CN109022380B - 一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法 - Google Patents

一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109022380B
CN109022380B CN201810905472.XA CN201810905472A CN109022380B CN 109022380 B CN109022380 B CN 109022380B CN 201810905472 A CN201810905472 A CN 201810905472A CN 109022380 B CN109022380 B CN 109022380B
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
acid deaminase
plasmid
gene
constructing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810905472.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109022380A (zh
Inventor
吴黎诚
郭小雷
章权
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Zhengshuo Bio Tech Co ltd
Original Assignee
Zhejiang Zhengshuo Bio Tech Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Zhengshuo Bio Tech Co ltd filed Critical Zhejiang Zhengshuo Bio Tech Co ltd
Priority to CN201810905472.XA priority Critical patent/CN109022380B/zh
Publication of CN109022380A publication Critical patent/CN109022380A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109022380B publication Critical patent/CN109022380B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0014—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
    • C12N9/0022—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with oxygen as acceptor (1.4.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y104/00—Oxidoreductases acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
    • C12Y104/03—Oxidoreductases acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with oxygen as acceptor (1.4.3)
    • C12Y104/03002—L-Amino-acid oxidase (1.4.3.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
    • C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
    • C12Y111/01006—Catalase (1.11.1.6)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于基因工程领域，涉及一种提高L‑氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，采用L‑氨基酸脱氨酶（L‑amino acid deaminase，LAAD）基因与过氧化氢酶（Catalase）基因串联表达。本发明采用L‑氨基酸脱氨酶串联过氧化氢酶进行表达，提高了单位菌体的酶活，也提高了单位发酵体积菌体的量，从而具有很高的工业化运用价值。

Description

一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法
技术领域
本发明属于基因工程领域，涉及一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法。
背景技术
L-氨基酸脱氨酶（LAAD, L-Amino Acid Deaminase），也可以称作L-氨基酸氧化酶(LAAO，L-Amino Acid Oxidase, EC 1.4.3.2)，是一类黄素蛋白（flavoenzyme）对天然和非天然的L-氨基酸具有广谱的α位脱氨活性。LAAD在氧的参与下氧化L-氨基酸脱α-氨基，生成酮酸和氨，并产生副产物双氧水。L-氨基酸脱氨酶可用于氧化L-氨基酸的氨基制备对应的α-酮酸或用于氧化消旋氨基酸中的L-氨基酸来制备D-氨基酸。无论是α-酮酸或D-氨基酸都是重要的医药中间体。
过氧化氢酶（Catalase），主要来源于微生物及动物肝脏（如牛肝），并被工业化开发运用于分解双氧水（H2O2），消除双氧水对其所在环境中其它物质的氧化破坏。
L-氨基酸脱氨酶来源多种微生物，如Proteus、ProÍidencia、Morganella属，另外蛇毒中L-氨基酸脱氨酶也被商业化运用，只是太昂贵而不能广泛使用。微生物来源的L-氨基酸脱氨酶较容易进行基因操作，并可通过发酵获得酶。采用大肠杆菌表达有活性的L-氨基酸脱氨酶时，L-氨基酸脱氨酶在细胞内会对细胞内的氨基酸进行脱氨反应并产生双氧水，而双氧水对细胞产生毒害，造成细胞过早自溶，从而使得单位菌体的酶活表达量小，同时单位发酵体积的菌体量少，严重影响了工业化运用。
发明内容
本发明提供一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，L-氨基酸脱氨酶串联表达过氧化氢酶，提高了单位菌体的酶活，也提高了单位发酵体积菌体的量，从而具有很高的工业化运用价值。
本发明采用如下的技术方案：一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，采用L-氨基酸脱氨酶（L-amino acid deaminase，LAAD）基因与过氧化氢酶（Catalase）基因串联表达。
作为优选，采用奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)的L-氨基酸脱氨酶（L-aminoacid deaminase，LAAD）基因（genbank登录号EU669819.1）LAAD与嗜冷杆菌（Psychrobacterpiscatorii T-3）的过氧化氢酶（Catalase）基因（genbank登录号EU543218）PKTA串联表达。
作为优选，在PKTA基因片段上游加上DNA片段，所述DNA片段序列为：aagctttctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacc。
具体操作步骤如下：
1.重组菌构建
全基因合成来源于奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)的L-氨基酸脱氨酶（L-amino acid deaminase，LAAD）基因（genbank登录号EU669819.1）LAAD，并连入pET28a载体（NdeⅠ/Hind），构建质粒laad，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PMLAAD；
全基因合成来源于嗜冷杆菌（Psychrobacterpiscatorii T-3）的过氧化氢酶（Catalase）基因（genbank登录号EU543218）PKTA，并连入pET28a载体（NcoⅠ/Xhol），构建质粒pkta，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PKTA；
质粒pkta，通过PCR扩增，在pkta基因片段上游加上DNA片段（aagctttctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacc），回收正确的目的片段（含PKTA和DNA片段的目的片段）后HindⅢ/XhoⅠ双酶切，并纯化回收正确的酶切后的目的片段；质粒laad采用HindⅢ/XhoⅠ双酶切，并纯化回收正确的线性质粒；酶切片段（酶切后的目的片段和酶切后的laad线性片段）连接，构建串联表达质粒pmlaadpkta，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PMLAADPKTA。
2. 重组菌表达
重组菌PMLAAD和PMLAADPKTA采用TB进行发酵。
1）培养基
LB：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
琼脂LB-Kan平板(g/L)：
Figure DEST_PATH_IMAGE004
注：培养基灭菌冷却至50-60℃，100ml LB加100μl Kan溶液（100mg/ml），混匀，倒平板（25-30ml/6cm平皿）。
TB(g/L)：
Figure DEST_PATH_IMAGE006
2）发酵流程
(1)菌种活化：从甘油管或牛奶管接菌至LB琼脂平板(Kan,100mg/L)，37℃培养12-14h。
(2)一级种子：从平板上挑取单菌至4ml LB试管，加Kan至终浓度为100mg/L，37℃，220rpm培养过夜（16h）。
(3)二级种子：取新鲜菌液按2%接种量接种于LB（100ml/500ml）摇瓶，加Kan至终浓度为100mg/L， 37℃，220rpm培养3.0-3.5h，OD600为1.0左右。
(4)1L/5L的TB发酵：二级种子2%-10%的接种量接入TB培养基（1L/5L发酵摇瓶），加Kan至25mg/L，37℃，220rpm，培养3h，开始降温25℃；加IPTG至终浓度（0.1mM），220rpm，25度，培养过夜。
(5)发酵20-24h，收集菌体。
通过实施上述技术方案，本发明采用L-氨基酸脱氨酶串联过氧化氢酶进行表达，提高了单位菌体的酶活，也提高了单位发酵体积菌体的量，从而具有很高的工业化运用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细说明。
实施例1：
一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，具体操作步骤如下：
1.重组菌构建
全基因合成来源于奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)的L-氨基酸脱氨酶（L-amino acid deaminase，LAAD）基因（genbank登录号EU669819.1）LAAD，并连入pET28a载体（NdeⅠ/Hind），构建质粒laad，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PMLAAD；
全基因合成来源于嗜冷杆菌（Psychrobacterpiscatorii T-3）的过氧化氢酶（Catalase）基因（genbank登录号EU543218）PKTA，并连入pET28a载体（NcoⅠ/Xhol），构建质粒pkta，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PKTA；
质粒pkta，通过PCR扩增，在pkta基因片段上游加上DNA片段（aagctttctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacc），回收正确的目的片段（含PKTA和DNA片段的目的片段）后HindⅢ/XhoⅠ双酶切，并纯化回收正确的酶切后的目的片段；质粒laad采用HindⅢ/XhoⅠ双酶切，并纯化回收正确的线性质粒；酶切片段（酶切后的目的片段和酶切后的laad线性片段）连接，构建串联表达质粒pmlaadpkta，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PMLAADPKTA。
2. 重组菌表达
重组菌PMLAAD和PMLAADPKTA采用TB进行发酵。
1）培养基
LB：
Figure 914456DEST_PATH_IMAGE002
琼脂LB-Kan平板(g/L)：
Figure DEST_PATH_IMAGE008
注：培养基灭菌冷却至50-60℃，100ml LB加100μl Kan溶液（100mg/ml），混匀，倒平板（25-30ml/6cm平皿）。
TB(g/L)：
Figure DEST_PATH_IMAGE010
2）发酵流程
(1)菌种活化：从甘油管或牛奶管接菌至LB琼脂平板（Kan，100mg/L），37℃培养12-14h。
(2)一级种子：从平板上挑取单菌至4ml LB试管，加Kan至终浓度为100mg/L，37℃，220rpm培养过夜（16h）。
(3)二级种子：取新鲜菌液按2%接种量接种于LB（100ml/500ml）摇瓶，加Kan至终浓度为100mg/L， 37℃，220rpm培养3.0-3.5h，OD600为1.0左右。
(4)1L/5L的TB发酵：二级种子2%-10%的接种量接入TB培养基（1L/5L发酵摇瓶），加Kan至25mg/L，37℃，220rpm，培养3h，开始降温25℃；加IPTG至终浓度（0.1mM），220rpm，25度，培养过夜。
(5)发酵20-24h，3500rpm*25min离心收集菌体，称量菌体，计算单位发酵体积的湿菌含量。
(6)结果：串联表达菌PMLAADPKTA达到28g/L的湿菌含量，而对照菌PMLAAD只有9.7g/L的湿菌含量，而且菌体有部分自溶。
(7)两份菌-30℃冰箱冷冻24h。
3. 酶活测定
向250ml的摇瓶中加入9ml的100mM pH6.5的磷酸盐缓冲液，然后加入1g的冷冻破胞的菌体（实验组串联表达菌PMLAADPKTA，对照组为PKTA），搅拌分散均匀，置于30℃摇床中220rpm，预热30min。然后加入10ml的L-Phe底物溶液（20g/L，pH6.5,30℃预热30min），置于30℃摇床，250rpm反应30min，反应结束后，取样，用磷酸水溶液（pH3.0）稀释20倍，并100℃水浴处理3min。离心取上清，HPLC检测产物酮苯丙氨酸浓度。
结果：实验组串联表达菌PMLAADPKTA，产物酮苯丙氨酸的浓度为3.5g/L，而对照组PMLAAD的产物浓度为2.1g/L。说明串联表达菌的L-氨基酸脱氨酶的酶活明显高于未串联过氧化氢酶的菌。
序列表
<110> 浙江正硕生物科技有限公司
<120> 一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<220>
<222> (1)..(47)
<223> DNA片段
<400> 1
aagctttcta gaaataattt tgtttaactt taagaaggag atatacc 47

Claims (4)

1.一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，其特征在于，采用L-氨基酸脱氨酶基因与过氧化氢酶基因串联表达；所述L-氨基酸脱氨酶基因来源于奇异变形杆菌，所述L-氨基酸脱氨酶基因的genbank登录号为EU669819.1；过氧化氢酶基因来源于嗜冷杆菌，所述过氧化氢酶基因的genbank登录号为EU543218；在过氧化氢酶基因片段上游加上DNA片段，所述DNA片段序列为SEQ NO.1所示序列。
2.根据权利要求1所述一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：
1.重组菌构建
构建L-氨基酸脱氨酶基因质粒laad，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PMLAAD；
构建过氧化氢酶基因质粒pkta，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PKTA；
在质粒pkta上的过氧化氢酶基因片段上游加上DNA片段后，HindⅢ/XhoⅠ双酶切所得目的片段，同时采用HindⅢ/XhoⅠ双酶切质粒laad，连接，构建串联表达质粒pmlaadpkta，转化至E.Coli BL21（DE3），构建重组菌PMLAADPKTA；所述DNA片段序列为SEQ NO.1所示序列；
2.重组菌表达
采用TB培养基进行发酵。
3.根据权利要求2所述一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，其特征在于，
(1)菌种活化；
(2) 一级种子：从平板上挑取单菌至装有LB培养基的试管，加Kan至终浓度为100mg/L，37℃，220rpm培养过夜；
(3) 二级种子：取一级种子新鲜菌液按2%接种量接种于含LB培养基的摇瓶，加Kan至终浓度为100mg/L，37℃，220rpm培养3.0-3.5h，OD600为1.0；
(4) TB发酵：二级种子2%-10%的接种量接入TB培养基，加Kan至25mg/L，37℃，220rpm，培养3h，开始降温25℃；加IPTG至终浓度为0.1mM，220rpm，25度，培养过夜；
(5) 发酵20-24h，收集菌体。
4.根据权利要求2所述一种提高L-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法，其特征在于，构建L-氨基酸脱氨酶基因质粒laad和过氧化氢酶基因质粒pkta采用pET28a载体。
CN201810905472.XA 2018-08-10 2018-08-10 一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法 Active CN109022380B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810905472.XA CN109022380B (zh) 2018-08-10 2018-08-10 一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810905472.XA CN109022380B (zh) 2018-08-10 2018-08-10 一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109022380A CN109022380A (zh) 2018-12-18
CN109022380B true CN109022380B (zh) 2021-07-23

Family

ID=64633436

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810905472.XA Active CN109022380B (zh) 2018-08-10 2018-08-10 一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109022380B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102586343A (zh) * 2012-02-27 2012-07-18 重庆邮电大学 一种从l-丙氨酸制备丙酮酸的生物催化方法
CN104152498A (zh) * 2014-07-31 2014-11-19 洛阳华荣生物技术有限公司 一种酶法生产α-酮戊二酸的方法
CN105316257A (zh) * 2015-10-23 2016-02-10 重庆邮电大学 一种解木糖赖氨酸芽孢杆菌及其制备α-酮酸的方法
CN105821066A (zh) * 2016-05-26 2016-08-03 江南大学 一种生产α-酮戊二酸的双酶共表达菌株
CN107299072A (zh) * 2017-08-02 2017-10-27 江南大学 一种工程菌及其应用
CN107586752A (zh) * 2017-08-04 2018-01-16 江南大学 一种工程菌及其应用
CN107881159A (zh) * 2017-12-15 2018-04-06 江南大学 一种提高d‑氨基酸氧化酶可溶性异源表达的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102586343A (zh) * 2012-02-27 2012-07-18 重庆邮电大学 一种从l-丙氨酸制备丙酮酸的生物催化方法
CN104152498A (zh) * 2014-07-31 2014-11-19 洛阳华荣生物技术有限公司 一种酶法生产α-酮戊二酸的方法
CN105316257A (zh) * 2015-10-23 2016-02-10 重庆邮电大学 一种解木糖赖氨酸芽孢杆菌及其制备α-酮酸的方法
CN105821066A (zh) * 2016-05-26 2016-08-03 江南大学 一种生产α-酮戊二酸的双酶共表达菌株
CN107299072A (zh) * 2017-08-02 2017-10-27 江南大学 一种工程菌及其应用
CN107586752A (zh) * 2017-08-04 2018-01-16 江南大学 一种工程菌及其应用
CN107881159A (zh) * 2017-12-15 2018-04-06 江南大学 一种提高d‑氨基酸氧化酶可溶性异源表达的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Combination of phenylpyruvic acid (PPA) pathway engineering and molecular engineering of L-amino acid deaminase improves PPA production with an Escherichia coli whole-cell biocatalyst;Ying Hou等;《Appl Microbiol Biotechnol》;20151110;第100卷(第5期);第2183-2191页 *
Expression and characterization of a second L-amino acid deaminase isolated from Proteus mirabilis in Escherichia coli;Jin-Oh Baek等;《J Basic Microbiol》;20110430;第51卷(第2期);第129-135页 *
Membrane binding of the insertion sequence of Proteus vulgaris L-amino acid deaminase stabilizes protein structure and increases catalytic activity;Yingchen Ju等;《Sci Rep》;20171020;第7卷(第1期);第1-11页 *
Production of phenylpyruvic acid from L-phenylalanine using an L-amino acid deaminase from Proteus mirabilis: comparison of enzymatic and whole-cell biotransformation approaches;Ying Hou等;《Appl Microbiol Biotechnol》;20150625;第99卷(第20期);第8391-8402页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109022380A (zh) 2018-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108795937B (zh) 高效异源表达碱性蛋白酶的启动子组合及其基因工程菌
CN111321193B (zh) 一种生物多酶偶联法氧化还原不对称制备l-草铵膦的方法
CN108060114B (zh) 一种发酵生产l-丙氨酸的大肠杆菌及其应用
CN106754610B (zh) 表面展示表达谷氨酸脱羧酶的重组工程菌及其构建方法与应用
CN110373370B (zh) 一种耦合atp再生系统的催化体系及其在生产谷胱甘肽过程中的应用
CN113151198B (zh) 一种γ-谷酰胺甲胺合成酶的突变体，其编码基因、氨基酸序列及其应用
CN110885803A (zh) 重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备l-草铵膦中的应用
CN114381416A (zh) 一种高产5-氨基乙酰丙酸的重组大肠杆菌菌株及其应用
CN107287144B (zh) 一种代谢改造的枯草芽孢杆菌生物转化细胞及其制备方法与应用
CN113493799B (zh) 一株高产酸性乳糖酶的黑曲霉菌株
CN110484480B (zh) 一种枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化方法
CN109022380B (zh) 一种提高l-氨基酸脱氨酶异源表达酶活的方法
CN114736881B (zh) 酸稳定性提高的葡萄糖氧化酶GoxM10突变体A4D及其衍生突变体和应用
CN106119272B (zh) 一种高效联产l-苯甘氨酸及葡萄糖酸的策略
CN107299074B (zh) 甲酸脱氢酶工程菌株的构建方法及应用
CN112779233B (zh) 重组草铵膦脱氢酶、基因工程菌及其在制备l-草铵膦中的应用
CN113943690A (zh) 魏氏柠檬酸杆菌tpiA基因敲除突变株及其应用
CN114672525A (zh) N-乙酰基-5-甲氧基色胺的生物合成方法及其应用
CN112646768A (zh) 一种重组谷氨酸棒杆菌及谷胱甘肽的制备方法
CN108165516B (zh) 一种枯草芽孢杆菌发酵生产亮氨酸脱氢酶的方法
CN112662720A (zh) 一种重组枯草芽孢杆菌及谷胱甘肽的制备方法
CN116410950B (zh) 四氢嘧啶生物合成基因簇及发酵生产四氢嘧啶的方法
CN116254286B (zh) 氰胺诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法
CN116694542A (zh) 一种生产l-苹果酸的双酶共表达菌株及其构建方法与应用
CN116042496A (zh) 发酵生产l-瓜氨酸的大肠杆菌基因工程菌、构建方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant