CN108949875A - 一种元宝枫籽活性肽的制备方法 - Google Patents

一种元宝枫籽活性肽的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及活性肽的制备,公开了一种元宝枫籽活性肽的制备方法,该方法包含以下步骤:1)过筛;2)超声辅助提取;3)酸沉;4)水洗分散;5)干燥;6)酶解:称取元宝枫籽分离蛋白,加入蒸馏水和Alcalase蛋白酶,水解后,加热钝化蛋白酶,即得元宝枫籽活性肽。本发明通过超声辅助浸提,提取元宝枫籽分离蛋白,利用Alcalase蛋白酶对元宝枫籽蛋白进行水解制备元宝枫籽活性肽,该提取方法简单,工艺成熟,适于工业实际生产,能够短时间提取元宝枫籽活性肽,蛋白提取率可达65%以上,所得元宝枫籽活性肽的水解度(DH)高达78.35%,适于用于食品、保健品等。

Description

一种元宝枫籽活性肽的制备方法
技术领域
本发明涉及活性肽的制备,尤其涉及一种元宝枫籽活性肽的制备方法。
背景技术
元宝枫籽颗粒大,含油量高,含油量为48%,机榨出油率35%,高于油菜籽出油率。元宝枫是以含油酸和亚油酸的半干性油,其中必需脂肪酸——亚油酸和亚麻酸高达53%,油质优良,是食用植物油中不多见的,因此元宝枫籽油利用较多,但是元宝枫籽中的蛋白质却较少被利用,元宝枫籽含蛋白质25%-27%,不含淀粉,在植物种子种是鲜见的。种仁提取油后,油粕是很好的食用蛋白质。据测定,元宝树蛋白质中含有9种人体必需的氨基酸,属完全蛋白质,制取的优质食物味道鲜美,是理想的蛋白质资源,已经越来越为人们所重视。
但是近年来科学研究发现,人类摄取蛋白质经消化酶作用后,并非主要以氨基酸的形式吸收,而是以肽的形式吸收,一些肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质,同时具有多种生理功能,如改善和提高矿物质运输和吸收、抗菌和病毒、提高免疫力、抗氧化、降胆固醇、抗癌作用,清除自由基抗衰老以及抗高血压和高血脂等。而元宝枫籽活性肽的制备还未见报道。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种元宝枫籽活性肽的制备方法,通过超声辅助浸提和酶解,并严格调节各个步骤的提取参数,能够短时间提取元宝枫籽活性肽,蛋白提取率可达65%以上,水解度可达78%以上。
本发明的具体技术方案为:该方法包含以下步骤:
1)过筛:将脱脂元宝枫籽粕粉碎,过100-180目筛;
2)超声辅助提取:取筛下物,加入蒸馏水,用lmol/L NaOH调节到预定pH,然后放入超声波仪器中提取,将超声后的混合物离心分离,收集上清液;
3)酸沉:用1mol/L HCl调节上清液到pH=4.5,离心后倒去上清液,得到元宝枫籽蛋白凝乳;
4)水洗分散:对元宝枫籽蛋白凝乳进行水洗后,将其分散在去离子水中,调节至pH=7.0;
5)干燥:将蛋白分散液粉碎、均质,经冷冻干燥后制得元宝枫籽分离蛋白;
6)酶解:称取元宝枫籽分离蛋白,加入蒸馏水和Alcalase蛋白酶,水解后,加热钝化蛋白酶,即得元宝枫籽活性肽。
采用超声辅助提取元宝枫籽分离蛋白,能够使元宝枫籽分离蛋白最大限度的析出,提高元宝枫籽分离蛋白提取率,加快提取速率。pH值对于蛋白质提取效率影响极大,随pH增加,蛋白质提取率增加,但是到达一定pH值后,提取率反而下降,因此提取时采用NaOH调节pH值至预定pH,提取效率最佳。提取后,调节pH=4.5,为元宝枫籽分离蛋白的蛋白质等电点,因此蛋白质大量沉淀,简单离心即可分离。
作为优选,所述步骤6)中酶解的具体方法为:准确称取元宝枫籽分离蛋白,加入蒸馏水至蛋白完全溶解,然后加入反应器搅拌至均质,并加热至反应温度,用0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl调节酸碱度,准确量取Alcalase蛋白酶加入水解反应器中,反应过程中及时滴加0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl,使pH值稳定,并使温度始终保持不变,水解后,即用0.5mol/L的HCl调节pH值至4.3,停止搅拌,移出反应器,迅速升温到90℃,加热15min,钝化蛋白酶。
作为优选,所述酶解反应温度为55-60℃,酶解pH=8.8-9.2,底物浓度8-10wt%,酶质量分数6-7wt%,水解时间 2-3h。
随着温度的升高,蛋白水解度DH增大,但是温度高于一定温度,DH下降。pH值对元宝枫籽分离蛋白水解的影响较大。底物浓度对DH影响也很大,而且底物浓度还影响酶的添加量,水解时间也影响DH,综合考虑多种因素,确定了最适的酶解方法及相关参数。
作为优选,所述步骤2)中筛下物和蒸馏水的料液比为1:28-32。
作为优选,所述步骤2)中预定pH=9.5。
作为优选,所述步骤2)中超声功率为360W以上,超声时间为50-70min,超声温度为35-45℃。
温度过高蛋白质易变性,温度过低,提取效果差,提取时间长,在35-45℃时,综合效果最佳。
作为优选,所述步骤2)中离心转速为3400r/min,离心时间为10-20min。
作为优选,所述步骤3)中离心转速为3400r/min,离心时间为25-35min。
作为优选,所述步骤4)中水洗重复1-2次。
作为优选,所述步骤5)中采用均质机均质,均质机压力为10MPa。
与现有技术对比,本发明的有益效果是:本发明通过超声辅助浸提,提取元宝枫籽分离蛋白,利用Alcalase蛋白酶对元宝枫籽蛋白进行水解制备元宝枫籽活性肽,该提取方法简单,工艺成熟,适于工业实际生产,能够短时间提取元宝枫籽活性肽,蛋白提取率可达65%以上,所得元宝枫籽活性肽的水解度(DH)高达78.35%,适于用于食品、保健品等。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
将脱脂元宝枫籽粕粉碎,过100目筛,取筛下物,加入筛下物按料液比1:30加入蒸馏水,用l mol/L NaOH调节到pH=9.5,放入超声波仪器中提取,超声功率为360W,超声时间为60min,超声温度为35℃。将混合物倒入离心管,在3400r/min下离心15min,收集上清液。用1mol/L HCl调节上清液到蛋白等电点pH=4.5,在3400r/min下离心30min,倒去上清液,得到元宝枫籽蛋白凝乳。对凝乳进行二次水洗后,将其分散在去离子水中,调节至pH=7.0,胶体磨粉碎、均质机均质后的蛋白分散液经冷冻干燥制得亚麻籽分离蛋白,均质机压力为10MPa,所得蛋白提取率为65.45%。
按8%的底物浓度准确称取元宝枫籽分离蛋白,加入适量蒸馏水,然后加入反应器搅拌至均质加热至55℃,用0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L 的HCl调节酸碱度至pH9.0,依据所用酶的活力,准确量取6% Alcalase蛋白酶加入水解反应器中,反应过程中及时滴加0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl,使pH值稳定在pH 9.0,并使温度始终保持在55℃。水解2.0h,即用0.5mol/L的HCl 调节至pH 4.3,停止搅拌,移出反应器,迅速升温到90℃,加热15min,钝化蛋白酶。记录水解过程中各时段消耗的碱液量,采用 pHstat 法计算水解度DH为75.24%。
实施例2
将脱脂元宝枫籽粕粉碎,过180目筛,取筛下物,加入筛下物按料液比1:32加入蒸馏水,用l mol/L NaOH调节到pH=9.5,放入超声波仪器中提取,超声功率为500W,超声时间为50min,超声温度为40℃。将混合物倒入离心管,在3400r/min下离心15min,收集上清液。用1mol/L HCl调节上清液到蛋白等电点pH=4.5,在3400r/min下离心30min,倒去上清液,得到元宝枫籽蛋白凝乳。对凝乳进行一次水洗后,将其分散在去离子水中,调节至pH=7.0,胶体磨粉碎、均质机均质后的蛋白分散液经冷冻干燥制得亚麻籽分离蛋白,均质机压力为10MPa,所得蛋白提取率为62.49%。
按10%的底物浓度准确称取元宝枫籽分离蛋白,加入适量蒸馏水,然后加入反应器搅拌至均质加热至57℃,用0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L 的HCl调节酸碱度至pH8.8,依据所用酶的活力,准确量取7% Alcalase蛋白酶加入水解反应器中,反应过程中及时滴加0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl,使pH值稳定在pH 8.8,并使温度始终保持在57℃。水解3.0h,即用0.5mol/L的HCl 调节至pH 4.3,停止搅拌,移出反应器,迅速升温到90℃,加热15min,钝化蛋白酶。记录水解过程中各时段消耗的碱液量,采用 pHstat 法计算水解度DH为78.35%。
实施例3
将脱脂元宝枫籽粕粉碎,过160目筛,取筛下物,加入筛下物按料液比1:28加入蒸馏水,用l mol/L NaOH调节到pH=9.5,放入超声波仪器中提取,超声功率为400W,超声时间为70min,超声温度为45℃。将混合物倒入离心管,在3400r/min下离心15min,收集上清液。用1mol/L HCl调节上清液到蛋白等电点pH=4.5,在3400r/min下离心30min,倒去上清液,得到元宝枫籽蛋白凝乳。对凝乳进行二次水洗后,将其分散在去离子水中,调节至pH=7.0,胶体磨粉碎、均质机均质后的蛋白分散液经冷冻干燥制得亚麻籽分离蛋白,均质机压力为10MPa,所得蛋白提取率为64.11%。
按9%的底物浓度准确称取元宝枫籽分离蛋白,加入适量蒸馏水,然后加入反应器搅拌至均质加热至60℃,用0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L 的HCl调节酸碱度至pH9.2,依据所用酶的活力,准确量取6.5% Alcalase蛋白酶加入水解反应器中,反应过程中及时滴加0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl,使pH值稳定在pH 9.2,并使温度始终保持在60℃。水解2.5h,即用0.5mol/L的HCl 调节至pH 4.3,停止搅拌,移出反应器,迅速升温到90℃,加热15min,钝化蛋白酶。记录水解过程中各时段消耗的碱液量,采用 pHstat 法计算水解度DH为76.59%。
本发明中所用原料、设备,若无特别说明,均为本领域的常用原料、设备;本发明中所用方法,若无特别说明,均为本领域的常规方法。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何限制,凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换,均仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于:该方法包含以下步骤:
1)过筛:将脱脂元宝枫籽粕粉碎,过100-180目筛;
2)超声辅助提取:取筛下物,加入蒸馏水,用lmol/L NaOH调节到预定pH,然后放入超声波仪器中提取,将超声后的混合物离心分离,收集上清液;
3)酸沉:用1mol/L HCl调节上清液到pH=4.5,离心后倒去上清液,得到元宝枫籽蛋白凝乳;
4)水洗分散:对元宝枫籽蛋白凝乳进行水洗后,将其分散在去离子水中,调节至pH=7.0;
5)干燥:将蛋白分散液粉碎、均质,经冷冻干燥后制得元宝枫籽分离蛋白;
6)酶解:称取元宝枫籽分离蛋白,加入蒸馏水和Alcalase蛋白酶,水解后,加热钝化蛋白酶,即得元宝枫籽活性肽。
2.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤6)中酶解的具体方法为:准确称取元宝枫籽分离蛋白,加入蒸馏水至蛋白完全溶解,然后加入反应器搅拌至均质,并加热至反应温度,用0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl调节酸碱度,准确量取Alcalase蛋白酶加入水解反应器中,反应过程中及时滴加0.5mol/L的NaOH和0.5mol/L的HCl,使pH值稳定,并使温度始终保持不变,水解后,即用0.5mol/L的HCl调节pH值至4.3,停止搅拌,移出反应器,迅速升温到90℃,加热15min,钝化蛋白酶。
3.如权利要求2所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述酶解反应温度为55-60℃,酶解pH=8.8-9.2,底物浓度8-10wt%,酶质量分数6-7wt%,水解时间 2-3h。
4.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中筛下物和蒸馏水的料液比为1:28-32。
5.如权利要求1或4所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中预定pH=9.5。
6.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中超声功率为360W以上,超声时间为50-70min,超声温度为35-45℃。
7.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中离心转速为3400r/min,离心时间为10-20min。
8.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤3)中离心转速为3400r/min,离心时间为25-35min。
9.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤4)中水洗重复1-2次。
10.如权利要求1所述的元宝枫籽活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤5)中采用均质机均质,均质机压力为10MPa。
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