CN108865929A - 一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用 - Google Patents

一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用，该菌株的保藏编号为CGMCC No.15146，其用于制备发酵食品。本发明的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146生长速度快，LBS中14h进入稳定期，脱脂乳中6h进入稳定期，适合工业发酵；该菌株产酸快，有利于凝乳和风味物质的产生；该菌株产乙酸乙酯高，6h可产165.59μg/kg，该菌株在发酵后期可维持乙酸乙酯含量基本稳定不变。因此，本发明的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146用作发酵剂发酵食品，提升了乳制品的果香味，具有非常广泛的应用前景。

Description

一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用
技术领域
本发明属于微生物的技术领域，具体涉及一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用。
背景技术
酯类芳香物质可以赋予乳制品的特色风味，例如甜味、果香味。其中乙酸乙酯是果香风味的典型芳香物质。
酯类物质由酸和醇结合而成，通常在酸奶的储藏期得到积累，挥发出水果香气，以降低脂肪酸和胺类产生的苦味和其他异味(Güler Z.Changes in salted yoghurt duringstorage[J].International Journal of Food Science&Technology,2010,42(2):235-245.)。市售酸乳通常由新鲜牛乳经热处理并接种发酵剂等工序加工而成，根据宋继宏等人(宋继宏,王记成,其木格苏都,等.酸乳中风味物质的研究进展[J].食品研究与开发,2016,37(2):214-220)的研究发现，发酵乳的风味来源于原料乳原有风味、热处理过程产生的风味以及发酵剂发酵产生的风味三方面，其中乳酸菌的发酵作用是酸乳产生风味的主要贡献因素。另外王琴等人(王琴,朱小红,任远庆,等.不同乳酸菌及其组合发酵乳的产香特性分析[J].食品工业科技,2008(6):73-76.)研究了酸乳感官和风味物质含量的相关性，结果表明，酸乳感官受4种风味物质影响，分别为丁二醛、乙醛、丙酮和乙酸乙酯，且随着乙酸乙酯含量的升高，酸乳的感官喜好度越高。
目前研究得比较多的产酯菌株属于真菌，包括异常毕赤酵母、马克斯克鲁维酵母，广泛用于白酒、酒曲、啤酒、面包等，而国内外对产酯乳酸菌的研究较少，文献“Volatileorganic aroma compounds produced by thermophilic andmesophilicmixedstraindairy starter cultures”(Imhof RL etc.WT-Food Science and Technology,1995,28(1):78-86)中在研究单菌发酵实验时列举了各种发酵菌株的风味组成及其特征，其中保加利亚乳杆菌在38℃下经30h发酵后最高可产6.17μg/kg的乙酸乙酯。文献“类卡门贝尔奶酪的果香风味改善研究”(洪青等，2015)研究发现植物乳杆菌在奶酪长期的成熟过程中可在一定条件下增强果香味，且在奶酪成熟前期丁酸乙酯含量可达到70μg/kg。文献“乳酸菌发酵类型对老酵馒头风味特性的影响”(何晓赟等，2016)研究显示发酵乳杆菌和短乳杆菌中也存在潜在发酵面团增强果香风味的菌株，将经12h发酵后的老酵加入面团后醒发成型，其主要风味物质组成为3-甲基丁醛、乙酸乙酯、己醛、1-辛烯-3-醇、苯乙醇，其中酯类物质总含量可达到90.3μg/kg。
综上，在产乙酸乙酯的菌株中，产酯乳酸菌的种类少，乙酸乙酯产量普遍较低，其中包括保加利亚乳杆菌，而保加利亚乳杆菌是发酵乳制品中常用的一种乳酸菌，因此研究开发一种高产乙酸乙酯的保加利亚乳杆菌，以期作为发酵剂应用于乳制品发酵，以提升乳制品的果香味，是本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用。
具体地，本发明提供了一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)，其保藏编号为CGMCC No.15146。
所述德氏乳杆菌保加利亚亚种TD3菌株，已于2018年01月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，该菌株的保藏编号为：CGMCC No.15146。
另外，本发明人研究发现，德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus)CGMCC No.15146生长速度快，LBS中14h进入稳定期，脱脂乳中6h进入稳定期，适合工业发酵；该菌株产酸快，有利于凝乳和风味物质的产生；该菌株产乙酸乙酯高，6h可产165.59μg/kg，该菌株在发酵后期可维持乙酸乙酯含量基本稳定不变，表明本发明提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)CGMCC No.15146非常适合工业发酵和高产乙酸乙酯，增香快。
本发明还提供了一种菌剂，其活性成分为德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCCNo.15146。
由于本发明的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146的生长速度快和高产乙酸乙酯，其作为活性成分应用到菌剂中，使得菌剂也具有生长速度快和高产乙酸乙酯的特性。
本发明还提供了德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146在制备发酵食品中的应用。
本发明的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146属于乳酸菌的一种，在发酵过程中生成乳酸，由于德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146具有生长速度快和高产乙酸乙酯的特性，作为发酵剂发酵生成的发酵食品(乳制品、豆制品与果蔬制品)可明显地提升发酵食品的果香味。
需要进一步说明的，所述发酵食品包括酸奶、发酵乳饮料、奶酪、马奶酒和酸奶油。德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146用做发酵剂发酵生成酸奶、发酵乳饮料、奶酪、马奶酒和酸奶油，使得制成的酸奶、发酵乳饮料、奶酪、马奶酒和酸奶油产品中乙酸乙酯含量较高，具有突出的果香味。
本发明还提供了所述菌剂在制备发酵食品中的应用。由于所述菌剂中含有高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146，使得制备得到的发酵食品中乙酸乙酯的含量较高，具有突出的果香味。
本发明的有益效果为：
本发明的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146生长速度快，LBS中14h进入稳定期，脱脂乳中6h进入稳定期，适合工业发酵；该菌株产酸快，有利于凝乳和风味物质的产生；该菌株产乙酸乙酯高，6h可产165.59μg/kg，该菌株在发酵后期可维持乙酸乙酯含量基本稳定不变。因此，本发明的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146用作发酵剂发酵食品，提升了乳制品的果香味，具有非常广泛的应用前景。
生物材料保藏信息：
本发明提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)，已于2018年01月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，该菌株的保藏编号为：CGMCC No.15146。
附图说明
图1为本发明保加利亚乳杆菌CGMCC No.15146分离源样品与市售样品风味特征差异；
图2为本发明保加利亚乳杆菌CGMCC No.15146在固体LBS培养基上的形态图；
图3为本发明保加利亚乳杆菌CGMCC No.15146的镜检结果图；
图4为本发明德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146在LBS中24h内的生长情况；
图5为本发明德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146在LBS中24h内的pH变化情况；
图6为本发明德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146在脱脂乳中14h内的活菌数变化情况；
图7为本发明德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146在脱脂乳中14h内的生长速率变化情况；
图8为本发明德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146在脱脂乳中14h内的产酸能力。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明进行具体描述。
实施例1保加利亚乳杆菌分离源样品与市售样品的风味特征差异评定
(1)准备样品
将-80℃冰箱中贮藏的四川阿坝传统牦牛酸奶原样取出，置于冰上解冻，振荡混匀后取6g于气相瓶中，加入1gNaCl，并迅速拧紧气相瓶瓶盖，同时购买新鲜的市售酸奶，震荡混匀后取6g于气相瓶中，加入1gNaCl，并迅速拧紧气相瓶瓶盖，测定其挥发性风味，平行三次测定。
(2)GC-MS风味测定条件
气谱条件为：Rtx-WAX毛细管柱；柱子规格：30m×0.25mm×0.25mm，进口温度为250℃，分流比5，柱流速1mL/min，载气为氦气；程序升温：初始温度40℃，保持3min；10℃/min升温至90℃；5℃/min升温至200℃，保持5分钟。
质谱条件为：离子化方式EI，发射能量为70eV，发射电流为200μA，检测器电压为1.4kV，离子源温度250℃，接口温度230℃，四级杆温度：150℃，质荷比30-500。化合物检索结果与NIST和Varian2个标准谱库进行匹配，相似度达到80％以上确认为目的化合物。以2μl的0.05mg/ml癸酸乙酯为内标，计算各挥发性风味物质的含量。
本发明使用的样品编号、样品名称如表所示：
表1样品信息表
由图1可知，四川传统发酵酸奶的挥发性风味特征多样，传统牦牛酸奶与工业发酵的市售酸奶的差异显著。其中TD3-Y酸奶整体挥发性风味组成与市售酸奶相似，乙酸乙酯含量突出。
实施例2德氏乳杆菌保加利亚亚种的分离与鉴定
(1)制备合适的样品稀释梯度并培养
将-80℃冰箱中贮藏的四川阿坝传统牦牛酸乳甘油样品取出，置于冰上解冻。震荡混匀后取0.5mL样品加入4.5mL无菌生理盐水中，完成一次10倍稀释，振荡混匀后再从该稀释液中取出0.5mL稀释液加入4.5mL无菌生理盐水中，完成第二次10倍稀释，以此类推，直至稀释到10-6，从每个梯度的稀释液中吸取100μL，均匀涂布于LBS固体培养基平板上，平行制备两块平板，倒置，放于37℃厌氧下培养36-48h，并及时观察。
(2)划线分离与纯化
将长出菌落的平板取出后，选取单菌落明显的梯度平板，挑取不同菌落形态的菌落，进行二次划线，直至纯化出所有单菌落。
(3)革兰氏染色和过氧化氢酶实验
挑取单菌落于载玻片上，经过涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥后镜检，记录革兰氏染色结果；并挑取单菌落于载玻片上，加入3％过氧化氢溶液，观察有无气泡产生，并记录过氧化氢酶接触结果。
(4)菌种保藏
将纯化完成后的每种菌株的单菌落挑入5mL液体LBS培养基中，置于37℃厌氧下静置培养20-24h，吸取1mL菌液至保菌管中，6000rpm3min离心，去上清，加入1mL30％无菌甘油溶液，重悬，置于-80℃保存。
(5)16S rDNA序列扩增
吸取1mL菌液6000rpm 3min离心，去上清，水洗两次，得菌泥，加入SDS裂解液破碎细胞壁，再加入酚-氯仿萃取核酸DNA，12000rpm 10min离心取上清，乙醇溶液水洗两次，12000rpm 5min离心去上清，烘干，加入50μL无菌水重悬，即得菌株DNA模板。以此为模板，进行PCR扩增，流程如下：
1)扩增体系25μL：
其中模板量为1μL，Taq酶Mix为12.5μL，27F为0.5μL，1492R为0.5μL，ddH2O为10.5μL。所用引物为27F:AGA GTT TGA TCC TGG CCT CA(SEQ ID No 1)和1492R:GGT TAC CTTGTT ACG ACT T(SEQ ID No 2)。扩增片段的核苷酸序列如SEQ ID No 3所示，长度为1399bp。
2)扩增条件：
预变性温度：105℃
第一步变性：95℃7min；95℃30s
第二步退火：55℃30s
第三步延伸：72℃90s
循环次数：95℃30s，33次循环
第四步最后延伸：72℃5min
第五步保持：12℃10min
(6)琼脂糖凝胶电泳
称取80mL琼脂糖加入锥形瓶中，加入80mL 1xTAE，微波间断式加热4min，至液体澄清透明，稍稍冷却，加入2‰核酸染料，摇匀，无气泡，倒入胶板槽中，冷却40min凝固后，置于电泳槽中，排气泡，依次加入PCR扩增产物，每个孔中加入4μL PCR扩增产物，120V 30min跑胶结束后取出，置于凝胶电泳成像仪中拍照保存，记录PCR成功样品的编号，将成功的PCR产物置于-20℃冰箱中保藏。
(7)菌株序列送测与鉴定
将PCR成功的样品送到华大基因进行检测，根据华大基因反馈的序列结果，结合NCBI菌株序列数据库进行BLAST检索，选取匹配度最高的菌株信息进行结果记录。结果显示，本发明提供的菌株为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)。
该菌株的菌落特征为：该菌株在固体LBS培养基上的形态如图2所示，12h左右时菌落呈浅灰色，有光泽，边缘雪花状，透明，扁平，中等大小；40h左右时菌落呈白色，无光泽，边缘不规则，不透明，微凸起，较大。镜检结果如图3所示，于油镜下观察到的CGMCC No.15146徳氏乳杆菌保加利亚亚种的菌体呈杆状，革兰氏染色结果为紫色，即为革兰氏阳性菌。其余菌株形态学特征如表1所示。
表1
本发明使用的菌株编号、菌株名称以及分离源等菌株信息如表2所示：
表2菌株信息表
实施例3德氏乳杆菌保加利亚亚种在LBS中24h内的生长曲线
从-80℃下保藏的菌株按2％的接种量接种到5mL液体LBS培养基中，37℃厌氧下培养16-18h，活化三代培养，取菌液按2％的接种量接种至LBS液体培养基中培养14h，从起点开始每隔2h取菌液1mL，振荡混匀，利用紫外分光光度计测定OD600吸光度，平行三次，并按时间绘制生长曲线。同时取出菌液100μL均匀涂布于固体LBS培养基上，倒置，37℃厌氧下培养36-48h，平板计数，结果见图4。由图4可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146(TD3菌株)在16h进入稳定期，市售菌株C1、C2均在18h进入稳定期，表明本发明提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种更早进入稳定期。
实施例4德氏乳杆菌保加利亚亚种在LBS中24h内的pH变化
从-80℃下保藏的菌株按2％的接种量接种到5mL液体LBS培养基中，37℃厌氧下培养16-18h，活化三代培养，取菌液按2％的接种量接种至LBS液体培养基中培养14h，从起点开始每隔2h取菌液，振荡混匀，利用pH计测定pH值，平行三次并记录，结果见图5。根据图5可知，本发明提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种在LBS中的pH比市售菌株C1降低更快。
实施例5德氏乳杆菌保加利亚亚种在脱脂乳中14h内的活菌数变化
从-80℃下保藏的菌株按2％的接种量接种到5mL液体LBS培养基中，37℃厌氧下培养16-18h，活化三代培养，取菌液按2％的接种量接种至无菌脱脂乳中培养14h，从起点开始每隔2h取发酵液100μL均匀涂布于固体LBS培养基上，倒置，37℃厌氧下培养36-48h，平板计数，结果见图6和图7。由图6、图7可知，本发明提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种在脱脂乳中的生长速度远远快于LBS中的生长速度，同时快于在同样在脱脂乳中生长的市售保加利亚乳杆菌C1、C2，市售菌株C1、C2均需8h进入稳定期，而德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCCNo.151466h可进入稳定期，活菌量可达到2.8×108cfu/ml。
实施例6德氏乳杆菌保加利亚亚种在脱脂乳中14h内的产酸能力、凝乳能力
从-80℃下保藏的菌株按2％的接种量接种到5mL液体LBS培养基中，37℃厌氧下培养16-18h，活化三代培养，取菌液按2％的接种量接种至无菌脱脂乳中培养14h，从起点开始每隔2h取发酵液，振荡混匀，利用pH计测定pH值；同时取出10mL发酵液，加入20mL无菌水稀释混匀后，加入2-3滴2％酚酞，经0.1M NaOH滴定至变色且30min不褪色，平行三次，记录滴定体积并计算酸度值，结果见图8。
同时，每个时间点进行发酵乳的质地观察，可通过倾斜震荡以观察是否凝固，结果如表3所示。
由图8可知，与两株市售保加利亚乳杆菌相比，本发明提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可更快发酵脱脂乳产酸，这将有利于快速凝乳，产生活跃的酶系水解脱脂乳的成分形成芳香物质。
表3不同时间点凝乳情况
实施例7德氏乳杆菌保加利亚亚种在脱脂乳中10h内的乙酸乙酯生成能力
1)发酵乳的制备
从-80℃下保藏的菌株按2％的接种量接种浓度在106CFU/mL的菌液到5mL液体LBS培养基中，37℃厌氧下培养16-18h，活化三代培养，取菌液按2％的接种量接种至无菌脱脂乳中培养14h，从起点开始每隔2h取发酵液6g，置于顶空气相瓶中，迅速拧紧气相瓶瓶盖，测定其挥发性风味。
2)GC-MS风味测定条件
气谱条件为：Rtx-WAX毛细管柱；柱子规格：30m×0.25mm×0.25mm，进口温度为250℃，分流比5，柱流速1mL/min，载气为氦气；程序升温：初始温度40℃，保持3min；10℃/min升温至90℃；5℃/min升温至200℃，保持5分钟。
质谱条件为：离子化方式EI，发射能量为70eV，发射电流为200μA，检测器电压为1.4kV，离子源温度250℃，接口温度230℃，四级杆温度：150℃，质荷比30-500。化合物检索结果与NIST和Varian2个标准谱库进行匹配，相似度达到80％以上确认为目的化合物。以10μl的0.2mg/ml癸酸乙酯为内标，计算乙酸乙酯含量。
本发明所使用的菌株发酵脱脂乳产生的乙酸乙酯含量如表4所示。由表4可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可在6h内产生165.59μg/kg的乙酸乙酯，远远高于市售菌株C1、C2，且在发酵后期含量几乎稳定不变。
表4不同时间点乙酸乙酯产量
实施例8德氏乳杆菌保加利亚亚种在酸马奶酒中的应用
以新鲜无杂质的马乳为原料，82℃，30min巴氏杀菌后，接入2％1:1的酵母菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146，搅拌18min后，在35℃下发酵4h，酸度达到0.061％～0.065％时为发酵终点，取出于4℃环境中后发酵2d，即得酸马奶酒。
本发明所使用的菌株发酵马奶产生的乙酸乙酯含量如表5所示。由表5可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可在48h内产生8.97μg/kg的乙酸乙酯，远远高于市售菌株C2，可显著增强酸马奶酒的果香味。
表5不同时间点乙酸乙酯产量
实施例9德氏乳杆菌保加利亚亚种制备酸面团中的应用
100g面粉和100mL水混合均匀后，加入20mg德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCCNo.15146，混合均匀，置于35℃恒温培养箱中下发酵24h，即得酸面团。加入德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146的酸面团可使馒头具有一定的奶香味，并改善质地。
本发明所使用的菌株发酵面团产生的乙酸乙酯含量如表6所示。由表6可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可在24h内产生49.53μg/kg的乙酸乙酯，高于市售菌株C2，赋予面团香气，并使面团质地得到改善。
表6不同时间点乙酸乙酯产量
实施例10德氏乳杆菌保加利亚亚种制备奶酪中的应用
称取970mL经标准化处理后的生牛乳(蛋白质含量≥2.9％，脂肪含量≥3.1％)，进行巴氏杀菌，加入活化好的30mL徳氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146，混合均匀，置于温度30℃的成熟室中成熟8h，4℃冷藏，即得新鲜干酪。
本发明所使用的菌株发酵奶酪产生的乙酸乙酯含量如表7所示。由表7可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可在48h内产生0.33μg/kg的乙酸乙酯，略高于市售菌株C2。
表7不同时间点乙酸乙酯产量
实施例11徳氏乳杆菌保加利亚亚种制备发酵乳饮料中的应用
将新鲜原料乳巴氏杀菌后，冷却至42℃，按体积3-5％接入嗜热链球菌和上述制备的徳氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146工作发酵剂(两种菌的体积比为1:1)。置于42℃的发酵室中发酵4-6h至凝乳。冷却搅拌后，加入其他配料(营养强化剂、稳定剂、乳化剂、螯合剂等)，均质包装即得发酵乳饮料。
本发明所使用的菌株发酵牛乳并混合其他原料制得的发酵乳饮料产生的乙酸乙酯含量如表8所示。由表8可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可在6h内产生2.16μg/kg的乙酸乙酯，远高于市售菌株C2，可提高发酵乳饮料的果香气味。
表8不同时间点乙酸乙酯产量
实施例12徳氏乳杆菌保加利亚亚种制备酸奶油中的应用
以960mL脂肪含量20％的新鲜稀奶油为原料，巴氏杀菌后，接种活菌量在106CFU/mL的徳氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146工作发酵剂于稀奶油中，混合均匀，置于20℃发酵室中培养24h，4℃下冷藏，即得酸奶油。
本发明所使用的菌株发酵奶油产生的乙酸乙酯含量如表9所示。由表9可知，德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146可在24h内产生3.15μg/kg的乙酸乙酯，远高于市售菌株C2，给酸奶油带来芳香气味。
表9不同时间点乙酸乙酯产量
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明实质内容上所作的任何修改、等同替换和简单改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 光明乳业股份有限公司
<120> 一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 1
agagtttgat cctggcctca 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(未知)
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 1399
<212> DNA
<213> 16S rDNA
<400> 3
ccgactttgg gcattgcaga cttccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa 60
cgtattcacc gcggcgtgct gatccgcgat tactagcgat tccagcttcg tgcaggcgag 120
ttgcagcctg cagtccgaac tgagaacagc tttaagagat ccgcttaccc tcgcgggttc 180
gcttctcgtt gtactgccca ttgtagcacg tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg 240
acttgacgtc atccccacct tcctccggtt tgtcaccggc agtctcttta gagtgcccaa 300
cttaatgatg gcaactaaag acaagggttg cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc 360
acgacacgag ctgacgacag ccatgcacca cctgtctctg cgtccccgaa gggaaccacc 420
tatctctagg tgtagcacag gatgtcaaga cctggtaagg ttcttcgcgt tgcttcgaat 480
taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc ccccgtcaat tcctttgagt ttcaaccttg 540
cggtcgtact ccccaggcgg agcgcttaat gcgtttgctg cggcactgag gaccggaaag 600
tccccaacac ctagcgctca tcgtttacgg catggactac cagggtatct aatcctgttc 660
gctacccatg ctttcgagcc tcagcgtcag ttgcagacca gagagccgcc ttcgccactg 720
gtgttcttcc atatatctac gcattccacc gctacacatg gaattccact ctcctcttct 780
gcactcaaga atgacagttt ccgatgcagt tccacggttg agccgtgggc tttcacatca 840
gacttatcat tccgcctgcg ctcgctttac gcccaataaa tccggacaac gcttgccacc 900
tacgtattac cgcggctgct ggcacgtagt tagccgtgac tttctggttg attaccgtca 960
aataaagacc agttactgcc tctatccttc ttcaccaaca acagagcttt acgatccgaa 1020
aaccttcttc actcacgcgg cgttgctcca tcagacttgc gtccattgtg gaagattccc 1080
tactgctgcc tcccgtagga gtttgggccg tgtctcagtc ccaatgtggc cgatcagtct 1140
ctcaactcgg ctacgcatca ttgccttggt aggcctttac cccaccaact agctaatgcg 1200
ccgcgggctc atcctaaagt gacagcttac gccgcctttc aaacttgaat catgcgattc 1260
atgttgttat ccggtattag cacctgtttc caagtggtat cccagtcttt agggcagatt 1320
gcccacgtgt tactcaccca tccgccgcta gcgtccaaca aatcaccccg aagggatctt 1380
tgaattcagc tcgctcgac 1399

Claims (5)

1.一种高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.15146。
2.一种菌剂，其特征在于，其活性成分为高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种CGMCC No.15146。
3.权利要求1所述的高产乙酸乙酯的德氏乳杆菌保加利亚亚种在制备发酵食品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵食品包括酸奶、发酵乳饮料、奶酪、马奶酒和酸奶油。
5.权利要求2所述的菌剂在制备发酵食品中的应用。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113717896A (zh) * 2021-09-24 2021-11-30 扬州大学 发酵乳杆菌yzu-06及其应用
CN114231367A (zh) * 2021-12-27 2022-03-25 光明乳业股份有限公司 一种天然含有甜香蕉风味的奶啤及其制备方法
CN114568536A (zh) * 2022-03-04 2022-06-03 扬州大学 单菌发酵的酸奶油及其制备方法
CN115191485A (zh) * 2022-07-04 2022-10-18 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种植物乳杆菌Lp90在制备高产乙酸乙酯产品中的应用及包含其的酸奶发酵剂
CN116445365A (zh) * 2023-06-01 2023-07-18 黑龙江飞鹤乳业有限公司 一种菌剂及其用途以及基于该菌剂的植物酸奶
NL2035198A (en) * 2023-01-05 2023-07-27 Chongqing Tianyou Dairy Co Ltd Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and application thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107788517A (zh) * 2017-10-18 2018-03-13 江南大学 一种利用保加利亚乳杆菌强化酵素功效的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107788517A (zh) * 2017-10-18 2018-03-13 江南大学 一种利用保加利亚乳杆菌强化酵素功效的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
陈卫，王琪，张哲，刘小鸣，赵建新，张灏: "保加利亚乳杆菌的发酵特性及其在牦牛酸乳中的应用", 《食品科学技术学报》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113717896A (zh) * 2021-09-24 2021-11-30 扬州大学 发酵乳杆菌yzu-06及其应用
CN113717896B (zh) * 2021-09-24 2023-07-14 扬州大学 发酵乳杆菌yzu-06及其应用
CN114231367A (zh) * 2021-12-27 2022-03-25 光明乳业股份有限公司 一种天然含有甜香蕉风味的奶啤及其制备方法
CN114568536A (zh) * 2022-03-04 2022-06-03 扬州大学 单菌发酵的酸奶油及其制备方法
CN114568536B (zh) * 2022-03-04 2024-01-23 扬州大学 单菌发酵的酸奶油及其制备方法
CN115191485A (zh) * 2022-07-04 2022-10-18 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种植物乳杆菌Lp90在制备高产乙酸乙酯产品中的应用及包含其的酸奶发酵剂
NL2035198A (en) * 2023-01-05 2023-07-27 Chongqing Tianyou Dairy Co Ltd Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and application thereof
CN116445365A (zh) * 2023-06-01 2023-07-18 黑龙江飞鹤乳业有限公司 一种菌剂及其用途以及基于该菌剂的植物酸奶
CN116445365B (zh) * 2023-06-01 2023-08-25 黑龙江飞鹤乳业有限公司 一种菌剂及其用途以及基于该菌剂的植物酸奶

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