CN108903049B - 一种使用生物技术醇化发酵“清甜香”型烤烟烟叶的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于轻工业烟草领域，具体涉及一种在烤烟烟叶醇化发酵过程中运用生物技术添加烟叶醇化发酵有益菌株降低烤烟烟叶醇化发酵时间，提升烟叶醇厚感、柔和感、吃味，降低烧口感、青杂气味的方法。该方法通过对醇化发酵的烟叶添加筛选出的烟叶醇化增香提质发酵有益的微生物，分段控制醇化发酵过程中的温度、湿度等条件，最总醇化后的烟叶总糖提升到37.42%，含氮量下降到1.56%，品吸评价结果：烟叶香气提升，回甜提升，生青杂气改善，余味清爽，烟气柔和，气味醇厚，增香提质效果显著。

Description

一种使用生物技术醇化发酵“清甜香”型烤烟烟叶的方法

技术领域

本发明属于轻工烟草领域，具体为一种使用生物技术醇化发酵“清甜香”型烤烟烟叶的方法。

背景技术

烟草的醇化发酵是烤烟加工制作过程中最为核心、重要的一个步骤，它决定了一款烟草的品质，良好的发酵工艺可以极大改善提高烟叶的质量。未经发酵的烟草，生青杂气与刺激性气味最为突出，没有发酵烟草的特征香气，香气质单调，香气量不足，不能直接用来生产。通过发酵处理后，烟草青杂气和刺激性下降，烟草香气显露，因此烟叶必须经过发酵处理才能用于生产。目前烟草发酵技术主要是：自然发酵是将烟叶贮存很长的一段时间(2-3年)，在自然条件下陈化烟草，使烟叶中的大分子物质分解，香型物质合成。简单的控制发酵温度和空气湿度，防止烟叶的病变虫害等。但是上述方法都存在着时间过长、可控性差等问题，烟叶质量无法得到保障；应此利用自然界的微生物，在烟叶发酵过程中使用生物技术增香提质，将是对目前烟草醇化发酵的一个新的突破口，将会对产品质量提升，烟草制造的成本，烟草生产工艺革新带来新的机遇。

发明内容

本发明的目的是针对现有烟草醇化发酵技术不成熟，提供一种生物技术方法，在烟草醇化发酵的过程中添加喷撒烟草醇化发酵有益的增香提质微生物，控制发酵的温湿度等条件达到烟叶醇化发酵增香提质减少醇化发酵时间的目的。

为了实现上述目的，本发明的具体技术方案为：

一种使用生物技术醇化发酵“清甜香”型烤烟烟叶的方法，该方法包括以下步骤：

1.从四川省微生物资源平台菌种保藏中心购买菌株号为sicc 1.2583的霍氏肠杆菌作为烟叶醇化发酵增香提质菌剂：

1.1勾取一环菌株号为sicc 1.2583的霍氏肠杆菌作为烟叶增香提质菌株在一级种子液中(LB培养基，PH＝7.4)中进行旋转式摇床培育24h，温度控制为37℃，旋转式摇床转速为220r/min。

1.2按10％的接种量(接种量是指移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例)将一级种子液接种到二级种子液中(LB烟汁培养基)温度37℃，旋转式摇床转速220r/min，培养24h。LB烟汁培养基的配方为：云85干烟叶浸泡液(超纯水与烟叶的质量比＝5:1)600ml，云85烟梗浸泡液(超纯水与烟梗的质量比＝2:1)400ml，蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母膏5g。

2.其次进行“清甜香”型烤烟烟叶发酵

2.1把待醇化发酵的“清甜香”型烤烟烟叶做烘干处理，使其水分质量含量下降至10％～13％左右，保证醇化发酵过程烟叶发酵烟叶水分含量。

2.2在洁净的环境中将培养好的二级种子液按照烟叶重量的5％的用喷洒接种到烘干好的烟叶上，充分振荡搅拌混匀，装入用PVC薄膜做内包装封入纸箱内开始发酵。

2.3发酵第一阶段：室温升温至37℃，发酵七日，湿度65±5％；

发酵第二阶段：37℃升温至40℃，发酵一个月，湿度65±5％；

发酵第三阶段：40℃降温至30℃，发酵二个月，湿度60±5％；

发酵第四阶段降温至25℃，发酵三个月，湿度50～60％。

2.4.发酵过程中每隔1～2天，检查发酵醇化烟叶霉菌感染情况烟叶水分含量等。使用快速水分检测仪，测定烟叶水分含量，将烟叶水分含量控制在10％～13％左右，水分过高降低发酵室湿度，水分过低提升发酵室温度。同时预防发酵室的鼠害，做好除虫害措施，直到烟叶醇化发酵完成开始使用。

本发明的积极效果为：

(一)生物技术醇化发酵烟草，可明显缩短发酵的周期，可控、具有方向性的提升烟草品质，控制烟草中的有害物质如焦油、亚硝酸盐等使烟草更加安全可靠，同时提高烟草的口感吃味、消除烧口感青杂气味，使之更加柔顺、醇厚，达到增香提质的目的，同时提高烟草产业的科技附加值，有着巨大的研究价值和市场前景。

(二)该方法通过我院在烟草上筛选出的发酵有益微生物醇化发酵烟草，在发酵过程中，对温湿度的控制，优化醇化发酵控制条件，达到烟叶醇化发酵增香提质减少醇化发酵时间的目的。最终醇化发酵后的烟草经烟草品吸专家评价后得出：烟叶香气提升，回甜提升，生青杂气改善，余味清爽，烟气柔和，气味醇厚，烟草发酵时间缩短，增香提质显著。

(三)通过在“清甜香”型烤烟烟叶上使用生物技术醇化发酵烟叶，在烟叶上喷洒接种筛选的增香提质发酵有益微生物，并在发酵过程中根据微生物生在代谢原理调节醇化发酵条件湿度，温度等，使得烟叶在在可控的条件下短时间内达到增香提质的效果。

具体实施方式

一种使用生物技术醇化发酵“清甜香”型烤烟烟叶的方法，该方法包括以下步骤：

1.从四川省微生物资源平台菌种保藏中心购买菌株号为sicc 1.2583的霍氏肠杆菌作为烟叶醇化发酵增香提质菌剂：

1.1勾取一环菌株号为sicc 1.2583的霍氏肠杆菌作为烟叶增香提质菌株在一级种子液中(LB培养基，PH＝7.4)中进行旋转式摇床培育24h，温度控制为37℃，旋转式摇床转速为220r/min。

1.2按10％的接种量(接种量是指移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例)将一级种子液接种到二级种子液中(LB烟汁培养基)温度37℃，旋转式摇床转速220r/min，培养24h。LB烟汁培养基的配方为：云85干烟叶浸泡液(超纯水与烟叶的质量比＝5:1)600ml，云85烟梗浸泡液(超纯水与烟梗的质量比＝2:1)400ml，蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母膏5g。

3.其次进行“清甜香”型烤烟烟叶发酵

2.1把待醇化发酵的“清甜香”型烤烟烟叶做烘干处理，使其水分质量含量下降至10％～13％左右，保证醇化发酵过程烟叶发酵烟叶水分含量。

2.2在洁净的环境中将培养好的二级种子液按照烟叶重量的5％的用喷洒接种到烘干好的烟叶上，充分振荡搅拌混匀，装入用PVC薄膜做内包装封入纸箱内开始发酵。

2.3发酵第一阶段：室温升温至37℃，发酵七日，湿度65±5％；

发酵第二阶段：37℃升温至40℃，发酵一个月，湿度65±5％；

发酵第三阶段：40℃降温至30℃，发酵二个月，湿度60±5％；

发酵第四阶段降温至25℃，发酵三个月，湿度50～60％。

2.4.发酵过程中每隔1～2天，检查发酵醇化烟叶霉菌感染情况烟叶水分含量等。使用快速水分检测仪，测定烟叶水分含量，将烟叶水分含量控制在10％～13％左右，水分过高降低发酵室湿度，水分过低提升发酵室温度。同时预防发酵室的鼠害，做好除虫害措施，直到烟叶醇化发酵完成开始使用。

为了使本发明的发明目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。

本申请中记载的％，如无特殊说明，均表示其wt％。

实施例1：

攀枝花，云85，C2F，“清甜香”型烤烟生物技术醇化发酵

1.1首先将购买于四川省微生物资源平台菌种保藏中心的菌种号sicc 1.2583烟叶增香提质菌株(Enterobacter hormaechei strain SCEH020042)作为烟叶醇化发酵增香提质菌剂；

1.2勾取一环烟叶增香提质菌株在一级种子液中(LB培养基，PH＝7.4)中，温度37℃，旋转式摇床转速220r/min，培养24h。

1.3按10％的接种量将一级种子液接种到二级种子液中(LB烟汁培养基)温度37℃，旋转式摇床转速220r/min，培养24h，OD₆₀₀大于1。

1.4把待醇化发酵的“清甜香”型烤烟烟叶做低温烘干处理，使其水分含量下降至10％，保证醇化发酵过程烟叶发酵烟叶水分含量。

1.5在洁净的环境中将培养好的二级种子液按照烟叶重量的5％的用喷洒接种到烘干好的烟叶上，充分振荡搅拌混匀，装入用PVC薄膜做内包装封入纸箱内开始发酵。

1.6发酵第一阶段，室温升温至37℃，发酵七日，湿度65％；

发酵第二阶段，37℃升温至40℃，发酵一个月，湿度65％；

发酵第三阶段，40℃降温至30℃，发酵二个月，湿度60％；

发酵第四阶段，30℃降温至25℃，发酵三个月，湿度50％；

1.7发酵过程中每隔2天，检查发酵醇化烟叶霉菌感染情况烟叶水分含量等。使用快速水分检测仪，测定烟叶水分含量，将烟叶水分含量控制在10％左右，水分过高降低发酵室湿度，水分过低提升发酵室温度。同时预防发酵室的鼠害，做好除虫害措施，直到烟叶醇化发酵完成。

1.8烟叶到达醇化发酵时间后经检测，其理化指标显示，烟叶总糖37.42％，含氮量1.56％，烟草品吸专家评价后得分最高：烟叶香气提升，回甜提升，生青杂气改善，余味清爽，烟气柔和，气味醇厚，生物发酵技术醇化烟叶方法可行的，增香提质效果显著。

对比例1：

攀枝花，云85，C2F，“清甜香”型烤烟自然醇化发酵

1)、首先将含水量13％～20％烟叶压入有内包的纸箱中密封，打包装箱。

2)待密封好的烟叶降温到室温时放入可控湿度恒温的醇化发酵室内。

3)保持醇化发酵室湿度在60％～65％，室内恒温23℃，醇化发酵6个月。

4)同时预防发酵室的鼠害，做好除虫害措施，直到烟叶醇化发酵完成。

通过6个月的自然醇化发酵烟叶，经品吸：生青杂气重、香气被掩盖、回甜不足、劲头和刺激性都较大，理化指标总糖30.63％，总氮2.21％，综合得分59，还需要长时间的醇化,不能满足烟草制品的生产。

对比例2：

攀枝花，云85，C2F，“清甜香”型烤烟生物技术醇化发酵

使用同样购买于四川省微生物资源平台菌种保藏中心的菌株号sicc 1.2582与sicc 1.2581的霍氏肠杆菌分别进行发酵，其余方法以及发酵过程控制同实施例1。

烟叶到达醇化发酵时间后经检测，其理化指标显示，菌株sicc 1.2582烟叶总糖32.31％含氮量2.01％，菌株号sicc 1.2581烟叶总糖31.76％含氮量2.28％，但烟草品吸专家评价后得出：使用菌株sicc 1.2582与sicc 1.2581发酵虽然烟草生青杂气改善，但余味不清爽，回甜不自然，烟气密实感下降较多，烟气较粗，吸食品评得分分别为58与60较低，未能达到理想增香提质效果。

对比例3：

攀枝花，云85，C2F，“清甜香”型烤烟生物技术醇化发酵

采用实施例1中同样的方法和步骤，但在发酵菌株培养接种后不使用低温烘烤的方式将发酵前的烟叶水分控制在10％～13％范围内，保持醇化发酵室湿度在60％～65％，室内恒温23℃，醇化发酵6个月。

完成醇化发酵后，理化指标显示烟叶总糖31.16％，含氮量2.33，但经品吸后得出的结果：烟草出现霉味，杂气严重，余味不清爽，品吸得分45最低，未能达到理想增香提质效果。

将实施例1，对比例1、对比例2和对比例3中方法制备得到的发酵前后“清甜香”型烤烟烟叶进行理化参数对比，具体结果见下表：

1.理化性能测试：

表一发酵前后“清甜香”型烤烟烟叶理化参数

其中，编号①为对比例1，②为实施例1，③为对比例2，④为对比例3，⑤空白对照(方法参数均同实施例1，但不添加菌剂进行发酵)

2.按照单料烟“九分制”评分要求对实施例1，对比例1，对比例2和对比例3进行评分，具体得分如下

表二发酵“清甜香”型烤烟烟叶品吸得分

中，①为对比例1，②为实施例1，③为实施例2，④为实施例3。

单料烟“九分制定”打分标准

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种使用生物技术醇化发酵“清甜香”型烤烟烟叶的方法，其特征在于包括以下步骤：

1.1挑取一环购买的霍氏肠杆菌sicc 1.2583菌种接种在一级种子液上，于恒温37℃的条件下进行摇床培养24h，摇床转速为220r/min；

1.2在二级种子液中按10％的接入量接入培养好的一级种子液，继续摇床24h，培养温度为37℃，摇床转速220r/min；

1.3把待醇化发酵的“清甜香”型烤烟烟叶做烘干处理，使其水分质量含量为10％～13％；

1.4在洁净的环境中将培养好的二级种子液按照烟叶重量的5％喷洒接种到烘干好的烟叶上，振荡搅拌混匀，用PVC薄膜做内包装封入纸箱内开始发酵；

1.5在洁净的通风发酵室内控温控湿，将烟叶醇化发酵半年，发酵步骤如下：

发酵第一阶段：室温升温至37℃，发酵七日，湿度65±5％；

发酵第二阶段：37℃升温至40℃，发酵一个月，湿度65±5％；

发酵第三阶段：40℃降温至30℃，发酵二个月，湿度60±5％；

发酵第四阶段：30℃降温至25℃，发酵三个月，湿度50～60％；

1.6发酵过程中每隔1～2天，检查发酵醇化烟叶霉菌感染情况和烟叶水分含量，并将烟叶水分含量控制在10％～13％，水分过高降低发酵室湿度，水分过低提升发酵室温度，同时预防酵室的鼠虫的侵害。