CN108982828A - 一种量子点快诊试纸的制备及应用 - Google Patents

一种量子点快诊试纸的制备及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种量子点快诊试纸的制备，包括以下步骤：量取PB缓冲液加至离心管中，另外加入EDC溶液和NHS溶液，吹打均匀；然后再量取水溶性羧基量子点，进行活化；活化完成后，量取标记抗体，进行偶联，偶联结束，再加入淬灭液甘氨酸溶液，淬灭，反应结束后，再加入封闭液，封闭结束后，将离心管放入离心机中离心；离心结束，弃去上层清液，另加入复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，最后通过传统方法再进行制备快诊试纸。本发明制备的试纸灵敏度能达到纳克级，具有荧光持续时间长、能同时检测多个不同生物分子、检测时间短，标记量子点用量少以及价格便宜等优点。

Description

一种量子点快诊试纸的制备及应用
技术领域
本发明属于医疗器械快速诊断产品的原料标记技术领域，具体地说，涉及一种量子点快诊试纸的制备及应用。
背景技术
快诊试纸标记材料普遍使用胶体金、化学发光材料、磁微粒、胶乳、量子点等。但是国内相关技术存在的问题有以下几个方面：1、发光时间短且弱；激发谱线窄，发射谱线宽，背景高；2、灵敏度仅能达到微克级；3、不同的荧光染料，需不同波长光源激发；4、不能同时检测多个不同生物分子；5、易褪色，光照易分解，产物有毒。
因此，如何提供一种检测灵敏度高、检测时间短、制备工艺简单以及原料用量少的量子点快诊试纸，成为本领域技术人员亟需解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种量子点快诊试纸的单色偶联标记方法及应用，该方法具有检测灵敏度高、检测时间短、制备工艺简单以及原料用量少等优点。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种量子点快诊试纸的制备，包括以下步骤：
1)量取PB缓冲液加至离心管中，另外加入30-50ul的EDC溶液和10-30ul的NHS溶液，吹打均匀；然后再量取量子点材料1-5ul，吹打均匀，进行活化；
2)所述步骤1)活化完成后，量取标记抗体1-5ul，加入步骤1)中的离心管，吹打均匀，反应时间为10-36h；
3)在所述步骤2)反应结束后，加入淬灭液甘氨酸溶液30-60ul，吹打均匀，淬灭30-60min；
4)在所述步骤3)反应结束后，再加入封闭液10-30ul，封闭20-40min；
5)所述步骤4)封闭结束后，将离心管放入离心机中离心；
6)将所述步骤5)中离心结束的离心管取出，弃去上层清液，另加入200-500ul的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，最后通过传统方法再进行制备快诊试纸。
优选的，所述步骤1)中的量子点材料为水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基。
优选的，所述步骤1)中的抗体为肌钙蛋白I抗体、α-HCG抗体、肌红蛋白抗体、肌酸激酶同工酶抗体、降钙素原抗体、人血清淀粉样蛋白A抗体、C反应蛋白抗体、叶酸抗体、维生素D抗体中的一种或多种。
优选的，所述步骤1)中的PB溶液pH值为6.8-8.0。
优选的，所述步骤4)中的封闭液为质量分数1-10％的BSA。
优选的，所述步骤5)中的离心参数为：离心转数为10000-20000r/min，离心温度为2-8℃，时间为40-80min。
优选的，所述步骤1)中加入的PB缓冲液浓度为0.05-0.3M，用量为30-60ul。
优选的，所述步骤1)中活化时间为10-60min，活化温度为35-40℃。
优选的，所述步骤6)中的复溶液为0.1-0.3M的PB缓冲液，其中包含甘氨酸0.1-1.0％，牛血清白蛋白0.1-1.0％，柠檬酸三钠0.1-1.0％，聚乙烯吡咯烷酮K30 0.01-0.1％，蔗糖2-10％，吐温200.1-0.5％，叠氮钠0.1-1.0％。
一种由上述所述的方法所制备的快诊试纸在检测肌钙蛋白I、人绒毛膜促性腺激素、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、降钙素原、人血清淀粉样蛋白A、C反应蛋白、叶酸、维生素D中的应用。
本发明有益效果：
1、制备的试纸，灵敏度能达到纳克级(ng/ml)；
2、荧光持续时间长(半年以上)，红色单色性好；
3、能同时检测多个不同生物分子；
4、标记量子点用量少，价格便宜；
5、制备工艺简单，节约生产成本；
6、该产品不易褪色，光照不易分解，产物安全，无毒；
7、该试纸检测限为0.5ng/ml,检测范围1ng-1mg/ml，检测时间5-20min，检测用量50-100μl样本量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行完整、清楚的描述。
本发明在以下实施例中加入的复溶液为0.1-0.3M的PB缓冲液，其中包含甘氨酸0.1-1.0％，牛血清白蛋白0.1-1.0％，柠檬酸三钠0.1-1.0％，聚乙烯吡咯烷酮K30 0.01-0.1％，蔗糖2-10％，吐温200.1-0.5％，叠氮钠0.1-1.0％。
实施例1
1)量取50μl 0.1MPB(ph7.2)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入40μl的EDC溶液和20μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)3μl，吹打均匀，活化30min，活化温度35℃。
2)活化完成后，量取肌钙蛋白I(CTnI)抗体2μl，加入步骤1)中的离心管，吹打均匀，常温反应24小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液50μl，吹打均匀，淬灭45min。
4)加入封闭液5％的BSA溶液20μl，封闭30min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，60min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入400μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例1制作的试纸用于检测肌钙蛋白I。
实施例2
1)量取50μl 0.1MPB(ph6.8)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入40μl的EDC溶液和20μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)3μl，吹打均匀，活化30min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取α-HCG抗体1.3μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应过夜(24小时)。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液50μl，吹打均匀，淬灭45min。
4)加入封闭液5％的BSA溶液20μl，封闭30min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，60min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入400μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例2制备的试纸用于检测人绒毛膜促性腺激素。
实施例3
1)量取55μl 0.1MPB(ph8.0)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入45μl的EDC溶液和25μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)4μl，吹打均匀，活化40min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取肌钙蛋白抗体、肌红蛋白抗体、肌酸激酶同工酶抗体、，每种抗体2μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应30小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液55μl，吹打均匀，淬灭50min。
4)加入封闭液6％的BSA溶液25μl，封闭35min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数15000r/min，6℃，65min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入450μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例3制备的试纸可用于同时检测肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶。
实施例4
1)量取60μl 0.1MPB(ph7.5)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入50μl的EDC溶液和30μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)5μl，吹打均匀，活化55min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取人血清淀粉样蛋白A抗体5μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应31小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液60μl，吹打均匀，淬灭55min。
4)加入封闭液7％的BSA溶液30μl，封闭40min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，80min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入500μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例4制备的试纸可用于检测人血清淀粉样蛋白A。
实施例5
1)量取60μl 0.1MPB(ph7.5)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入50μl的EDC溶液和30μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)5μl，吹打均匀，活化55min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取降钙素原抗体5μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应31小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液60μl，吹打均匀，淬灭55min。
4)加入封闭液7％的BSA溶液30μl，封闭40min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，80min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入500μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例5制备的试纸可用于检测降钙素原。
实施例6
1)量取60μl 0.1MPB(ph7.5)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入50μl的EDC溶液和30μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)5μl，吹打均匀，活化55min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取C反应蛋白抗体5μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应31小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液60μl，吹打均匀，淬灭55min。
4)加入封闭液7％的BSA溶液30μl，封闭40min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，80min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入500μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例6制备的试纸可用于同时检测C反应蛋白。
实施例7
1)量取60μl 0.1MPB(ph7.5)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入50μl的EDC溶液和30μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)5μl，吹打均匀，活化55min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取叶酸抗体5μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应31小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液60μl，吹打均匀，淬灭55min。
4)加入封闭液7％的BSA溶液30μl，封闭40min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，80min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入500μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例7制备的试纸可用于检测叶酸。
实施例8
1)量取60μl 0.1MPB(ph7.5)缓冲液至1.5ml的离心管中，另加入50μl的EDC溶液和30μl的NHS溶液，吹打均匀。
量取(水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基)5μl，吹打均匀，活化55min，活化温度为40℃。
2)活化完成后，量取维生素D抗体5μl，加入至离心管中，吹打均匀，常温反应31小时。
3)加入淬灭液甘氨酸溶液60μl，吹打均匀，淬灭55min。
4)加入封闭液7％的BSA溶液30μl，封闭40min。
5)封闭结束，将离心管放入离心机中，离心参数20000r/min，4℃，80min。
6)取出离心管，弃去上层清液，另加入500μl的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，可用于后续试纸的制作。
上述实施例8制备的试纸可用于检测维生素D。
本发明将上述实施例1-8检测结果进行汇总，详情参见表1。
表1
由表1可以看出，本发明制备的试纸灵敏度达到了纳克级，远优于现有技术中的微克级；而且本发明可以检测多个不同生物分子，量子点材料用量少，检测时间短。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，包括以下步骤：
1)量取PB缓冲液加至离心管中，另外加入30-50ul的EDC溶液和10-30ul的NHS溶液，吹打均匀；然后再量取量子点材料1-5ul，吹打均匀，进行活化；
2)所述步骤1)活化完成后，量取标记抗体1-5ul，加入步骤1)中的离心管，吹打均匀，反应时间为10-36h；
3)在所述步骤2)反应结束后，加入淬灭液甘氨酸溶液30-60ul，吹打均匀，淬灭30-60min；
4)在所述步骤3)反应结束后，再加入封闭液10-30ul，封闭20-40min；
5)所述步骤4)封闭结束后，将离心管放入离心机中离心；
6)将所述步骤5)中离心结束的离心管取出，弃去上层清液，另加入200-500ul的复溶液，吹打均匀，即得标记溶液，最后通过传统方法再进行制备快诊试纸。
2.根据权利要求1所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤1)中的量子点材料为水溶性CdSe/Cds/ZnS QDs羧基。
3.根据权利要求1所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤1)中的抗体为肌钙蛋白I抗体、α-HCG抗体、肌红蛋白抗体、肌酸激酶同工酶抗体、降钙素原抗体、人血清淀粉样蛋白A抗体、C反应蛋白抗体、叶酸抗体、维生素D抗体中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤1)中的PB溶液pH值为6.8-8.0。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤4)中的封闭液为质量分数1-10％的BSA。
6.根据权利要求5所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤5)中的离心参数为：离心转数为10000-20000r/min，离心温度为2-8℃，时间为40-80min。
7.根据权利要求5所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤1)中加入的PB缓冲液浓度为0.05-0.3M，用量为30-60ul。
8.根据权利要求5所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤1)中活化时间为10-60min，活化温度为35-40℃。
9.根据权利要求1任一项所述的一种量子点快诊试纸的制备，其特征在于，所述步骤6)中的复溶液为0.1-0.3M的PB缓冲液，其中包含甘氨酸0.1-1.0％，牛血清白蛋白0.1-1.0％，柠檬酸三钠0.1-1.0％，聚乙烯吡咯烷酮K300.01-0.1％，蔗糖2-10％，吐温200.1-0.5％，叠氮钠0.1-1.0％。
10.一种由权利要求1-9任一项所述的方法所制备的快诊试纸在检测肌钙蛋白、人绒毛膜促性腺激素、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、降钙素原、人血清淀粉样蛋白A、C反应蛋白、叶酸、维生素D中的应用。
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