CN109030156B - 一种流式分析用染色液 - Google Patents
一种流式分析用染色液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109030156B CN109030156B CN201811220583.3A CN201811220583A CN109030156B CN 109030156 B CN109030156 B CN 109030156B CN 201811220583 A CN201811220583 A CN 201811220583A CN 109030156 B CN109030156 B CN 109030156B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- benzyl chloride
- flow analysis
- weight
- olefin derivative
- staining solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000005206 flow analysis Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 150000005524 benzylchlorides Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 claims abstract description 37
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 claims abstract description 28
- 150000002440 hydroxy compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 claims description 18
- VOSLIUIVGWBSOK-UHFFFAOYSA-N 1-n-phenylbenzene-1,2,4-triamine Chemical compound NC1=CC(N)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 VOSLIUIVGWBSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- -1 hydroxyl compound Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 4
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 abstract description 4
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 abstract description 3
- 229910001914 chlorine tetroxide Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 abstract description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- ZXWXQHNTKANDRB-UHFFFAOYSA-N 4-n-ethylpyrimidine-4,6-diamine Chemical compound CCNC1=CC(N)=NC=N1 ZXWXQHNTKANDRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 4
- DXHDNEMDAQGOLC-UHFFFAOYSA-N 5-n,2-dimethylpyrimidine-4,5-diamine Chemical compound CNC1=CN=C(C)N=C1N DXHDNEMDAQGOLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 150000001344 alkene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 125000002029 aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001795 light effect Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011206 morphological examination Methods 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011342 resin composition Substances 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 210000004895 subcellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及生物试剂领域，更具体地，本发明涉及一种流式分析用染色液及其制备方法。本发明第一个方面提供一种流式分析用染色液，按重量份计算，包括60～150份羟基化合物、0.001～1份改性苄氯以及0.001～1份烯烃衍生物；羟基化合物为R1(CH2)nOH，R1为甲基或羟基，n为0～5的整数；烯烃衍生物的结构选自
中的任一种或多种的组合，其中X为Br、I、ClO4中的任一种，M为Na或K，R1、R2、R3分别独立选自氢原子、烃基、酰基、芳香基、环烷基、羧基中的任一种或多种。
Description
技术领域
本发明涉及生物试剂领域，更具体地，本发明涉及一种流式分析用染色液及其制备方法。
背景技术
流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析和分选技术，其测量速度快，最快可在1秒内检测数万个细胞；可进行多参数测量，对同一个细胞做有关物理、化学、生物等特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义。它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
目前，流式细胞术已被广泛应用于各个领域之中。其中，流式细胞仪借助于各种荧光染料测定一个细胞的多种参数完成白血病及淋巴瘤的诊断，准确率达90％左右，较传统形态学检查准确性提高10％-20％；流式细胞仪对淋巴细胞及其亚群数量的检测，可以探索疾病的发病机理、病程、预后，指导临床治疗方案。
正常的外周血白细胞(WBC)中一般分为五个亚群，即淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MON)、中性粒细胞(NEU)、嗜酸性粒细胞(EOS)和嗜碱性粒细胞(BASO)。且这些白细胞亚群各自以一定的比例存在。但是，当受试者存在疾病时，特定的血细胞数会增加或减少。所以，在临床检验领域，通过白细胞的分类计数，可用于一些疾病的辅助诊断。在检测白细胞(WBC)四个亚群即淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MON)、中性粒细胞(NEU)、嗜酸性粒细胞(EOS)的过程中，染料进入细胞核进行染色，根据染色后的细胞被激光照射后的散射光及激发出的荧光强度的不同，检测分辨出上述四种白细胞亚群。
在进行流式分析时，染色液对不同的细胞种类以及不同的细胞结构，有着不同的着色能力，从而会造成不同细胞、不同部位会产生不同的光散射强度，进一步确定不同种类细胞的数量，进行疾病的诊断。本发明提供一种流式分析用染色液，其与细胞的匹配性很好，具有良好的荧光特性，且配方简单，成本较低。
发明内容
本发明第一个方面提供一种流式分析用染色液，按重量份计算，包括60～150份羟基化合物、0.001～1份改性苄氯以及0.001～1份烯烃衍生物；羟基化合物为R1(CH2)nOH，R1为甲基或羟基，n为0～5的整数；烯烃衍生物的结构选自
中的任一种或多种的组合，其中X为Br、I、ClO4中的任一种，M为Na或K，R1、R2、R3分别独立含有氢原子、烃基、酰基、芳香基、环烷基、羧基中的任一种或多种。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，包括80～120份羟基化合物、0.005～0.5份改性苄氯以及0.005～0.5份烯烃衍生物。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，包括100份羟基化合物、0.01份改性苄氯以及0.01份烯烃衍生物。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，羟基化合物为CH3OH与HOCH2CH2OH。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：(30～50)。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：49。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，改性苄氯的制备原料包括2,4-二氨基二苯胺、N5,2-二甲基-4,5-嘧啶二胺、N-乙基-4,6-嘧啶二胺中的任一种或多种的组合。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，烯烃衍生物的结构为
X为Br，n为1～4，R1、R2、R3分别独立选自
-CH3中的任一种。
作为本发明的一种优选技术方案，其中，烯烃衍生物的结构为
X为Br。
本发明第二个方面提供一种所述流式分析用染色液的制备方法，其中，包括先将羟基化合物混合均匀，再依次添加改性苄氯以及烯烃衍生物。
本发明的有益效果：本发明提供的流式分析用染色液具有稳定的光学性能，且在不用前处理的条件下，具有稳定均匀的相体系，在使用过程中，易于细胞结合，具有较高的荧光量子产率，且毒性很小，不会对细胞产生负面影响，从而分析结果较为准确。
具体实施方式
本发明第一个方面提供一种流式分析用染色液，按重量份计算，包括60～150份羟基化合物、0.001～1份改性苄氯以及0.001～1份烯烃衍生物。
优选地，所述流式分析用染色液，按重量份计算，包括80～120份羟基化合物、0.005～0.5份改性苄氯以及0.005～0.5份烯烃衍生物。
更优选地，所述流式分析用染色液，按重量份计算，包括100份羟基化合物、0.01份改性苄氯以及0.01份烯烃衍生物。
羟基化合物：
羟基化合物是脂肪烃、脂环烃或芳香烃侧链中的氢原子被羟基取代而成的化合物；羟基是与一个饱和的，sp3杂化的碳原子相连，则为醇；若羟基与苯环相连，则是酚；若羟基与sp2杂化的烯类碳相连，则是烯醇，醇、酚与烯醇与一般的醇性质上有较大差异，此外，分子链上的碳原子数同样对羟基化合物的性能存在着一定的影响。
在一种实施方式中，羟基化合物为R1(CH2)nOH，R1为甲基或羟基，n为0～5的整数；优选地，所述羟基化合物为CH3OH与HOCH2CH2OH；进一步优选地，所述CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：(30～50)；更优选地，所述CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：49。
改性苄氯：
苄氯中含有较为活泼的氯甲基，其广泛应用在农药、医药、染料和香料等精细化学品的合成应用中。
在一种实施方案中，改性苄氯的制备原料包括2,4-二氨基二苯胺、N5,2-二甲基-4,5-嘧啶二胺、N-乙基-4,6-嘧啶二胺中的任一种或多种的组合，其中2,4-二氨基二苯胺的CAS：136-17-4、N5,2-二甲基-4,5-嘧啶二胺CAS：101080-48-2、N-乙基-4,6-嘧啶二胺CAS：101080-47-1；优选地，所述改性苄氯的制备原料包括2,4-二氨基二苯胺。
在一种实施方式中，改性苄氯的制备原料还包括苄氯；优选地，所述苄氯与2,4-二氨基二苯胺的摩尔比为1：(0.8～1.5)；更优选地，所述苄氯与2,4-二氨基二苯胺的摩尔比为1：1.2。
在一种实施方式中，所述改性苄氯的制备方法为：在氮气氛围下，将苄氯、2,4-二氨基二苯胺以及三乙胺称量放于50mL的反应瓶中，再加入N,N-二甲基甲酰胺，搅拌反应，反应结束后，利用无水乙醚冲洗、干燥，即得改性苄氯；
所述三乙胺与苄氯的摩尔比为(0.02～0.08)：1；优选地，所述三乙胺与苄氯的摩尔比为0.05：1。
优选地，所述改性苄氯的制备方法为：在氮气氛围下，将苄氯、2,4-二氨基二苯胺以及三乙胺称量放于50mL的反应瓶中，再加入N,N-二甲基甲酰胺，于65℃搅拌反应5h，反应结束后，利用无水乙醚冲洗三次，并干燥，即得改性苄氯。
烯烃衍生物：
在一种实施方式中，烯烃衍生物的结构选自
中的任一种或多种的组合，其中X为Br、I、ClO4中的任一种，M为Na或K，R1、R2、R3分别独立含有氢原子、烃基、酰基、芳香基、环烷基、羧基中的任一种或多种。
在一种实施方式中，所述烯烃衍生物的结构为
X为Br，n为1～4，R1、R2、R3分别独立选自
-CH3中的任一种；优选地，所述烯烃衍生物的结构为
X为Br，购自西安凯新生物科技有有限公司。
本发明第二个方面提供了一种所述流式分析用染色液的制备方法，包括先将羟基化合物混合均匀，再依次添加改性苄氯以及烯烃衍生物。
优选地，所述流式分析用染色液的制备方法，包括于室温下，先将羟基化合物混合均匀，再依次添加改性苄氯以及烯烃衍生物。
通过实验发现，本发提供的染色液在羟基化合物、烯烃衍生物以及改性苄氯的共同作用下，具有较高的荧光量子产率以及较好的染色性能，这可能是因为在乙醇的体系中，烯烃衍生物以及改性苄氯为共轭体系，利于荧光的产生与传递；而烯烃衍生物、改性苄氯分别在乙醇体系时，分子内部作用力大于其与细胞的作用力，导致其染色能力不佳，而当烯烃衍生物与改性苄氯共同作用下，减少电荷的内部消减，促进对细胞中电荷的吸附，从而提高细胞的染色的强度；此外，申请人也意外地发现当CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：(30～50)的范围内时，染色液具有良好的荧光特性，以及可以对细胞染色，且呈现高、中强度的荧光，这可能是因为适量的甲醇促进体系的均一性，吸附于烯烃衍生物以及改性苄氯的表面，更有利于其与细胞的接触，提高染料与细胞的作用力，而当甲醇含量过高超过乙醇时，荧光量子产率较低，而染色性能较差，这可能是因为在该种情况下，染料体系的均一性较差，从而造成分子的排列的重整，导致荧光量子产率以及染料对细胞的吸附性降低。
实施例1
本发明的实施例1提供一种流式分析用染色液，包括100份羟基化合物、0.01份改性苄氯以及0.01份烯烃衍生物；
所述羟基化合物为CH3OH与HOCH2CH2OH；所述CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：49；
所述改性苄氯的制备原料包括2,4-二氨基二苯胺和苄氯；所述苄氯与2,4-二氨基二苯胺的摩尔比为1：1.2；
所述改性苄氯的制备方法为：在氮气氛围下，将苄氯、2,4-二氨基二苯胺以及三乙胺称量放于50mL的反应瓶中，再加入N,N-二甲基甲酰胺，于65℃搅拌反应5h，反应结束后，利用无水乙醚冲洗三次，并干燥，即得改性苄氯；
所述三乙胺与苄氯的摩尔比为0.05：1；
所述烯烃衍生物的结构为
X为Br；
所述流式分析用染色液的制备方法，包括于室温下，先将羟基化合物混合均匀，再依次添加改性苄氯以及烯烃衍生物。
实施例2
本发明的实施例2提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，包括150份羟基化合物、1份改性苄氯以及1份烯烃衍生物；
所述CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：50；
所述苄氯与2,4-二氨基二苯胺的摩尔比为1：1.5。
实施例3
本发明的实施例3提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，包括60份羟基化合物、0.001份改性苄氯以及0.001份烯烃衍生物；
所述CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：30；
所述苄氯与2,4-二氨基二苯胺的摩尔比为1：0.8。
实施例4
本发明的实施例4提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为49：1。
实施例5
本发明的实施例5提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述CH3OH的含量替换为0。
实施例6
本发明的实施例6提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述烯烃衍生物的重量替换为0。
实施例7
本发明的实施例7提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述改性苄氯替换为苄氯。
实施例8
本发明的实施例8提供一种流式分析用染色液，其具体实施方式同实施例1，不同之处在于，将所述改性苄氯的重量替换为0。
性能测试
荧光量子产率的测定
实验仪器与试剂：RF-5301PC荧光光谱仪(日本,SHIMADZU公司)；荧光四面通石英比色皿；UV-1601紫外-可见分光光度计(日本,SHIMADZU公司)；紫外石英比色皿。
实施例1～8制备得到的染色液、罗丹明(BCRhB,上海试剂三厂)：0.5μg/mL乙醇溶液；1.0mol/L盐酸(分析纯)；1.0mol/L氢氧化钠(分析纯)。
实验方法：准确配制待测物实施例1～8制备得到的染色液、参比标准物RhB溶液，设置各项荧光光谱测量参数如下：激发波长：495nm；狭缝宽度(nm)：EX＝3，EM＝3；灵敏度：高；发射光谱波长范围：450～630nm(实施例1～8制备得到的染色液)，500～700nm(RhB溶液)；扫描速度：中速；响应时间：自动，测得的结果见表1。
细胞染色强度测定
利用血溶剂先将细胞膜溶解，再利用实施例1～8制备得到的染色液对细胞染色，染色完成后利用显微镜观察细胞被染色的强度，根据看到的强弱，将细胞的染色强度分为强、中、弱、无四个级别，具体实验结果见表1，其中，染色过程为本领域常用手段，不做特别的限制。
表1性能测试结果
| 荧光量子产率 | 染色强度 | |
| 实施例1 | 0.91 | 强 |
| 实施例2 | 0.86 | 中 |
| 实施例3 | 0.84 | 中 |
| 实施例4 | 0.32 | 弱 |
| 实施例5 | 0.21 | 弱 |
| 实施例6 | 0.51 | 弱 |
| 实施例7 | 0.44 | 弱 |
| 实施例8 | 0.39 | 弱 |
由表1可以看出本发明提供的染色液具有较高的荧光量子产率，且其在染色过程中呈光效果很好，这可能是因为其体系均一，且与细胞作用力比较稳定，匹配性能较佳，适用于实验研究以及疾病诊断与治疗。
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合的选择的实施方式的说明。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。
Claims (5)
1.一种流式分析用染色液，其特征在于，按重量份计算，包括60～150份羟基化合物、0.001～1份改性苄氯以及0.001～1份烯烃衍生物；
羟基化合物为CH3OH与HOCH2 CH2OH，CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：(30～50)；
所述改性苄氯的制备方法为：在氮气氛围下，将苄氯、2,4-二氨基二苯胺以及三乙胺称量放于50mL的反应瓶中，再加入N,N-二甲基甲酰胺，于65℃搅拌反应5h，反应结束后，利用无水乙醚冲洗三次，并干燥，即得改性苄氯；
所述苄氯与2,4-二氨基二苯胺的摩尔比为1：(0.8～1.5)；所述三乙胺与苄氯的摩尔比为0.05：1；
烯烃衍生物的结构为
X为Br。
2.根据权利要求1所述流式分析用染色液，其特征在于，包括80～120份羟基化合物、0.005～0.5份改性苄氯以及0.005～0.5份烯烃衍生物。
3.根据权利要求1所述流式分析用染色液，其特征在于，包括100份羟基化合物、0.01份改性苄氯以及0.01份烯烃衍生物。
4.根据权利要求1所述流式分析用染色液，其特征在于，CH3OH与HOCH2CH2OH的重量比为1：49。
5.根据权利要求1～4任一项所述流式分析用染色液的制备方法，其特征在于，包括先将羟基化合物混合均匀，再依次添加改性苄氯以及烯烃衍生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811220583.3A CN109030156B (zh) | 2018-10-19 | 2018-10-19 | 一种流式分析用染色液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811220583.3A CN109030156B (zh) | 2018-10-19 | 2018-10-19 | 一种流式分析用染色液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109030156A CN109030156A (zh) | 2018-12-18 |
| CN109030156B true CN109030156B (zh) | 2021-03-16 |
Family
ID=64613666
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811220583.3A Active CN109030156B (zh) | 2018-10-19 | 2018-10-19 | 一种流式分析用染色液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109030156B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0882983A2 (en) * | 1997-05-19 | 1998-12-09 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent and method for classification and counting of leukocytes |
| CN101723874A (zh) * | 2008-10-31 | 2010-06-09 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途 |
| CN102115456A (zh) * | 2009-12-30 | 2011-07-06 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 花菁类化合物,包含所述化合物的组合物及其在细胞检测中的用途 |
| CN102766346A (zh) * | 2012-07-30 | 2012-11-07 | 北京福罗泰科技有限责任公司 | 一种菁类荧光染料 |
| CN105315988A (zh) * | 2015-01-12 | 2016-02-10 | 中南大学 | 一种细胞溶酶体定位用荧光染料及其制备方法和应用 |
| CN107529797A (zh) * | 2015-05-12 | 2018-01-02 | 三荣源有限公司 | 花青苷染料制剂 |
| CN108440987A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-08-24 | 安迪福诺生物科技（武汉）有限公司 | 不对称花青素染料及其应用 |
-
2018
- 2018-10-19 CN CN201811220583.3A patent/CN109030156B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0882983A2 (en) * | 1997-05-19 | 1998-12-09 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Reagent and method for classification and counting of leukocytes |
| CN101723874A (zh) * | 2008-10-31 | 2010-06-09 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途 |
| CN102115456A (zh) * | 2009-12-30 | 2011-07-06 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 花菁类化合物,包含所述化合物的组合物及其在细胞检测中的用途 |
| CN102766346A (zh) * | 2012-07-30 | 2012-11-07 | 北京福罗泰科技有限责任公司 | 一种菁类荧光染料 |
| CN105315988A (zh) * | 2015-01-12 | 2016-02-10 | 中南大学 | 一种细胞溶酶体定位用荧光染料及其制备方法和应用 |
| CN107529797A (zh) * | 2015-05-12 | 2018-01-02 | 三荣源有限公司 | 花青苷染料制剂 |
| CN108440987A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-08-24 | 安迪福诺生物科技（武汉）有限公司 | 不对称花青素染料及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109030156A (zh) | 2018-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3783808B2 (ja) | 白血球分類計数用試薬 | |
| EP3810721B1 (en) | Fluorescent particles with molecularly imprinted fluorescent polymer shells for cell staining applications in cytometry and microscopy | |
| EP1813942B1 (en) | Reagent for immature leukocyte analysis and reagent kit | |
| AU2011236610B2 (en) | Method of analysing a cell or other biological material containing a nucleic acid | |
| FI95032B (fi) | Uusi fluoresoiva väriaine | |
| CN101750476A (zh) | 血液分析试剂及其使用方法 | |
| JP4248017B2 (ja) | 白血球分類計数方法及び白血球分類計数試薬キット | |
| CN111100476B (zh) | 一种pH荧光探针的合成及应用 | |
| US4423153A (en) | Methods and compositions for the detection and determination of cellular DNA | |
| CN103424540A (zh) | 一种白细胞分类试剂盒及其分类方法 | |
| JP6437009B2 (ja) | 循環腫瘍細胞（ｃｔｃ）の検出方法 | |
| JPH03182562A (ja) | 全血中の網状赤血球の定量測定における化合物、試薬組成物及びその用途 | |
| Langlois et al. | Interactions between pairs of DNA-specific fluorescent stains bound to mammalian cells. | |
| CN106568748A (zh) | 一种基于壳核型上转换材料和二硫化钼发生荧光共振能量转移检测微囊藻毒素lr的方法 | |
| Xu et al. | Disposable paper strips for carboxylate discrimination | |
| JP5214603B2 (ja) | 幼若白血球の分析用試薬及び分析用試薬キット | |
| CN113336723A (zh) | 一类花菁荧光探针、其制备方法及应用 | |
| CN116217512A (zh) | 一种用于检测粘度的半菁染料荧光探针及其制备方法、检测方法以及在溶液及生物体系中的应用 | |
| CN109030156B (zh) | 一种流式分析用染色液 | |
| JP2001506686A (ja) | ハロレピジンから誘導できるヘリウム−ネオン励起性網状赤血球染色用色素 | |
| CN103820103A (zh) | 一种检测汞离子的反应型罗丹明荧光探针及其制备方法 | |
| Bian et al. | Spectrofluorometric determination of total bilirubin in human serum samples using tetracycline-Eu3+ | |
| CN111662279B (zh) | 一种萘取代咔唑-苯并噻唑基腙类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN108822839A (zh) | 一种氨基葡萄糖改性的纳米碳点GSCs及其制备方法与制备赖氨酸荧光检测试剂上的应用 | |
| CN110243651B (zh) | 一种网织红细胞检测试剂盒及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |