CN109765386A - 一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以Fe3O4@Au纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的方法，包括以下步骤：1)对上下玻片进行酸处理；2)将上玻片浸泡在DMOAP中，再冲洗后吹干；同时将下玻片浸泡TEA/DMOAP中，然后冲洗后吹干；3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并温育，再冲洗后吹干；4)将待检测的Fe3O4@Au复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再温育，然后冲洗后吹干；5)将上玻片放置于下玻片上，之间填充液晶5CB形成的液晶池，然后观察液晶池光学信号的颜色及亮度。该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。
Description
技术领域
本发明属于抗菌肽检测技术领域，涉及一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法。
背景技术
Fe3O4@Au复合纳米微粒是纳米级别的Fe3O4和Au形成的复合材料，以Fe3O4纳米微粒为核，Au纳米微粒包覆在Fe3O4纳米微粒周围形成Fe3O4-Au核壳结构，又被称为金磁复合微粒。其具有超顺磁性、良好的生物相容性及低毒性等优点，因此经常被应用于磁性靶向药物输送、生物分离、传感器、磁共振成像、抗体标记等领域。崔亚丽等在2001年首次合成了Fe3O4@Au复合纳米微粒，首先在水溶液中合成Fe3O4纳米微粒，将合成的Fe3O4纳米微粒作为“种子”加入到Au3+溶液中，以羟胺还原Au3+形成Au包覆的Fe3O4@Au复合纳米微粒。Jon等制备了一种PEG修饰的核壳Fe3O4@Au复合纳米微粒，并且发现其对生物细胞无毒副性，更加适应于生物体内检测。
天蚕素是最早被发现和研究的一种阳离子抗菌肽。天蚕素B(CB)对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌均具有很强的杀伤力，而对真菌和真核细胞没有毒，而在动植物抗病基因工程、植物育种、生物饲料添加剂等领域有着巨大的潜在应用价值。
然而，现有的检测手段，现有多肽检测方法有电位滴定法、高效液相色谱法等，电位滴定法滴定终点难以判定，且受客观环境影响大；高效液相色谱法的分析成本高，耗时长。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的装置及检测方法，能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，包括以下步骤：
1)取上玻片及下玻片，将上玻片及下玻片进行酸处理，使其表面产生羟基，然后冲洗后吹干；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于含TEM和DMOAP的乙醇溶液中浸泡，然后冲洗后吹干；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在28℃-40℃的温度下温育，再冲洗后吹干；
4)将Fe3O4@Au和天蚕素B的复合溶液滴加到下玻片上，再放置于28℃-40℃的温度下温育，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用聚酯片隔开，聚酯片的中部开设有空腔，该空腔的一侧开口，再将热致型液晶加热使其呈各向同性的液态，然后将热致型液晶从开口处注入到所述空腔内，使得热致型液晶注满整个空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
优选的，步骤1)中，将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，使其表面产生羟基。
优选的，步骤2)中，DMOAP水溶液的体积分数为0.1-0.4％。
优选的，步骤2)中，下玻片在60℃-80℃乙醇溶液中浸泡，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。
优选的，步骤3)中，天蚕素B抗体溶液的浓度为75ng/mL。
优选的，步骤3)中，温育时间为3-5h；步骤4)中，温育时间为1.5-3h。
优选的，步骤4)中，Fe3O4@Au和天蚕素B的复合溶液制备方法为：取Fe3O4@Au溶液，调节pH到天蚕素B等电点，加入天蚕素B溶液，混合摇匀静置，得到Fe3O4@Au和天蚕素B的复合溶液。
优选的，步骤5)中，热致型液晶采用液晶5CB，将液晶5CB加热至40℃-50℃，使液晶5CB呈各向同性的液态。
优选的，步骤5)中，聚酯片采用Mylar聚酯片。
优选的，步骤1)中，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；步骤2)中，上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水及乙醇进行冲洗，然后用N2吹干；步骤3)中，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法在具体操作时，利用三乙氧基硅基丁醛/N,N-二甲基-N-十八烷基(3-[三甲氧基硅烷]丙基)(TEM/DMOAP)混合自组装对下玻片表面进行修饰，DMOAP用于诱导液晶分子垂直均一取向，利用TEM中的醛基与天蚕素B抗体中的氨基反应，将天蚕素B抗体固定在下玻片上，最后利用天蚕素B与天蚕素B抗体特异性结合扰乱液晶分子的垂直取向，当加入未用Fe3O4@Au修饰的天蚕素B时，由于空间立体结构较小，被扰乱垂直取向的液晶5CB分子较少，因此图像中亮斑较少，当在基底表面滴加一定量的Fe3O4@Au修饰的天蚕素B复合液时，基底固定的天蚕素B抗体与Fe3O4@Au修饰的天蚕素B特异性结合后，由于Fe3O4@Au具有更大的空间立体结构以及分子尺寸效应，能够扰乱液晶5CB分子的取向，使其呈倾斜或近平行排列，从而导致光学信号的颜色及亮度发生较大变化，从而起到信号放大的作用，降低天蚕素B的检出限。本发明检测速度快，检测灵敏度高，并且检测成本低，受客观环境影响较小。本发明将TEM和DMOAP溶于乙醇在，乙醇作为溶剂，使反应程度更彻底。
附图说明
图1为实施例一得到的光学照片；
图2为实施例二得到的光学照片；
图3为实施例三得到的光学照片；
图4为实施例四得到的光学照片；
图5为实施例五得到的光学照片；
图6为实施例六得到的光学照片；
图7为实施例七得到的光学照片；
图8为实施例八得到的光学照片；
图9为实施例九得到的光学照片；
图10为实施例十得到的光学照片；
图11为实施例十一得到的光学照片；
图12为实施例十二得到的光学照片。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，包括以下步骤：
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于60℃-80℃的乙醇溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在28℃-40℃的温度下温育3-5h，再冲洗后吹干；
4)将待检测的Fe3O4@Au复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再放置于28℃-40℃的温度下温育1.5-3h，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将热致型液晶(5CB)加热使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
步骤1)中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水及乙醇进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤3)中用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
步骤2)中上玻片DMOAP水溶液的体积分数为0.1-0.4％，浸泡时间为30min-50min；下玻片浸泡时间为1-1.5h。
步骤3)中，将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置于28℃-40℃的温度下温育3-5h。
步骤4)中，将待检测的Fe3O4@Au复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后放置于28℃-40℃的温度下温育1.5-3h。Fe3O4@Au复合的天蚕素B溶液制备方法为：取新配制的Fe3O4@Au溶液1mL，用K2CO3调节pH到天蚕素B等电点附近，加入15-30uL的天蚕素B溶液，混合摇匀静置2h后，即可得到所要的复合溶液。
步骤5)中，将液晶5CB加热至30℃-50℃，使液晶5CB呈各向同性的液态。
实施例一至四空白检测装置及偏光检测
实施例一
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于60℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.1％；下玻片中TEM的体积分数为5％，DMOAP的体积分数为1.7％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在28℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为25ng/mL；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至42℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度。
实施例二
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在32℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度。
实施例三
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于95℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于65℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.3％，下玻片中TEM的体积分数为4％，DMOAP的体积分数为1.4％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在37℃的温度下温育4h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为150ng/mL；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至45℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度。
实施例四
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于80℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.4％，下玻片中TEM的体积分数为3％，DMOAP的体积分数为1％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在40℃的温度下温育5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为200ng/mL；
4)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至50℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度。
将实施例一至四制备的液晶池置于偏光显微镜下观察，得到图1至图4所述的照片，当CB抗体浓度较底时(25ng/mL)，对液晶分子取向扰乱程度太小，光学成像为全黑色(图1)，不利于后期检测。随着CB抗体浓度的增大，对液晶分子取向扰乱也将增大，液晶池光学成像逐渐变亮，当抗体浓度为75ng/mL时，光学成像中只有少数星点亮斑，为了不对下一步产生干扰，因此选择CB抗体浓度为75ng/mL，进行后续检测。
实施例五至八未经Fe3O4@Au纳米粒子信号放大的检测装置及偏光检测
实施例五
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在28℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将0ng/mL的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于28℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度。
实施例六
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在32℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将50ng/mL的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于32℃的温度下温育1.5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
实施例七
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在37℃的温度下温育4h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将100ng/mL的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于37℃的温度下温育2h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至45℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
实施例八
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在40℃的温度下温育5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将200ng/mL的CB溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于40℃的温度下温育2.5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至50℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
将实施例五至实施例八制备的液晶池分别置于偏光显微镜下进行观察，得到图5至图8结果。
实施例九至十二Fe3O4@Au纳米粒子信号放大的检测装置及偏光检测
实施例九
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于30℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在28℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将0ng/mL的CB溶液与Fe3O4@Au复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于28℃的温度下温育1.5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至40℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度。
实施例十
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在32℃的温度下温育4h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将0.5ng/mL的CB溶液与Fe3O4@Au复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于32℃的温度下温育2h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至43℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
实施例十一
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在40℃的温度下温育4.5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将1ng/mL的CB溶液与Fe3O4@Au复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于40℃的温度下温育2.5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至46℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
实施例十二
1)将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于90℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡40min，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；同时将下玻片放置于75℃的乙醇溶液中浸泡1h，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干，其中，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。其中，上玻片中DMOAP水溶液的体积分数为0.2％，下玻片中TEM的体积分数为4.5％，DMOAP的体积分数为1.5％；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置在37℃的温度下温育5h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；其中CB抗体溶液的浓度为75ng/mL；
4)将100ng/mL的CB溶液与Fe3O4@Au复合后滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后再放置于37℃的温度下温育3h，分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热至50℃使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
将实施例九至实施例十二制备的液晶池分别置于偏光显微镜下进行观察，得到图9至图12结果。参照图10，当CB的浓度为0.5ng/mL时，图像出现亮斑，与图6相比，可以检出的CB浓度下限值明显降低。因此，天蚕素B含量超过0.5ng/mL时，光学信号出现明显变化。
以上结果显示，利用Fe3O4@Au为信号放大器检测CB检出限明显降低，在CB的含量超过0.5ng/mL时，光学信号出现明显变化。
本发明检测原理为：在下玻片表面修饰TEM/DMOAP混合自组装膜，DMOAP用于诱导液晶分子垂直均一取向，利用TEM中的醛基与天蚕素B抗体中的氨基反应，将天蚕素B抗体固定在下玻片上。当加入未用Fe3O4@Au修饰的天蚕素B时，由于空间立体结构较小，被扰乱垂直取向的液晶5CB分子较少，因此图像中亮斑较少，如图6所示。当在基底表面滴加一定量的Fe3O4@Au修饰的天蚕素B复合液时，基底固定的天蚕素B抗体与Fe3O4@Au修饰的天蚕素B特异性结合后，由于Fe3O4@Au具有更大的空间立体结构以及分子尺寸效应，能够扰乱液晶5CB分子的取向，使其呈倾斜或近平行排列，测得结果如图10所示。随着样品中待测Fe3O4@Au修饰的天蚕素B复合液浓度的变化，使液晶膜的颜色和亮度发生变化，实现对天蚕素B的特异性检测。与未用Fe3O4@Au修饰的天蚕素B相比，在加入Fe3O4@Au修饰的天蚕素B复合液浓度，可检测限降低100倍。
Claims (10)
1.一种以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取上玻片及下玻片，将上玻片及下玻片进行酸处理，使其表面产生羟基，然后冲洗后吹干；
2)将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于含TEM和DMOAP的乙醇溶液中浸泡，然后冲洗后吹干；
3)将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在28℃-40℃的温度下温育，再冲洗后吹干；
4)将Fe3O4@Au和天蚕素B的复合溶液滴加到下玻片上，再放置于28℃-40℃的温度下温育，然后冲洗后吹干；
5)将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用聚酯片隔开，聚酯片的中部开设有空腔，该空腔的一侧开口，再将热致型液晶加热使其呈各向同性的液态，然后将热致型液晶从开口处注入到所述空腔内，使得热致型液晶注满整个空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。
2.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤1)中，将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，使其表面产生羟基。
3.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤2)中，DMOAP水溶液的体积分数为0.1-0.4％。
4.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤2)中，下玻片在60℃-80℃乙醇溶液中浸泡，乙醇溶液中TEM与DMOAP体积比为3:1。
5.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤3)中，天蚕素B抗体溶液的浓度为75ng/mL。
6.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤3)中，温育时间为3-5h；步骤4)中，温育时间为1.5-3h。
7.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤4)中，Fe3O4@Au和天蚕素B的复合溶液制备方法为：取Fe3O4@Au溶液，调节pH到天蚕素B等电点，加入天蚕素B溶液，混合摇匀静置，得到Fe3O4@Au和天蚕素B的复合溶液。
8.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤5)中，热致型液晶采用液晶5CB，将液晶5CB加热至40℃-50℃，使液晶5CB呈各向同性的液态。
9.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤5)中，聚酯片采用Mylar聚酯片。
10.根据权利要求1所述的以Fe3O4@Au为信号放大器检测天蚕素B的方法，其特征在于，步骤1)中，分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；步骤2)中，上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水及乙醇进行冲洗，然后用N2吹干；步骤3)中，用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；步骤4)中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1930304A (zh) * | 2003-11-21 | 2007-03-14 | Anp技术公司 | 不对称支化的聚合物缀合物和微阵列检测 |
| CN101769918A (zh) * | 2008-12-31 | 2010-07-07 | 重庆医科大学 | 基于液晶取向变化的免疫检测方法 |
| US20110200986A1 (en) * | 2008-10-06 | 2011-08-18 | National University Of Singapore | Bio-assay using liquid crystals |
| CN107941712A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-04-20 | 陕西科技大学 | 一种基于液晶生物传感器检测天蚕素b的方法 |
| CN109060666A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-21 | 陕西科技大学 | 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法 |
| CN109212224A (zh) * | 2018-08-24 | 2019-01-15 | 陕西科技大学 | 基于纳米金信号放大的液晶免疫传感器检测hbd-2的方法 |
-
2019
- 2019-01-30 CN CN201910093340.6A patent/CN109765386A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1930304A (zh) * | 2003-11-21 | 2007-03-14 | Anp技术公司 | 不对称支化的聚合物缀合物和微阵列检测 |
| US20110200986A1 (en) * | 2008-10-06 | 2011-08-18 | National University Of Singapore | Bio-assay using liquid crystals |
| CN101769918A (zh) * | 2008-12-31 | 2010-07-07 | 重庆医科大学 | 基于液晶取向变化的免疫检测方法 |
| CN107941712A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-04-20 | 陕西科技大学 | 一种基于液晶生物传感器检测天蚕素b的方法 |
| CN109212224A (zh) * | 2018-08-24 | 2019-01-15 | 陕西科技大学 | 基于纳米金信号放大的液晶免疫传感器检测hbd-2的方法 |
| CN109060666A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-21 | 陕西科技大学 | 一种基于纳米金信号放大检测天蚕素b的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 杨玉东: "《生物医学纳米磁性材料原理及应用》", 31 October 2005, 吉林人民出版社 * |
| 鲁启鹏等: "《基于金属氧化物TiO2和Y2O3纳米材料光电性能的研究》", 30 April 2016, 北京交通大学出版社 * |
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