CN108864318A - 一种铁皮石斛多糖的提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种铁皮石斛多糖的提取工艺,涉及植物活性成分提取技术领域。所述提取工艺为:将新鲜铁皮石斛洗净,冷冻干燥,粉碎,加入石油醚提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,向药渣中加入乙醇,静置提取,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取2‑3次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,向多糖原液中加入0.05‑0.1%的蛋白质水解酶,水浴酶解1‑2h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得。本发明通过优化提取方法,有效提高了铁皮石斛多糖的提取率和纯度,并增强了生物活性。
Description
【技术领域】
本发明涉及植物活性成分提取技术领域,具体涉及一种铁皮石斛多糖的提取工艺。
【背景技术】
铁皮石斛是我国传统名贵中草药,已有2000多年的药用历史,其主要化学成分包括生物碱类、多糖类、多酚类等,其中多糖是铁皮石斛中最有效的成分之一,药理研究表面,铁皮石斛多糖具有较强的抗衰老、抗氧化、抗肿瘤和增强机体免疫力等药理活性。随着近年来人们保健意识的增强,铁皮石斛多糖的需求量在不断增加,市场需求量旺盛,供不应求,需进一步改进铁皮石斛多糖提取技术,增加提取量。目前铁皮石斛多糖提取存在含蛋白质、色素等杂质较多,纯度低的问题,过多杂质会影响其生物活性,使品质降低。且现阶段去除色素主要使用活性炭进行,活性炭虽然吸附效果好,但活性炭在吸附色素的同时也会吸附部分多糖,导致多糖成分受损,提取率变低。
【发明内容】
针对上述问题,本发明要解决的技术问题是提供一种铁皮石斛多糖的提取工艺,该方法通过优化提取方法,有效提高了铁皮石斛多糖的提取率和纯度,并增强了生物活性。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:
一种铁皮石斛多糖的提取工艺,包括以下步骤:
(1)将新鲜铁皮石斛洗净,冷冻干燥,粉碎,过40-60目筛,加入石油醚,于60℃-90℃下提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,备用;
(2)向上述药渣中加入3-5重量倍的乙醇,静置提取5-7h,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取2-3次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,备用;
(3)向上述多糖原液中加入0.05-0.1%的蛋白质水解酶,于35℃-40℃下水浴酶解1-2h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇20-30min,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得。
进一步地,步骤(1)中,所述冷冻干燥的温度为-30℃~-20℃。
进一步地,步骤(1)中,所述石油醚的加入量为所述粉碎后铁皮石斛重量的3-6倍。
进一步地,步骤(2)中,所述乙醇的体积浓度为60-70%。
进一步地,步骤(3)中,所述蛋白质水解酶为木瓜蛋白酶或链霉蛋白酶。
进一步地,步骤(3)中,所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的1-3%。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明通过优化提取方法,有效提高了铁皮石斛多糖的提取率和纯度,并增强了生物活性。经试验,使用本发明方法提取率高达31.95%-33.91%,多糖含量为79.8%-82.4%,2mg/mL浓度下的吸光度为1.86-1.98。采用酶解法结合明胶吸附来去除杂质,酶解可去除多糖中的蛋白质,而明胶可结合色素和其它酶解后的杂质,进而提高了纯度,同时,明胶不会吸附多糖,可防止纯化中多糖的损失,提高了提取率。
【具体实施方式】
以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明。
实施例1
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺,包括以下步骤:
(1)将新鲜铁皮石斛洗净,于-30℃下冷冻干燥,粉碎,过40目筛,加入3重量倍的石油醚,于60℃下提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,备用。
(2)向上述药渣中加入3重量倍的体积浓度为60%的乙醇,静置提取5h,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取2次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.05%的木瓜蛋白酶,于35℃下水浴酶解1h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇20min,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得;所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的1%。
实施例2
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺,包括以下步骤:
(1)将新鲜铁皮石斛洗净,于-20℃下冷冻干燥,粉碎,过60目筛,加入6重量倍的石油醚,于90℃下提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,备用。
(2)向上述药渣中加入5重量倍的体积浓度为70%的乙醇,静置提取7h,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取3次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.1%的链霉蛋白酶,于40℃下水浴酶解2h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇30min,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得;所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的3%。
实施例3
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺,包括以下步骤:
(1)将新鲜铁皮石斛洗净,于-25℃下冷冻干燥,粉碎,过50目筛,加入5重量倍的石油醚,于70℃下提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,备用。
(2)向上述药渣中加入4重量倍的体积浓度为65%的乙醇,静置提取6h,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取3次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.06%的木瓜蛋白酶,于38℃下水浴酶解1.5h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇25min,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得;所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的2%。
实施例4
本实施例一种铁皮石斛多糖的提取工艺,包括以下步骤:
(1)将新鲜铁皮石斛洗净,于-22℃下冷冻干燥,粉碎,过60目筛,加入4重量倍的石油醚,于80℃下提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,备用。
(2)向上述药渣中加入4重量倍的体积浓度为69%的乙醇,静置提取6h,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取2次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,备用。
(3)向上述多糖原液中加入0.09%的链霉蛋白酶,于38℃下水浴酶解1.5h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇25min,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得;所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的2.5%。
对比实验:
组1、组2、组3、组4分别用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的方法提取多糖;
对比组1:步骤(3)未用酶处理,而是直接加入氯仿、正丁醇振摇,其他步骤均与实施例3相同;
对比组2:步骤(3)只用酶处理,未加入氯仿、正丁醇振摇,其他步骤均与实施例3相同;
对比组3:步骤(3)用去除凝胶物后滤液重量的0.1-0.5%活性炭代替明胶,其他步骤均与实施例3相同。
统计各组多糖提取率,并采用高效凝胶渗透色谱法分别对各组石斛多糖的均一性进行鉴定;通过测定吸光度判断还原力来判定各组的生物活性。结果为:
(1)组1、组2、组3、组4中多糖提取率分别为31.95%、32.72%、33.91%、31.98%,对比组1提取率为22.3%,对比组2提取率为24.6%,对比组3提取率为20.1%,因此,本发明提取方法提高了多糖提取率。
(2)色谱法结果为:组1、组2、组3、组4多糖含量分别为79.8%、81.0%、82.4%、79.9%,对比组1多糖含量为50.8%,对比组2多糖含量为48.9%,对比组3多糖含量为42.3%,因此,本发明提取方法多糖损失少,纯度较高。
(3)吸光度测定结果为:在多糖浓度均为2mg/mL时,组1、组2、组3、组4的吸光度分别为1.86、1.89、1.98、1.87,对比组1的吸光度为0.93,对比组2的吸光度为1.12,对比组3的吸光度为0.78,因此,本发明提取方法可提高多糖生物活性(吸光度越高,还原力越强,抗氧化能力越强,生物活性越强)。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明,但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围,凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更,均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (6)
1.一种铁皮石斛多糖的提取工艺,其特征在于:包括以下步骤:
(1)将新鲜铁皮石斛洗净,冷冻干燥,粉碎,过40-60目筛,加入石油醚,于60℃-90℃下提取至无色,过滤,挥干溶剂,得药渣,备用;
(2)向上述药渣中加入3-5重量倍的乙醇,静置提取5-7h,过滤,挥干滤渣上的溶剂后,加蒸馏水回流提取2-3次,过滤,将滤液减压浓缩至原体积的1/3,得多糖原液,备用;
(3)向上述多糖原液中加入0.05-0.1%的蛋白质水解酶,于35℃-40℃下水浴酶解1-2h,得酶解液,将酶解液、氯仿、正丁醇按25:4:1混匀,振摇20-30min,离心,去除凝胶物后,加入明胶,过滤,将滤液浓缩、干燥,即得。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛多糖的提取工艺,其特征在于:步骤(1)中,所述冷冻干燥的温度为-30℃~-20℃。
3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛多糖的提取工艺,其特征在于:步骤(1)中,所述石油醚的加入量为所述粉碎后铁皮石斛重量的3-6倍。
4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛多糖的提取工艺,其特征在于:步骤(2)中,所述乙醇的体积浓度为60-70%。
5.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛多糖的提取工艺,其特征在于:步骤(3)中,所述蛋白质水解酶为木瓜蛋白酶或链霉蛋白酶。
6.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛多糖的提取工艺,其特征在于:步骤(3)中,所述明胶加入量为去除凝胶物后滤液重量的1-3%。
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