CN101569700B - 一种中药药物在制备治疗人患禽流行性感冒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药药物在制备治疗人患禽流行性感冒药物中的应用。该中药组合物制成的各种制剂可有效防治人患禽流行性感冒。并通过抗禽流行性感冒动物筛选试验，筛选中药组合物对分别感染H5N1和H9N2两种毒株的小鼠的保护作用，可明显抑制禽流感病毒致小鼠肺部炎症，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率和延长其存活时间，具有明显抗禽流感病毒的作用。本发明药物选择蒲公英、紫花地丁、黄芩、岗梅、赤芍、天花粉、玄参、当归、防风、柴胡、皂角刺、人工牛黄、白芷、胆南星、虎杖、夏枯草、板蓝根进行组合，将这些药物组合使得各药物功效产生协同作用，具有清热解毒，活血凉血，消炎止痛的功效。

Description

一种中药药物在制备治疗人患禽流行性感冒药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的新医药用途，具体涉及众生丸组方的医药新用途。

背景技术

禽流感是禽流行性感冒的简称，它是一种由甲型流感病毒的一种亚型(也称禽流感病毒)引起的传染性疾病，被国际兽疫局定为甲类传染病。禽流感主要在鸟类中间传播，偶可感染至人，其临床表现与人类流行性感冒相似，但人禽流感症状重、并发症多、病死率高，疫苗接种无效，与普通流感有一定区别。目前报道的人禽流感病例大都由H5N1毒株引起，偶有H9N2病毒株感染的报道。

最早的人禽流感病例出现在1997年的香港，1例3岁儿童死于不明原因的多器官功能衰竭，同年8月经美国疾病预防和控制中心以及WHO荷兰鹿特丹国家流感中心鉴定为禽甲型流感病毒A(H5N1)引起的人类流感。这是世界上首次证实流感病毒A(H5N1)感染人类，因而引起了医学界的广泛关注。那次H5N1型禽流感病毒感染导致12人发病，其中6人死亡。根据世界卫生组织的统计，到目前为止全球共有15个国家和地区的393人感染，其中248人死亡，死亡率63％。中国从2003年至今有31人感染禽流感，其中21人死亡。其死亡率高于非典。

目前防治流感的最有效手段是接种流感疫苗，但至今仍未开发出供临床应用的禽流感病毒疫苗，从而加大了防治的难度。由于目前尚无确切的抗病毒药物，所以西药对流感病毒的治疗主要是抑制病毒复制。临床应用的抗流感药已有20余种，它们对于感冒所引起的各种症状具有缓解或消除作用，但最终还需靠人的自身免疫力治愈，且大多数的西药都可能导致严重的副作用。

中医药从整体观入手，辨证论治，认为流感是在机体内火伏里的基础上外邪入里引发的。通过复方治疗流感，既可清除内热，又可疏散外表风寒之邪，表里同治，并且中药可以整体调节人体的免疫机能，达到扶正驱邪的目的，可以使流感得到彻底有效的治疗。临床上已有数十种治疗流感的中成药问世，如板蓝根颗粒、抗病毒口服液、荆防败毒散等。研究人员也对中药防治禽流行性感冒进行了大量的研究，李艳华等报道贯众、板蓝根、黄芪、柴胡、连翘、黄连、金银花、黄芩及甘草配制的复方中药在体内、体外对禽流感病毒均有一定抑制作用，具有延长感染鸡的存活时间、增强机体免疫力的作用。香港大学医学院新发传染性疾病国家重点实验室亦证实(川方)抗病毒颗粒对引起高致病性禽流感的H5N1病毒具有良好的体外抑制作用。

发明内容

本发明的目的在于提供中成药-众生丸的新用途，即在制备治疗禽流行性感冒的药物中的应用，该众生丸组方制成的各种制剂可有效防治禽流行性感冒。并通过抗禽流行性感冒动物筛选试验，筛选众生丸对分别感染H5N1和H9N2两种毒株的小鼠的保护作用，该众生丸可明显抑制禽流感病毒致小鼠肺部炎症，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率和延长其存活时间，具有明显抗禽流感病毒的作用。

本发明的另一目的在于提供一种更为有效治疗禽流行性感冒的中药组合物。

所述治疗禽流行性感冒的中药组合物，其特殊之处在于它是由下列重量份的原料药制成：

蒲公英    330g    紫花地丁  330g    黄芩        100g

岗梅      130g    赤芍      100g    天花粉      100g

玄参      100g    当归      100g    防风        100g

柴胡      100g    皂角刺    130g    人工牛黄    20g

白芷      30g     胆南星    30g     虎杖        130g

夏枯草    65g     板蓝根    130g。

本发明药物选择蒲公英、紫花地丁、黄芩、岗梅、赤芍、天花粉、玄参、当归、防风、柴胡、皂角刺、人工牛黄、白芷、胆南星、虎杖、夏枯草、板蓝根进行组合，将这些药物组合使得各药物功效产生协同作用，具有清热解毒，活血凉血，消炎止痛的功效。用于上呼吸道感染，急、慢性咽喉炎，急性扁桃腺炎，化脓性扁桃腺炎，疮毒等症。上述药物组合物可以加入常规辅料或赋形剂，制成临床可接受的剂型，如口服制剂、雾化剂、注射剂。

本发明众生丸的制备方法为：以上十七味药材，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥成干膏粉，加入人工牛黄、胆南星细粉制成1000丸，干燥，制得。

下面将通过动物实验证明本发明具有的积极效果。

第一部分：众生丸在小鼠体内对H5N1亚型禽流感病毒抑制效果试验。

1.试验材料

1.1试验药物

众生丸药材由广东众生药业股份有限公司提供，批号：20090301。处方如下：

药物制备方法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥成干膏粉，加入人工牛黄、胆南星细粉制成2000丸，干燥，即得。

用法与用量：口服：每次4-6丸，一日3次，重症加倍，小儿减半。

可知众生丸每丸相当于2.025g生药，按照体重60kg的成人每次服药6丸，每天3次计算，成人的服药剂量为0.6075g生药/公斤/天。

抗禽流感样品制法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入人工牛黄、胆南星细粉混悬，加蒸馏水调整体积至2000ml，取1000ml另器保存，供试品标签为Ⅲ-1。取Ⅲ-1样品，摇匀，取200ml，加蒸馏水调整体积至1000ml，另器保存，供试品标签为Ⅲ-2。取Ⅲ-2样品，摇匀，取200ml，加蒸馏水调整体积至1000ml，另器保存，供试品标签为Ⅲ-3。各样品含生药量、小鼠给药量及相当人体剂量见表1.1。

表1.1给药剂量换算表

1.2阳性药物

Tamiflu(特敏福)，罗氏有限公司生产，产品批号：B1154；先用少量DMSO溶解，再用纯水稀释，按50mg/kg/d灌胃给药，给药容量为0.25mL/只。

1.3实验动物

6-7周龄BALB/c小鼠：SPF级。广东省医学实验动物中心提供。许可证号：SCXK(粤)2008-0002，粤监证字2008A023。

1.4病毒

H5N1亚型禽流感病毒由农业部动物疫病防控重点开放实验室提供。

2.试验方法

2.1众生丸对小鼠禽流感病毒性肺炎的治疗试验

方法：取6-7周龄BALB/c小鼠180只，随机分成6组，每组30只。分别为众生丸高浓度组(0.15ml/d)、众生丸中浓度组(0.25ml/d)、众生丸低浓度组(0.5ml/d)、阳性药物特敏福组(50mg/kg/d)、病毒对照组(模型组)及正常对照组等六个试验组，每天灌胃给药一次，病毒对照组用蒸馏水代替药物，连续给药4天。在给药后的第二天用干冰对小鼠作轻度麻醉后，以10LD₅₀H5N1亚型禽流感病毒液滴鼻感染，每只0.05mL，正常对照组在同等条件下用蒸馏水代替病毒滴鼻。第六天各组对小鼠进行眼球取血备用，每组共30份血样，其中加抗凝剂全血15份，不加抗凝剂分离血清15份，分别测定小鼠T淋巴细胞亚群和血清TNF-α、IFN-γ及IL-10指标；取血后处死小鼠，称量体重并剖检，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，逐个计算肺指数，并算出肺指数抑制率；肺组织用10％甲醛固定，乙醇系列脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，HE染色，普通光学显微镜观察肺组织形态学变化。

肺指数＝〔肺重(g)/体重(g)〕×100

肺指数抑制率(％)＝〔(病毒对照组肺指数均值-试验组肺指数增加值)/病毒对照组肺指数均值〕×100％

2.2众生丸对禽流感病毒致小鼠死亡的保护试验

方法：取小鼠120只，随机分成6组，每组20只。分别为众生丸高浓度组(0.15ml/d)、众生丸中浓度组(0.25ml/d)、众生丸低浓度组(0.5ml/d)、阳性药物组(50mg/kg/d)、病毒对照组及正常对照组等六个试验组，每天灌胃给药一次，病毒对照组用蒸馏水代替药物，连续给药8天。在给药后的第二天用干冰对小鼠作轻度麻醉后，以2LD₅₀H5N1亚型禽流感病毒液滴鼻感染，每只0.05mL，正常对照组在同等条件下用蒸馏水代替病毒滴鼻，病毒对照组在同等条件下给予蒸馏水，每天记录感染后小鼠死亡数，连续15天。计算死亡率、保护率及平均存活天数、生命延长率。

死亡率％＝(死亡小鼠数/试验小鼠总数)×100％

保护率％＝〔(病毒对照组死亡率-试验组死亡率)/病毒对照组死亡率〕×100％

生命延长率＝〔(试验组平均存活在天数-病毒对照组平均存活天数)/病毒对照组平均存活天数〕×100％

2.3病毒分离和和鉴定

方法：对各试验组感染病毒后死亡每只小鼠的肝、肺等器官，经研磨、离心和加双抗处理后，接种9～11天龄非免疫鸡胚，37℃孵化96小时，每天检胚3次，死亡鸡胚4℃冰箱保存，然后收获鸡胚尿囊液，用HA和HI试验方法对分离物进行鉴定。

3.试验结果

3.1众生丸对小鼠禽流感病毒性肺炎的治疗效果

表3.1各试验组小鼠的肺指数变化

注：与病毒对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01

表3.1结果显示，正常对照组小鼠健康，体重增加，行为敏捷，皮毛有光泽，呼吸正常。病毒对照组有出现不同的发病经过，小鼠食欲明显下降，随后逐渐出现甩头，呼吸短促现象，并伴随腹式呼吸，行动迟缓无力，弓背，消瘦，体重减轻，部分小鼠出现神经症状。与病毒对照组相比较，用药组小鼠症状有所减轻，肺部出现炎症和水肿，但其他脏器未见明显病变。

对肺指数结果进行方差分析，结果显示：众生丸低浓度组的肺指数值显著低于病毒对照组，阳性药物组的肺指数值极显著低于病毒对照组，众生丸高浓度组和众生丸中浓度组对小鼠肺指数无明显降低作用。众生丸低浓度组与病毒对照组比较，0.01＜P＜0.05，差异显著。

3.2小鼠T淋巴细胞亚群和血清TNF-α、IFN-γ及IL-10的指标的测定结果

用流式细胞仪测定小鼠T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺百分比及CD4⁺/CD8⁺比例，其余小鼠取血清采用双抗体夹心ELISA法测炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ及IL-10。

表3.2.1众生丸对感染H5N1AIV小鼠T淋巴细胞亚群的影响

注：与正常对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01；与病毒对照组比较，&为P＜0.05，&&为P＜0.01；与阳性药物组比较，#为P＜0.05，##为P＜0.01。

表3.2.1结果显示，与正常对照组相比，病毒对照组小鼠CD3⁺、CD4⁺T细胞亚群百分率以及CD4⁺/CD8⁺均显著降低(P＜0.05或0.01)，但CD8⁺T细胞亚群百分率无明显差异(p＞0.05)，提示病毒感染对小鼠CD3⁺、CD4⁺T细胞亚群百分率以及CD4⁺/CD8⁺有显著影响。给予药物治疗后对CD3⁺的影响：众生丸高浓度组、低浓度组和阳性药物组明显提高CD3⁺T细胞亚群百分率(P＜0.05或0.01)，中浓度组对降低的CD3⁺有一定的提高作用，但与病毒对照组相比无统计学差异(p＞0.05)；与阳性药物组比较，众生丸高浓度组、中浓度组、低浓度组提高CD3⁺T细胞亚群百分率低于阳性药物组(P＜0.05或0.01)。对CD4⁺的影响：阳性药物组、众生丸高浓度组明显提高CD4⁺T细胞亚群百分率(P＜0.01)，众生丸中、低浓度组有提高CD4⁺的作用但与病毒对照组相比无统计学差异(p＞0.05)；与阳性药物组比较，众生丸中浓度组、低浓度组提高CD4⁺T细胞亚群百分率低于阳性药物组(P＜0.05或0.01)。对CD8⁺的影响：各给药组与病毒对照组相比，CD8⁺T细胞亚群百分率无明显变化。对CD4⁺/CD8⁺的影响：众生丸不同浓度的三个组对CD4⁺/CD8⁺均有一定的提高作用，但与病毒对照组相比无统计学差异(p＞0.05)，阳性药物组对CD4⁺/CD8⁺的影响不大；与阳性药物组比较，众生丸中浓度组提高CD4⁺/CD8⁺优于阳性药物组(P＜0.05)。结果显示众生丸能通过调整T细胞亚群百分率而调节机体免疫功能，在提高CD3⁺T细胞亚群、CD4⁺T细胞亚群百分率与阳性对照药有一定差距，但众生丸中浓度组提高CD4⁺/CD8⁺优于阳性药物组，提示众生丸与特敏福对T细胞亚群百分率影响的作用机制存在差异。

表3.2.2众生丸对感染H5N1AIV小鼠血清TNF-α、IFN-γ及IL-10的影响

注：与正常对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01；与病毒对照组比较，&为P＜0.05，&&为P＜0.01；与阳性药物组比较，#为P＜0.05，##为P＜0.01。

表3.2.2结果显示：

①病毒感染模型组小鼠血清中TNF-α含量较正常对照组明显升高(P＜0.01)，提示病毒感染对小鼠血清中TNF-α含量有显著影响。经过治疗后，众生丸高、中浓度组明显降低TNF-α的含量(P＜0.01)，阳性药物组、低浓度组对升高的TNF-α水平有降低作用，但与与病毒对照组相比无统计学差异(p＞0.05)；与阳性药物组比较，众生丸高浓度组降低TNF-α的含量显著优于阳性药物组(P＜0.05)。结果提示，特敏福对小鼠血清中TNF-α含量的影响不显著，而众生丸能通过抑制TNF-α的过量产生而减轻病毒感染引起的免疫病理损害。

②病毒感染小鼠后病毒感染模型组IFN-γ水平较正常对照组升高，这可能是由于机体感染病毒，刺激IFN-γ的分泌，提示病毒感染对小鼠血清中IFN-γ含量有显著影响，病毒感染时CD4+T细胞和CD8+T细胞都能产生IFN-γ，通过增强TH1细胞的活性而增强CTL、NK和巨噬细胞对病毒的清除。经过治疗后，众生丸在各浓度组均使小鼠血清IFN-γ含量升高，其中众生丸中浓度组对IFN-γ水平作用明显(P＜0.01)；与阳性药物组比较，众生丸中浓度组提高IFN-γ的含量显著优于阳性药物组(P＜0.05)。结果提示，特敏福对小鼠血清中IFN-γ含量的影响不显著，而众生丸三个浓度组均能促进血清中IFN-γ产生，从而提高机体抗病毒感染的免疫功能。其具体途径可能是通过增强TH1细胞的活性而增强CTL、NK和巨噬细胞对病毒的清除。

③病毒感染第6d，检测血清IL-10含量，结果显示：病毒感染后小鼠IL-10水平明显下降(P＜0.01)提示病毒感染对小鼠血清中IL-10含量有显著影响。经过治疗后，众生丸高、中、低三个浓度组、阳性药物组均有提高小鼠血清IL-10含量的趋势，但与病毒对照组比较均无显著性差异；与阳性药物组比较，众生丸各浓度组提高IFN-γ的含量优于阳性药物组，但无显著性差异。结果提示众生丸可通过提高IL-10含量，抑制免疫应答，从而减轻病毒感染后所出现免疫病理损害，起到对机体的保护作用。

3.3小鼠肺组织形态学变化结果

肺组织用10％甲醛固定，乙醇系列脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，HE染色，普通光学显微镜观察肺组织形态学变化。

众生丸对感染H5N1AIV小鼠肺部炎症的影响

注：与正常对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01；与病毒对照组比较，&为P＜0.05，&&为P＜0.01。

炎症细胞浸润程度分级标准：正常：基本无炎症细胞，记0分。基本正常：炎症细胞在10％以下，记0.5分；轻度：炎症细胞约占10％～20％，记1分；中度：炎症细胞约占30％，记2分；重中度：炎症细胞约占50％，记3分；重度：炎症细胞呈弥漫性，约占80％，记4分。

结果显示，与正常对照组相比，病毒对照组小鼠炎症记分值明显增高(P＜0.01)。与病毒对照组相比，阳性药物组和众生丸高、中、低三个浓度组对H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明显的抑制作用，炎症记分值均明显降低(P＜0.01)。结果提示：众生丸对H5N1禽流感病毒感染小鼠所致肺病变有抑制作用。

肺组织病理组织学观察结果：

正常对照组肉眼肺体积未见明显增大，表面平整光滑；镜下可见肺内支气管上皮细胞完整，支气管壁未见炎细胞浸润；肺泡无扩张、萎陷，肺泡腔未见出血、水肿液；大部分肺泡间隔未见明显增宽和炎细胞浸润。

病毒对照组肉眼可见肺部淤血严重、斑点坏死、局部实变；镜下可见间质性肺炎的表现和结构破坏，肺间质充血、水肿和淋巴细胞浸润；血管周围淋巴细胞浸润，毛细血管扩张；肺支气管上皮细胞变性、坏死、脱落，并有充血和单核细胞浸润；支气管壁不完整，溶解、脱落；肺泡中有出血和单核细胞浸润，有的肺泡溶合，呈气肿状。

阳性组、众生丸各剂量组与病毒对照组相比，肺间质、肺泡内炎症明显减轻，支气管上皮细胞变性、支气管壁不完整等情况均显著减轻。

3.4各试验组小鼠感染禽流感病毒后死亡情况

表3.4.1感染病毒后小鼠死亡情况

3.5众生丸对禽流感病毒致小鼠死亡的保护率

表3.5.1各试验组小鼠的保护率

6各试验组小鼠的平均存活天数及生命延长率结果

表3.6.1各试验组小鼠的平均存活天数及生命延长率

注：与病毒对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01

表3.4.1、表3.5.1和表3.6.1的结果显示：在感染14天内除众生丸高浓度组外，其余各给药组小鼠的死亡数均少于病毒对照组，且小鼠的存活天数较病毒对照组有所延长。从动物死亡数、死亡保护率及生命延长率来看，阳性药物组与病毒对照组比较，P＜0.01，有极显著差异。众生丸高浓度组和众生丸中浓度组与病毒对照组比较，P＞0.05，差异不显著.众生丸低浓度组与病毒对照组比较，0.01＜P＜0.05，差异显著。

5.病毒分离和和鉴定

对各试验组感染病毒后死亡每只小鼠的肝、肺等器官，经研磨、离心和加双抗处理后，接种9～11天龄非免疫鸡胚，37℃孵化96小时，每天检胚3次，死亡鸡胚4℃冰箱保存，然后收获鸡胚尿囊液，用HA和HI试验方法对分离物进行鉴定，结果各试验组死亡小鼠的病毒分离鉴定均为阳性。

6.结论

众生丸低浓度组对H5N1亚型禽流感病毒所致小鼠肺部炎症有明显的减轻作用，众生丸高浓度组和众生丸中浓度组对小鼠肺部炎症无减轻作用。众生丸低浓度组对H5N1亚型禽流感病毒所致小鼠的死亡有降低作用，并延长生存时间。众生丸能通过调整T细胞亚群百分率而调节机体免疫功能；通过抑制TNF-α的过量产生而减轻病毒感染引起的免疫病理损害；通过促进血清中IFN-γ产生，从而提高机体抗病毒感染的免疫功能；通过提高IL-10含量，抑制免疫应答，从而减轻病毒感染后所出现免疫病理损害，起到对机体的保护作用。众生丸对H5N1禽流感病毒感染小鼠所致肺病变具有抑制作用，病理组织结结果表明众生丸各剂量组与病毒对照组相比，肺炎症均显著减轻。

第二部分：众生丸在小鼠体内对H9N2亚型禽流感病毒抑制效果试验

1材料和方法

1.1实验材料

1.1.1药物由广东众生药业股份有限公司提供，批号：20080801：

处方如下：

药物制备方法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥成干膏粉，加入人工牛黄、胆南星细粉制成2000丸，干燥，即得。

用法与用量：口服：每次4-6丸，一日3次，重症加倍，小儿减半。

可知众生丸每丸相当于2.025g生药，按照体重60kg的成人每次服药6丸，每天3次计算，成人的服药剂量为0.6075g生药/公斤/天。

抗禽流感样品制法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入人工牛黄、胆南星细粉混悬，加蒸馏水调整体积至2000ml，取1000ml另器保存，供试品标签为Ⅲ-1。取Ⅲ-1样品，摇匀，取200ml，加蒸馏水调整体积至1000ml，另器保存，供试品标签为Ⅲ-2。取Ⅲ-2样品，摇匀，取200ml，加蒸馏水调整体积至1000ml，另器保存，供试品标签为Ⅲ-3。

各样品含生药量、小鼠给药量及相当人体剂量见表1。

表1：给药剂量换算表

阳性药物：达菲(磷酸奥司他韦胶囊)(瑞士巴塞尔豪夫迈.罗氏有限公司生产，上海罗氏制药有限公司分装，批号：B1212)

利巴韦林胶囊(上海绿谷制药有限公司生产，国药准字H31022207)

1.1.2动物：NIH小鼠，单一性别，由广东省医学实验动物中心提供，SPF级别，实验动物质量合格证号：粤监证号：2007A004，体重13-15g。小鼠饲料为富含多种成分的配方。饲养环境：室温23±2℃，相对湿度75±10％。

1.1.3病毒：H9N2AIV由华南农业大学兽医科技中心惠赠。H9N2AIV鼠肺适应株由本试验室经昆明(KM)鼠传代5次获得，经SPF鸡胚传代扩增(-80℃保存)，KM鼠测定其小鼠半数致死量(LD50)。试验前，取毒种用流水冲浸融化，放冰水中保存，使用时稀释。

1.1.4病毒对小鼠的半数致死量的测定：用灭菌肉汤将H9N2AIV稀释成10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5等浓度的病毒液。KM种小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，乙醚轻度麻醉后，滴鼻感染各个稀释浓度的病毒，每鼠4滴，合约0.05mL，第3天开始记录死亡小鼠的数量。根据Reed-Muench两氏法计算，得到该病毒对小鼠的半数致死量(LD50)为10^-2.896/0.05mL。

2实验方法与结果

2.1对小鼠禽流感病毒性肺炎的影响

2.1.1方法：将体重13.0～15.0g的KM种小鼠随机分成正常对照组、阳性药物组(利巴韦林)、病毒对照组(即模型组)、Ⅲ-1组、Ⅲ-2组、Ⅲ-3组，正常对照组4只，病毒对照组(即模型组)10只，其余每组12只。感染小鼠的方法：在乙醚轻度麻醉下，选用H9N2型禽流感病毒鼠肺适应株15个LD50病毒浓度，滴鼻感染小鼠，用1mL注射器每只滴4滴，约0.05ml。从感染前1d开始按拟定的剂量灌胃给药，每天1次，连续4d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。第6天称取小鼠体重后解剖，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，与体重计算肺指数值，并求出肺指数与抑制率，结果见表2。

肺指数＝小鼠肺重(g)×100％/小鼠体重(g)

肺指数抑制率＝(对照组平均肺指数一实验组平均肺指数)×100％/对照组平均肺指数

2.1.2实验结果

感染H9N2AIV小鼠临床表现：正常对照组小鼠健康，体重增加，行为敏捷，毛发有光泽，呼吸正常。病毒对照组，依攻毒量大小，出现不同的发病经过，一般在感染后第2天开始，小鼠食欲明显下降，随后逐渐出现甩头，呼吸短促现象，并伴随腹式呼吸，行动迟缓无力，弓背，消瘦，体重减轻，第4天开始出现死亡，部分小鼠死前出现明显的神经症状，如打转等。与病毒对照组相比较，药物组动物多数症状减轻，少数症状较重，出现死亡，临死前出现抽搐现象。死亡小鼠的肺脏严重出血，并产生肺炎和水肿，但其他脏器未见明显病变。

表2：众生丸对感染H9N2AIV小鼠的肺指数试验结果(X±SD)

注：*表示：与病毒对照组比较，P＜0.05；**表示：与病毒对照组比较，P＜0.01，***表示：P＜0.001，“-”表示没有该项。

采用spss11.0软件处理数据，对肺指数结果进行方差分析，结果显示：小鼠感染禽流感病毒6d后被处死，解剖发现病毒对照组小鼠的肺部病变明显，其肺指数与正常对照组比较具有显著性差别(P＜0.01)，表明此模型成立。利巴韦林、众生丸高剂量和众生丸临床剂量提取物对于禽流感病毒所致小鼠肺炎病变均有明显的抑制作用，与病毒对照组相比，肺指数有明显好转(P＜0.01)。众生丸低剂量组与病毒对照相比，肺指数低于病毒对照组(P＜0.05)。

2.2死亡保护实验

2.2.1方法：将体重13.0～15.0g的KM种小鼠随机分成正常对照组、阳性药物组(利巴韦林)、病毒对照组(即模型组)、Ⅲ-1组、Ⅲ-2组、Ⅲ-3组，正常对照组4只，病毒对照组(即模型组)10只，其余每组12只。感染小鼠的方法：在乙醚轻度麻醉下，选用H9N2型禽流感病毒鼠肺适应株2个LD50病毒浓度，滴鼻感染小鼠，用1mL注射器每只滴4滴，约0.05ml。从感染前1d开始按拟定的剂量灌胃给药，每天1次，连续8d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。逐日观察动物发病和记录死亡数，共观察15d，根据观察结果计算死亡保护率。

死亡保护率＝(病毒感染对照组死亡率-试验组死亡率)/病毒感染对照组死亡率

生命延长率＝(试验组平均存活天数-病毒感染对照组平均存活天数/病毒感染对照组平均存活天数)×100％。

2.2.2实验结果：

感染H9N2AIV小鼠临床表现：小鼠感染禽流感病毒后，大多发病在4d以后，小鼠出现耸毛、活动减少、体重减轻、体温下降等症状，从第6日开始出现死亡。各组死亡情况见表3。

表3众生丸对感染H9N2AIV小鼠的死亡的保护作用

注：*表示：与病毒对照组比较，P＜0.05；**表示：与病毒对照组比较，P＜0.01，***表示：P＜0.001，“-”表示没有该项。

正常组动物6只，其余各组动物数均为12只，在灌胃过程中，Ⅲ-1组灌死两只。

采用spss11.0软件处理数据，对平均存活时间进行方差分析，结果显示：达菲能明显提高存活率和延长生命存活时间(P＜0.01)，表明此模型成立。众生丸各剂量组均有能提高存活率和延长生命存活时间的趋势，但与病毒组比较无统计学差异(P＞0.05)。

由以上实验结果可看出，众生丸提取物对H9N2禽流感病毒致小鼠肺部炎症有明显抑制作用，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率和延长其存活时间，表明众生丸提取物在体内具有明显抗禽流感病毒的作用。

具体实施方式

下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。

实施例1(众生丸)：

药物制备方法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥成干膏粉，加入人工牛黄、胆南星细粉制成1000丸，干燥，即得。

实施例2(众生胶囊)：

药物制备方法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥成干膏粉，加入人工牛黄、胆南星细粉及适量辅料，混匀，制粒，干燥，整粒，加硬脂酸镁适量，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

实施例3(众生片)：

药物制备方法：以上十七味，除人工牛黄外，胆南星粉碎成细粉，其余蒲公英等十五味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，干燥成干膏粉，加入人工牛黄、胆南星细粉及适量辅料，混匀，制粒，干燥，整粒，压制成1000片，包衣，即得。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明权利要求范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明权利要求的涵盖范围。

Claims (1)

1.一种中药药物在制备治疗人患禽流行性感冒药物中的应用，其特征在于，所述药物由下列原料药制成：

蒲公英    330g      紫花地丁  330g        黄芩        100g

岗梅      130g      赤芍      100g        天花粉      100g

玄参      100g      当归      100g        防风        100g

柴胡      100g      皂角刺    130g        人工牛黄    20g

白芷      30g       胆南星    30g         虎杖        130g

夏枯草    65g       板蓝根    130g。