CN105168374A - 细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用,其特征在于:该细果角茴香提取物是指从罂粟科角茴香属细果角茴香的干燥全草中采用醇提、大孔树脂柱纯化获得的总生物碱含量为30~95%、总黄酮含量为5~60%的提取物,其与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物的各种剂型中至少包含有该细果角茴香提取物。本发明通过体外和体内实验证明,细果角茴香提取物可以用于制备抗病毒的药物。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,尤其涉及细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用。
背景技术
目前世界上流行的或者流行过的,缺乏特异性治疗方法的病原体包括登革热病毒,这类病毒每年造成4亿的感染量;冠状病毒SARS-CoV与MERS-CoV,这两类病毒分别造成了2002年呼吸道疾病大爆发以及2012年中东地区的呼吸道疾病。线状病毒埃博拉,它目前正在非洲地区大规模流行,这些病毒都急需有效的疗法。
具有抗病毒作用的中藏药多属于清热药、解毒药和外用药。诸多体外实验和临床实践证明,多数病毒对传统中藏药敏感。如呼吸道病毒(流感病毒、麻疹病毒、流行性腮腺炎病毒)、肠道病毒(脊灰炎病毒、轮状病毒、柯萨基病毒)等使用中藏药治疗可获得较好疗效。如中药大青叶、板蓝根等都有抗病毒活性,且作用范围较广。
因此,从传统中藏药中筛选具有广谱性、低毒副作用、易于代谢、无耐药性等优点的抗病毒药物已成为抗病毒药物研究开发的热点之一。
藏药细果角茴香为罂粟科角茴香属细果角茴香(HypecoumleptocarpumHook.f.etThoms.)的干燥全草,生长于海拔4300米以下的草原、草甸、砂砾地上。《晶珠本草》记载其味苦性凉,清血热、温热和毒热;《西藏常用中草药》称其有解热镇痛、消炎解毒之功效,可治伤风感冒、头痛、四肢关节疼痛、胆囊炎,并解食物中毒;《陕甘宁青中草药选》中称:细果角茴香能治流感、咽喉肿痛、目赤等症。
现有的文献表明,细果角茴香中主要含有生物碱类和黄酮类化合物;其乙醇提取物可减少内毒素炎症过程中肺组织炎症反应和炎性细胞的浸润,降低外周血白细胞数,抑制TNF-α、IL-6的释放;细果角茴香生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等细菌生长有一定的抑制作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用。
为解决上述问题,本发明所述的细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用,其特征在于:该细果角茴香提取物是指从罂粟科角茴香属细果角茴香(HypecoumleptocarpumHook.f.etThoms.)的干燥全草中采用醇提、大孔树脂柱纯化获得的总生物碱含量为30~95%、总黄酮含量为5~60%的提取物,其与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物的各种剂型中至少包含有该细果角茴香提取物。
所述细果角茴香提取物是由下述方法制得:
⑴细果角茴香药材粉粹至20~60目后,加入其质量6~15倍的体积浓度为10~95%的乙醇,在室温下、浸提次数为2~4次、每次24~48小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为0~-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香提取物;
⑵所述细果角茴香提取物经大孔树脂柱纯化后,依次用3~10倍柱体积的水和体积浓度为60~95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为0~-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
本发明通过体外和体内实验证明,细果角茴香提取物对甲型流行性感冒病毒PR8株有杀灭作用,对流感PR8株在鸡胚内的增殖有抑制作用;有直接灭活人腺病毒3型的作用,同时有抑制人腺病毒3型病毒的致细胞病变作用;其对甲型流行性感冒病毒PR8株、3型腺病毒标准株感染的ICR封闭群小鼠有明显的保护作用,能明显降低小鼠感染病毒后的肺指数,可以用于制备抗病毒的药物。
1、细果角茴香提取物(EXG)对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠的体内保护作用:
⑴对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠的死亡保护:
取ICR封闭群小鼠120只,随机分为6组,每组20只,雌雄兼用。将已经测定了病毒血凝效价(1:2560)的病毒液用无菌生理盐水进行10倍连续梯度稀释,每―稀释度病毒液滴鼻法感染一组小鼠,每只小鼠滴鼻0.05ml/次,2次/日,连续感染2日。同时设立生理盐水对照。精心饲养,观察、记录各组小鼠死亡情况。记录14天内死亡数,计算各组存活率。结果如表1所示,细果角茴香提取物(EXG)对甲型流行性感冒病毒PR8株感染的小鼠有明显的保护作用。
表1EXG对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠体内保护作用
⑵对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠肺指数的影响:
取ICR封闭群小鼠随机分组,每组10只,雌雄兼用。用MLD量试验病毒液滴鼻感染小鼠,同时设立阳性药物(病毒唑)治疗组、感染对照组以及正常对照组,感染后12小时开始给药。每一梯度药液灌胃给药一组小鼠,给药量0.5ml/20g体重。各组给药量分别为0.25、0.05、0.01g/kg,用病毒唑作为阳性对照药,按1.5g/kg体重灌胃给药;感染对照组和正常对照组给予0.5ml/20g体重生理盐水。每日给药1次,连续给药7日。精心饲养,观察、记录各组小鼠发病以及病死情况。小鼠病死、处死后精确称取体重,剖开胸腔取肺脏精确称重。统计、整理实验数据,获得细果角茴香提取物对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠的肺指数,并对组间肺指数均值进行t检验,各组检测结果与模型组比较(*P<0.05),结果如表2所示,细果角茴香提取物能明显降低小鼠感染病毒后的肺指数。
表2EXG对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠肺指数的影响
2、细果角茴香对甲型流行性感冒病毒的体内作用:
⑴受试药物对鸡胚毒性作用的观察:
常规选择生长良好的鸡胚,将各浓度的药液分别接种至9日龄鸡胚的尿囊腔中,每胚0.2ml,每一稀释度9个鸡胚,36.5℃孵育,逐日观察,以鸡胚生长发育良好,72小时仍然存活的浓度为最大无毒浓度,逐日观察鸡胚接种后的活动、发育情况和胚体有无充血,判断药物对鸡胚的毒性作用。同时设生理盐水对照,正常鸡胚对照。以鸡胚存活的药物最大稀释度为无毒浓度。
细果角茴香提取物药液在本实验中,接种药液后每日观察鸡胚存活情况,24h内死亡为非特异性死亡。72h后取胚观察,鸡胚发育正常,胚体无明显出血。从原液到1:64稀释浓度下,对鸡胚未见明显毒性作用,表明细果角茴香提取物对鸡胚的最大无毒浓度为10.0005mg/ml。
⑵受试药物对流感病毒PR8株在鸡胚增殖的抑制作用:
试验采用流感病毒PR8株(80个血凝单位),药物浓度为10-1.25mg/ml(二倍连续稀释)。实验分为两个实验组,A组:采用病毒与药物等量混合,室温下直接作用两小时后接种鸡胚。B组:分次接种(先接种病毒4小时后,再接种不同浓度药物)。每个鸡胚尿囊腔中接种0.2ml病毒液,每一浓度接种9个鸡胚。同时设病毒、阳性药物和正常对照组。在35℃孵育72h,收获尿囊液,测定病毒血凝滴度,以“++”为血凝效价终点,并计算其几何平均滴度(GMT),同时观察鸡胚发育情况,实验重复三次,对实验结果进行统计学分析。
细果角茴香提取物药液对甲型流感病毒PR8株的抑制实验结果显示:接种受试药物:72h后取胚观察,病毒对照组胚体发育偏小、有片状出血。阳性药物对照组与正常对照组的鸡胚大小基本一致,无明显充血。收获尿囊液,测定血凝滴度,计算其几何平均滴度(GMT),结果见表3:
表3细果角茴香提取物对流感PR8株抑制作用测定结果
表3结果显示:①试验A组中,流感病毒PR8株与受试药物等量混合作用2h后感染鸡胚,细果角茴香提取物在药液浓度为2.499-10.0005mg/ml时,其对流感病毒PR8株有直接杀灭作用(P<0.05)。②先病毒后药物组,药物浓度为4.9995-10.0005mg/ml时,细果角茴香提取物对流感PR8株在鸡胚内的增殖有抑制作用(P<0.05)。
3、细果角茴香提取物对3型腺病毒株感染小鼠的体内保护作用:
取ICR封闭群小鼠随机分组,每组10只,雌雄兼用。用MLD量试验病毒液滴鼻感染小鼠,同时设立阳性药物(病毒唑)治疗组、感染对照组以及正常对照组,感染后12小时开始给药。用生理盐水稀释药液,每一梯度药液灌胃给药一组小鼠,给药量0.5ml/2Og体重。各组给药量分别为0.25,0.05,0.01,0.002,0.0004g/kg。用病毒唑作为阳性对照药,按1.5g/kg体重灌胃给药;感染对照组和正常对照组给予0.5ml/20g体重生理盐水。每日给药1次,连续给药7日。精心饲养,观察、记录各组小鼠发病以及病死情况。小鼠病死、处死后精确称取体重,剖开胸腔取肺脏精确称重。统计、整理实验数,并对组间肺指数均值进行t检验。细果角茴香提取物对3型腺病毒标准的保护作用见表4。
表4细果角茴香提取物对3型腺病毒标准株感染小鼠体内保护试验结果
细果角茴香提取物对甲型流行性感冒病毒PR8株感染小鼠对3型腺病毒标准株感染小鼠肺指数的影响见表5。
表5细果角茴香提取物对3型腺病毒标准株感染小鼠肺指数影响结果
与感染对照组比较p<0.05。
表5结果表明:细果角茴香提取物能够明显降低3型腺病毒标准株感染小鼠的肺指数,减轻腺病毒感染对肺脏的损害,可以用于抗病毒药物的制备。
具体实施方式
细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用,该细果角茴香提取物是指从罂粟科角茴香属细果角茴香(HypecoumleptocarpumHook.f.etThoms.)的干燥全草中采用醇提、大孔树脂柱纯化获得的总生物碱含量为30~95%、总黄酮含量为5~60%的提取物,其与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物的各种剂型中至少包含有该细果角茴香提取物。
其中:细果角茴香提取物是由下述方法制得:
⑴细果角茴香药材粉粹至20~60目后,加入其质量6~15倍的体积浓度为10~95%的乙醇,在室温下、浸提次数为2~4次、每次24~48小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为0~-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
⑵细果角茴香提取物经大孔树脂柱纯化后,依次用3~10倍柱体积的水和体积浓度为60~95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为0~-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
实施例1制备单味中药抗病毒片剂
取细果角茴香药材1.5kg,粉粹至20目后,加入其质量8倍的体积浓度为10%的乙醇,在室温下、浸提次数为3次、每次24小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
细果角茴香粗提物经D101型大孔树脂柱纯化,依次用5倍柱体积的水和体积浓度为95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为0MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
取上述细果角茴香提取物,粉粹,过100目筛,以30%的添加量与总添加量为70%的赋形剂(淀粉、糊精、蔗糖、微晶纤维素、乙醇、硬脂酸镁等)混匀,制粒,干燥,整粒,混合,压片,即得可治疗病毒性感冒的片剂。
实施例2制备单味中药抗病毒胶囊剂
取细果角茴香药材2.5kg,粉粹至40目后,加入其质量10倍的体积浓度为50%的乙醇,在室温下、浸提次数为2次、每次36小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为-0.06MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
细果角茴香粗提物经D101型大孔树脂柱纯化,依次用5倍柱体积的水和体积浓度为70%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为-0.04MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
取上述细果角茴香提取物,粉粹,过100目筛,以40%的添加量与总添加量为60%的赋形剂(淀粉、糊精、蔗糖、微晶纤维素、乙醇、硬脂酸镁等)混匀,制粒,干燥,整粒,混合,填充,即得可治疗流感病毒性肺炎的胶囊剂。
实施例3制备单味中药抗病毒口服液
取细果角茴香药材5kg,粉粹至20目后,加入其质量10倍的体积浓度为65%的乙醇,在室温下、浸提次数为2次、每次36小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为-0.05MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
细果角茴香粗提物经D101型大孔树脂柱纯化,依次用5倍柱体积的水和体积浓度为95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为-0.03MPa的条件下经真空减压回收乙醇,将提取物制成相对密度1.2-1.3的流浸膏,即得细果角茴香提取物。
取上述细果角茴香提取物,以20%的添加量与总添加量为80%的矫味剂和纯化水混匀,即得可治疗流行性感冒的口服液。
实施例4制备二味中药抗病毒片剂
取细果角茴香药材1.5kg,粉粹至20目后,加入其质量8倍的体积浓度为70%的乙醇,在室温下、浸提次数为3次、每次24小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为-0.05MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
细果角茴香粗提物经D101型大孔树脂柱纯化,依次用5倍柱体积的水和体积浓度为95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为-0.01MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
取上述细果角茴香提取物及板蓝根提取物,分别粉粹,过100目筛,以细果角茴香提取物:板蓝根提取物:赋形剂总量为4:2:4的比例(质量比)混匀,赋形剂包括淀粉、糊精、蔗糖、微晶纤维素、乙醇、硬脂酸镁等,制粒,干燥,整粒,混合,压片,即得可治疗病毒性感冒的片剂。
实施例5制备二味中药抗病毒胶囊剂
取细果角茴香药材2.5kg,粉粹至40目后,加入其质量10倍的体积浓度为50%的乙醇,在室温下、浸提次数为2次、每次36小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为-0.08MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
细果角茴香粗提物经D101型大孔树脂柱纯化,依次用5倍柱体积的水和体积浓度为70%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为-0.04MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
取上述细果角茴香提取物及板蓝根提取物,分别粉粹,过100目筛,以细果角茴香提取物:板蓝根提取物:赋形剂总量为5:3:2的比例(质量比)混匀,赋形剂包括淀粉、糊精、蔗糖、微晶纤维素、乙醇、硬脂酸镁等,制粒,干燥,整粒,混合,填充,即得可治疗流感病毒性肺炎的胶囊剂。
实施例6制备二味中药抗病毒口服液
取细果角茴香药材5kg,粉粹至20目后,加入其质量10倍的体积浓度为95%的乙醇,在室温下、浸提次数为2次、每次36小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为0MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香粗提物。
细果角茴香粗提物经D101型大孔树脂柱纯化,依次用5倍柱体积的水和体积浓度为95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为-0.01MPa的条件下经真空减压回收乙醇,将提取物制成相对密度1.2-1.3的流浸膏,即得细果角茴香提取物。
取上述细果角茴香提取物及板蓝根流浸膏,以细果角茴香提取物:板蓝根流浸膏:辅料(包括矫味剂和纯化水)为4:1:5的比例(质量比)混匀,即得可治疗流行性感冒的口服液。
上述实施例1~6是对本发明的进一步详细说明,但不意味着对本发明的任何限制。在不脱离本发明上述思想的情况下,根据本领域普通技术知识和常规手段做出的各种替换方式或变更,均包含在本发明之内。
Claims (2)
1.细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用,其特征在于:该细果角茴香提取物是指从罂粟科角茴香属细果角茴香的干燥全草中采用醇提、大孔树脂柱纯化获得的总生物碱含量为30~95%、总黄酮含量为5~60%的提取物,其与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物的各种剂型中至少包含有该细果角茴香提取物。
2.如权利要求1所述的细果角茴香提取物在制备抗病毒药物中的应用,其特征在于:所述细果角茴香提取物是由下述方法制得:
⑴细果角茴香药材粉粹至20~60目后,加入其质量6~15倍的体积浓度为10~95%的乙醇,在室温下、浸提次数为2~4次、每次24~48小时的条件下进行浸提,得到提取液,该提取液在真空度为0~-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至流浸膏,即得细果角茴香提取物;
⑵所述细果角茴香提取物经大孔树脂柱纯化后,依次用3~10倍柱体积的水和体积浓度为60~95%的乙醇洗脱至收集液无色,收集醇洗脱液,该醇洗脱液在真空度为0~-0.09MPa的条件下经真空减压回收乙醇至干,即得细果角茴香提取物。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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