CN109071497A - Pad4杂芳基抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供可用作PAD4抑制剂的化合物、其组合物以及治疗PAD4相关病症的方法。

Description

PAD4杂芳基抑制剂
发明背景
PAD4是能够在肽序列内催化精氨酸到瓜氨酸的瓜氨酸化的酶的肽基精氨酸脱亚胺酶(PAD)家族的成员。PAD4负责各种蛋白在体外和体内的脱亚胺化或瓜氨酸化，其结果为各种疾病中的不同功能反应(Jones J.E.等人，Curr.Opin.Drug Discov.Devel.,12(5),(2009),616-627)。示例性疾病的实例包括类风湿性关节炎、嗜中性细胞对发病具有贡献的疾病(例如血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎)以及肿瘤学适应症。PAD4抑制剂还作为通过表观遗传机制用于人类疾病的工具及治疗剂具有较宽适应性。
PAD4抑制剂具有对抗类风湿性关节炎(RA)的用途。RA是影响大约1％的群体的自身免疫疾病(Wegner N.等人，Immunol.Rev.,233(1)(2010),34-54)。其特征在于导致骨和软骨衰弱性破坏的关节炎症。尽管不一致，已在诸多群体研究中展现PAD4多型性与RA易感性之间的弱基因相关性(Kochi Y.等人，Ann.Rheum.Dis.,70,(2011),512-515)。已在滑液组织中检测到PAD4(以及家族成员PAD2)，其中其负责各种关节蛋白的脱亚胺化。该过程被认为导致对RA关节中的瓜氨酸化底物(诸如纤维蛋白原、波形蛋白和胶原)的耐受性破坏且引发对其的免疫反应。这些抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)导致疾病发病且也可用作用于RA的诊断测试(例如市售的CCP2或环状瓜氨酸化蛋白2测试)。另外，通过其直接影响几种关节和炎性介体(例如纤维蛋白原、抗凝血酶、多种趋化因子)的功能的能力，增加的瓜氨酸化也可向疾病发病提供额外直接贡献。在较小的RA患者子集中，可测量抗PAD4抗体且可与疾病的更具侵蚀性形式关联。
PAD4抑制剂也可用于减小各种疾病中的病理学嗜中性粒细胞活性。研究表明，嗜中性粒细胞细胞外捕集(NET)形成的过程(嗜中性粒细胞能够固定并杀死病原体的先天性防御机制)与组蛋白瓜氨酸化相关并在PAD4敲除小鼠中是缺失的(Neeli I.等人,J.Immunol.,180,(2008),1895-1902和Li P.等人,J.Exp.Med.,207(9),(2010),1853-1862)。PAD4抑制剂可因此适用于其中组织中的NET形成造成局部损伤和疾病病理学的疾病。此类疾病包括但不限于小血管炎(Kessenbrock K.等人,Nat.Med.,15(6),(2009),623-625)、全身性红斑狼疮(Hakkim A.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,107(21),(2010),9813-9818和Villanueva E.等人,J.Immunol.,187(1),(2011),538-52)、溃疡性结肠炎(Savchenko A.等人,Pathol.Int.,61(5),(2011),290-7)、囊性纤维化、哮喘(Dworski R.等人,J.Allergy Clin.Immunol.,127(5),(2011),1260-6)、深层静脉血栓形成(Fuchs T.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,107(36),(2010),15880-5)、牙周炎(Vitkov L.等人,Ultrastructural Pathol.,34(1),(2010),25-30)、败血症(Clark S.R.等人,Nat.Med.,13(4),(2007),463-9)、阑尾炎(Brinkmann V.等人,Science,303,(2004),1532-5)和中风。另外，有证据证明，NET可造成影响皮肤的疾病中的病理学(例如皮肤红斑狼疮(VillanuevaE.等人,J.Immunol.,187(1),(2011),538-52)和牛皮癣(Lin A.M.等人.,J.Immunol.,187(1),(2011),490-500)，所以PAD4抑制剂在通过全身性或皮肤途径给药时可显示解决NET皮肤病的益处。PAD4抑制剂可影响嗜中性粒细胞内的其他功能并对嗜中性粒细胞疾病具有较宽适用性。
研究已表明，工具PAD抑制剂(例如氯代-脒)在许多动物疾病模型(包含胶原诱导的关节炎(Willis V.C.等人,J.Immunol.,186(7),(2011),4396-4404)、葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发的实验性结肠炎(Chumanevich A.A.等人,Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.,300(6),(2011),G929-G938)、脊髓修复(Lange S.等人,Dev.Biol.,355(2),(2011),205-14)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE))中的效力。DSS结肠炎报告也表明，氯代-脒驱动炎性细胞在体外和体内的细胞凋亡，表明PAD4抑制剂可更通常在广泛的炎性疾病中是有效的。
PAD4抑制剂也可用于治疗癌症(Slack.J.L.等人,Cell.Mol.Life Sci.,68(4),(2011),709-720)。PAD4的过表达已证明于许多癌症中(Chang X.等人，BMC Cancer,9,(2009),40)。已从如下观察表明PAD4抑制剂的抗增殖性作用：PAD4使在p53-靶基因(诸如p21)的启动子处组蛋白中的精氨酸残基瓜氨酸化，所述靶基因参与细胞周期停滞和细胞凋亡的诱导(Li P.等人,Mol.Cell Biol.,28(15),(2008),4745-4758)。
PAD4在使组蛋白中的精氨酸残基脱亚胺化中的上述作用可表明PAD4在基因表达的表观遗传调控中的作用。PAD4是发现驻留于细胞核以及细胞质中的主要PAD家族成员。PAD4可充当组蛋白脱甲基亚氨酶以及脱亚胺酶的早期证据不一致且未证实。然而，可经由通过转化为瓜氨酸以消耗可用精氨酸残基来间接减小组蛋白精氨酸甲基化(和因此与该标记相关的表观遗传调控)。PAD4抑制剂可用作影响其他疾病环境中的不同靶基因的表达的表观遗传工具或治疗剂。通过此类机制，PAD4抑制剂也可有效控制干细胞中的瓜氨酸化水平且可因此在治疗上影响不同干细胞(包括，但不限于，胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞和癌症干细胞)的多能性状态和分化潜力。因此，仍然存在鉴定和开发用于治疗PAD4-介导的病症的PAD4抑制剂的未满足的需求。
发明概述
现已发现，式I的化合物或其药学上可接受的盐可用作PAD4的抑制剂：
其中环A、环B、R1、R2、R3、X1、L和R4各自如本文所定义和描述。
也已发现，式I’的化合物或其药学上可接受的盐可用作PAD4的抑制剂：
其中环A、环B、R1、R2、R3、X1、L、R4和n各自如本文所定义和描述。
在一些实施方案中，所提供化合物相对于PAD2显示出对PAD4的选择性。本发明还提供了包含所提供的化合物的药学上可接受的组合物。所提供的化合物可用于治疗各种与PAD4相关的病症。此类病症详细描述于本文中且包括，例如，类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮和牛皮癣。
发明详述
1.本发明的某些方面的一般描述
在一些实施方案中，这样的化合物包括具有本文所述的式的那些化合物或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文中所定义且描述于实施方案中。这样的化合物具有式I结构：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环；
R1为氢、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
各-Cy独立地为具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环，其中-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代；
R2为氢、-CN、-OR、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、
-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1是N或C(R3)；
R3是-R或-OR；
各R独立地为氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团；
L选自共价键或C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链，其中L的一个亚甲基单元任选地被-C(O)N(Ry)-置换，其中Ry为R或-CH2苯基；且
R4为氢、R、苯基或具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
在一些实施方案中，这样的化合物包含具有本文所描述的式的那些，或其药学上可接受的盐，其中各变量如本文中所定义且描述于实施方案中。这样的化合物具有式I’结构：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A为
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环；
R1为氢、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
各-Cy独立地为含有0-2个氮原子的6员芳基环或具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环，其中-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代；
R2为氢、-CN、-OR、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；或
相同碳上的两个R2基团任选地结合在一起形成＝O；
n为1、2或3；
X1为N或C(R3)；
R3为-R、卤素或-OR；
各R独立地为氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团；
L选自共价键或C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链，其中L的一个亚甲基单元任选地被-S(O)2-或-C(O)N(Ry)-置换，其中Ry为R或-CH2苯基；且
R4为氢、R、苯基或具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR、-C(O)OH或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
2.定义
本发明的化合物包括本文一般描述的那些，且进一步由本文公开的类别、子类和种类来说明。除非另外指示，否则下列定义应适合于本文。就本发明的目的而言，根据元素周期表，CAS版，Handbook of Chemistry and Physics，第75版来确定化学元素。另外，有机化学的一般原则描述于“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University ScienceBooks,Sausalito：1999，和“March’s Advanced Organic Chemistry”,第5版,Smith,M.B.和March,J.,John编辑，Wiley&Sons,New York：2001，其完整内容都通过引用并入本文。
如本文中所使用，术语“脂族基团(aliphatic)”或“脂族基团(aliphatic group)”是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即非支链)或支链、取代或未取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不为芳族的单环烃或双环烃(在本文中还称为“碳环”、“环脂族”或“环烷基”)，其具有附接至分子的其余部分的单一点。除非另外指定，否则脂族基团含有1至6个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1至5个脂族碳原子。在其他实施方案中，脂族基团含有1至4个脂族碳原子。在其他实施方案中，脂族基团含有1至3个脂族碳原子，且在其他实施方案中，脂族基团含有1至2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“环脂族基团(cycloaliphatic)”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不为芳族的单环C3-C6烃，其具有附接至分子的其余部分的单一点。适宜的脂族基团包括但不限于直链或支链、取代或未取代的烷基、烯基、炔基和其杂合体，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于接触人类和低等动物的组织而无过度毒性、刺激、过敏反应等且与合理效益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.PharmaceuticalSciences,1977,66,1-19(其通过引用并入本文)中详细描述了药学上可接受的盐。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或与有机酸(诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或通过使用本领域所用的其它方法(诸如离子交换)形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
衍生自适当碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。在适当时，另外的药学上可接受的盐包括无毒铵、季铵和胺阳离子(使用抗衡离子诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成)。
除非另外陈述，否则本文描绘的结构还意欲包括该结构的所有异构体(例如对映异构体、非对映异构体和几何异构体(或构象异构体))形式；例如各不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何异构体(或构象异构体)混合物都在本发明的范围内。除非另外陈述，否则本发明的化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围内。另外，除非另外陈述，否则本文描绘的结构还意欲包括不同之处仅仅在于存在一个或多个同位素富集原子的化合物。例如，包括用氘或氚置换氢或用13C-或14C-富集的碳置换碳的具有本发明的结构的化合物在本发明的范围内。根据本发明，此类化合物可用作例如分析工具、作为生物测定中的探针或作为治疗剂。
本文所用的术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”意指在包含本发明的化合物或其组合物和PAD4的样品与包含PAD4但缺乏所述化合物或其组合物的相等样品之间的PAD4活性的可测量的变化。
3.示例性化合物的描述
根据一个方面，本发明提供了式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A为
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环；
R1为氢、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
各-Cy独立地为具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环，其中-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代；
R2为氢、-CN、-OR、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；
X1为N或C(R3)；
R3为-R或-OR；
各R独立地为氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团；
L选自共价键或C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链，其中L的一个亚甲基单元任选地被-C(O)N(Ry)-置换，其中Ry为R或-CH2苯基；且
R4为氢、R、苯基或具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR、任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
根据另一个方面，本发明提供了式I’的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A为
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环；
R1为氢、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
各-Cy独立地为含有0-2个氮原子的6员芳基环或具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环，其中-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代；
R2为氢、-CN、-OR、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；或
相同碳上的两个R2基团任选地结合在一起形成＝O；
n为1、2或3；
X1为N或C(R3)；
R3为-R、卤素或-OR；
各R独立地为氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团；
L选自共价键或C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链，其中L的一个亚甲基单元任选地被-S(O)2-或-C(O)N(Ry)-置换，其中Ry为R或-CH2苯基；且
R4为氢、R、苯基或具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR、-C(O)OH或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
如上所定义，X1为N或C(R3)。在一些实施方案中，X1为N。在一些实施方案中，X1为C(R3)。在某些实施方案中，本发明提供了式I-a或I-b的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、环B、R1、R2、R3、L和R4各自如本文所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I’-a或I’-b的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中环A、环B、R1、R2、R3、L、R4和n各自如本文所定义和描述。
如上所定义并如本文所描述，R1为氢、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；各-Cy独立地为具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环，其中-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代。
在一些实施方案中，R1为氢。在一些实施方案中，R1为-Cy。在一些实施方案中，R1为任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R1为C1-3脂族基团。在一些实施方案中，R1为甲基。在一些实施方案中，R1为乙基。在一些实施方案中，R1为丙基。在一些实施方案中，R1为任选地被甲基和-OH取代的-CH2-环丁基。在一些实施方案中，各-Cy独立地为具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环。在一些实施方案中，-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代。在一些实施方案中，-Cy为苯基。在一些实施方案中，-Cy为吡啶基。
在一些实施方案中，-Cy为含有0-2个氮原子的6员芳基环。
在一些实施方案中，R1为苯基。在一些实施方案中，R1为在一些实施方案中，R1为在一些实施方案中，R1为
如上所定义和本文所描述，R2为氢、-CN、-OR、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为氢。在一些实施方案中，R2为任选地被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为-Cy。在一些实施方案中，R2为甲基。在一些实施方案中，R2为乙基。在一些实施方案中，R2为丙基。在一些实施方案中，R2为丁基。在一些实施方案中，R2为戊基。在一些实施方案中，R2为己基。在一些实施方案中，R2为环丙基。在一些实施方案中，R2为环丁基。在一些实施方案中，R2为环戊基。在一些实施方案中，R2为环己基。在一些实施方案中，R2为环丙基甲基。在一些实施方案中，R2为环丁基甲基。在一些实施方案中，R2为环戊基甲基。在一些实施方案中，R2为环己基甲基。在一些实施方案中，R2为环丙基乙基。在一些实施方案中，R2为环丁基乙基。在一些实施方案中，R2为环戊基乙基。在一些实施方案中，R2为环己基乙基。在一些实施方案中，R2为-CH2-环丙基或-CH2-环丁基。在一些实施方案中，R1为任选地被甲基和-OH取代的-CH2-环丁基。在一些实施方案中，R1选自下表1描述的那些基团。
在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被1个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被2个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被3个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被4个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被5个氟原子取代的C1-10脂族基团。在一些实施方案中，R2为被1-3个氟原子取代的甲基。在一些实施方案中，R2为三氟甲基。在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的乙基。在一些实施方案中，R2为2,2,2-三氟乙基。在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的丙基。在一些实施方案中，R2为3,3,3-三氟丙基。在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的丁基。在一些实施方案中，R2为4,4,4-三氟丁基。在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的戊基。在一些实施方案中，R2为5,5,5-三氟戊基。在一些实施方案中，R2为被1-5个氟原子取代的己基。在一些实施方案中，R2为6,6,6-三氟己基。在一些实施方案中，R2选自下表1描述的那些基团。
在一些实施方案中，R2为苯基。在一些实施方案中，R2为正丙基。在一些实施方案中，R2为异丙基。在一些实施方案中，R2为吡啶基。在一些实施方案中，R2为氟。在一些实施方案中，R2为溴。在一些实施方案中，R2为苄基。在一些实施方案中，R2为-Ome。在一些实施方案中，R2为-OH。在一些实施方案中，R2为-CN。在一些实施方案中，两个R2基团结合在一起形成＝O。
在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为
在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为
在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为在一些实施方案中，R2为
如上所定义和本文所描述，R3是-R或-OR。在一些实施方案中，R3为氢。在一些实施方案中，R3为任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，R3为-OCH3。在一些实施方案中，R3选自下表1描述的那些基团。
在一些实施方案中，R3为卤素。在一些实施方案中，R3为氟。
如上所定义，环A为
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
在一些实施方案中，环A选自在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为
在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为
在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A为在一些实施方案中，环A选自下表1描述的那些基团。
在一些实施方案中，环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5员杂芳基环。在其他实施方案中，环B为具有1-2个氮的6员杂芳基环。
在一些实施方案中，环B为咪唑基、吡唑基、吡咯基、吡啶基或噻唑基。在一些实施方案中，环B为咪唑基、吡唑基、吡咯基或噻唑基。在一些实施方案中，环B为吡啶基。在一些实施方案中，环B选自下表1中所示的那些基团。
在一些实施方案中，环B为吡咯基。在一些实施方案中，环B为在一些实施方案中，环B为在一些实施方案中，环B为在一些实施方案中，环B为在一些实施方案中，环B
在一些实施方案中，环B为咪唑基。在一些实施方案中，环B为
在一些实施方案中，环B为亚苯基(phenylenyl)。在一些实施方案中，环B为亚吡啶酮基(pyridonenyl)。在一些实施方案中，环B为吡啶基。在一些实施方案中，环B为亚吡咯基(pyrrolenyl)。在一些实施方案中，环B为亚吡唑基(pyazolenyl)。在一些实施方案中，环B为亚噻唑基(thiazolenyl)。
在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为
在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为
在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为
在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为在一些实施方案中，环B与其R2和-L-R4取代基为
在一些实施方案中，R1为甲基，R2为环丙基甲基，X1为C(R3)，R3为-H，且环A为在一些实施方案中，R1为甲基，R2为环丙基甲基，X1为C(R3)，R3为-H，且环A为在一些实施方案中，R1为甲基，R2为环丙基甲基，X1为C(R3)，R3为-OCH3，且环A为且环B为
如上所定义和本文所描述，L选自共价键或C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链。其中L的一个亚甲基单元任选地被-C(O)N(Ry)-置换，其中Ry为R或-CH2苯基。在一些实施方案中，L为共价键。在一些实施方案中，L为-(CH2)-。在一些实施方案中，L为-C(O)N(Ry)-。在一些实施方案中，Ry为R。在一些实施方案中，Ry为氢。在一些实施方案中，Ry为任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团。在一些实施方案中，Ry为-CH2苯基。在一些实施方案中，-L-选自下表1描述的那些基团。
在一些实施方案中，L为C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链，其中L的一个亚甲基单元任选地被-S(O)2-置换。在一些实施方案中，L为-S(O)2-。在一些实施方案中，L为-CH2CH2-。
在一些实施方案中，L为在一些实施方案中，L为在一些实施方案中，L为在一些实施方案中，L为在一些实施方案中，L为在一些实施方案中，L为
如上所定义和本文所描述，R4为氢、R、苯基或具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
在一些实施方案中，R4为卤素。在一些实施方案中，R4为-Br。在一些实施方案中，R4为氰基。在一些实施方案中，R4为苯基。在一些实施方案中，R4为吡啶基。在一些实施方案中，R4为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。在一些实施方案中，R4选自下表1描述的那些基团。
在一些实施方案中，R4被-C(O)OH取代。
在一些实施方案中，R4为甲基。在一些实施方案中，R4为乙基。在一些实施方案中，R4为氢。在一些实施方案中，R4为环丙基。在一些实施方案中，R4为环丁基。在一些实施方案中，R4为正丙基。在一些实施方案中，R4为异丙基。在一些实施方案中，R4为氟。
在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为
在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为
在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为在一些实施方案中，R4为
如上所定义和本文所描述，n为1、2或3。在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。在一些实施方案中，n选自下表1描述的那些。
在一些实施方案中，式I或式I’的化合物选自下表1中所示的那些。
表1.式I或式I’的示例性化合物
在某些实施方案中，本发明提供以上和本文所描述的任一化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供如上表1中所示的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供呈分离形式的以上和本文所描述的任一化合物。
4.用途、配制和给予
药学上可接受的组合物
根据另一实施方案，本发明提供一种组合物，其包括本发明化合物或其药学上可接受的衍生物及药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。本发明组合物中的化合物的量使得在生物试样或患者中有效可测量地抑制PAD4。在某些实施方案中，本发明组合物中的化合物的量使得在生物试样或患者中有效可测量地抑制PAD4。在某些实施方案中，本发明组合物经配制用于给予需要此组合物的患者。在一些实施方案中，本发明组合物经配制用于经口给予患者。
本文所用的术语“受试者”可与术语“患者”互换使用且意指动物、优选哺乳动物。在一些实施方案中，受试者或患者是人类。在其他实施方案中，受试者(或患者)是畜类受试者(或患者)。在一些实施方案中，畜类受试者(或患者)是犬、猫或马受试者。
术语“药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂”是指不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可用于本发明组合物中的药学上可接受的载剂、佐剂和媒剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(诸如人类血清白蛋白)、缓冲物质(诸如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。
本发明组合物可经口、胃肠外、藉由吸入喷雾、经局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入型储库给予。本文所用的术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。优选地，经口、腹膜腔内或静脉内给予这样的组合物。本发明组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这样的悬浮液可根据业内已知技术使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可为在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液可用作所述可接受媒剂和溶剂。另外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。
就此目的而言，可使用任一温和不挥发性油，包括合成单-或二-甘油酯。脂肪酸(诸如油酸及其甘油酯衍生物)可用于制备可注射物，同样还有天然的药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙烯化形式。这些油溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或通常用于配制包括乳液及悬浮液的药学上可接受的剂型的类似分散剂。还可将其他常用表面活性剂用于配制目的，诸如Tween、Spans及其他通常用于制备药学上可接受的固体、液体或其他剂型的乳化剂或生物可用性增强剂。
本发明的药学上可接受的组合物可以任何经口可接受剂型经口给予，这样的剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在经口使用的片剂情形下，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口给予而言，可用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。在需口服使用水性悬浮液时，可将活性成份与乳化剂和悬浮剂组合。若需要，还可添加某些甜味剂、矫味剂或着色剂。
或者，本发明的药学上可接受的组合物可以用于直肠给予的栓剂形式给予。可通过将药剂与适当的非刺激性赋形剂混合来制备这样的组合物，该赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体，且因此将在直肠中融化而释放药物。这样的材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物也可局部给药，尤其当治疗靶标包括可通过局部施加易于接近的区域或器官(包括眼睛、皮肤或下部肠道的疾病)时。可容易地制备用于这些区域或器官各自的合适的局部制剂。
可以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠制剂来实现对于下部肠道的局部施加。也可使用局部经皮贴片。
对于局部施用，可将所提供的药学上可接受的组合物配制于含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分的合适软膏中。用于局部给予本发明的化合物的载剂包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将所提供的药学上可接受的组合物配制于含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性组分的合适洗剂或乳霜中。合适的载剂包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼部使用，可将所提供的药学上可接受的组合物配制为在等渗、pH经调节的无菌盐水中的微粒化悬浮液，或优选地配制为在等渗、pH经调节的无菌盐水中的溶液，其含有或不含防腐剂，诸如苄扎氯铵(benzylalkonium chloride)。或者，对于眼部使用，可将药学上可接受的组合物配制于软膏(诸如矿脂)中。
也可通过经鼻气溶胶或吸入来给予本发明的药学上可接受的组合物。根据药物制剂领域众所周知的技术来制备此类组合物且可将其制备为在盐水中的溶液，其采用苯甲醇或其它合适防腐剂、吸收促进剂(以增强生物利用度)、氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂。
最优选地，本发明的药学上可接受的组合物被配制用于经口给药。此类制剂可与食物一起或不与食物一起给药。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起给药。在其它实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起给药。
本发明的药学上可接受的组合物可经口、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏或滴剂)、经颊、作为经口或经鼻喷雾等给予人类和其它动物，这取决于所治疗的感染的严重程度。在某些实施方案中，本发明的化合物可以每天约0.01mg/kg受试者体重至约50mg/kg受试者体重且优选约1mg/kg受试者体重至约25mg/kg受试者体重的剂量水平一天一或多次经口或肠胃外给药，以获得期望治疗效应。
用于经口给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂(诸如例如水或其它溶剂)、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨醇的脂肪酸酯和其混合物。除了惰性稀释剂以外，经口组合物也可包括佐剂，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠道外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒剂和溶剂是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于该目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。另外，在可注射制剂中使用脂肪酸，诸如油酸。
可注射制剂可例如通过如下灭菌：过滤通过截留细菌的过滤器或通过掺入灭菌剂，所述灭菌剂呈可在使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物的形式。
为了延长本发明化合物的效果，通常期望从皮下或肌内注射来减缓化合物的吸收。这可通过使用具有较差水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，其进而可取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油性媒剂中来实现肠胃外给药的化合物形式的延迟吸收。通过在生物可降解聚合物(诸如聚乳酸-聚乙交酯)中形成化合物的微囊基质来制备可注射的储库形式。取决于化合物与聚合物的比率和采用的具体聚合物的性质，可控制化合物释放的速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。也可通过将化合物捕集于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库可注射制剂。
用于直肠或阴道给药的组合物优选为栓剂，其可通过将本发明的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载剂(诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，所述赋形剂或载剂在环境温度下为固体但在体温下为液体且因此其可在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物。
用于经口给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在此类固体剂型中，所述活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，诸如例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，诸如甘油，d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，诸如石蜡，f)吸收促进剂，诸如季铵化合物，g)润湿剂，诸如例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，诸如高岭土和膨润土粘土，和i)润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情形下，剂型也可包含缓冲剂。。
也可采用类似类型的固体组合物作为使用赋形剂诸如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等在软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可用包衣和包壳(诸如肠溶包衣和药学配制领域中众所周知的其它包衣)来制备。其可任选地含有遮光剂且也可以是其任选地以延迟方式仅或优先在肠道的特定部分中释放(一种或多种)活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。也可采用相似类型的固体组合物作为使用赋形剂诸如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的在软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
活性化合物也可与一种或多种如上文所示的赋形剂呈微囊化形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可用包衣和包壳(诸如肠溶包衣、释放控制包衣和药学配制领域中众所周知的其它包衣)来制备。在此类固体剂型中，可将活性化合物与至少一种惰性稀释剂(诸如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。此类剂型也可如同通常实践一样包含除了惰性稀释剂以外的额外物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂(诸如硬脂酸镁和微晶纤维素)。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型也可包含缓冲剂。其可任选地含有遮光剂且也可以是其任选地以延迟方式仅或优先在肠道的特定部分中释放(一种或多种)活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部或经皮给予本发明的化合物的剂型包括软膏、糊剂、乳霜、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。如果需要，可在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载剂和任何所需防腐剂或缓冲剂混合。眼部制剂、滴耳剂和滴眼剂也涵盖于本发明的范围内。另外，本发明涵盖透皮贴片的使用，透皮贴片具有提供化合物至身体的受控递送的额外优点。此类剂型可通过将化合物溶解或分配于适当介质中来制备。也可使用吸收增强剂来增加所述化合物穿过皮肤的通量。速率可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
可与载剂材料组合以产生呈单一剂型的组合物的本发明化合物的量将取决于所治疗的宿主、具体给药模式而变化。优选地，应当配制所提供的组合物，以便可将剂量为0.01-100mg/kg体重/天的抑制剂给药于接受这些组合物的患者。
本发明的化合物可单独或与一种或多种其它治疗化合物组合给药，可能的组合疗法采用以下形式：本发明的化合物和一种或多种其它治疗化合物的固定组合或本发明的化合物和一种或多种其它治疗化合物交错给药或彼此独立地给予，或固定组合和一种或多种其它治疗化合物的组合给药。本发明的化合物可此外或另外与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、光疗法、手术干预或这些的组合联合给予以尤其用于肿瘤疗法。长期疗法在其它治疗策略的情况下同样地可能作为辅助疗法，如上文所述。其它可能的治疗是肿瘤消退后用于维持患者状态的疗法或甚至化学预防疗法，例如在处于风险下的患者中。
那些额外药剂可作为多剂量方案的一部分与含有本发明化合物的组合物分开给药。或者，那些药剂可以是单一剂型的一部分，其与本发明的化合物一起混合于单一组合物中。如果作为多剂量方案的一部分给药，则两种活性剂可同时、依次或彼此在一定时间期间内、通常彼此在5小时内递送。
如本文所用，术语“组合”、“组合的”和相关术语是指同时或依次给予本发明的治疗剂。例如，本发明的化合物可与另一治疗剂同时或依次以分开的单位剂型或一起在单一单位剂型中进行给药。因此，本发明提供包含本发明的化合物、额外治疗剂和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂的单一单位剂型。
可与载剂物质组合以产生单一剂型的本发明化合物和额外治疗剂两者的量(在如上文所述包含额外治疗剂的那些组合物中)将取决于所治疗的宿主和具体给药方式而变化。优选地，本发明的组合物应当被配制，使得可给药剂量为0.01-100mg/kg体重/天的本发明化合物。
在包含额外治疗剂的那些组合物中，该额外治疗剂和本发明的化合物可协同起作用。因此，额外治疗剂在此类组合物中的量将小于仅利用该治疗剂的单一疗法中所需的量。
存在于本发明的组合物中的额外治疗剂的量将不超过在包含该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中正常给药的量。优选地，本文公开的组合物中的额外治疗剂的量的范围将为包含该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中正常存在的量的约50％至100％。
还应理解，用于任何具体患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合和治疗医师的判断以及所治疗的具体疾病的严重程度。本发明的化合物在组合物中的量还将取决于组合物中的具体化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
本文所述的化合物和组合物通常可用于抑制PAD4。
可在体外、体内或在细胞系中测定在本发明中用作PAD4抑制剂的化合物的活性。体外测定法包括测定PAD4抑制的测定法。用于测定本发明中用作PAD4的抑制剂的化合物的详细条件记载于下文诸实施例中。在一些实施方案中，所提供的化合物与PAD2相比选择性抑制PAD4。
如本文所用，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”和“治疗(treating)”是指如本文所述的逆转、减轻疾病或病症或其一种或多种症状、延迟其发作或抑制其进展。在一些实施方案中，治疗可在已发生一种或多种症状之后给药。在其它实施方案中，治疗剂可在无症状的情况下给药。例如，可在症状发作之前将治疗剂给药于敏感个体(例如根据症状历史和/或根据遗传或其它敏感因子)。也可在症状已消退之后继续治疗，例如以防止或延迟其复发。
所提供的化合物是PAD4的抑制剂且因此可用于治疗一种或多种与PAD4的活性相关的病症。因此，在某些实施方案中，本发明提供了治疗PAD4-介导的病症的方法，其包括向有此需要的患者给予本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
在某些实施方案中，PAD4-介导的病症是由不适当的PAD4活性介导的疾病、病况或病症。在一些实施方案中，PAD4-介导的病症选自类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮和牛皮癣。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是全身性狼疮。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是血管炎。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是皮肤红斑狼疮。在另一个实施方案中，由不适当的PAD4活性介导的病症是牛皮癣。
在一个实施方案中，提供了治疗类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者给予治疗有效量的所提供的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，提供了治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者给予治疗有效量的所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了治疗全身性狼疮的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者给予治疗有效量的所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了治疗血管炎的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者给予治疗有效量的所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了治疗皮肤红斑狼疮的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者给予治疗有效量的所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，提供了治疗牛皮癣的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者给予治疗有效量的所提供的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PAD4-介导的病症选自：酸诱发的肺损伤、痤疮(PAPA)、急性淋巴细胞白血病、急性呼吸窘迫综合征、艾迪生病(Addison's disease)、肾上腺增生、肾上腺皮质功能不全、衰老、AIDS、酒精性肝炎、酒精性肝炎、酒精性肝病、过敏原诱发的哮喘、过敏性支气管肺炎、曲霉病、过敏性结膜炎、脱发、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、淀粉样变性、肌萎缩侧索硬化、体重减轻、心绞痛、血管性水肿、无汗外胚叶发育不良-ID、强直性脊柱炎、前节(anterior segment)、炎症、抗磷脂综合征、口疮性口炎、阑尾炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、异位性皮炎、自身免疫疾病、自身免疫性肝炎、蜂螫伤诱发的炎症、贝切特氏病(Behcet's disease)、贝切特氏综合征(Behcet's syndrome)、贝尔氏麻痹症(BellsPalsey)、铍中毒、布劳综合征(Blau syndrome)、骨疼痛、细支气管炎、烧伤、滑囊炎、癌症、心肌肥大、腕管综合征、异化代谢病症、白内障、脑动脉瘤、化学刺激物诱发的炎症、脉络膜视网膜炎、慢性心力衰竭、早产儿慢性肺病、慢性淋巴细胞白血病、慢性阻塞性肺病、结肠炎、复杂性区域疼痛综合征、结缔组织疾病、角膜溃疡、克罗恩氏病(crohn's disease)、Cryopyrin蛋白(cryopyrin)相关周期性综合征、隐球菌病、囊性纤维化、白介素-1-受体拮抗剂(DIRA)缺乏、皮炎、皮炎内毒素血症、皮肌炎、弥漫型内因性脑桥胶质瘤、子宫内膜异位症、内毒素血症、上髁炎、幼红细胞减少症、家族性淀粉样多发性神经病、家族性冷荨麻疹、家族性地中海热、胎儿生长迟滞、青光眼、肾小球疾病、肾小球肾炎、痛风、痛风性关节炎、移植物抗宿主病、肠病、头损伤、头痛、听力损失、心脏病、溶血性贫血、亨舍二氏紫癜(Henoch-Scholein purpura)、肝炎、遗传性周期性发热综合征、带状疱疹和单纯疱疹、HIV-1、霍奇金病(Hodgkin's disease)、亨廷顿氏病(Huntington's disease)、透明膜病、高氨血症、高钙血症、高胆固醇血症、高免疫球蛋白血症D伴反复发热(HIDS)、发育不全和其他贫血、发育不全性贫血、特发性血小板减少紫癜、色素失禁症、感染性单核细胞增多症、炎症性肠病、炎症性肺病、炎症性神经病、炎症性疼痛、昆虫咬伤诱发的炎症、虹膜炎、刺激物诱发的炎症、缺血/再灌注、青少年型类风湿性关节炎、角膜炎、肾疾病、由寄生虫感染引起的肾损伤、由寄生虫感染引起的肾损伤、肾移植排斥预防、钩端螺旋体病、白血病、吕弗勒氏综合征(Loeffler's syndrome)、肺损伤、肺损伤、狼疮、狼疮、狼疮性肾炎、淋巴瘤、脑膜炎、间皮瘤、混合结缔组织疾病、穆-韦二氏综合征(Muckle-Wells syndrome)(荨麻疹耳聋淀粉样变性)、多发性硬化、肌肉萎缩、肌营养不良症、重症肌无力、心肌炎、蕈样霉菌病、蕈样霉菌病、骨髓发育不良综合征、肌炎、鼻窦炎、坏死性小肠结肠炎、新生儿期发病的多系统炎性疾病(NOMID)、肾病综合征、神经炎、神经病理学疾病、非过敏原诱发的哮喘、肥胖症、眼睛过敏、视神经炎、器官移植、骨关节炎、中耳炎、佩吉特氏病(paget's disease)、疼痛、胰腺炎、帕金森氏病(Parkinson's disease)、天疱疮、心包炎、周期性发热、牙周炎、腹膜型子宫内膜异位症、百日咳、咽炎和腺炎(PFAPA综合征)、植物刺激物诱发的炎症、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、肺囊虫(pneumosysts)感染、毒葛(poison ivy)/漆酚油诱发的炎症、结节性多动脉炎、多软骨炎、多囊性肾病、多发性肌炎、牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣、心理社会应激疾病、肺病、肺高血压、肺纤维化、坏疽性脓皮病、化脓性无菌关节炎、肾疾病、视网膜疾病、风湿性心炎、风湿性疾病、类风湿性关节炎、结节病、皮脂溢、败血症、严重疼痛、镰状细胞、镰状细胞贫血、二氧化硅诱发的疾病、薛格连氏综合征(Sjogren's syndrome)、皮肤病、睡眠呼吸暂停、实体瘤、骨髓损伤、史蒂芬-强森综合征(Stevens-Johnsonsyndrome)、中风、蛛网膜下出血、晒伤、颞动脉炎、腱鞘炎、血小板减少症、甲状腺炎、组织移植、TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)、弓形虫症、移植、创伤性脑损伤、肺结核、1型糖尿病、2型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、眼色素层炎和韦格纳氏肉芽肿(Wegener'sgranulomatosis)。
在一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法中。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗由不适当的PAD4活性介导的病症。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗类风湿性关节炎。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗全身性狼疮。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗血管炎。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗皮肤红斑狼疮。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗牛皮癣。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由不适当的PAD4活性介导的病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗全身性狼疮的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗血管炎的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗皮肤红斑狼疮的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了所提供的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗牛皮癣的药物中的用途。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防由不适当的PAD4活性介导的病症的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮或牛皮癣的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防类风湿性关节炎的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防全身性狼疮的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防血管炎的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防皮肤红斑狼疮的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防牛皮癣的药物组合物，其包含所提供的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的各个方面的所有特征加上必要的变更适用于所有其它方面。
为了可更全面地理解本文所描述的本发明，记载以下实施例。应理解，这些实施例仅用于说明性目的且不应解释为以任何方式限制本发明。
实施例
如以下诸实施例中所描绘的那样，在某些示例性实施方案中，根据以下一般程序制备诸化合物。应理解，尽管一般方法描绘本发明的某些化合物的合成，但以下一般方法和本领域普通技术人员已知的其它方法可适用于本文所描述的所有化合物和这些化合物各自的亚类和种类。
制备型HPLC方法
碱性HPLC制备方法
柱：XBridgeTM Prep.C18 10um OBDTM,30 x 100mm
流动相：5-95％乙腈(0.2％氢氧化铵)/水(0.2％氢氧化铵)，14分钟
流速：40mL/min
UV检测：215和254nm
酸性HPLC制备方法
柱：SunfireTM Prep.C18 10um OBDTM,30 x 100mm
流动相：5-95％乙腈(0.1％甲酸)/水(0.1％甲酸)，14分钟
流速：40mL/min
UV检测：215和254nm
分析型LCMS方法：
方法A
MET/u-HPLC(低pH MSQ1 7min方法)
柱：Phenomenex Kinetex-XB C18,2.1mm×100mm,1.7μm
流速：0.6ml/min
流动相：A，0.1％甲酸(水溶液)；和B，0.1％甲酸(MeCN)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
5.30-100
5.80-100
5.82-5
方法B
MET/CR/1600(高pH MS10 7min方法)
柱：Phenomenex Gemini C18,2.0mm×100mm,3μm
流速：0.5ml/min
流动相：
A：2mM碳酸氢铵，于HPLC等级水中，pH10
B：HPLC等级MeCN
注入体积：3μl
温度：50℃
检测：215nm
梯度时间：(分钟)-％B
0.0-5
5.50-100
5.90-100
5.92-5
9.00-5
方法C
METCR 1416(低pH Shimadzu 7min方法)
柱：Waters Atlantis dC18,2.1mm×100mm，3μm管柱
流速：0.6ml/min
流动相：A，0.1％甲酸(水溶液)；和B，0.1％甲酸(乙腈)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
5.00-100
5.40-100
5.42-5
方法D
METCR 1410(低pH Shimadzu 2min方法)
柱：Kinetex Core-Shell C18,2.1mm×50mm，5μm管柱
流速：1.2ml/min
流动相：A，0.1％甲酸(水溶液)；和B，0.1％甲酸(乙腈)
注入体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
1.20-100
1.30-100
1.31-5
方法H
MET/u-HPLC(高pH MS16 7min方法)
柱：Waters UPLC CSH C18,2.1mm x 100mm 5μm柱
流速：0.6ml/min
流动相：A，2mM碳酸氢铵，用氢氧化铵(水溶液)改性至pH 10，以及B，乙腈
注射体积：3μl
温度：40℃
检测：215nm(标称)
梯度时间(分钟)-％B
0.00-5
5.30-100
5.80-100
5.82-5
方法J
MET/CR/0990(高pH 3min方法)
柱：Phenomenex Gemini C18,2.0mm x 100mm,3μm
流速：1ml/min
流动相：A，2mM碳酸氢铵/HPLC级水，pH10
B，HPLC级MeCN
注射体积：3μl
温度：60℃
检测：215nm
梯度时间(分钟)-％B
0.0-1
1.80-100
2.10-100
2.30-1
分析和制备型手性HPLC方法
方法E：
手性HPLC制备型方法
柱：Chiralpak IC 250mm×4.6mm，5μm柱
流速：15ml/min
流动相：35％乙醇：65％CO2
试样稀释剂：乙醇
温度：40℃
检测：215nm(标称)
方法F：
手性纯度分析方法
柱：Chiralpak IC 250mm×4.6mm，5μm管柱
流速：4ml/min
注入体积：10μL
温度：40℃
检测：215nm
等度条件：40％乙醇：60％CO2
根据以下流程1和2来制备本发明的某些化合物。
流程1
(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐I-9EOAI3428252(EV-AR0067-002)的合成
5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AR0054-002)-步骤1
往5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸(500mg,2.67mmol)在甲苯(10ml)和甲醇(3ml)中的溶液内加入2M在己烷(2ml)中的(重氮甲基)(三甲基)甲硅烷，并将混合物在氮气、室温中搅拌30分钟。往反应混合物中加入乙酸(1ml)并将混合物真空浓缩，得到530mg(99％)5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AR0054-002)，为浅黄色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.14min,M/z＝202.0(M+1)。
1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸(EV-AR0056-003)-步骤2
往5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AR0054-002,530mg,2.63mmol)在无水DMF(10ml)中的溶液内分批加入氢化钠(60％,120mg,3.00mmol)并将所得混合物搅拌15分钟。经过这段时间之后，加入(溴甲基)环丙烷(285μl,2.94mmol)并将混合物在氮气、室温下搅拌72h。将混合物进一步用(溴甲基)环丙烷(450μl,4.65mmol)和氢化钠(60％,60mg,1.50mmol)处理并在40℃下搅拌30分钟。真空浓缩所述反应混合物，并将剩余物溶解在乙醇(8ml)和水(2ml)中。加入5M氢氧化钠水溶液(2ml)，并将所得混合物在压力管中在80℃下搅拌2h。真空浓缩所述反应混合物，并溶于水(5ml)中，用5N盐酸水溶液酸化(～5ml)，直至没有观察到更多的沉淀。所得的悬浮液在冰浴中搅拌15分钟，并在真空下用滤纸过滤。将所得固体干燥得到495mg(78％)1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸(EV-AR0056-003)，为米色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.17min,M/z＝242.0(M+1)。
4-(甲氨基)-3硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0020-002)-步骤3
往搅拌着的4-氟-3-硝基苯甲酸甲酯(10.0g,50.2mmol)在DMF(100ml)中的溶液内加入甲胺盐酸盐(1：1)(4.00g,59.2mmol)。加入碳酸钾(99％,9.00g,64.5mmol)，并将混合物在室温、氮气中搅拌18h。真空浓缩反应粗产物，并在乙酸乙酯(400ml)和1M盐酸水溶液(2x25ml)之间分配。用盐水(25ml)洗涤有机层，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到6.00g(57％)4-(甲氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0020-002)，为黄色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.23min,M/z＝210.9(M+1)。
3-氨基-4-(甲氨基)苯甲酸甲酯(EV-AR0021-002)-步骤4
往4-(甲氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(EV-AR0020-002,6.00g,28.6mmol)在乙醇(100ml)中的溶液内加入10％w/w Pd/C(0.15g,1.41mmol)。将反应混合物在氢气气氛、室温下搅拌18h。反应粗产物经Kieselguhr过滤，并用甲醇(200ml)洗涤。将滤液真空浓缩，得到5.00g(97％)3-氨基-4-(甲氨基)苯甲酸甲酯(EV-AR0021-002)，为紫色固体。LCMS(方法D)：保留时间0.84min，M/z＝181.0(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AR0061-003)-步骤5
往1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-甲酸(EV-AR0056-003,295mg,1.22mmol)在DMF(5ml)中的溶液内依次加入DIPEA(225μl,1.36mmol)和HATU(520mg,1.37mmol)，将所得混合物在室温下搅拌30分钟。加入3-氨基-4-(甲氨基)苯甲酸甲酯(EV-AR0021-002,250mg,1.39mmol)，将混合物在氮气、室温下搅拌3h，在60℃下搅拌3h，接着在室温下搅拌16h。随后真空浓缩混合物，将剩余物悬浮在乙酸(3ml)中，将所得混合物在氮气、80℃中搅拌7h。真空除去溶剂，通过快速柱色谱(10-25％乙酸乙酯/庚烷)纯化剩余物，得到固体物，该固体物从乙醚(5ml)中研磨，得到140mg(29％)2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AR0061-003)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.28min,M/z＝386.1(M+1)。
2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸(EV-AR0064-002)-步骤6
往2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AR0061-003,140mg,0.36mmol)在THF(3ml)中的溶液内加入氢氧化锂(26mg,1.09mmol)在水(3ml)中的溶液，将所得混合物在氮气、50℃下搅拌16h。真空浓缩反应粗产物并置于水中(5ml)，用5N盐酸水溶液(～0.5ml)酸化，直至没有观察到更多的沉淀。搅拌所得悬浮液30分钟，并经滤纸过滤。将所得固体干燥，得到130mg(96％)2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸(EV-AR0064-002)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.13min,M/z＝372.0(M+1)。
N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AR0066-002)-步骤7
往2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸(EV-AR0064-002,50mg,0.13mmol)在2：1DMSO/乙腈(3ml)中的溶液内依次加入DIPEA(26μl,0.16mmol)和HATU(60mg,0.16mmol)，将所得混合物在室温下搅拌15分钟。往该溶液中加入(3R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.15mmol)，并将混合物在氮气、室温下搅拌16h。往该混合物中加入3：2乙腈/水(0.5ml)、2：1DMSO/乙腈(2ml)和水(5ml)，将所得悬浮液在真空下用滤纸过滤。用水(10ml)洗涤固体，干燥得到53mg(71％)N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AR0066-002)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.20min,M/z＝554.2(M+1)。
(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐(I-9)(EV-AR0067-002)-步骤8
往N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AR0066-002,53mg,0.10mmol)在甲醇(2ml)中的悬浮液内加入4M盐酸/二氧六环(1ml)，将所得溶液在室温下搅拌2h。真空浓缩反应粗产物，将剩余物从水(4ml)中冻干，得到46mg(98％)(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐(EV-AR0067-002)，为白色粉末。LCMS(方法A)：保留时间2.17min,M/z＝454.2(M+1)。
流程1的具体案例
I-12
按照流程1描述的方法通过按照流程1.1合成的1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5714-004)合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺I-12EV-AS5724-003(EOAI3435373)
流程1.1
5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5711-002)-步骤1
往5-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(CAS 934-07-6,500mg,2.45mmol)在无水DMF(5ml)中的溶液内加入氢化钠(60％,150mg,3.75mmol)。往该溶液中加入(溴甲基)环丙烷(350μl,3.61mmol)，将混合物在氮气、30℃下在密封管内搅拌8h。浓缩反应混合物，用甲醇猝灭，经快速柱色谱(0-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到566mg(89％)5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5711-002)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.44min,M/z＝258/260(M+1)。
1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5714-004)-步骤2
往5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5711-002,566mg,2.19mmol)在甲苯(3ml)中的溶液内加入钯-三苯基膦(1：4)(100mg,0.09mmol)。往该溶液中加入2-(三丁基甲锡烷基)吡啶(0.84ml,2.63mmol)，将混合物在氮气、110℃下搅拌18h。将反应混合物冷却，用乙酸乙酯(5ml)稀释，用1M氟化钾(2.5ml)猝灭。搅拌混合物15分钟，将所得的悬浮液经Kieselguhr过滤，滤器用乙酸乙酯(100ml)洗涤。有机层用1M氟化钾(2x6ml)、饱和氯化钠水溶液(6ml)洗涤，随后经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物经快速柱色谱(0-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到176mg(31％)1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5714-004)，为黄色胶状物。LCMS(方法D)：保留时间1.22min,M/z＝257(M+1)。
I-17
按照流程1描述的方法通过按照流程1.2合成的1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5741-002)合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺I-17 EV-AS5752-002(EOAI3435970)
流程1.2
1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5741-002)-步骤1
往5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5714-003,135mg,0.52mmol)在二氧六环(1ml)中的溶液内加入吡啶-3-基硼酸(75mg,0.61mmol)。往该溶液中加入二氯1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁合钯(1：1)(15mg,0.02mmol)，将混合物在氮气、100℃下搅拌1h。浓缩反应混合物，剩余物经快速柱色谱(8-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到100mg(71％)1-(环丙基甲基)-5-(吡啶-3-基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AS5741-002)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.08min,M/z＝257(M+1)。
I-22
按照流程1描述的方法通过按照流程1.3合成的1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AS5469-002)合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-4-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺I-22 EV-AS5480-001(EOAI3441169)。
流程1.3
1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AS5469-002)-步骤1
0℃下，往2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AS5468-002，如流程1.10中描述制备，683mg,3.38mmol)在THF(20ml)中的溶液内加入六甲基二硅氮烷钾(15％在甲苯中的溶液,5.64ml,3.72mmol)，搅拌5min，随后加入(溴甲基)环丙烷(360μl,3.72mmol)并在70℃下搅拌20h。冷却反应混合物至0℃，加入饱和氯化铵水溶液(20ml)。用DCM(2x20ml)萃取反应混合物，有机萃取物经硫酸钠干燥并浓缩。剩余物经快速柱色谱(0-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到381mg(43％)1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AS5469-002)，为米色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.12min,M/z＝257(M+1)。
I-32
按照流程1.4通过按照流程1和1.1描述的方法合成的N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-[(E)-2-苯基乙烯基]-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AU3418-004)得到(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-(2-苯基乙基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐I-32 EV-AU3425-003(EOAI3447741)。
流程1.4
(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-(2-苯基乙基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐(EV-AU3425-003)-步骤1
往N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-[(E)-2-苯基乙烯基]-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AU3418-004,17mg,0.03mmol)在乙醇(2ml)中的溶液内加入10％w/w Pd/C(2mg,0.02mmol)。在室温、氢气气氛中搅拌混合物5h，并经Kieselguhr过滤。用甲醇(20ml)洗涤滤器，并真空浓缩滤液。将所得的物质溶解在DCM(2ml)中，加入2M HCl/乙醚(0.5ml)。室温下搅拌混合物2h。在氮气流中去除溶剂，进一步真空干燥物质16h，得到13mg(85％)(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-(2-苯基乙基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐(EV-AU3425-003)，为白色固体。LCMS(方法A)：保留时间2.48min,M/z＝482(M+1)。
I-21
由N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5765-002)经boc-脱保护得到(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐I-21EV-AS5766-001(EOAI3437830)，其中N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5765-002)按照流程1.5得到，以按照流程1描述的方法合成的N-[(3R)-1-{2-[5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5763-002)为原料。
流程1.5
N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5765-001)-步骤1
往N-[(3R)-1-{2-[5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5763-002,50mg,0.09mmol,按照流程1中描述的方法合成)在乙醇(2ml)中的溶液内加入10％w/w Pd/C(5mg,0.05mmol)。在室温、氢气气氛中搅拌混合物17h，并经Kieselguhr过滤。用甲醇(40ml)洗涤滤器，并将滤液真空浓缩，得到43mg(99％)N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5765-002)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.07min,M/z＝478(M+1)。
(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐(EV-AS5766-002)-步骤2
往N-[(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AS5765-002,40mg,0.08mmol)在乙醇(1ml)中的溶液内加入1.25M氯化氢/乙醇(1ml)。在40℃下搅拌混合物4.5h。在氮气流下去除溶剂，剩余物经碱性HPLC制备方法纯化。剩余物溶解于2M氯化氢水溶液(1ml)中，真空去除溶剂。剩余物溶解在水(4ml)中，在冷冻干燥器中干燥，得到31mg(89％)(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺盐酸盐(EV-AS5766-002)，为黄色粉末。LCMS(方法A)：保留时间1.46min,M/z＝378(M+1)。
I-6和I-7
按照流程1描述的方法通过按照流程1.6中描述的方法合成的1-环丁基-3-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0034-003)合成(3R)-1-[2-(1-环丁基-3-环丙基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺I-6EV-AR0050-002(EOAI3427617)。按照流程1描述的方法通过按照流程1.6中的描述合成的1-环丁基-5-环丙基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(EV-AR0034-004)合成(3R)-1-[2-(1-环丁基-5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺I-7 EV-AR0051-002(EOAI3427618)。
流程1.6
1-环丁基-3-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0034-003)和1-环丁基-5-环丙基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(EV-AR0034-004)-步骤1
往3-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(CAS 1036733-11-5,500mg,3.01mmol)在DMF(5ml)中的溶液内加入碳酸钾(832mg,6.02mmol)、碘化钾(750mg,4.52mmol)和溴代环丁烷(CAS 4399-47-7,315μl,3.35mmol)。80℃下搅拌所得混合物17h。加入额外的溴代环丁烷(70μl,0.74mmol)，80℃下搅拌混合物24h。真空除去溶剂，剩余物溶解于乙酸乙酯(100ml)中，依次用水(3x10ml)和饱和氯化钠(10ml)洗涤。有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(25％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到2种产物。
第一洗脱异构体：230mg(31％)1-环丁基-3-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(EV-AR0034-003)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.26min,M/z＝221(M+1)。
第二洗脱异构体：130mg(19％)1-环丁基-5-环丙基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(EV-AR0034-004)，为无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.12min,M/z＝221(M+1)。
I-36
按照流程1描述的方法通过按照流程1.7合成的1-(环丙基甲基)-4-甲基-2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸EV-AT8656-001合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-4-甲基-2-苯基-1H-咪唑-5-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺EV-AU7213-001(EOAI3447871)。
流程1.7
2-溴-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(EV-AT8648-001)-步骤1
往搅拌着的4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(CAS 51605-32-4,500mg,3.24mmol)在乙腈(10ml)和氯仿(10ml)中的溶液内加入N-溴琥珀酰亚胺(577mg,3.24mmol)，在氮气气氛、室温下搅拌反应物18h。将反应混合物浓缩，剩余物经快速柱色谱(10-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到560mg(73％)2-溴-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(EV-AT8648-001)，为灰白色固体。LCMS(方法D)：保留时间0.87min,M/z＝233/235(M+1)。
2-溴-1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(EV-AT8650-001)-步骤2
往在DMF(10ml)中的2-溴-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(EV-AT8648-001,550mg,2.36mmol)内依次加入碳酸钾(652mg,4.72mmol)和(溴甲基)环丙烷(0.25ml,2.60mmol)，室温下搅拌反应混合物16h。向反应混合物中加入饱和氯化铵水溶液(150ml)，水层用乙酸乙酯(2x150ml)萃取。合并的有机物随后经硫酸钠干燥并真空浓缩。剩余物经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到543mg(80％)2-溴-1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(EV-AT8650-001)，为无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.23min,M/z＝287/289(M+1)。
1-(环丙基甲基)-4-甲基-2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸(EV-AT8656-001)-步骤3
压力管装有在二氧六环(2ml)和水(0.67ml)的2-溴-1-(环丙基甲基)-4-甲基-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(EV-AT8650-001,200mg,0.70mmol)、苯基硼酸(127mg,1.04mmol)、四(三苯基膦)合钯(0)(20mg,0.017mmol)和碳酸钾(154mg,1.11mmol)。将混合物用氮气吹扫10分钟并在100℃下搅拌3h。反应混合物在乙酸乙酯(100ml)和水(80ml)之间分配。有机萃取物经硫酸钠干燥并浓缩。剩余物使用快速柱色谱(0-35％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到172mg(82％)1-(环丙基甲基)-4-甲基-2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸(EV-AT8656-001)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.05min,M/z＝285(M+1)。
I-43
按照流程1描述的方法通过按照流程1.8中的描述合成的5-[苄基(苯基)氨基甲酰基]-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸(EV-AU3461-003)合成5-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-N-苄基-1-(环丙基甲基)-N-苯基-1H-吡咯-2-甲酰胺I-43 EV-AU3468-002(EOAI3450849)。
流程1.8
5-[苄基(苯基)氨基甲酰基]-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3459-003)-步骤1
往5-(乙氧基羰基)-1H-吡咯-2-甲酸(CAS 952569-58-3,200mg,1.09mmol)在DMF(5ml)中的溶液内依次加入DIPEA(190μl,1.15mmol)和HATU(436mg,1.15mmol)。搅拌反应物30分钟，加入N-苄基苯胺(CAS 103-32-2,220mg,1.20mmol)。在氮气下将混合物在室温下搅拌17h，随后在50℃下搅拌23h。真空浓缩反应混合物，剩余物用DCM(30ml)和水(25ml)稀释。水层用DCM(2x30ml)萃取，合并的有机萃取物用水(2x10ml)、饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(100％DCM)纯化，得到174mg(46％)5-[苄基(苯基)氨基甲酰基]-1H-吡咯-2-甲酸乙酯EV-AU3459-003，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间2.28min.M/z＝349(M+1)。
5-[苄基(苯基)氨基甲酰基]-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸(EV-AU3461-003)-步骤2
往5-[苄基(苯基)氨基甲酰基]-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(174mg,0.50mmol)在无水DMF(3ml)中的溶液内依次加入氢化钠(60％,30.1mg,0.75mmol)和(溴甲基)环丙烷(73μl,0.75mmol)。在氮气、室温下搅拌所得混合物17h，随后在50℃下8h，接着在室温下52h。真空浓缩反应混合物，并将剩余物溶解在甲醇(5ml)中。加入5M氢氧化钠水溶液(0.86ml)，并在50℃下搅拌反应物6h。使反应物冷却至室温，并用5N氯化氢水溶液(6ml)酸化。将所得悬浮液真空浓缩并置于水中(3ml)。随后过滤所述悬浮液，并将固体空气干燥，得到55mg(83％)5-[苄基(苯基)氨基甲酰基]-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲酸(EV-AU3461-003)，为浅黄色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.23min。M/z＝375(M+1)。
I-48
按照流程1描述的方法通过按照流程1.9中的描述合成的1-(环丙基甲基)-5-(苯基氨基甲酰基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3483-002)合成5-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(环丙基甲基)-N-苯基-1H-吡咯-2-甲酰胺I-48 EV-AU3491-002(EOAI3454072)。
流程1.9
5-(苯基氨基甲酰基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3481-004)-步骤1
往5-(乙氧基羰基)-1H-吡咯-2-甲酸(CAS 952569-58-3,100mg,0.55mmol)在DMF(2ml)中的溶液内依次加入DIPEA(110μl,0.67mmol)和HATU(250mg,0.66mmol)。搅拌15分钟后，加入苯胺(CAS 62-53-3,60μl,0.66mmol)，在氮气、室温下搅拌混合物1.5h。真空浓缩反应混合物，剩余物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并用1N氯化氢水溶液(2x20ml)、水(3x20ml)且随后用饱和氯化钠水溶液(20ml)洗涤。有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗物质，所述粗物质经快速柱色谱(0-1％MeOH/DCM)纯化，得到114mg(81％)5-(苯基氨基甲酰基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3481-004)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.08min,M/z＝259(M+1)。
1-(环丙基甲基)-5-(苯基氨基甲酰基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3483-002)-步骤2
在-20℃下往DIAD(174μl,0.88mmol)在无水THF(5ml)中的溶液内加入三苯基膦(232mg,0.88mmol)。搅拌30分钟后，加入5-(苯基氨基甲酰基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3481-004,114mg,0.44mmol)在无水THF(5ml)中的溶液。再搅拌溶液30分钟，随后加入环丙基甲醇(54μl,0.67mmol)，在氮气气氛下让混合物达到室温历时17h。真空除去溶剂，粗物质经快速柱色谱(5-25％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到150mg(80％)1-(环丙基甲基)-5-(苯基氨基甲酰基)-1H-吡咯-2-甲酸乙酯(EV-AU3483-002)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.29min,M/z＝313(M+1)。
I-23
按照流程1描述的方法通过按照流程1.10中的描述合成的1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AT8667-001)合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺I-23 EV-AT8676-001(EOAI3441286)。
流程1.10
2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AT8666-001)-步骤1
往N-羟基苯甲亚氨代酰胺(carboximidamide)(CAS 613-92-3,3.91g,28.7mmol)在甲醇(20ml)中的悬浮液内加入丙-2-炔酸甲酯(CAS 922-67-8,2.55ml,28.7mmol)。混合物在60℃下、氮气中搅拌1h，真空浓缩，与甲苯(20ml)共沸，真空除去溶剂。往所得固体中加入二苯醚，将混合物在200℃下搅拌30分钟。使反应物冷却至室温，加入乙醚(100ml)。滤出所得固体，经快速柱色谱(10-80％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到0.52g(8.6％)2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AT8666-001)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间0.80min,M/z＝203(M+1)。
1‐(环丙基甲基)‐2‐苯基‐1H‐咪唑‐5‐甲酸甲酯(EV-AT8667-001)-步骤2
往2-苯基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AT8666-001,624mg,3.09mmol)和碳酸钾(853mg,6.17mmol)在DMF中的悬浮液内(10ml)加入(溴甲基)环丙烷(0.36ml,3.70mmol)。室温下搅拌所述混合物16h，随后使混合物在乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)之间分配。有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物经快速柱色谱(10-60％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到235mg(29％)1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AT8667-001)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.05min,M/z＝257(M+1)。
I-58
按照流程1描述的方法通过按照流程1.11中的描述合成的1-苄基-2-甲基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AV3888-001)合成(3R)-1-[2-(1-苄基-2-甲基-1H-咪唑-4-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺I-58 EV-AW5508-001(EOAI3456187)。
流程1.11
(Z)-N-羟基亚氨代乙酰氯(ethenecarbonimidoyl chloride)(EV-AV3883-001)-步骤1
往(E)-N-乙叉基羟胺(CAS 107-29-9,0.50g,8.46mmol)在DMF(20mL)中的溶液内加入1-氯吡咯烷-2,5-二酮(685.06μl,8.46mmol)，室温下搅拌反应物2h。将混合物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(2x10ml)萃取。合并的有机萃取物用水(3x10ml)、饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到0.79g(假定为定量)(Z)-N-羟基亚氨代乙酰氯(EV-AV3883-001)，为无色油状物。
(Z)-N-苄基-N'-羟基亚氨代乙酰胺(EV-AV3886-001)-步骤2
0℃下，往(Z)-N-羟基亚氨代乙酰氯(EV-AV3883-001,0.80g,8.56mmol)在乙醚(20ml)中的溶液内加入三乙胺(1.19ml,8.56mmol)和苯甲胺(0.93ml,8.56mmol)，将反应物在0℃下搅拌2h。随后将混合物用水(10ml)稀释并用DCM(3x10ml)萃取。合并的有机萃取物用水(10ml)、饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到730mg(52％)(Z)-N-苄基-N'-羟基亚氨代乙酰胺(EV-AV3886-001)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间0.37min,M/z＝165(M+1)。
1-苄基-2-甲基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AV3888-001)-步骤3
往(Z)-N-苄基-N'-羟基亚氨代乙酰胺(EV-AV3886-001,730mg,4.45mmol)在甲醇(12ml)中的溶液内加入丙-2-炔酸甲酯(CAS 922-67-8,404.26μl,4.54mmol)。混合物在65℃下、氮气中搅拌5h。随后真空浓缩混合物，加入甲苯(3ml)，真空浓缩混合物，得到橙色油状物。加入二苯醚(12ml)，在200℃下搅拌混合物20分钟。冷却反应物至室温，经快速柱色谱(10-100％乙酸乙酯/庚烷，接着0-20％MeOH/乙酸乙酯)纯化混合物，得到320mg(30％)1-苄基-2-甲基-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(EV-AV3888-001)，为棕色油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.77min,M/z＝231(M+1)。
I-55
按照流程1描述的方法通过按照流程1.12中的描述合成的1-苄基-5-氰基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AU7292-001)合成5-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-苄基-1H-吡咯-2-甲腈I-55 EV-AW5300-001(EOAI3455897)。
流程1.12
1-苄基-5-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AU7290-001)-步骤1
在氮气、-20℃下，往DIAD(1.03ml,4.90mmol)在无水THF(5ml)中的溶液内加入三苯基膦(1.30g,4.90mmol)在无水THF(10ml)中的溶液。搅拌混合物30分钟，加入5-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(CAS 934-07-6,500mg,2.45mmol)在无水THF(5ml)中的溶液。在-20℃下进一步搅拌混合物30分钟，在-20℃下滴加在无水THF(5ml)中的苯甲醇(CAS 100-51-6,0.38ml,3.67mmol)，使反应混合物升温至室温，搅拌62h。真空除去溶剂，粗物质经快速柱色谱(5-30％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到730mg(99％)1-苄基-5-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AU7290-001)，为浅黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.32min,M/z＝294/296(M+1)。
1-苄基-5-氰基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AU7292-001)-步骤2
往1-苄基-5-溴-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AU7290-001,300mg,1.00mmol)在NMP中的溶液内(5ml)加入氰化铜(107mg,1.2mmol)。将所得混合物在160℃密封管内加热16h。使反应物冷却至室温，倒入在1M氢氧化钠中的10％EDTA水溶液(30ml)。在室温下搅拌所得混合物30分钟。含水混合物用乙酸乙酯(3x20ml)萃取，合并的有机萃取物用饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(5-30％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到142mg(58％)1-苄基-5-氰基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AU7292-001)，为无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.21min,M/z＝241(M+1)。
I-56
由得到I-55的合成路线(流程1.12)的副产物合成5-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-苄基-1H-吡咯-2-甲酰胺I-56EV-AW5302-001(EOAI3455898)
I-57
按照流程1描述的方法通过按照流程1.13中的描述合成的1-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AW1367-001)合成(3R)-1-[7-甲氧基-1-甲基-2-(1-苯基-1H-吡咯-2-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺I-57 EV-AW1377-001(EOAI3456183)。
流程1.13
1-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AW1367-001)-步骤1
将1H-吡咯-2-甲酸甲酯(CAS 1193-62-0,100mg,0.80mmol)和碘苯(CAS 591-50-4,107μl,0.96mmol)溶解在甲苯(2ml)和N,N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(35μl,0.32mmol)中，加入磷酸钾(356mg,1.68mmol)。用氮气吹扫反应物5分钟，随后加入碘化铜(I)(30mg,0.16mmol)。在110℃下搅拌混合物17h。使反应物冷却至室温，用乙酸乙酯(20ml)稀释，并用水(5x10ml)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到127mg(79％)1-苯基-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(EV-AW1367-001)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.15min,M/z＝202(M+1)。
I-13
按照流程1描述的方法通过按照流程1.14中的描述合成的1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑-2-甲酸乙酯(EV-AS5437-001)合成(3R)-1-{2-[1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}哌啶-3-胺I-13 EV-AS5448-002(EOAI3435745)。
流程1.14
1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑(EV-AS5429-002)-步骤1
往5-苯基-1,3-噁唑(CAS 1006-68-4,1.00g,6.90mmol)和环丙基-甲胺(CAS2516-47-4,980mg,13.8mmol)在邻二氯苯(10ml)中的溶液内加入三氟乙酸(1.054ml,13.78mmol)。在200℃、微波辐射下搅拌反应物1.5h。将混合物倒入1M氢氧化钠水溶液(20ml)和饱和氯化钠水溶液(40ml)的混合物中并用乙酸乙酯(3x20ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经SCX-II柱(cartridge)纯化。所述柱依次用MeOH和2M氨/MeOH洗涤。真空浓缩氨/MeOH洗去物，得到250mg 1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑(EV-AS5429-002)，为棕色油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.71min,M/z＝199(M+1)。
1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑-2-甲酸乙酯(EV-AS5437-001)-步骤2
在-60℃、氮气中，往1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑(EV-AS5429-002,50mg,0.25mmol)在无水THF(5ml)中的溶液内加入2.5M n-BuLi在己烷中的溶液(119μl,0.30mmol)。搅拌30分钟后，加入氯甲酸乙酯(47μl,0.50mmol)。混合物在室温下搅拌16h，加入水(10ml)猝灭，然后用乙酸乙酯(2x20ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到66mg(85％)1-(环丙基甲基)-5-苯基-1H-咪唑-2-甲酸乙酯(EV-AS5437-001)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.17min,M/z＝271(M+1)。
I-62
按照流程1中描述的方法通过按照流程1.15中的描述合成的7-氰基-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AW1386-001)合成5-{5-[(3R)-3-氨基哌啶-1-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲腈，I-62,EV-AW1394-001(EOAI3458420)。
流程1.15
7-氰基-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AW1386-001)-步骤1
往搅拌着的2-[5-溴-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AW1383-001，按照流程1,步骤1-5合成,90％,162mg,0.35mmol)在NMP(3ml)中的溶液中加入氰化铜(I)(31mg,0.35mmol)。在16℃下搅拌反应混合物17h，冷却至室温，进一步加入氰化铜(I)(16mg,0.17mmol)。搅拌反应物5h。冷却反应混合物至0℃，依次加入水(30ml)和乙酸乙酯(30ml)。分离有机相，水相用乙酸乙酯(2 x10ml)萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到88mg(49％)7-氰基-2-{1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基}-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸乙酯(EV-AW1386-001)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.25min,M/z＝365(M+1)。
I-71
按照流程1描述的方法通过根据流程1.16中的描述合成的1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-甲酸(EV-AW6268-002)合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺,I-71,EV-AW6285-001(EOAI3461374)。
流程1.16
2-[(环丙基甲基)氨基]乙酸甲酯EV-AW6256-001-步骤1
往搅拌着的环丙基甲胺(CAS 2516-47-4,4.00g,56.2mmol)在乙腈(40ml)中的溶液内加入碳酸钾(7.77g,56.2mmol)，随后滴加在乙腈(20ml)中的2-氯乙酸甲酯(CAS 96-34-4,4.93ml,56.2mmol)。室温下搅拌混合物17h。过滤反应混合物并将固体进一步用乙腈(60ml)洗涤，将滤液真空浓缩，得到8.07g(82％)2-[(环丙基甲基)氨基]乙酸甲酯(EV-AW6256-001)，为浅黄色固体。LCMS(方法D)：保留时间：溶剂前,M/z＝143.9(M+1)。
2-[N-(环丙基甲基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酰氨基]乙酸甲酯EV-AW6260-002-步骤2
0℃、氮气气氛中往搅拌着的2-[(环丙基甲基)氨基]乙酸甲酯(EV-AW6256-001,2.00g,10.2mmol)在无水THF(80ml)中的溶液内滴加三乙胺(2.98ml,21.4mmol)，持续搅拌5分钟。在0℃下向反应混合物中分批加入1-甲基-1H-吡唑-4-羰基氯(CAS 79583-19-0,1.62g,11.2mmol)，在该温度下持续搅拌1h。用水(80ml)猝灭反应，减压浓缩混合物。用乙酸乙酯(2 x 80ml)萃取所得含水剩余物。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。剩余物经柱色谱(0-5％甲醇/DCM)纯化，得到1.82g(65％)2-[N-(环丙基甲基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酰氨基]乙酸甲酯(EV-AW6260-002)，为浅黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.86min,M/z＝252(M+1)。
2-[N-(环丙基甲基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酰氨基]乙酸钠EV-AW6261-001-步骤3
往在THF(15ml)中的2-[N-(环丙基甲基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酰氨基]乙酸甲酯(EV-AW6260-002和EV-AW6257-003，如作为EV-AW6260-002得到,2.23g,8.25mmol)中加入2M氢氧化钠(10.3ml)。在50℃、搅拌下加热反应混合物2.5h。浓缩混合物至干，得到3.00g(98％)2-[N-(环丙基甲基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酰氨基]乙酸钠(EV-AW6261-001)。LCMS(方法D)：保留时间0.79min,M/z＝238(M+1)。
1-[1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-基]-2,2,2-三氟乙-1-酮EV-AW6265-002-步骤4
0℃下，往搅拌着的2-[N-(环丙基甲基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酰氨基]乙酸钠(EV-AW6261-001,2.74g,7.40mmol)在DCM(30ml)中的溶液内加入三氟乙酸酐(4.12ml,29.6mmol)，将混合物在室温下搅拌2h。0℃下加入更多的三氟乙酸酐(4.12ml,29.6mmol)，并在室温下持续搅拌17h。真空除去溶剂，并将剩余物溶解在DMF(50ml)中，冷却混合物至0℃，加入乙酸甲脒(methanimidamide)(2.31g，22.2mmol)和碳酸钾(3.07g，22.2mmol)。将混合物在70℃下加热3h，用水(30ml)稀释并用乙酸乙酯(2 x 30ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。剩余物经柱色谱(0-75％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到1.32g(60％)1-[1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-基]-2,2,2-三氟乙-1-酮(EV-AW6265-002)，为灰白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.18min，M/z＝299(M+1)。
1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-甲酸EV-AW6268-002-步骤5
在氮气气氛、冰冷下，往1-[1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-基]-2,2,2-三氟乙-1-酮(EV-AW6265-002，1.31g，4.08mmol)在DMF(20ml)中的溶液内分批加入NaH(60％，0.65g，16.3mmol)。将反应混合物在70℃下加热并在该温度下搅拌3h。真空除去溶剂，将剩余物溶解在水(60ml)，用1M HCl酸化至pH 4。水层用1：4的2-丙醇/氯仿(2 x 60ml)溶液萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物和浓缩的水层经反相色谱(5-30％乙腈/水，含有0.1％甲酸)纯化，得到0.90g(89％)1-(环丙基甲基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-咪唑-5-甲酸(EV-AW6268-002)，为奶油色固体。LCMS(方法D)：保留时间0.74min，M/z＝247(M+1)。
I-109
按照流程1描述的方法通过根据如流程1.17中的描述合成的2-环丁基-1-乙基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AY4663-002)合成(1R,4R,7R)-2-[2-(2-环丁基-1-乙基-1H-咪唑-5-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-109，EV-AY4676-001(EOAI3482311)。
流程1.17
2-环丁基-1-乙基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AY4663-002)-步骤1
往硝酸银(1+)(161mg，0.95mmol)和环丁烷甲酸(CAS 3721-95-7，473mg，4.73mmol)在10％的硫酸水溶液(15ml)中的悬浮液内加入1-乙基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AY4659-001，243mg，1.58mmol)，在70℃下加热反应混合物。在10分钟内少量多次加入0.2M过硫酸铵水溶液(23.6ml)。将反应混合物冷却至室温，搅拌10分钟，倒入冰中，用约33％的氨水碱化，随后用乙酸乙酯(2 x 20ml)萃取。合并的萃取物用饱和氯化钠水溶液(2x 20ml)洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(5-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到72mg(22％)2-环丁基-1-乙基-1H-咪唑-5-甲酸甲酯(EV-AY4663-002)，为浅白色油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.82min，M/z＝209(M+1)。
I-112
按照流程1和流程1.18描述的方法合成6-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(环丙基甲基)-3-甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮，I-112，EV-AY2080-001(EOAI3655173)。
流程1.18
N-[(1R,4R,7R)-3-[2-[1-(环丙基甲基)-5-甲基-6-氧代-2-吡啶基]-7-甲氧基-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]-3-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2075-002)-步骤1
往N-[(1R,4R,7R)-3-[2-[5-溴-1-(环丙基甲基)-6-氧代-2-吡啶基]-7-甲氧基-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]-3-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2072-002，按照流程1合成，142mg，0.12mmol)在二氧六环(1.5ml)和水(0.15ml)中的溶液内加入甲基硼酸(CAS 10043-35-3，14mg，0.23mmol)，磷酸三钾(19μl，0.23mmol)和三环己基膦(7μl，0.02mmol)。反应混合物用氮气吹扫5分钟，一次性加入二乙酸钯(2+)(3mg，0.01mmol)。封闭反应容器并加热至120℃历时16h。混合物用水(5ml)稀释，用DCM(2 x 15ml)萃取。合并的有机物浓缩并经柱色谱(0-10％甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到37mg(46％)N-[(1R,4R,7R)-3-[2-[1-(环丙基甲基)-5-甲基-6-氧代-2-吡啶基]-7-甲氧基-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]-3-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2075-002)，为黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.15min，M/z＝562(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-3-[2-[1-(环丙基甲基)-5-甲基-6-氧代-2-吡啶基]-7-甲氧基-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]-3-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2080-001)-步骤2
将N-[(1R,4R,7R)-3-[2-[1-(环丙基甲基)-5-甲基-6-氧代-2-吡啶基]-7-甲氧基-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]-3-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2075-002，37mg，0.07mmol)溶解在DCM(1ml)中，氮气气氛下用三氟乙酸(0.22ml，2.83mmol)处理并在室温下搅拌1h。将混合物真空浓缩并与甲苯/乙腈共沸。剩余物经制备HPLC(碱性方法)纯化，用Smopex-105(5mg)处理1h，冻干得到0.016g(49％)6-[5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-3-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-苯并咪唑-2-基]-1-(环丙基甲基)-3-甲基-吡啶-2-酮I-112(EV-AY2080-001)，为白色粉末。LCMS(方法H)：保留时间2.28min，M/z＝462(M+1)。
I-118
按照流程1描述的方法通过按照流程1.19中的描述合成的3-乙基吡啶-4-甲酸甲酯(EV-BA1108-001)合成(1R,4R,7R)-2-[2-(3-乙基吡啶-4-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-118，EV-BA1121-001(EOAI3694084)。
流程1.19
3-乙烯基吡啶-4-甲酸甲酯(EV-BA1103-002)-步骤1
将3-溴吡啶-4-甲酸甲酯(CAS 59786-31-1，0.50g，2.31mmol)，氟化铯(1.05g，6.94mmol)和2,4,6-乙烯基硼氧六环(boroxin)-吡啶络合物(CAS 95010-17-6，1.39g，5.79mmol)在THF(20ml)中的悬浮液用氮气吹扫5分钟。加入Pd(dppf)Cl2(0.34g，0.46mmol)，将反应混合物在70℃下加热2h。将混合物冷却至室温，经Celite过滤，用乙酸乙酯洗涤固体。滤液用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。剩余物经柱色谱(12-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到0.37g(97％)3-乙烯基吡啶-4-甲酸甲酯(EV-BA1103-002)。LCMS(方法D)：保留时间0.88min，M/z＝137(M+1)。
3-乙烯基吡啶-4-甲酸甲酯(EV-BA1108-001)-步骤2
将3-乙烯基吡啶-4-甲酸甲酯(EV-BA1103-002，100mg，0.61mmol)和Pd/C(10％，33mg，0.03mmol)在乙醇(2ml)中的悬浮液在室温、氢气气氛下搅拌16h。反应混合物经Celite过滤，浓缩滤液，得到140mg(55％)3-乙基吡啶-4-甲酸甲酯(EV-BA1108-001)。LCMS(方法D)：保留时间0.85min，M/z＝166(M+1)。
流程2
(3R)-1-[1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺盐酸盐，I-59，EOAI3426751(EV-AO7894-001)的合成
1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AP4075-001)-步骤1
往3-氨基-4-(甲氨基)苯甲酸甲酯(EV-AN2487-001，如流程1中的描述合成，100mg，0.54mmol)在无水DCM(3ml)中的溶液内加入1,1'-羰基二咪唑(110mg，0.68mmol)。混合物在室温下搅拌16h。真空过滤收集沉淀物，并用冰冷的乙醚(2x2ml)洗涤。空气干燥固体2h，得到82mg(73％)1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AP4075-001)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间0.94min，M/z＝207(M+1)。
2-溴-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AP4076-001)-步骤2
往在压力管中的三溴氧化磷(217mg，0.76mmol)在二氯乙烷(3ml)中的溶液内加入1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AP4075-001，78mg，0.38mmol)。密封容器，并将混合物在80℃下搅拌16h。使混合物冷却至室温，加入三溴氧化磷(217mg，0.76mmol)。将混合物在80℃下加热5h，接着在室温下加热62h。加入三溴氧化磷(434mg，1.52mmol)，将反应物在80℃下加热20h。使反应物冷却至室温，用水(10ml)和2M碳酸钠水溶液(10ml)中和。含水混合物用DCM(3x8ml)萃取，合并的有机萃取物依次用水(3x5ml)和饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩，得到72mg(68％)2-溴-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AP4076-001)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.09min，M/z＝269/271(M+1)。
1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AQ1926-001)-步骤3
往在压力管中的2-溴-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AP4096-001，57mg，0.20mmol)在DMF(1ml)中的溶液内依次加入碳酸钾(56.2mg，0.41mmol)和3-苯基-1H-吡唑(CAS 2458-26-6，44.0mg，0.31mmol)。密封容器，并将反应混合物在120℃下搅拌3h。将混合物冷却至室温，并在乙酸乙酯(5ml)和水(5ml)之间分配。水层用乙酸乙酯(5ml)萃取，随后将合并的有机萃取物蒸发至干，与庚烷共沸。粗物质经快速柱色谱(0-60％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到24mg(35％)1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AQ1926-001)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.48min，M/z＝333(M+1)。
1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸(EV-AO7889-001)-步骤4
往1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AQ1926-001，24mg，0.07mmol)在THF/水(1：1，4ml)中的溶液内加入氢氧化锂(6.0mg，0.25mmol)。将所得混合物在50℃下搅拌2h。真空除去溶剂，得到23mg(假定为定量反应)1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸(EV-AO7889-001)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.31min，M/z＝319(M+1)。
N-[(3R)-1-[1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AO7890-001)-步骤5
往1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸(EV-AO7889-001，22mg，0.07mmol)和DIPEA(14μl，0.08mmol)在无水DMF(3ml)的溶液内加入HATU(31mg，0.08mmol)。将反应物在室温下搅拌10分钟，加入(3R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(14mg，0.07mmol)，继续反应60h。进一步加入HATU(31mg，0.08mmol)、DIPEA(14μl，0.08mmol)和(3R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(14mg，0.07mmol)。将反应物在60℃下搅拌2.5h。真空浓缩混合物，剩余物经酸性HPLC制备方法纯化，得到16mg(47％)N-[(3R)-1-[1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AO7890-001)，为白色粉末。
(3R)-1-[1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺盐酸盐，I-59，(EV-AO7894-001)-步骤6
室温下，将4M在二氧六环中(2ml)的HCl加入到N-[(3R)-1-[1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AO7890-001，16mg，0.03mmol)在二氧六环(2ml)中的溶液内。将混合物在室温下搅拌2h。真空除去溶剂，剩余物从乙腈：水(1：1，2ml)中冷冻干燥，得到14mg(99％)(3R)-1-[1-甲基-2-(5-苯基-1H-吡唑-1-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]哌啶-3-胺盐酸盐，I-59，(EV-AO7894-001)，为无色结晶固体。LCMS(方法A)：保留时间2.04min，M/z＝401.2(M+1)。
流程3
1-(环丙基甲基)-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AX5314-002)-步骤1
往5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(CAS 81698-01-3，749mg，6.24mmol)在乙腈(25ml)中的溶液内依次加入碳酸钾(2.15g，15.6mmol)和(溴甲基)环丙烷(1.51ml，15.6mmol)。在50℃下搅拌混合物17h。反应混合物冷却至室温，倒入水(75ml)中并用乙酸乙酯(3 x 75ml)萃取。合并的有机层用水(100ml)和饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物经快速柱色谱(0-20％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到898mg(79％)1-(环丙基甲基)-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(为白色固体)(EV-AX5314-002)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.08min，M/z＝175(M+1)。
N-[(3R,6S)-1-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-6-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX5315-002)-步骤2
往3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酸(CAS 1549812-23-8，264mg，1.17mmol)和HATU(440mg，1.17mmol)在无水DMF(5ml)中的溶液内加入DIPEA(0.41ml，2.33mmol)，混合物在室温下搅拌30分钟。加入N-[(3R,6S)-6-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS 1227917-63-6，250mg，1.17mmol)，搅拌反应物17h。真空浓缩反应混合物，并在乙酸乙酯(50ml)和饱和氯化钠水溶液(50ml)之间分配。水层用乙酸乙酯(30ml)萃取，合并的有机物用水(40ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗物质经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到421mg(85％)N-[(3R,6S)-1-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-6-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX5315-002)，为橙色泡沫。LCMS(方法D)：保留时间1.18min，M/z＝423(M+1)。
N-[(3R,6S)-1-{2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-6-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX5316-002)-步骤3
往N-[(3R,6S)-1-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-6-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX5315-002，150mg，0.36mmol)和1-(环丙基甲基)-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AX5314-002，64mg，0.37mmol)在乙醇(4ml)中的混合物内分批加入亚硫酸氢钠(CAS 7775-14-6，185mg，1.07mmol)在水(2ml)中的溶液。混合物用氮气吹扫，在90℃下加热17h。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩。将DCM(30ml)加入至剩余物中，均相溶液经硫酸钠干燥。过滤出固体并真空浓缩滤液。粗物质经制备HPLC(酸性方法)纯化，得到143mg(74％)N-[(3R,6S)-1-{2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-6-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX5316-002)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.28min，M/z＝547(M+1)。
按照流程1中描述的方法，使用EV-AX5316-002合成5-{5-[(2S,5R)-5-氨基-2-甲基哌啶-1-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲腈，I-69，EV-AX5318-001(EOAI3460934)。
流程3的具体案例
I-73
按照流程3和流程1中描述的方法通过按照流程3.1中的描述合成的2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AX7820-001)合成5-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-甲腈，I-73，EV-AX7827-001(EOAI3461384)。
流程3.1
2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AX7819-001)-步骤1
将3-氨基-5-甲氧基-4-({[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基环丁基]甲基}氨基)苯甲酸甲酯(EV-AX2006-001，91％，557mg，1.72mmol)和1-(环丙基甲基)-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AX5314-002，300mg，1.72mmol)溶解在DMF(3ml)中，加入Na2S2O5(982mg，5.17mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌17h，并冷却至室温。混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，依次用水(3x 10ml)和饱和氯化钠水溶液(5ml)洗涤。合并的有机物经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到574mg(70％)2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AX7819-001)，为黄色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.19min，M/z＝449(M+1)。
2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AX7820-002)-步骤2
将2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-羟基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AX7819-001，574mg，1.20mmol)溶解在DMF(7ml)中，加入NaH(60％，96mg，2.41mmol)。在室温下搅拌反应混合物10分钟，随后加入碘甲烷(374μl，6.01mmol)。将反应物在室温下搅拌4h，随后真空浓缩。将剩余物用水(20ml)稀释，并萃取至乙酸乙酯(3 x 30ml)中。合并的有机物经硫酸钠干燥，并蒸发至干。所得物质依次经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)和制备HPLC(酸性方法)纯化，得到282mg(50％)2-[5-氰基-1-(环丙基甲基)-1H-吡咯-2-基]-7-甲氧基-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AX7820-002)，为白色粉末。
I-81
按照流程3.1中描述的方法通过根据流程3.2中的描述合成的1-环丙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈EV-AY4323-001合成5-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-环丙基-1H-吡咯-2-甲腈，I-81，EV-AY4337-001(EOAI3468837)。
流程3.2
1-环丙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4323-001)-步骤1
往5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(CAS 81698-01-3，250mg，1.98mmol)、环丙基硼酸(CAS 411235-57-9，510mg，5.93mmol)和Na2CO3(629mg，5.93mmol)在DCE(1ml)中的溶液内加入双乙酸铜(II)(copper(II)diacetate)(539mg，2.97mmol)和2,2'-联吡啶(463mg，2.97mmol)在DCE(2ml)中的悬浮液。将反应混合物在70℃下搅拌4h，冷却至室温，用1M HCl(15ml)猝灭。所得物质用乙酸乙酯(3 x 10ml)萃取。合并的各有机级分依次用5N NaOH(10ml)和饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物经快速柱色谱(用0-50％乙酸乙酯/庚烷洗脱)纯化，得到120mg(38％)1-环丙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4323-001)，为白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间0.98min，M/z＝161(M+1)。
I-82
按照流程3中描述的方法通过按照流程3.3中的描述合成的5-甲酰基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯-2-甲腈EV-AY4332-001合成5-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯-2-甲腈，I-82，EV-AY4338-001(EOAI3468838)。
流程3.3
5-甲酰基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4332-001)-步骤1
往5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(CAS 81698-01-3，300mg，2.37mmol)在DMF(10ml)中的溶液内加入NaH(60％，114mg，2.85mmol)和三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(582μl，4.03mmol)。在室温下搅拌反应物20h。反应混合物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(3 x10ml)萃取。将有机萃取物合并并依次用5N NaOH(10ml)和饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物经快速柱色谱(0-50％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到406mg(85％)5-甲酰基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4332-001)，为白色固体。LCMS(方法D)保留时间1.08min，没有观测到质量离子(mass ion)。
I-86
按照流程3中描述的方法通过按照流程3.4中的描述合成的1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-甲醛(EV-AW6299-002)合成(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-基]-1-乙基-7-甲氧基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-86，EV-AY4530-001(EOAI3469925)。
流程3.4
N'-(环丙基甲基)苯甲亚氨代酰胺(EV-AW6298-001)-步骤1
往环丙基甲胺(CAS 2516-47-4，276mg，3.88mmol)和苄腈(CAS100-47-0，400mg，3.88mmol)在THF(8ml)中的溶液内缓慢加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-三甲基铝(1：2)(994mg，3.88mmol)。在微波条件下，将反应混合物加热至130℃下6h。冷却反应物至0℃，缓慢用乙酸乙酯(40ml)猝灭。加入饱和Rochelle盐溶液，分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到594mg(88％)N'-(环丙基甲基)苯甲亚氨代酰胺(EV-AW6298-001)，为无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.66min，M/z＝174(M+1)。
1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-甲醛(EV-AW6299-002)-步骤2
将异丙醇(4ml)、(Z)-N'-(环丙基甲基)苯-1-甲亚氨代酰胺(EV-AW6298-001，594mg，3.41mmol)、三乙胺(0.44ml，3.14mmol)和乙酸(205μl，3.58mmol)的混合物在室温下搅拌5分钟。滴加在异丙醇(4ml)中的溴代丙二醛(CAS 2065-75-0，514mg，3.41mmol)，将反应混合物在80℃下加热16h。将反应混合物冷却至室温，进一步用溴代丙二醛(154mg，1.02mmol)再处理，在80℃下持续搅拌3h。蒸发溶剂，剩余物用水(25ml)稀释并用乙酸乙酯(2 x 25ml)萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物经快速色谱(10-70％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到173mg(20％)1-(环丙基甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-甲醛(EV-AW6299-002)，为橙色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.08min，M/z＝227(M+1)。
I-89
按照流程3中描述的方法通过按照流程3.5中的描述合成的5-甲酰基-1-[(3-羟基-3-甲基环丁基)甲基]-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AZ4535-001)合成5-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-吡咯-2-甲腈，I-89，EV-AY4541-001(EOAI3470261)。
流程3.5
(1R,3S)-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-甲酸甲酯(EV-AY4513-002)-步骤1
-78℃下，往3-氧代环丁烷-1-甲酸甲酯(CAS 695-95-4，4.00g，31.2mmol)在THF(100ml)中的溶液内加入1M溴化甲基镁/THF(35.9ml，35.9mmol)。混合物在-78℃下搅拌2h，随后升温至室温，搅拌16h。将反应混合物冷却至-78℃，加入饱和氯化铵溶液(10ml)。所得混合物用水(200ml)稀释并用乙酸乙酯(2 x 200ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物经柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到2.05g(46％)(1R,3S)-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-甲酸甲酯(EV-AY4513-002)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ3.70-3.68(m，3H)，2.74-2.64(m，1H)，2.40-2.25(m，4H)，1.41-1.36(m，3H)。无LCMS数据。无LCMS数据。
(1R,3S)-3-(羟基甲基)-1-甲基环丁-1-醇(EV-AY4522-001)-步骤2
0℃下，往(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁烷-1-甲酸甲酯(EV-AY4513-002，250mg，1.73mmol)和氢化钠(60％，73mg，1.82mmol)中加入无水DMF(3ml)，在0℃下搅拌混合物15分钟。加入甲基碘(0.22ml，3.47mmol)，使混合物升温至室温，搅拌48h。反应混合物在乙酸乙酯(80ml)和水(80ml)之间分配。含水萃取液进一步用乙酸乙酯(80ml)洗涤，合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物用THF(3ml)和甲醇(0.3ml)稀释，加入硼氢化钠(197mg，5.20mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，真空浓缩，并经柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到107mg(48％)[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲醇(EV-AY4522-001)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ3.63(d，J＝6.2Hz，2H)，3.16(s，3H)，2.17-2.09(m，1H)，2.03-1.97(m，2H)，1.89-1.81(m，2H)，1.33(s，3H)。无LCMS数据。
4-甲基苯-1-磺酸[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲酯
(EV-AY4533-001)-步骤3
冰冷却下，往[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲醇(EV-AY4529-001，305mg，1.76mmol)在DCM(10ml)中的溶液内加入三乙胺(0.32ml，2.28mmol)、DMAP(11mg，0.088mmol)和4-甲基苯-1-磺酰氯(352mg，1.84mmol)。使反应混合物升温至室温，搅拌4h。混合物在DCM(30ml)和水(30ml)之间分配。有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并浓缩，得到480mg(96％)4-甲基苯-1-磺酸[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲酯(EV-AY4533-001)，为粘稠、无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.29min，M/z＝307(M+23)。
5-甲酰基-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4535-001)-步骤4
往5-甲酰基-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4533-001，100mg，0.83mmol)在乙腈(2ml)中的溶液内依次加入碳酸钾(288mg，2.08mmol)和4-甲基苯-1-磺酸[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲酯(EV-AY4533-001，272mg，0.96mmol)。将混合物在60℃下搅拌16h，在80℃下加热并在该温度下持续搅拌6h。将混合物倒入水(30ml)中并用乙酸乙酯(2 x 30ml)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。混合物随后用碳酸钾(288mg，2.08mmol)和乙腈(2ml)再处理并在80℃下搅拌24h。将混合物倒入水(30ml)中并用DCM(2 x 30ml)萃取。合并的有机层用2M NaOH(20ml)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物经柱色谱(0-60％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到68mg(35％)5-甲酰基-1-{[(1R,3S)-3-甲氧基-3-甲基环丁基]甲基}-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY4535-001)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.29min，M/z＝249(M+水-1)。
I-91
按照流程3.6中描述的方法通过根据流程3.6中的描述合成的N-[(1R,4R,7R)-2-[7-甲氧基-1-甲基-2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2038-001)合成(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(环丙基甲氧基)吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-91，EV-AY2043-002(EOAI3476158)。
流程3.6
N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(环丙基甲氧基)吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2040-001)-步骤1
氮气气氛中，将N-[(1R,4R,7R)-2-[7-甲氧基-1-甲基-2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(137mg，0.25mmol)溶解在无水DMF(2ml)中，用Cs2CO3(98mg，0.30mmol)处理。所得混合物在室温下搅拌2-3分钟，一次性加入(溴甲基)环丙烷(CAS7051-34-5，27μl，0.27mmol)，在室温下搅拌反应混合物16h。混合物用水(10ml)和饱和氯化铵(6ml)稀释并用乙酸乙酯(3 x20ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。剩余物经柱色谱(0-15％甲醇/DCM)纯化，得到184mg N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(环丙基甲氧基)吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2040-001)，为浅黄色玻璃状物。LCMS(方法D)：保留时间1.32min，M/z＝548(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[7-甲氧基-1-甲基-2-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基)-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2043-002)-步骤2
氮气气氛、室温下，将N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[1-(环丙基甲基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2040-001，76％，184mg，0.26mmol)溶解在DCM(4ml)中，用三氟乙酸(0.6ml)处理。在室温下搅拌混合物2小时。将反应混合物浓缩并经制备HPLC(酸性方法)纯化，得到27mg(23％)(1R,4R,7R)-2-{2-[6-(环丙基甲氧基)吡啶-2-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺(EV-AY2043-002)，为白色玻璃状物/泡沫体。LCMS(方法A)：保留时间2.03min，M/z＝448(M+1)。
I-102
按照流程3中描述的方法通过按照流程3.7中的描述合成的5-甲酰基-1-[(3-羟基-3-甲基环丁基)甲基]-1H-吡咯-2-甲腈(EV-AY2050-001)合成6-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-1-(环丙基甲基)-1,2-二氢吡啶-2-酮，I-102，EV-AY2061-002(EOAI3477377)。
流程3.7
1-(环丙基甲基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-甲醛(EV-AY2050-001)-步骤1
氮气气氛下，将6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-甲醛(CAS 358751-77-6，294mg，2.39mmol)溶解在无水DMSO(10ml)中，用Cs2CO3(934mg，2.87mmol)和(溴甲基)环丙烷(CAS7051-34-5，0.25ml，2.63mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌16h，用水(20ml)稀释并用乙酸乙酯(3 x 20ml)萃取。合并的有机萃取物依次用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。剩余物经柱色谱(10-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到0.16g(38％)1-(环丙基甲基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-甲醛(EV-AY2050-001)，为深绿色胶状物，LCMS(方法D)：保留时间0.92min，M/z＝178(M+1)，和0.21g 6-(环丙基甲氧基)吡啶-2-甲醛(EV-AY2050-002)，为无色油状物，LCMS(方法D)：保留时间1.18min，M/z＝178(M+1)。
I-106
如流程3.8中描述，由N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2064-001)的Boc脱保护合成(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-106，EV-AY4657-002(EOAI3478191)。
流程3.8
2-丙酰基戊-4-烯酸乙酯(EV-AY2058-002)-步骤1
氮气气氛中，将3-氧代戊酸乙酯(CAS 4949-44-4，500mg，3.47mmol)溶解在无水DMF(2.5ml)中，将所得混合物冷却至0℃。反应混合物用氢化钠(60％，166mg，4.16mmol)处理并在0℃下搅拌30分钟，随后在10分钟内滴加3-溴丙-1-烯(CAS 106-95-6，360μl，4.16mmol)。使反应混合物升温至室温，搅拌17h，接着用水(20ml)稀释并用TBME(3 x 25ml)萃取。合并的有机物用饱和氯化钠水溶液(30ml)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物经快速柱色谱(0-5％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到341mg(49％)2-丙酰基戊-4-烯酸乙酯(EV-AY2058-002)，为无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.21min，没有观测到质量离子。
2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(EV-AY2062-001)-步骤2
将2-丙酰基戊-4-烯酸乙酯(EV-AY2058-002，341mg，1.68mmol)溶解在无水甲苯(3ml)和苯胺(77μl，0.84mmol)中，加入双(三氟乙酸根合)钯(II)(28mg，0.08mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌18h，冷却至室温，用乙酸乙酯(5ml)稀释，经Kieselguhr垫过滤，用乙酸乙酯(30ml)洗涤。将滤液真空浓缩，经快速柱色谱(0-40％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到313mg(38％)2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(EV-AY2062-001)，为浅黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.34min，M/z＝258(M+1)。
2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-甲酸(EV-AY2063-001)-步骤3
将1M NaOH水溶液(0.95ml)加入2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(EV-AY2062-001，313mg，0.63mmol)在甲醇(5ml)中的溶液内，将所得的混合物在50℃下搅拌2h。进一步加入1M NaOH(0.95ml)，将混合物在60℃下搅拌16h，接着在80℃下搅拌20h。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩。加入水(7ml)，随后加入1N HCl直至pH为2。滤出所得沉淀物，用水(2 x 3ml)洗涤并干燥，得到87mg(58％)2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-甲酸(EV-AY2063-001)，为淡米色固体。LCMS(方法D)：保留时间0.86min，M/z＝230(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2064-001)-步骤4
氮气气氛中，将2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-甲酸(EV-AY2063-001，87mg，0.36mmol)溶解在DMF中(1ml)，用HATU(166mg，0.44mmol)和DIPEA(76μl，0.44mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，随后加入N-[(1R,4R,7R)-2-[3-氨基-5-甲氧基-4-(甲氨基)苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8858-001，按照流程5中描述的方法合成，142mg，0.36mmol)，室温下搅拌反应物2.5h，接着在50℃下搅拌2h。室温下静置反应物18h，接着在40℃下搅拌22h。真空浓缩反应混合物，与甲苯(5ml)共沸。粗物质经快速柱色谱(50-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-5-甲基-1-苯基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2064-001)，为黄色玻璃状固体。LCMS(方法D)：保留时间1.19min，M/z＝584(M+1)。
I-97和I-98
分别通过N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁基酯(EV-AY2054-002)和N-苄基-N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁基酯(EV-AY2054-003)的Boc脱保护，得到(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-97，EV-AY2056-002(EOAI3476816)和(1R,4R,7R)-N-苄基-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-98，EV-AY2057-002(EOAI3476817)。这些按照流程4中描述的方法合成。
流程4
N-[(1E)-呋喃-3-基亚甲基]-4-甲基苯-1-磺酰胺(EV-AY2033-006)-步骤1
将4-甲基苯磺酰胺(CAS 70-55-3，1.00g，5.84mmol)和呋喃-3-甲醛(CAS 498-60-2，0.49ml，5.84mmol)悬浮在原硅酸四乙酯(1.43ml，6.42mmol)中。密封容器，并加热至160℃下4h。冷却反应物至室温，用乙醚(4ml)稀释，搅拌并过滤，得到0.81g(52％)N-[(1E)-呋喃-3-基亚甲基]-4-甲基苯-1-磺酰胺(EV-AY2033-006)，为棕色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.12min，M/z＝250(M+1)。
2-乙基-1-(4-甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-3-甲醛(EV-AY2041-001)-步骤2
在0℃、氮气气氛中，在5分钟内，将3M溴(乙基)镁(1.90ml)滴加至搅拌着的N-[(1E)-呋喃-3-基亚甲基]-4-甲基苯-1-磺酰胺(EV-AY2033-006，604mg，2.28mmol)在无水THF(10ml)中的溶液内。室温下持续搅拌混合物3h，随后冷却至0℃，用1M HCl/水(5.7ml)处理。将反应物用THF(15ml)稀释，一次性加入1-溴代吡咯烷-2,5-二酮(405mg，2.28mmol)。反应混合物在室温下搅拌16h，用饱和氯化铵(12ml)和水(5ml)稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。剩余物经柱色谱(10-20％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到348mg(47％)2-乙基-1-(4-甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-3-甲醛(EV-AY2041-001)，为无色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.32min，M/z＝278(M+1)。
2-乙基-1-(4-甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-3-甲醛(EV-AY2044-002)-步骤3
将N-[(1R,4R,7R)-2-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY4011-002，按照流程5步骤1-3合成，0.78g，1.57mmol)和2-乙基-1-(4-甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-3-甲醛(EV-AY2041-001，0.43g，1.56mmol)溶解在乙醇(15ml)和水(7.5ml)中。一次性加入连二亚硫酸二钠(2.45g，14.1mmol)，反应混合物在90℃下搅拌4h。将混合物冷却至室温，用水(15ml)稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。剩余物经柱色谱(0-5％甲醇/DCM)纯化，得到0.71g N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[2-乙基-1-(4-甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2044-002)，为白色泡沫体。LCMS(方法D)：保留时间1.32min，M/z＝648.3(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2049-003)-步骤4
氮气气氛中，将N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[2-乙基-1-(4-甲基苯磺酰基)-1H-吡咯-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2044-002，573mg，0.8mmol)溶解在无水THF中(15ml)，用1M氟化N,N,N-三丁基丁烷-1-铵/THF(2.39ml)处理。将混合物在室温下搅拌16h，随后在40℃下搅拌5h。进一步加入1M氟化N,N,N-三丁基丁烷-1-铵/THF(1.1ml)，在50℃下继续搅拌16h。混合物用饱和氯化铵(20ml)稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用饱和氯化钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。剩余物依次经柱色谱(0-10％甲醇/DCM)和SCX-2柱纯化，得到313mg(77％)N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2049-003)，为粉米色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.03min，M/z＝494(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2054-002)和N-苄基-N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2054-003)-步骤5
氮气气氛中，将N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2049-003，100mg，0.19mmol)溶解在无水DMF(2ml)中并冷却至0℃。向反应混合物中一次性加入氢化钠(60％，11mg，0.27mmol)处理，并在0℃下搅拌15分钟。反应混合物用(溴甲基)苯(CAS 100-39-0，23μl，0.19mmol)处理，进一步在室温下搅拌3h。混合物用饱和氯化铵(12ml)和水(3ml)稀释，加入庚烷(8ml)，将混合物搅拌并过滤，固体经柱色谱(0-5％甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到74mg(57％)N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2054-002)，为浅黄色玻璃状物，LCMS(方法D)：保留时间1.24min，M/z＝584(M+1)。
还分离出21mg(15.1％)N-苄基-N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(1-苄基-2-乙基-1H-吡咯-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY2054-003)，为浅黄色玻璃状物。LCMS(方法D)：保留时间1.37min，M/z＝674(M+1)。
流程5
3-甲氧基-4-(甲氨基)-5硝基苯甲酸甲酯(EV-AX9482-002)-步骤1
室温下，将碳酸钾(11.3g，81.4mmol)和2M MeNH2/THF(61ml)加入搅拌着的4-氯-3-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(CAS 63603-09-8，10.0g，40.71mmol)在THF(180ml)中的溶液内。所得混合物在60℃下搅拌24h并真空浓缩。剩余物重新溶解在乙酸乙酯(500ml)中，用水(2×250ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤。有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到9.38g(96％)3-甲氧基-4-(甲氨基)-5硝基苯甲酸甲酯(EV-AX9482-001)，为橙色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.30min，M/z＝241(M+1)。
3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酸(EV-AX9487-001)-步骤2
2M LiOH水溶液(58.2ml)加入至3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯(EV-AX9482-002，9.32g，38.8mmol)在THF：甲醇(4：1)(75ml)中的溶液内，所得混合物在50℃下搅拌5h。将反应混合物真空浓缩，再次溶解在水(50ml)中，用2M HCL水溶液酸化至pH 2。真空过滤沉淀物，得到9.75g(定量)3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酸(EV-AX9487-001)，为亮橙色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.01min，M/z＝227(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9493-002)-步骤3
将DIPEA(6.58ml，39.79mmol)和HATU(11.4g，29.8mmol)加入3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酸(EV-AX9487-001，90％，5.00g，19.9mmol)在DMF(60ml)中的溶液内，将所得混合物在室温下搅拌10分钟。向反应混合物中加入N-[(1R,4R,7R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX2051-001，4.43g，20.89mmol)(如Adv.Synth.Catal.2005，347，1242-1246中合成)，在室温下继续搅拌2h。真空浓缩反应混合物，将所得剩余物溶解于乙酸乙酯(250ml)中，用水(2×100ml)和饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤。有机萃取物经硫酸钠干燥，真空浓缩，经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到6.39g(76％)N-[(1R,4R,7R)-2-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9493-002)，为红色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.19min，M/z＝421(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[3-氨基-5-甲氧基-4-(甲氨基)苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8858-001)-步骤4
将Na2S2O4(85％，14.6g，71.4mmol)加入至N-[(1R,4R,7R)-2-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9493-002，3.00g，7.14mmol)在乙醇(20ml)和水(10ml)中的溶液内，将所得混合物在90℃下搅拌3h。反应混合物用水(50ml)稀释，所得溶液用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到2.71g(97％)N-[(1R,4R,7R)-2-[3-氨基-5-甲氧基-4-(甲氨基)苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8858-001)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间0.82min，M/z＝391(M+1)。
流程6
2-乙基吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AY8832-002)-步骤1
将Pd(dppf)Cl2(299mg，0.41mmol)和1M二乙基锌/己烷(4.9ml)加入至2-氯吡啶-3-甲酸甲酯(CAS 2942-59-8，532μl，4.08mmol)在无水二氧六环(7ml)中的溶液内，将所得混合物在氮气中、60℃下搅拌2h。反应混合物用水(20ml)稀释并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，真空浓缩，并经柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到647mg(96％)2-乙基吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AY8832-002)，为无色挥发性油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.79min，M/z＝166(M+1)。
2-乙基吡啶-3-甲酸(EV-AY8835-001)-步骤2
将1M NaOH水溶液(5.51ml)加入至2-乙基吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AY8832-002，607mg，3.67mmol)在甲醇(5ml)中的溶液内，将所得混合物在50℃下搅拌2h。真空浓缩反应混合物，将剩余物溶解在水(10ml)中，用2M HCl水溶液酸化至pH为3。溶液用乙酸乙酯(2×50ml)萃取，合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到354mg(64％)2-乙基吡啶-3-甲酸(EV-AY8835-001)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间0.22min，M/z＝152(M+1)。
N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8830-002)-步骤3
HATU(224mg，0.59mmol)和DIPEA(103μl，0.59mmol)加入至2-乙基吡啶-3-甲酸(EV-AY8835-001，77mg，0.51mmol)在DMF(3ml)中的溶液内，将所得混合物在室温下搅拌10分钟。加入N-[(1R,4R,7R)-2-[3-氨基-5-甲氧基-4-(甲氨基)苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8858-001，按照流程5合成，200mg，0.51mmol)，将反应混合物在室温下搅拌24h。真空浓缩反应混合物，溶解在乙酸(3ml)中并在80℃下搅拌4h。真空浓缩反应混合物，所得剩余物经制备HPLC(碱性方法)纯化，得到153mg(59％)N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8830-002)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.10min，M/z＝506(M+1)。
(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺盐酸盐，I-96(EV-AY8837-001)-步骤4
将1.25M HCl/乙醇(2ml)加入至N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AY8830-002，95mg，0.19mmol)在乙醇(4ml)中的溶液内，将所得混合物在50℃下搅拌16h。真空浓缩反应混合物，得到白色粉末。将化合物置于甲醇(10ml)中，用Smopex-105(CAS 527751-99-1)金属清除剂(95mg)处理并在室温下搅拌2h。真空过滤除去纤维，真空浓缩滤液，得到83mg(定量)(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺盐酸盐，I-96(EV-AY8837-001)，为白色固体。LCMS(方法H)：保留时间2.13min，M/z＝406(M+1)。
流程6的具体案例
I-103
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.1中的描述合成的2-乙基-5-甲氧基吡啶-3-甲酸(EV-AY8846-001)合成(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-5-甲氧基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-103，EV-AY8854-001(EOAI3477379)。
流程6.1
2-乙基-5-甲氧基吡啶-3-甲酸(EV-AY8846-001)-步骤1
将NaOMe(199mg，3.69mmol)加入至EV-AY8841-001(按照流程6步骤1合成，以CAS1214351-19-5为原料，208mg，1.23mmol)在DMF(3ml)中的溶液内，将所得混合物在140℃下搅拌2h。反应混合物用水(20ml)稀释，使用5M HCl水溶液酸化为pH3。所得溶液用乙酸乙酯(2×100ml)萃取，合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到190mg(85％)2-乙基-5-甲氧基吡啶-3-甲酸(EV-AY8846-001)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间0.37min，M/z＝182(M+1)。
I-99和I-100
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.2中的描述合成的2-氯-6-甲氧基吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AY8827-002)合成(1R,4R,7R)-2-[2-(2-乙基-6-甲氧基吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-99，EV-AY8850-002(EOAI3477015)和5-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-6-乙基吡啶-2-醇，I-100，EV-AY8850-003(EOAI3477016)。
流程6.2
2-氯-6-甲氧基吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AY8827-002)-步骤1
将Ag2CO3(11.0g，39.8mmol)和甲基碘(3.77ml，60.5mmol)加入至2-氯-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(CAS 1805670-73-8，3.00g，17.3mmol)在氯仿(30ml)中的溶液内，在50℃下搅拌所得混合物3h。真空过滤反应混合物(用氯仿洗涤)并真空浓缩滤液。剩余物经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到2.42g(69％)2-氯-6-甲氧基吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AY8827-002)，为白色固体。LCMS(方法D)：保留时间1.13min，M/z＝202(M+1)。
I-105
(1R,4R,7R)-2-{2-[2-(环丙基甲基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-105，EV-AY8871-001(EOAI3478068)通过根据流程6.3中的描述合成的2-(环丙基甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9626-002)按照流程6中描述的方法合成。
流程6.3
2-(丙-2-烯-1-基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9622-002)-步骤1
将CsF(26.6g，174.8mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-2-烯-1-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CAS 72824-04-5，22.01ml，116.6mmol)和Pd(dppf)Cl2(4.26g，5.83mmol)加入至2-氯吡啶-3-甲酸甲酯(CAS 2942-59-8，7.61ml，58.3mmol)在乙腈(750ml)中的溶液内，将所得混合物在氮气、70℃下搅拌1h。形成稠状沉淀物。反应混合物用水(300ml)稀释并用乙酸乙酯(3×500ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，真空浓缩，经快速柱色谱(0-80％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到10.31g(定量)2-(丙-2-烯-1-基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9622-002)，为黄色挥发性油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.88min，M/z＝178(M+1)。
2-(环丙基甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9626-002)-步骤2
0℃下，将在DCM(50ml)中的三氟乙酸(8.64ml，112.9mmol)滴加至1M二乙基锌/庚烷(112.9ml)在DCM(150ml)中的溶液内，将所得混合物在0℃下搅拌10分钟。向反应混合物中加入二碘代甲烷(9.08ml，112.9mmol)，在0℃下持续搅拌10分钟。滴加2-(丙-2-烯-1-基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9622-002，10g，56.4mmol)/DCM(100ml)，使所得混合物在3h内达到室温。加入水(100ml)猝灭反应，分离有机层。含水混合物用DCM(3×150ml)再萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，真空浓缩，经快速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到8.26g(76％)2-(环丙基甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9626-002)，为黄色挥发性油状物。LCMS(方法D)：保留时间0.88min，M/z＝192(M+1)。
I-117
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.4中的描述合成的2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9632-002)合成(1R,4R,7R)-2-{2-[2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-117，EV-AZ9647-002(EOAI3694082)。
流程6.4
2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9632-002)-步骤1
将AgF2(6.87g，47.06mmol)加入至2-(环丙基甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9626-002，按照流程6.3合成，3.00g，15.7mmol)在乙腈(25ml)中的溶液内，将所得混合物在室温下搅拌16h。反应混合物真空过滤，真空浓缩滤液得到橙色油状物，再经快速柱色谱(0-80％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到1.99g(61％)2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9632-002)，为无色挥发性油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.19min，M/z＝210(M+1)。
I-116
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.5中的描述合成的2-(环丙基甲基)-6-甲氧基吡啶-3-甲酸(EV-AZ9615-002)合成(1R,4R,7R)-2-{2-[2-(环丙基甲基)-6-甲氧基吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-116，EV-AZ9628-002(EOAI3689043)。
流程6.5
2-(环丙基甲基)-6-甲氧基吡啶-3-甲酸(EV-AZ9615-002)-步骤1
将甲醇(35μl，0.86mmol)和tBuOK(97mg，0.86mmol)加入至2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9632-00，按照流程6.4合成，150mg，0.72mmol)在THF(2ml)中的溶液内，将所得混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用水(20ml)稀释，使用2M HCL水溶液酸化至pH为4。所得溶液用乙酸乙酯(2×50ml)萃取，合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到无色油状物。剩余物溶解在甲醇(5ml)中，加入1M NaOH水溶液(2.15ml)。混合物在60℃下搅拌3h，用水(20ml)稀释，用2M HCL水溶液酸化至pH为3。所得溶液用乙酸乙酯(2×50ml)萃取，合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到129mg(82％)2-(环丙基甲基)-6-甲氧基吡啶-3-甲酸(EV-AZ9615-002)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.10min，M/z＝208(M+1)。
I-120
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.6中的描述合成的2-[2-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AZ9651-002)合成(1R,4R,7R)-2-{2-[2-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺，I-120，EV-AZ9655-001(EOAI3694317)。
流程6.6
2-[2-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AZ9651-002)-步骤1
将DIPEA(130μl，0.73mmol)和吗啉(63μl，0.73mmol)加入至搅拌着的2-[2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AZ9645-002，按照流程6.4和流程1合成，90％，200mg，0.49mmol)在DMSO(2ml)中的溶液内，在100℃下搅拌所得混合物2h。向反应混合物中加入乙腈(1ml)，所得溶液经制备HPLC(碱性方法)纯化，得到161mg(76％)2-[2-(环丙基甲基)-6-(吗啉-4-基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-甲酸甲酯(EV-AZ9651-002)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.15min，M/z＝437(M+1)。
I-121
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.7中的描述合成的N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[6-氰基-2-(环丙基甲基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AZ9657-002)合成5-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}-6-(环丙基甲基)吡啶-2-甲腈，I-121，EV-AZ9658-002(EOAI3702812)。
流程6.7
N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[6-氰基-2-(环丙基甲基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AZ9657-002)-步骤1
将KCN(38mg，0.58mmol)加入至N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[2-(环丙基甲基)-6-氟吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AZ9643-002，按照流程6.5和流程1合成，80mg，0.15mmol)在DMF(2ml)中的溶液内，所得混合物在120℃下搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(2×25ml)洗涤。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到黄色油状物。剩余物经制备HPLC(碱性方法)纯化，得到58mg(72％)N-[(1R,4R,7R)-2-{2-[6-氰基-2-(环丙基甲基)吡啶-3-基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基}-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AZ9657-002)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.22min，M/z＝557(M+1)。
I-114
按照流程6中描述的方法通过按照流程6.8中的描述合成的2-({2-[(叔丁氧基)羰基]环丙基}甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9605-002)合成2-[(3-{5-[(1R,4R,7R)-7-氨基-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-2-基}吡啶-2-基)甲基]环丙烷-1-甲酸，I-114，EV-AZ9624-001(EOAI3669062)。
流程6.8
2-({2-[(叔丁氧基)羰基]环丙基}甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9605-002)-步骤1
0℃下，将Cu(OTf)2(0.18g，0.51mmol)和重氮乙酸叔丁酯(CAS35059-50-8，1.95ml，12.7mmol)加入至2-(丙-2-烯-1-基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9622-002，按照流程6.3合成，步骤1，90％，1.00g，5.08mmol)在HFIP(10ml)中的溶液内，将所得混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用饱和氯化铵水溶液(50ml)猝灭，并用DCM(2×100ml)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，真空浓缩，经快速柱色谱(0-80％乙酸乙酯/庚烷)纯化，得到1.23g(81％)2-({2-[(叔丁氧基)羰基]环丙基}甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(EV-AZ9605-002)，为浅黄色油状物。LCMS(方法D)：保留时间1.20min，M/z＝292(M+1)。
流程7
N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-溴吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9488-002)-步骤1
将2-溴吡啶-3-甲醛(CAS 128071-75-0，310mg，1.67mmol)和Na2S2O4(85％，932mg，4.55mmol)加入至N-[(1R,4R,7R)-2-[3-甲氧基-4-(甲氨基)-5-硝基苯甲酰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9493-002，如流程5中合成，85％，750mg，1.52mmol)在乙醇(5ml)和水(3ml)中的溶液内，所得混合物在90℃下搅拌4h。反应混合物真空过滤，真空浓缩滤液。所得剩余物经制备HPLC(碱性方法)纯化，得到360mg(43％)N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-溴吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9488-002)，为灰白色粉末。LCMS(方法D)：保留时间1.13min，M/z＝556，558(M+1)。
(1R,4R,7R)-2-[2-(2-溴吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺盐酸盐，I-90，(EV-AY8802-001)-步骤2
将1.25M HCl/乙醇(2ml)加入至N-[(1R,4R,7R)-2-[2-(2-溴吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基]氨基甲酸叔丁酯(EV-AX9488-002，105mg，0.19mmol)在乙醇(4ml)中的溶液内，所得混合物在5℃下搅拌5h。真空浓缩反应混合物，得到白色粉末。将所得化合物置于甲醇(10ml)中，用Smopex-105(CAS 527751-99-1)金属清除剂(105mg)处理并在室温下搅拌2h。真空过滤除去纤维，真空浓缩滤液，得到93mg(定量)(1R,4R,7R)-2-[2-(2-溴吡啶-3-基)-7-甲氧基-1-甲基-1H-1,3-苯并二氮杂环戊烯-5-羰基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚-7-胺盐酸盐，I-90，(EV-AY8802-001)，为白色固体。LCMS(方法H)：保留时间2.14min，M/z＝457(M+1)。
以下化合物按照以上描述的方法合成：
生物测定
使用下文所描述的测定方案来测定作为PAD4抑制剂的本发明化合物。
将化合物溶解于100％DMSO中以实现100mM最终化合物浓度。将化合物储备溶液储存在室温下。在DMSO中制备一系列稀释液并以20μL混合体积混合8次。最终测定条件如下：
反应体积：20μl
测定缓冲液(如前所提及)：100mM Tris-HCl(pH 7.6),2mM DTT,1mM CaCl2
最终浓度：
-100nM hPAD4酶
-50μM(8倍sub-Km)底物肽
-0.5％DMSO
总温育时间：65min，在37℃下
终止溶液：40μl 5％TCA/ACN
将0.25μL化合物溶液添加至10μL 200nM PAD4/测定缓冲液(100mM Tris-HCl pH 7.6,2mM DTT)中。在5min之后，添加10μL 100μM底物/缓冲液(100mM Tris-HCl pH 7.6,2mMDTT,2mM CaCl2)并将反应物在37℃下温育60min。通过添加40μl 5％TCA/ACN(1.7％TCA最终浓度)终止溶液来淬灭酶促反应。将含精氨酸底物和含瓜氨酸产物(+1Da质量位移)在Agilent RapidFire(RF)300系统上进行固相提取并在耦合的三相四极Agilent 6460 QQQ质谱(MS)装置上在应用多反应监测(MRM)下检测用于定量。
下表2显示本发明的所选化合物在上述PAD4测定中的活性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。具有指定为“A”的活性的化合物提供IC50<1μM；具有指定为“B”的活性的化合物提供1.0-5.0μM的IC50；具有指定为“C”的活性的化合物提供5.0-10.0μM的IC50；且具有指定为“D”的活性的化合物提供>10.0μM的IC50。术语pIC50＝-log(IC50)。具有指定为“E”的活性的化合物提供pIC50<4；具有指定为“F”的活性的化合物提供4.0-5.0的pIC50；具有指定为“G”的活性的化合物提供5.0-6.0的pIC50；且具有指定为“H”的活性的化合物提供>6的pIC50。“NA”代表“未测定”。
表2.PAD4活性

Claims (20)

1.式I’的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A为
其中环A任选地被1-4个选自氟、-CN、-OR或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代；
环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环；
R1为氢、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-6脂族基团；
各-Cy独立地为含有0-2个氮原子的6员芳基环或具有0-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7员饱和单环，其中-Cy任选地被1-4个选自氟、-CN或-OR的基团取代；
R2为氢、-CN、-OR、-Cy或任选地被-Cy取代且任选地进一步被1-5个选自氟、-CN或-OR的基团取代的C1-10脂族基团；或
相同碳上的两个R2基团任选地结合在一起形成=O；
n为1、2或3；
X1为N或C(R3)；
R3为-R、卤素或-OR；
各R独立地为氢或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团；
L选自共价键或C1-6员直链或支链、饱和或不饱和的烃链，其中L的一个亚甲基单元任选地被-S(O)2-或-C(O)N(Ry)-置换，其中Ry为R或-CH2苯基；且
R4为氢、R、苯基或具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6员杂芳基环，其中R4任选地被1-4个独立地选自卤素、-CN、-OR、-C(O)OH或任选地被1-3个氟原子取代的C1-6脂族基团的基团取代。
2.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式I’-a：
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物具有式I’-b：
或其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中环A为
。
5.根据权利要求4的化合物，其中环A为
。
6.根据权利要求1至5中任一项的化合物，其中环B为具有1-2个氮的6员杂芳基环。
7.根据权利要求1至5中任一项的化合物，其中环B为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5员杂芳基环。
8.根据权利要求6的化合物，其中环B为吡啶基。
9.根据权利要求7的化合物，其中环B为咪唑基、吡唑基、吡咯基或噻唑基。
10.根据权利要求9的化合物，其中环B为吡咯基。
11.根据权利要求1至10中任一项的化合物，其中R4为苯基或吡啶基。
12.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物选自表1所示的那些化合物。
13.一种药学上可接受的组合物，其包含根据权利要求1至12中任一项的化合物和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。
14.根据权利要求13的组合物，其与另外的治疗剂组合。
15.一种在受试者中或生物样品中抑制PAD4的方法，所述方法包括使PAD4与根据权利要求1至12中任一项的化合物接触的步骤。
16.一种治疗有需要受试者的PAD4介导的疾病、病症或病状的方法，所述方法包括给予所述受试者根据权利要求13的组合物的步骤。
17.根据权利要求16的方法，其中所述受试者是人类受试者。
18.根据权利要求16的方法，其中所述受试者是兽类受试者。
19.根据权利要求16的方法，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自：酸诱发的肺损伤、痤疮(PAPA)、急性淋巴细胞白血病、急性呼吸窘迫综合征、艾迪生病(Addison'sdisease)、肾上腺增生、肾上腺皮质功能不全、衰老、AIDS、酒精性肝炎、酒精性肝炎、酒精性肝病、过敏原诱发的哮喘、过敏性支气管肺炎、曲霉病、过敏性结膜炎、脱发、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、淀粉样变性、肌萎缩侧索硬化、体重减轻、心绞痛、血管性水肿、无汗外胚叶发育不良-ID、强直性脊柱炎、前节(anterior segment)、炎症、抗磷脂综合征、口疮性口炎、阑尾炎、关节炎、哮喘、动脉粥样硬化、异位性皮炎、自身免疫疾病、自身免疫性肝炎、蜂螫伤诱发的炎症、贝切特氏病(Behcet's disease)、贝切特氏综合征(Behcet'ssyndrome)、贝尔氏麻痹症(Bells Palsey)、铍中毒、布劳综合征(Blau syndrome)、骨疼痛、细支气管炎、烧伤、滑囊炎、癌症、心肌肥大、腕管综合征、异化代谢病症、白内障、脑动脉瘤、化学刺激物诱发的炎症、脉络膜视网膜炎、慢性心力衰竭、早产儿慢性肺病、慢性淋巴细胞白血病、慢性阻塞性肺病、结肠炎、复杂性区域疼痛综合征、结缔组织疾病、角膜溃疡、克罗恩氏病(crohn's disease)、Cryopyrin蛋白(cryopyrin)相关周期性综合征、隐球菌病、囊性纤维化、白介素-1-受体拮抗剂(DIRA)缺乏、皮炎、皮炎内毒素血症、皮肌炎、弥漫型内因性脑桥胶质瘤、子宫内膜异位症、内毒素血症、上髁炎、幼红细胞减少症、家族性淀粉样多发性神经病、家族性冷荨麻疹、家族性地中海热、胎儿生长迟滞、青光眼、肾小球疾病、肾小球肾炎、痛风、痛风性关节炎、移植物抗宿主病、肠病、头损伤、头痛、听力损失、心脏病、溶血性贫血、亨舍二氏紫癜(Henoch-Scholein purpura)、肝炎、遗传性周期性发热综合征、带状疱疹和单纯疱疹、HIV-1、霍奇金病(Hodgkin's disease)、亨廷顿氏病(Huntington'sdisease)、透明膜病、高氨血症、高钙血症、高胆固醇血症、高免疫球蛋白血症D伴反复发热(HIDS)、发育不全和其他贫血、发育不全性贫血、特发性血小板减少紫癜、色素失禁症、感染性单核细胞增多症、炎症性肠病、炎症性肺病、炎症性神经病、炎症性疼痛、昆虫咬伤诱发的炎症、虹膜炎、刺激物诱发的炎症、缺血/再灌注、青少年型类风湿性关节炎、角膜炎、肾疾病、由寄生虫感染引起的肾损伤、由寄生虫感染引起的肾损伤、肾移植排斥预防、钩端螺旋体病、白血病、吕弗勒氏综合征(Loeffler's syndrome)、肺损伤、肺损伤、狼疮、狼疮、狼疮性肾炎、淋巴瘤、脑膜炎、间皮瘤、混合结缔组织疾病、穆-韦二氏综合征(Muckle-Wellssyndrome) (荨麻疹耳聋淀粉样变性)、多发性硬化、肌肉萎缩、肌营养不良症、重症肌无力、心肌炎、蕈样霉菌病、蕈样霉菌病、骨髓发育不良综合征、肌炎、鼻窦炎、坏死性小肠结肠炎、新生儿期发病的多系统炎性疾病(NOMID)、肾病综合征、神经炎、神经病理学疾病、非过敏原诱发的哮喘、肥胖症、眼睛过敏、视神经炎、器官移植、骨关节炎、中耳炎、佩吉特氏病(paget's disease)、疼痛、胰腺炎、帕金森氏病(Parkinson's disease)、天疱疮、心包炎、周期性发热、牙周炎、腹膜型子宫内膜异位症、百日咳、咽炎和腺炎(PFAPA综合征)、植物刺激物诱发的炎症、肺炎(pneumonia)、肺炎(pneumonitis)、肺囊虫(pneumosysts)感染、毒葛(poison ivy)/漆酚油诱发的炎症、结节性多动脉炎、多软骨炎、多囊性肾病、多发性肌炎、牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣、心理社会应激疾病、肺病、肺高血压、肺纤维化、坏疽性脓皮病、化脓性无菌关节炎、肾疾病、视网膜疾病、风湿性心炎、风湿性疾病、类风湿性关节炎、结节病、皮脂溢、败血症、严重疼痛、镰状细胞、镰状细胞贫血、二氧化硅诱发的疾病、薛格连氏综合征(Sjogren's syndrome)、皮肤病、睡眠呼吸暂停、实体瘤、骨髓损伤、史蒂芬-强森综合征(Stevens-Johnson syndrome)、中风、蛛网膜下出血、晒伤、颞动脉炎、腱鞘炎、血小板减少症、甲状腺炎、组织移植、TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)、弓形虫症、移植、创伤性脑损伤、肺结核、1型糖尿病、2型糖尿病、溃疡性结肠炎、荨麻疹、眼色素层炎和韦格纳氏肉芽肿(Wegener's granulomatosis)。
20.根据权利要求16的方法，其中所述PAD4介导的疾病、病症或病状选自类风湿性关节炎、血管炎、全身性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、癌症、囊性纤维化、哮喘、皮肤红斑狼疮和牛皮癣。
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