CN108904572A - 一种金银花黄酮的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于天然药物提取技术领域，具体公开了一种金银花黄酮的提取方法。本发明金银花黄酮的提取方法包括以下步骤：(1)金银花处理：将金银花粉碎过筛，得金银花粉；(2)第一次提取：以乙醇为溶剂，采用超声波进行提取；(3)第二次提取：以乙醇和丙酮为溶剂，进行加压处理后，采用超声波进行提取；(4)第三次提取：以乙醇和丙酮为溶剂，加压浸提；(5)萃取纯化。本发明金银花黄酮的提取方法通过采用改变溶剂组成以及具体提取方法对金银花进行了三次提取，有效提升了金银花黄酮的得率，同时，提取得到的金银花黄酮纯度高，提取效果好。

Description

一种金银花黄酮的提取方法
【技术领域】
本发明涉及天然药物提取技术领域，具体涉及一种金银花黄酮的提取方法。
【背景技术】
金银花是忍冬科植物忍冬的花，初开为白色，而后转为黄色，所以得名金银花，其为重要的药食同源植物，具有清热解毒、抗菌抗病毒、抗过敏、降糖降脂、抗氧化和抗肿瘤等作用。金银花的功能性能分主要有黄酮类、有机酸、挥发油和三萜皂苷类等。
其中，金银花的黄酮类成分具有抗炎、抗自由基氧化、改善衰老、增强免疫等药理活性，是金银花主要的活性成分。因此，提供一种高效的金银花黄酮提取方法对于后续金银花黄酮类物质的应用研究和提高金银花的价值均具有重要的意义。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种金银花黄酮的提取方法。本发明金银花黄酮的提取方法通过采用改变溶剂组成以及具体提取方法对金银花进行了三次提取，有效提升了金银花黄酮的得率，同时，提取得到的金银花黄酮纯度高，提取效果好。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种金银花黄酮的提取方法，包括以下步骤：
(1)金银花处理：将金银花粉碎至过20目筛，得金银花粉；
(2)第一次提取：将上述金银花粉和乙醇按体积比1:15-20混合搅拌至均匀后，采用超声波提取20-25min，然后过滤，得第一提取液和第一滤渣；
(3)第二次提取：将上述第一滤渣和乙醇、丙酮按体积比1:10-15:3-5混合搅拌至均匀后，先于1-1.5MPa的压力下处理5-10min，然后再采用超声波提取10-15min，最后过滤，得第二提取液和第二滤渣；
(4)第三次提取：将上述第二滤渣和乙醇、丙酮按体积比1:6-10:6-10混合搅拌至均匀后，于1-2MPa的压力和60-65℃的温度下提取15-20min，然后过滤得第三提取液和第三滤渣；
(5)萃取纯化：将上述第一提取液、第二提取液和第三提取液混合得总提取液，将所述总提取液进行离心后，分离得上清液；将所述上清液和乙酸乙酯按体积比1:1混合萃取4-5次后，合并萃取液，将合并后的萃取液减压干燥得萃取物；将所述萃取物溶解后，通过大孔吸附树脂纯化，最后真空冷冻干燥，即可得到所述金银花黄酮。
进一步的，步骤(2)或(3)中，所述超声波提取的功率为100-120W、温度为50-55℃。
进一步的，步骤(2)、(3)或(4)中，所述乙醇的浓度为50-60％。
进一步的，步骤(3)或(4)中，所述丙酮的浓度为40-50％。
进一步的，步骤(5)中，所述离心的转速为5500-6000r/min、时间为10-15min。
进一步的，步骤(5)中，所述真空冷冻干燥的温度-50～-60℃、压力为0.05-0.06MPa。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
黄酮类化合物易溶于乙醇、甲醇和丙酮等有机溶剂中，先采用乙醇作为溶剂，在超声波的辅助下进行一次提取，可从金银花细胞中有效提出大部分的黄酮类化合物；然后再采用乙醇和丙酮作为复合溶剂，加压处理进一步破坏金银花的细胞，再一次采用超声波处理使金银花细胞组织大量破裂，使得细胞内残留的黄酮类物质被提取出来，最后改变乙醇和丙酮的比例作为复合溶剂，加压加热进行第三次提取，促使了金银花中基本完全破裂的细胞上的黄酮类化合物的溶出。综上，上述三次提取结合，一步步将金银花中的黄酮类化合物进行提取，提取物中的总黄酮得率高，达到19.54％以上，其中，第一次提取的得率占总黄酮得率的60-65％，第二次提取的得率占总黄酮得率的25-30％，第三次提取的得率占总黄酮得率的10-15％，而再对第三滤渣进行提取，总黄酮得率基本不变，增加量不超过0.5％，反而会增加提取成本。
【具体实施方式】
下面将结合具体实施例来对本发明作进一步的说明。
下面将结合具体实施例来对本发明作进一步的说明。
1.本发明所涉及的材料具体来源如下：
金银花：产自广西，购于广西南宁一中药市场；
乙醇和丙酮：均为国产分析纯试剂，购于天津市致远化学试剂有限公司。
2.所使用的仪器型号如下：KQ100-DE型超声波清洗器；UV-7504型紫外可见分光光度计；FD-1A-50小型台式真空冷冻干燥机；WF-20中草药粉碎机。
实施例1
一种金银花黄酮的提取方法，包括以下步骤：
(1)金银花处理：将金银花粉碎至过20目筛，得金银花粉；
(2)第一次提取：将上述金银花粉和浓度为50％的乙醇按体积比1:15混合搅拌至均匀后，采用功率为100W的超声波于50℃下提取20min，然后过滤，得第一提取液和第一滤渣；
(3)第二次提取：将上述第一滤渣和50％的乙醇、浓度为40％的丙酮按体积比1:10:3混合搅拌至均匀后，先于1MPa的压力下处理5min，然后再采用功率为100W的超声波于50℃下提取10min，最后过滤，得第二提取液和第二滤渣；
(4)第三次提取：将上述第二滤渣和50％的乙醇、浓度为40％的丙酮按体积比1:6:6混合搅拌至均匀后，于1MPa的压力和60℃的温度下提取15min，然后过滤得第三提取液和第三滤渣；
(5)萃取纯化：将上述第一提取液、第二提取液和第三提取液混合得总提取液，将所述总提取液于5500r/min的转速下离心10min后，分离得上清液；将所述上清液和乙酸乙酯按体积比1:1混合萃取4次后，合并萃取液，将合并后的萃取液减压干燥得萃取物；将所述萃取物溶解后，通过大孔吸附树脂纯化，最后于-50℃的温度和0.05MPa的压力下真空冷冻干燥，即可得到所述金银花黄酮。
实施例2
一种金银花黄酮的提取方法，包括以下步骤：
(1)金银花处理：将金银花粉碎至过20目筛，得金银花粉；
(2)第一次提取：将上述金银花粉和浓度为55％的乙醇按体积比1:18混合搅拌至均匀后，采用功率为110W的超声波于52℃下提取23min，然后过滤，得第一提取液和第一滤渣；
(3)第二次提取：将上述第一滤渣和55％的乙醇、浓度为45％的丙酮按体积比1:12:4混合搅拌至均匀后，先于1.3MPa的压力下处理8min，然后再采用功率为110W的超声波于53℃下提取13min，最后过滤，得第二提取液和第二滤渣；
(4)第三次提取：将上述第二滤渣和55％的乙醇、浓度为45％的丙酮按体积比1:8:8混合搅拌至均匀后，于1.5MPa的压力和63℃的温度下提取18min，然后过滤得第三提取液和第三滤渣；
(5)萃取纯化：将上述第一提取液、第二提取液和第三提取液混合得总提取液，将所述总提取液于5800r/min的转速下离心13min后，分离得上清液；将所述上清液和乙酸乙酯按体积比1:1混合萃取5次后，合并萃取液，将合并后的萃取液减压干燥得萃取物；将所述萃取物溶解后，通过大孔吸附树脂纯化，最后于-55℃的温度和0.055MPa的压力下真空冷冻干燥，即可得到所述金银花黄酮。
实施例3
一种金银花黄酮的提取方法，包括以下步骤：
(1)金银花处理：将金银花粉碎至过20目筛，得金银花粉；
(2)第一次提取：将上述金银花粉和浓度为60％的乙醇按体积比1:20混合搅拌至均匀后，采用功率为120W的超声波于55℃下提取25min，然后过滤，得第一提取液和第一滤渣；
(3)第二次提取：将上述第一滤渣和60％的乙醇、浓度为50％的丙酮按体积比1:15:5混合搅拌至均匀后，先于1.5MPa的压力下处理10min，然后再采用功率为120W的超声波于55℃下提取15min，最后过滤，得第二提取液和第二滤渣；
(4)第三次提取：将上述第二滤渣和60％的乙醇、浓度为50％的丙酮按体积比1:10:10混合搅拌至均匀后，于2MPa的压力和65℃的温度下提取20min，然后过滤得第三提取液和第三滤渣；
(5)萃取纯化：将上述第一提取液、第二提取液和第三提取液混合得总提取液，将所述总提取液于6000r/min的转速下离心15min后，分离得上清液；将所述上清液和乙酸乙酯按体积比1:1混合萃取5次后，合并萃取液，将合并后的萃取液减压干燥得萃取物；将所述萃取物溶解后，通过大孔吸附树脂纯化，最后于-60℃的温度和0.06MPa的压力下真空冷冻干燥，即可得到所述金银花黄酮。
效果验证：
1.实验对象：
实验组1-3：本发明实施例1-3中提取得到的金银花黄酮；
对照组1：仅采用本发明第一次提取的方法重复进行3次提取得到的金银花黄酮；
对照组2：仅采用本发明第二次提取的方法重复进行3次提取得到的金银花黄酮；
对照组3：仅采用本发明第三次提取的方法重复进行3次提取得到的金银花黄酮；
对照组4：仅采用本发明第一次提取的方法(且溶剂由乙醇替换成丙酮)重复进行3次提取得到的金银花黄酮。
2.测定方法：采用NaNO2-Al(NO3)3比色法，在波长510nm下绘制芦丁标准曲线并线性回归得方程。分别取以上各组的金银花黄酮溶于95％的乙醇中并用蒸馏水定容后得提取液样品，将各组提取液样品在同样的条件下进行显色并测试，然后代入回归方程，即可计算得到各组金银花黄酮中的实际总黄酮量，进而计算得到提取得到的总黄酮得率和纯度(即实际测得的黄酮的量占提取得到的金银花黄酮的比例)，结果见表1：
表1各组提取方法提取得到的金银花总黄酮得率以及纯度
组别 总黄酮得率(％) 纯度(％)
实验组1 19.54 88.9
实验组2 20.03 87.6
实验组3 19.82 88.3
对照组1 15.33 81.4
对照组2 12.54 84.5
对照组3 15.95 83.1
对照组4 10.07 78.7
由表1可知，实验组1-3的金银花总黄酮得率和纯度明显高于对照组1-4，说明本发明的三次提取结合可有效提升金银花中黄酮类化合物的提取率以及提取纯度，提取效果好。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (6)

1.一种金银花黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)金银花处理：将金银花粉碎至过20目筛，得金银花粉；
(2)第一次提取：将上述金银花粉和乙醇按体积比1:15-20混合搅拌至均匀后，采用超声波提取20-25min，然后过滤，得第一提取液和第一滤渣；
(3)第二次提取：将上述第一滤渣和乙醇、丙酮按体积比1:10-15:3-5混合搅拌至均匀后，先于1-1.5MPa的压力下处理5-10min，然后再采用超声波提取10-15min，最后过滤，得第二提取液和第二滤渣；
(4)第三次提取：将上述第二滤渣和乙醇、丙酮按体积比1:6-10:6-10混合搅拌至均匀后，于1-2MPa的压力和60-65℃的温度下提取15-20min，然后过滤得第三提取液和第三滤渣；
(5)萃取纯化：将上述第一提取液、第二提取液和第三提取液混合得总提取液，将所述总提取液进行离心后，分离得上清液；将所述上清液和乙酸乙酯按体积比1:1混合萃取4-5次后，合并萃取液，将合并后的萃取液减压干燥得萃取物；将所述萃取物溶解后，通过大孔吸附树脂纯化，最后真空冷冻干燥，即可得到所述金银花黄酮。
2.根据权利要求1所述一种金银花黄酮的提取方法，其特征在于，步骤(2)或(3)中，所述超声波提取的功率为100-120W、温度为50-55℃。
3.根据权利要求1所述一种金银花黄酮的提取方法，其特征在于，步骤(2)、(3)或(4)中，所述乙醇的浓度为50-60％。
4.根据权利要求1所述一种金银花黄酮的提取方法，其特征在于，步骤(3)或(4)中，所述丙酮的浓度为40-50％。
5.根据权利要求1所述一种金银花黄酮的提取方法，其特征在于，步骤(5)中，所述离心的转速为5500-6000r/min、时间为10-15min。
6.根据权利要求1所述一种金银花黄酮的提取方法，其特征在于，步骤(5)中，所述真空冷冻干燥的温度-50～-60℃、压力为0.05-0.06MPa。
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