CN108727441A - 一种红景天苷的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种红景天苷的提取方法，包括以下步骤：A、采摘新鲜红景天，剔除病虫个体，并干燥；B、将干燥的红景天研磨成粉末，研磨后的红景天进行浸泡，并渗滤，得渗滤液；C、取渗滤液静置后的上清液，使用树脂吸附去除多糖和蛋白质；上样后使用纯化水冲洗至无色，再依次使用洗脱液4‑8％的乙醇水溶液、14‑18％的乙醇水溶液、24‑28％的乙醇水溶液、34‑38％的乙醇水溶液和44‑48％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，洗脱液的pH值为6.4‑6.6，分别收集各梯度洗脱液并浓缩得到五组红景天苷粗品；D、对各组红景天苷粗品进行杂质分离，提纯，获得高纯度的红景天苷。采用本方法提取红景天苷，提取率高，且提取的红景天苷纯度高。

Description

一种红景天苷的提取方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种红景天苷的提取方法。

背景技术

红景天为多年生草本植物，高10-20厘米，根粗壮，圆锥形，肉质，褐黄色，根颈部具多数须根，根茎短，粗状，圆柱形，多数覆瓦状排列的鳞片状的叶，生长在海拔1800—2500米高寒无污染地带，其生长环境恶劣，因而具有很强的生命力和特殊的适应性。可作药用，能够补气清肺，益智养心，是一味作用广泛的中药。亦有很大的美容效果，可作护肤品，也可食用。

红景天苷为红景天的主要有效成分。近年来，随着人们生活水平的提高，加上人口结构的老龄化，心血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗效果较好的心脑血管疾病的药物已经成为当今药物研究的热点，临床研究报道显示：高纯度单一成分的红景天苷在治疗心脑血管方面具有良好的应用前景，同时，其还具有抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗寒冷、抗衰老、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、兴奋中枢神经和调节内分泌等药理作用，在军事、航天、运动及保健医学上具有重要应用价值，极具开发前景。

目前从红景天中提取红景天苷的方法较多，如：用溶剂萃取结合大孔吸附树脂分离，然后用硅胶柱精制提取；用化学和高效液相制备色谱方法分离制备。还有将聚酰胺、反相大孔树脂、硅胶及葡聚糖凝胶四种柱层析组合使用制备红景天苷。然而，现有方法均存在从红景天中提取红景天苷的提取率低以及提取的红景天苷纯度低的缺陷。

发明内容

基于此，针对上述问题，本发明提出一种红景天苷的提取方法。

本发明的技术方案是：一种红景天苷的提取方法，包括以下步骤：

A、采摘新鲜红景天，剔除病虫个体，并干燥；

B、将干燥的红景天研磨成粉末，研磨后的红景天进行浸泡，并渗滤，得渗滤液；

C、取渗滤液静置后的上清液，使用树脂吸附去除多糖和蛋白质；上样后使用纯化水冲洗至无色，再依次使用洗脱液4-8％的乙醇水溶液、14-18％的乙醇水溶液、24-28％的乙醇水溶液、34-38％的乙醇水溶液和44-48％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，洗脱液的pH值为6.4-6.6，分别收集各梯度洗脱液并浓缩得到五组红景天苷粗品；

D、对各组红景天苷粗品进行杂质分离，提纯，获得高纯度的红景天苷。

其中，其中，步骤C中所述的树脂为非极性树脂，如，XAD系列大孔吸附树脂：XAD-4，XAD-1600；HZ系列大孔吸附树脂HZ-816；HP系列大孔吸附树脂 HP-20等，优选树脂为大孔吸附树脂HZ-816。

进一步地，所述步骤A中对红景天苷的干燥包括以下过程：利用微波对红景天苷进行干燥，微波功率密度为3W/g-5W/g，干燥时间为4min-6min。

利用微波加热干燥红景天，可直接作用到物料内部的游离水或是结合水使其蒸发，并且水分蒸发产生的压力有利于打开物料内部孔道，有利于水蒸气从内部扩散到物料表面，从而加速干燥过程，生产率高。

进一步地，所述步骤B具体包括以下过程：

B1、将研磨后的红景天与体积百分比为90％-95％的乙醇水溶液按1：10-12 的比例混合浸泡，浸泡10h-15h；

B2、浸泡后，再加入体积百分比为55％-65％的乙醇水溶液浸渍30h～35h 进行渗滤；收集渗滤液后浓缩，静置15h-20h，得到渗滤液。

进一步地，在所述步骤B1与步骤B2之间，还包括以下过程：利用微波处理浸泡液70秒-90秒。

微波处理就是利用微波的能量破坏红景天细胞的细胞壁，并增加细胞内薄壁组织的渗透性，使得红景天苷等物质渗出细胞外，以利于红景天苷的提取。

进一步地，所述步骤B2中进行渗滤时，保持渗滤液温度为71℃-75℃。

进一步地，所述步骤D包括以下过程：

D1、用硅胶柱对各组红景天苷粗品进行色谱分离，得含红景天苷的洗脱液；

D2、用半制备型高效液相色谱法分离纯化步骤D1中获得的洗脱液，收集流出液；

D3、将红景天苷纯度高于98％的流出液进行冷冻干燥，得到高纯度的红景天苷。

利用硅胶柱色谱对红景天苷中杂质进行富集，然后再用高效液相色谱对其制备纯化，可有效地降低红景天苷中杂质的含量，提高红景天苷的纯度。

进一步地，所述步骤D1包括以下过程：

D11、拌样：称取100目硅胶倒入蒸发皿中，再将红景天苷粗品的乙醇饱和溶液倒入蒸发皿中，以正好覆盖为宜，搅拌均匀蒸去大部分乙醇，在58-62℃的真空干燥箱中干燥至恒重；

D12、装柱：将200-300目硅胶225g用湿法装柱，平衡；

D13、上样：取拌样硅胶，加于色谱柱顶端；

D14、洗脱：乙醇水溶液梯度洗脱，流速为5-7滴/秒，分4段收集。

进一步地，所述步骤D14中洗脱液乙醇水溶液的洗脱梯度依次为95％、 90％、85％、80％、70％。

进一步地，所述步骤D2中半制备型高效液相色谱条件为：

色谱柱：BDS C18，5μm，250×4.6mm内径；

流动相组成体积比为：乙醇：水＝11：80-85；

流速：4-5mL/min；

柱温：24-25℃；

检测波长：UV275nm；

进样量：55-60μL；

分段收集流出液，HPLC跟踪检测。

本发明的有益效果是：

(1)本发明通过渗滤、大孔树脂吸附去除包括糖类和蛋白质的杂质得到红景天苷粗品，去除糖类和蛋白质杂质后有利于提高高效液相色谱的纯化度，并通过合理的梯度洗脱和洗脱液，配合高效液相色谱对红景天苷粗品纯化，提高红景天苷的纯度和提取率。

(2)本发明的未采用大量有机溶剂，使用的有机溶剂仅为乙醇，提取的红景天苷无有机溶剂残留，安全性高；并且可以重复利用大孔树脂，在保证分离效果的同时，提高了资源利用率。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例

一种红景天苷的提取方法，包括以下步骤：

A、采摘新鲜红景天，剔除病虫个体，并干燥；

B、将干燥的红景天研磨成粉末，研磨后的红景天进行浸泡，并渗滤，得渗滤液；

C、取渗滤液静置后的上清液，使用树脂吸附去除多糖和蛋白质；上样后使用纯化水冲洗至无色，再依次使用洗脱液4-8％的乙醇水溶液、14-18％的乙醇水溶液、24-28％的乙醇水溶液、34-38％的乙醇水溶液和44-48％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，洗脱液的pH值为6.4-6.6，分别收集各梯度洗脱液并浓缩得到五组红景天苷粗品；

D、对各组红景天苷粗品进行杂质分离，提纯，获得高纯度的红景天苷。

其中，其中，步骤C中所述的树脂为非极性树脂，如，XAD系列大孔吸附树脂：XAD-4，XAD-1600；HZ系列大孔吸附树脂HZ-816；HP系列大孔吸附树脂 HP-20等，优选树脂为大孔吸附树脂HZ-816。

进一步地，所述步骤A中对红景天苷的干燥包括以下过程：利用微波对红景天苷进行干燥，微波功率密度为3W/g-5W/g，干燥时间为4min-6min。

利用微波加热干燥红景天，可直接作用到物料内部的游离水或是结合水使其蒸发，并且水分蒸发产生的压力有利于打开物料内部孔道，有利于水蒸气从内部扩散到物料表面，从而加速干燥过程，生产率高。

进一步地，所述步骤B具体包括以下过程：

B1、将研磨后的红景天与体积百分比为90％-95％的乙醇水溶液按1：10-12 的比例混合浸泡，浸泡10h-15h；

B2、浸泡后，再加入体积百分比为55％-65％的乙醇水溶液浸渍30h～35h 进行渗滤；收集渗滤液后浓缩，静置15h-20h，得到渗滤液。

进一步地，在所述步骤B1与步骤B2之间，还包括以下过程：利用微波处理浸泡液70秒-90秒。

微波处理就是利用微波的能量破坏红景天细胞的细胞壁，并增加细胞内薄壁组织的渗透性，使得红景天苷等物质渗出细胞外，以利于红景天苷的提取。

进一步地，所述步骤B2中进行渗滤时，保持渗滤液温度为71℃-75℃。

进一步地，所述步骤D包括以下过程：

D1、用硅胶柱对各组红景天苷粗品进行色谱分离，得含红景天苷的洗脱液；

D2、用半制备型高效液相色谱法分离纯化步骤D1中获得的洗脱液，收集流出液；

D3、将红景天苷纯度高于98％的流出液进行冷冻干燥，得到高纯度的红景天苷。

利用硅胶柱色谱对红景天苷中杂质进行富集，然后再用高效液相色谱对其制备纯化，可有效地降低红景天苷中杂质的含量，提高红景天苷的纯度。

进一步地，所述步骤D1包括以下过程：

D11、拌样：称取100目硅胶倒入蒸发皿中，再将红景天苷粗品的乙醇饱和溶液倒入蒸发皿中，以正好覆盖为宜，搅拌均匀蒸去大部分乙醇，在58-62℃的真空干燥箱中干燥至恒重；

D12、装柱：将200-300目硅胶225g用湿法装柱，平衡；

D13、上样：取拌样硅胶，加于色谱柱顶端；

D14、洗脱：乙醇水溶液梯度洗脱，流速为5-7滴/秒，分4段收集。

进一步地，所述步骤D14中洗脱液乙醇水溶液的洗脱梯度依次为95％、 90％、85％、80％、70％。

进一步地，所述步骤D2中半制备型高效液相色谱条件为：

色谱柱：BDS C18，5μm，250×4.6mm内径；

流动相组成体积比为：乙醇：水＝11：80-85；

流速：4-5mL/min；

柱温：24-25℃；

检测波长：UV275nm；

进样量：55-60μL；

分段收集流出液，HPLC跟踪检测。

本发明中，如无其他特别说明，与浓度相关的百分比均是指溶质与溶剂的质量百分比，如步骤C中4-8％的乙醇水溶液，是指溶质乙醇与溶剂水的质量百分比为4-8％；微波功率密度的单位均遵照行业通常理解，如文中提到的“利用微波对红景天苷进行干燥，微波功率密度为3W/g-5W/g”，是指加热1g红景天苷时微波的功率控制为3W-5W。

以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种红景天苷的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、采摘新鲜红景天，剔除病虫个体，并干燥；

B、将干燥的红景天研磨成粉末，研磨后的红景天进行浸泡，并渗滤，得渗滤液；

C、取渗滤液静置后的上清液，使用树脂吸附去除多糖和蛋白质；上样后使用纯化水冲洗至无色，再依次使用洗脱液4-8％的乙醇水溶液、14-18％的乙醇水溶液、24-28％的乙醇水溶液、34-38％的乙醇水溶液和44-48％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，洗脱液的pH值为6.4-6.6，分别收集各梯度洗脱液并浓缩得到五组红景天苷粗品；

D、对各组红景天苷粗品进行杂质分离，提纯，获得高纯度的红景天苷。

2.根据权利要求1所述的红景天苷的提取方法，其特征在于，所述步骤A中对红景天苷的干燥包括以下过程：利用微波对红景天苷进行干燥，微波功率密度为3W/g-5W/g，干燥时间为4min-6min。

3.根据权利要求1所述的红景天苷的提取方法，其特征在于，所述步骤B具体包括以下过程：

B1、将研磨后的红景天与体积百分比为90％-95％的乙醇水溶液按1：10-12的比例混合浸泡，浸泡10h-15h；

B2、浸泡后，再加入体积百分比为55％-65％的乙醇水溶液浸渍30h～35h进行渗滤；收集渗滤液后浓缩，静置15h-20h，得到渗滤液。

4.根据权利要求3所述的红景天苷的提取方法，其特征在于：在所述步骤B1与步骤B2之间，还包括以下过程：利用微波处理浸泡液70秒-90秒。

5.根据权利要求4所述的红景天苷的提取方法，其特征在于：所述步骤B2中进行渗滤时，保持渗滤液温度为71℃-75℃。

6.根据权利要求1所述的红景天苷的提取方法，其特征在于，所述步骤D包括以下过程：

D1、用硅胶柱对各组红景天苷粗品进行色谱分离，得含红景天苷的洗脱液；

D2、用半制备型高效液相色谱法分离纯化步骤D1中获得的洗脱液，收集流出液；

D3、将红景天苷纯度高于98％的流出液进行冷冻干燥，得到高纯度的红景天苷。

7.根据权利要求6所述的红景天苷的提取方法，其特征在于，所述步骤D1包括以下过程：

D11、拌样：称取100目硅胶倒入蒸发皿中，再将红景天苷粗品的乙醇饱和溶液倒入蒸发皿中，以正好覆盖为宜，搅拌均匀蒸去大部分乙醇，在58-62℃的真空干燥箱中干燥至恒重；

D12、装柱：将200-300目硅胶225g用湿法装柱，平衡；

D13、上样：取拌样硅胶，加于色谱柱顶端；

D14、洗脱：乙醇水溶液梯度洗脱，流速为5-7滴/秒，分4段收集。

8.根据权利要求7所述的红景天苷的提取方法，其特征在于：所述步骤D14中洗脱液乙醇水溶液的洗脱梯度依次为95％、90％、85％、80％、70％。

9.根据权利要求6所述的红景天苷的提取方法，其特征在于：所述步骤D2中半制备型高效液相色谱条件为：

色谱柱：BDS C18，5μm，250×4.6mm内径；

流动相组成体积比为：乙醇：水＝11：80-85；

流速：4-5mL/min；

柱温：24-25℃；

检测波长：UV 275nm；

进样量：55-60μL；

分段收集流出液，HPLC跟踪检测。