±0.5d，与模型组相比各药物组的生存时间均有显著增加，说明该药物组合物能延长甲型流感病毒感染小鼠平均生存时间，降低流感病毒致死率。

实验例三

药物组合物对感染H1N1甲型病毒鼠肺适应株的抑制作用

将MDCK细胞接种于96孔细胞培养板，每孔0.1mL。细胞数为20000个/mL，待24小时长成完整单层后，用含2%血清DMEM培养基稀释成个不同浓度，抛掉原培养液后将不同浓度的实施例1提供的药物组合物样品加入细胞孔中，每孔0.1mL，置于37℃孵育，每日观察细胞形态，连续3天。细胞出现融合、固缩、脱落等现象者为药物有毒性。细胞出现病变的程度按6级标准记录：

（1）细胞生长正常，无病变出现；

（2）细胞病变少于整个单层细胞的10%；

（3）细胞病变少于整个单层细胞的25%；

（4）细胞病变少于整个单层细胞的50%；

（5）细胞病变少于整个单层细胞的75%；

（6）细胞病变占整个单层细胞的75%以上。

将MDCK细胞接种于孔细胞培养板，每孔0.1mL。细胞数为200000个，待24小时长成完整单层。将实施例1提供的药物组合物用维持液稀释成不同浓度，抛掉原培养液后将无毒浓度下的不同浓度倍比稀释药液加入细胞孔中，0.1mL/孔。实验时设病毒对照、细胞对照、药物毒性对照及阳性药病毒唑对照。置37℃、5%二氧化碳培养箱中培养。每天在倒置显微镜下观察病变并记录。当病毒对照孔细胞出现5级病变时，继续观察1天则终止。试验结束后用MTT法测试细胞存活率，以细胞存活率评价实施例1提供的药物组合物的体外杀灭病毒的能力。结果见表3。

表3结果表明，该药物组合物在2.0 mg/mL下对H1N1甲型流感病毒具有明显的杀伤能力，细胞MTT吸光度值显示，在该浓度下单独给药，细胞无死亡，表明该浓度是无毒的。在染毒细胞中，相比空白组100%的死亡率，给药组最高可达到88%的存活率，与相同浓度病毒唑功效相当，表明该药物组合物在体外具有明显的抗甲型流感病毒功效。

实验例四

药物组合物对奇昆古尼亚（Chikungunya）病毒的抑制作用

将MDCK细胞接种于96孔细胞培养板，每孔0.1mL。细胞数为20000个/mL，待24小时长成完整单层。用含2%血清DMEM培养基稀释成个不同浓度，抛掉原培养液后将不同浓度的实施例1提供的药物组合物加入细胞孔中，每孔0.1mL，置于37℃孵育，每日观察细胞形态，连续3天。细胞出现融合、固缩、脱落等现象者为药物有毒性。细胞出现病变的程度按6级标准记录：

（1）细胞生长正常，无病变出现；

（2）细胞病变少于整个单层细胞的10%；

（3）细胞病变少于整个单层细胞的25%；

（4）细胞病变少于整个单层细胞的50%；

（5）细胞病变少于整个单层细胞的75%；

（6）细胞病变占整个单层细胞的75%以上。

将MDCK细胞接种于孔细胞培养板，每孔0.1mL。细胞数为200000个，待24小时长成完整单层。将实施例1的药物组合物用维持液稀释成不同浓度，抛掉原培养液后将无毒浓度下的不同浓度倍比稀释药液加入细胞孔中，0.1mL/孔。实验时设病毒对照、细胞对照、药物毒性对照及阳性药病毒唑对照。置37℃、5%二氧化碳培养箱中培养。每天在倒置显微镜下观察病变并记录。当病毒对照孔细胞出现5级病变时，继续观察1天则终止。试验结束后用MTT法测试细胞存活率，以细胞存活率评价实施例1提供的药物组合物的体外杀灭病毒的能力。结果见表4。

表4 药物组合物体外抗Chikungunya病毒能力

表4结果表明，该药物组合物在2.0 mg/mL下对Chikungunya病毒具有明显的杀伤能力，细胞MTT吸光度值显示，在该浓度下单独给药，细胞无死亡，表明该浓度是无毒的。在染毒细胞中，相比空白组98.4%的死亡率，给药组最高可达到87.9%的存活率，与相同浓度病毒唑功效相当，表明该药物组合物在体外具有明显的抗Chikungunya病毒的功效。

实验例五

毒性实验

（一）、急性毒性实验

40只大鼠，随机分成2组，每组20只，雌、雄各半。以实施例1提供的药物组合物为受试药物，给药物组的小鼠灌胃给药，剂量为20g/Kg/d；对照组的小鼠以相同剂量给予蒸馏水。每日给药一次，连续7日。每日称体重次，并按体重调整给药剂量。实验期间，观察大鼠的一般状况，包括外观体征、行为活动、进食、大小便、死亡等情况。试验结果进行统计学处理。结果见表5。

表5实施例1的药物组合物的急性毒性

给药期间，各给药组的大鼠外观体征、行为活动、进食、两便均正常，开始给药到观察期结束，全部大鼠无一死亡，每周体重增长值各组无明显差异。表明该药物组合物在20g/Kg/d剂量下，没有任何急性毒性。

（二）、慢性毒性实验

慢性毒性试验为其3月，其中包含Ames实验、骨髓微核实验、血细胞检验、血生化检验和脏器尸检5部分。实验过程严格按照国家药监局CFDA的要求进行。以实施例1提供的药物组合物为受试药物，每日给药一次，连续3个月。每周称体重次，并按体重调整给药剂量。实验期间，观察大鼠的一般状况，包括外观体征、行为活动、进食、大小便、死亡等情况。给药3个月后末次给药后，每组取10只大鼠雌、雄各半腹腔注射戊巴比妥钠检查，对主要脏器进行全面尸检，取心、肝、脾、肺、'肾、肾上腺、胸腺、辜丸、附罕、子宫、卵巢、脑等脏器称重，计算脏器系数及体重，并对上述脏器和胃、小肠、直肠、淋巴结、胰腺、气管、食管、主动脉、前列腺、骨髓、脊髓、脑垂体、膀胧等脏器进行组织病理学检查。余下大鼠停药观察后同法处死，检测上述指标。试验结果进行统计学处理。

1.一般表现

给药期间，各剂量组的大鼠外观体征、行为活动、进食、两便均正常，开始给药到观察期结束，全部动物无一死亡，每周体重增长值各组无明显差异。

2.血液学检查

给药3个月后，进行血液学检查，各组动物的红细胞计数、血红蛋白含量、网织红细胞、血小板、白细胞计数、淋巴细胞、中间细胞、粒细胞、凝血酶原时间，与正常对照组比较，无明显差异。停药后，各组动物血液学指标和正常对照组比较，亦无明显差异。

3.血液生化学检查

给药3个月后，测定各组大鼠的血清谷氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、尿素、肌配、总蛋白、白蛋白、葡萄糖、总胆红素、总胆固醇、甘油三醋、钾离子、钠离子干、氯离子水平。测定结果表明，药物组合物的中剂量组和小剂量组与赋型剂组比较，其差异有统计学意义，但指标数值仍在正常范围内。药物组合物各剂量组的其余项目测定值与正常对照组比较，均无明显差异。停药后，药物组合物各剂量组血液生化学检查的项目测定值与正常对照组比较，均无明显差异。

4.脏器系数

给药3个月后，各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、攀丸、附辜、子宫、卵巢、脑等主要脏器系数群体重与正常对照组比较，均无显著性差异。赋型剂组与正常对照组比较，亦无显著性差异。停药后，各组大鼠的脏器系数与正常对照组比较均无统计学差异。

5. 组织学检查

由于给药3个月和停药肉眼尸检各组动物均未发现明显病变。故只选药物组合物大剂量组原药材和对照组大鼠的主要脏器进行组织病理切片检查。结果给药3个月后大剂量组各重要脏器未见病理组织学改变。表明该受试药物对大鼠的上述脏器组织无明显损害作用。

实验总结：

在毒性实验中，该药物组合物以20g/Kg/d剂量连续给药1周，实验动物没有任何不良反应产生，表明该药物组合物没有任何急性毒性。最高200微克/plate进行Ames实验，无突变产生，表明该药物组合物没有任何致突变毒性。该药物组合物以3000mg/Kg/d剂量连续给药3月，实验动物在血检，尸检和器官形态检查方面均未出现异常，表示该药物组合物在3000mg/Kg/d剂量下无慢性毒性。当该药物组合物以10000 mg/Kg剂量作用于大鼠骨髓，未见大鼠骨髓细胞产生异样，表明该药物组合物没有任何发育毒性与致畸毒性，以上二实验表明该药物组合物可以提供儿童和孕妇使用。

在药理实验中，每组实验最高剂量组均能取得最好的疗效，按照340mg/Kg剂量计算，人每日的摄入量为57mg/Kg，正常成年人按照60Kg计算，每人每日摄入量3.4克。雾化给药量一般为口服给药量1/10，则雾化给药量为每人每日0.34g。该药物的液体制剂，即雾化剂，规格是0.2g/2mL/只，那么成年人每日吸入2只该药物组合物的雾化剂即可达到有效剂量。

在毒性试验中，未见毒性症状的最低剂量换算成人类剂量为1000mg/Kg/d。而在药理实验中，该药物组合物的人每日的摄入量为57mg/Kg。即无毒安全剂量是使用剂量的17倍，因此，该药物组合物的使用剂量为57mg/Kg/d下非常安全。

综上所述，这种药物组合物能够降低流感病毒感染小鼠的肺指数，对流感病毒有抑制作用；且能延长流感病毒感染小鼠的存活时间，降低流感病毒的致死率。此外，这种药物组合物也具有抗奇昆古尼亚病毒的功效。由此说明，该药物组合物可用于制备抗病毒的药物或者制备上呼吸道感染的药物，应用前景广阔。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (3)

1.一种药物组合物在制备抗奇昆古尼亚病毒药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物是通过将质量比为1：0.2~5的细果角茴香和棘豆混合提取所得的提取物；

所述药物组合物的制备方法包括：

将所述细果角茴香与所述棘豆形成的混合药材与70~100% 乙醇溶液按照料液比1：15~25混合回流提取2~4次，每次0.5~1.5h，将所得提取液浓缩、烘干。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述棘豆为镰形棘豆或轮叶棘豆。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物组合物中，原阿片碱的含量为0.1~0.8% ；隐品碱的含量为0.1~0.8%；细果角茴香碱的含量为0.1~0.8%。