CN109060666A - 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法 - Google Patents

一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109060666A
CN109060666A CN201810982718.3A CN201810982718A CN109060666A CN 109060666 A CN109060666 A CN 109060666A CN 201810982718 A CN201810982718 A CN 201810982718A CN 109060666 A CN109060666 A CN 109060666A
Authority
CN
China
Prior art keywords
slide
cecropin
liquid crystal
rinsing
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810982718.3A
Other languages
English (en)
Inventor
苏秀霞
徐佳
张婧
张海宁
张姣
霍文静
胡金龙
晏春苗
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shaanxi University of Science and Technology
Original Assignee
Shaanxi University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shaanxi University of Science and Technology filed Critical Shaanxi University of Science and Technology
Priority to CN201810982718.3A priority Critical patent/CN109060666A/zh
Publication of CN109060666A publication Critical patent/CN109060666A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，包括以下步骤：1)将上玻片及下玻片浸泡，然后冲洗后吹干；2)将上玻片浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片浸泡，然后冲洗后吹干；3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并温育，再冲洗后吹干；4)将待检测的纳米金复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再温育，然后冲洗后吹干；5)将上玻片放置于下玻片上，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测，该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。

Description

一种基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法
技术领域
本发明属于抗菌肽检测技术领域，涉及一种基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法。
背景技术
纳米金是一类粒径在1～100nm范围内的颗粒金，作为一种新型的材料，由于其合成过程简单、性能稳定、表面积大、与生物分子具有很好的亲和性等优点近年来被广泛应用与生物检测。Faulk WP等将纳米金溶液与兔抗沙门氏菌血清复合，用以检测沙门氏菌的表面抗原，开创了纳米金标记技术。Spielberg等研究以纳米金为标记物用于检测艾滋病病毒抗体的渗滤试验，确立了纳米金免疫渗滤试验的基本技术。Garcia G等利用纳米金作为电化学标记物用以检测免疫反应。
天蚕素是最早被发现和研究的一种阳离子抗菌肽。天蚕素B对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌均具有很强的杀伤力，而对真菌和真核细胞没有毒，而在动植物抗病基因工程、植物育种、生物饲料添加剂等领域有着巨大的潜在应用价值。
然而，现有的检测手段，现有多肽检测方法有电位滴定法、高效液相色谱法、液晶生物传感器法等，电位滴定法滴定终点难以判定，且受客观环境影响大；高效液相色谱法的分析成本高，耗时长。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供了一种基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。
为达到上述目的，本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，然后冲洗后吹干；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于50℃-70℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在37℃-50℃的温度下温育2.5-4h，再冲洗后吹干；
4)将待检测的纳米金复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再放置于37℃-50℃的温度下温育1.5-3h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基。
步骤2)中DMOAP水溶液的体积分数为0.2-0.3％，浸泡时间为30min-50min。
步骤3)中，将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置于37℃-50℃的温度下温育2.5-4h。
步骤4)中，将待检测的纳米金复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后放置于37℃-50℃的温度下温育1.5-3h。
步骤5)中将液晶5CB加热至40℃-50℃，使液晶5CB呈各向同性的液态。
本发明具有以下有益效果：
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法在具体操作时，利用三乙氧基丁醛硅烷/N,N-二甲基-N-十八烷基(3-[三甲氧基硅烷]丙基)与TEA及DMOAP混合自组装对下玻片表面进行修饰，然后利用TEA中的醛基与天蚕素B抗体中的氨基反应，将天蚕素B抗体固定在下玻片上，最后利用天蚕素B与天蚕素B抗体特异性结合扰乱液晶分子的垂直取向，从而导致光学信号的颜色及亮度发生变化，以实现对天蚕素B的检测，检测速度快，检测灵敏度高，并且检测成本低，受客观环境影响较小。
附图说明
图1为实施例一得到的照片图；
图2为实施例二得到的照片图；
图3为实施例三得到的照片图；
图4为实施例四得到的照片图；
图5为实施例五得到的照片图；
图6为实施例六得到的照片图；
图7为实施例七得到的照片图；
图8为实施例八得到的照片图；
图9为实施例九得到的照片图；
图10为实施例十得到的照片图；
图11为实施例十一得到的照片图；
图12为实施例十二得到的照片图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
实施例一
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min-50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于50℃-70℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，其中，TEA的体积分数为3％，DMOAP的体积分数为1％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在37℃的温度下温育2.5h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为50ng/ml；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例二
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min-50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于70℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.3％，其中，TEA的体积分数为5％，DMOAP的体积分数为1.7％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在50℃的温度下温育4h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至50℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例三
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min-50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于60℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.25％，其中，TEA的体积分数为4％，DMOAP的体积分数为1.4％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在40℃的温度下温育3h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为100ng/ml；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至45℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例四
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于95℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡45min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于65℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.28％，其中，TEA的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在45℃的温度下温育3.5h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为120ng/ml；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至48℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
将实施例1～4制备的液晶池置于偏光显微镜下观察，得到图1至图4所述的照片，当CB抗体浓度较高时(120ng/ml)，对液晶分子取向扰乱程度较大，光学成像中有较大的彩色亮斑出现(图4)，背景值较高，干扰后续检测。随着CB抗体浓度的增大，对液晶分子取向扰乱也将增大，液晶池光学成像逐渐变亮，当抗体浓度为80ng/ml时，光学成像中只有少数星点亮斑，为了不对下一步产生干扰，因此选择CB抗体浓度为80ng/ml，进行后续检测。
实施例五
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min-50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于50℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，其中，TEA的体积分数为3％，DMOAP的体积分数为1％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在37℃的温度下温育2.5h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将0ng/ml的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于37℃的温度下温育1.5h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例六
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min-50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于70℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.3％，其中，TEA的体积分数为5％，DMOAP的体积分数为1.7％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在50℃的温度下温育4h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将80ng/ml的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于50℃的温度下温育3h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃-50℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例七
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于60℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.25％，其中，TEA的体积分数为4％，DMOAP的体积分数为1.4％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在40℃的温度下温育3h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将100ng/ml的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于40℃的温度下温育2h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至45℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例八
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于85℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡48min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于65℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.25％，其中，TEA的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在45℃的温度下温育3.5h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将200ng/ml的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于45℃的温度下温育2h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至45℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
将实施例五至实施例八制备的液晶池分别置于偏光显微镜下进行观察，得到图5至图8结果。
实施例九
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于95℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡35min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于55℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.21％，其中，TEA的体积分数为3.2％，DMOAP的体积分数为1.1％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在40℃的温度下温育3h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将0ng/ml的CB溶液与纳米金复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于40℃的温度下温育2.2h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至45℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例十
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于85℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡35min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于65℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.24％，其中，TEA的体积分数为3.2％，DMOAP的体积分数为1.1％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在45℃的温度下温育3.5h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将1ng/ml的CB溶液与纳米金复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于38℃的温度下温育2h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至4℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例十一
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于50℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，其中，TEA的体积分数为3％，DMOAP的体积分数为1％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在37℃的温度下温育2.5h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将30ng/ml的CB溶液与纳米金复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于37℃的温度下温育1.5，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
实施例十二
本发明所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于70℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.3％，其中，TEA的体积分数为5％，DMOAP的体积分数为1.7％，醋酸-醋酸钠溶液的pH值为5，醋酸-醋酸钠溶液的浓度为10mmol/L；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在50℃的温度下温育4h，再冲洗后吹干；天蚕素B抗体溶液选用CB抗体溶液，其中CB抗体溶液的浓度为80ng/ml；
4)将100ng/ml的CB溶液与纳米金复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于50℃的温度下温育3h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至50℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
将实施例九至实施例十二制备的液晶池分别置于偏光显微镜下进行观察，得到图9至图12结果，当CB的浓度高于1ng/ml，图像出现亮斑，与图2相比可以检出的CB浓度明显降低。因此，天蚕素B含量超过1ng/ml时，光学信号出现明显变化。
以上结果显示，利用纳米金信号放大检测CB检出限明显降低，在CB的含量超过1ng/ml时，光学信号出现明显变化。

Claims (7)

1.一种基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，然后冲洗后吹干；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于50℃-70℃的醋酸-醋酸钠溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，醋酸-醋酸钠溶液中TEA与DMOAP体积比为3:1；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在37℃-50℃的温度下温育2.5-4h，再冲洗后吹干；
4)将待检测的纳米金复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再放置于37℃-50℃的温度下温育1.5-3h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
2.根据权利要求1所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
3.根据权利要求1所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基。
4.根据权利要求1所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤2)中DMOAP水溶液的体积分数为0.2-0.3％，浸泡时间为30min-50min。
5.根据权利要求1所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤3)中，将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置于37℃-50℃的温度下温育2.5-4h。
6.根据权利要求1所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤4)中，将待检测的纳米金复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后放置于37℃-50℃的温度下温育1.5-3h。
7.根据权利要求1所述的基于纳米金信号放大检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤5)中将液晶5CB加热至40℃-50℃，使液晶5CB呈各向同性的液态。
CN201810982718.3A 2018-08-27 2018-08-27 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法 Pending CN109060666A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810982718.3A CN109060666A (zh) 2018-08-27 2018-08-27 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810982718.3A CN109060666A (zh) 2018-08-27 2018-08-27 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109060666A true CN109060666A (zh) 2018-12-21

Family

ID=64757212

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810982718.3A Pending CN109060666A (zh) 2018-08-27 2018-08-27 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109060666A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109765386A (zh) * 2019-01-30 2019-05-17 陕西科技大学 一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法
CN112595685A (zh) * 2020-12-29 2021-04-02 中农颖泰林州生物科园有限公司 一种含有天蚕素的产品和对产品中天蚕素含量检测的方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005300467A (ja) * 2004-04-15 2005-10-27 Daikin Ind Ltd 液晶バイオセンサ
WO2006121799A2 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Platypus Technologies, Llc Liquid crystal based analyte detection
JP2009103455A (ja) * 2007-10-19 2009-05-14 Canon Inc 標的物質検出素子、検出装置および検出方法
CN101769918A (zh) * 2008-12-31 2010-07-07 重庆医科大学 基于液晶取向变化的免疫检测方法
CN106501500A (zh) * 2016-09-14 2017-03-15 北京化工大学 一种可视化检测蛋白质生物标志物的液晶传感器及其检测方法
CN107918010A (zh) * 2017-11-27 2018-04-17 陕西科技大学 一种高灵敏液晶型非标记免疫传感器检测人类β防御素‑2的方法
CN107941712A (zh) * 2017-11-27 2018-04-20 陕西科技大学 一种基于液晶生物传感器检测天蚕素b的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005300467A (ja) * 2004-04-15 2005-10-27 Daikin Ind Ltd 液晶バイオセンサ
WO2006121799A2 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Platypus Technologies, Llc Liquid crystal based analyte detection
JP2009103455A (ja) * 2007-10-19 2009-05-14 Canon Inc 標的物質検出素子、検出装置および検出方法
CN101769918A (zh) * 2008-12-31 2010-07-07 重庆医科大学 基于液晶取向变化的免疫检测方法
CN106501500A (zh) * 2016-09-14 2017-03-15 北京化工大学 一种可视化检测蛋白质生物标志物的液晶传感器及其检测方法
CN107918010A (zh) * 2017-11-27 2018-04-17 陕西科技大学 一种高灵敏液晶型非标记免疫传感器检测人类β防御素‑2的方法
CN107941712A (zh) * 2017-11-27 2018-04-20 陕西科技大学 一种基于液晶生物传感器检测天蚕素b的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIAO ZHANG等: "Label-free liquid crystal biosensor for cecropin B detection", 《TALANTA 》 *
SHENGYUAN YANG等: "Gold nanoparticle based signal enhancement liquid crystal biosensors for DNA hybridization assays", 《CHEM. COMMUN.》 *
苏秀霞等: "液晶型非标记免疫传感器检测天蚕素 B", 《分析试验室》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109765386A (zh) * 2019-01-30 2019-05-17 陕西科技大学 一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法
CN112595685A (zh) * 2020-12-29 2021-04-02 中农颖泰林州生物科园有限公司 一种含有天蚕素的产品和对产品中天蚕素含量检测的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106990237B (zh) 一种基于核酸适配体的卡那霉素快速检测试纸及其制备方法和应用
CN107941712A (zh) 一种基于液晶生物传感器检测天蚕素b的方法
CN110982512B (zh) 多种近红外ii区荧光染料共掺荧光微球及其制备和应用
CN109060666A (zh) 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法
CN101629953A (zh) 一种现场检测免疫芯片及其制备方法与应用
EP1218741A1 (en) Biosensor detector array
CN113447652A (zh) 一种用于检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗原的试剂卡盒及其制备方法和应用
CN104165915A (zh) 一种用于检测银的生物传感器及其制备方法和应用
CN107894510A (zh) 定量检测转基因玉米中抗虫蛋白Vip3Aa20的酶联免疫试剂盒及其检测方法
CN114113582B (zh) 金属有机框架纳米酶生物探针和elisa试剂盒
Wang et al. A capillary electrophoresis method to explore the self‐assembly of a novel polypeptide ligand with quantum dots
CN103547922B (zh) 用于从样品检测细胞的方法
CN101629955B (zh) 鱼类淋巴囊肿病毒免疫检测芯片及其制备方法与应用
CN107219111A (zh) 一种远缘杂交甜菜的染色体制片方法
CN102735836A (zh) 一种可视化快速联检植物病原的方法和抗体芯片
CN108424843B (zh) 一种界面分子信标传感器及其检测方法
CN105297141A (zh) 瓜上10种病害的微阵列芯片检测方法及所用芯片探针
CN101629954B (zh) 对虾白斑症病毒免疫检测芯片及其制备方法与应用
CN110988344A (zh) 快速鉴别金黄色葡萄球菌的荧光染色试剂及其制备方法
CN108866149B (zh) 一种用于真菌检测的新型荧光染色试剂、其应用以及真菌检测试剂盒
CN114058682B (zh) 一种用于防伪的原位杂交缓冲液及其应用
CN107290533B (zh) 甘蔗杆状病毒Dot-ELISA检测方法及其试剂盒与应用
CN103983749B (zh) 一种水产品中小清蛋白的毛细管免疫层析快速检测方法
CN110244042B (zh) 羊腐败梭菌的间接elisa检测试剂盒
CN107478821B (zh) 用于检测孢子丝菌病的试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181221

RJ01 Rejection of invention patent application after publication