CN108853600A - 一种可降解骨组织工程材料的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于可降解材料领域,尤其涉及一种可降解组织工程填充材料的制备方法和应用。所述的制备方法,具体包括以下步骤:将3‑9g的HA溶解于20‑100 mL水中,搅拌成为悬浮液,静置3 ‑5h;将2‑8g的PLGA溶解于40‑100mL 分析纯N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)和10‑50mL分析纯二氯甲烷(CH2Cl2)中,均质5h;待PLGA完全溶解后,将HA制成悬浮液缓慢滴加至PLGA溶液中,得到白色乳状液,将此乳状液室温下均质5h,使PLGA与HA悬浮液混合均匀;边均质边加入过量无水乙醇,将得到的悬浮液置入0‑4℃空间,静置5h;将冷藏好的溶液用循环真空抽滤泵进行抽滤,然后用100度蒸馏水煮5次,放入烘干箱,180℃条件下烘干5‑10h。该降解组织工程填充材料具有一定的可塑性的和优良的生物活性。
Description
技术领域
本发明属于可降解材料领域,尤其涉及一种可降解组织工程填充材料的制备方法和应用。
背景技术
目前,临床上主要应用的是价格昂贵的进口组织工程填充材料,原料大多数来源于动物,存在一定的免疫源性和交叉感染等风险;并且临床上应用的人工骨粉呈细沙状,无原位固化作用,不易塑型,而且粘膜缝合后存在一定张力,愈合过程中还有组织水肿等使张力增加,因此很难维持三维空间,致使新骨形成速率缓慢、形态差,无法满足临床需要。
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成,是一种可降解的功能高分子有机化合物,具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。PLGA在人体内代谢的最终产物是CO2和H2O,中间产物乳酸也是体内正常糖代谢的产物,不会在重要器官聚集,因此具有优异的可生物降解吸收性,同时具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能,被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证,被正式作为药用辅料收录进美国药典。
发明内容
针对上述问题,本发明提供一种可降解组织工程填充材料的制备方法和应用。该降解组织工程填充材料具有一定的可塑性的和优良的生物活性;制得的骨粉、骨块呈现白色颗粒状,颗粒度为300-2000μm,具有可控降解性,降解时间为2-3个月。
为了实现上述目的,本发明提供的可降解组织工程填充材料的制备方法,具体包括以下步骤。
步骤1、溶解:将2-9g的HA溶解于20-100 mL水中,搅拌成为悬浮液,静置3 -5h。
步骤2、将2-8g的PLGA溶解于40-100mL 分析纯N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和10-50mL分析纯二氯甲烷(CH2Cl2)中,均质5h。
步骤3、待PLGA完全溶解后,将HA制成悬浮液缓慢滴加至PLGA溶液中,得到白色乳状液,将此乳状液室温下均质5h,使PLGA与HA悬浮液混合均匀;边均质边加入过量无水乙醇,将得到的悬浮液置入0-4℃空间,静置5h。
步骤4、抽滤:将冷藏好的溶液用循环真空抽滤泵进行抽滤,然后用100度蒸馏水煮5次,放入烘干箱,180℃条件下烘干5-10h。
优选的,所述的HA与PLGA的重量比为2:8,4:6,6:4或8:2。
所述的分析纯N,N-二甲基甲酰胺与分析纯二氯甲烷的体积比为8:2。
所述的PLGA的原料按重量分数配比为50-90%乳酸和20-50%羟基乙酸。
所述的缓慢滴加的速度为2-3滴/分。
优选的,本发明提供的可降解组织工程填充材料的制备方法,具体包括以下步骤。
步骤1、称量3g HA,20ml蒸馏水;将蒸馏水盛放于容器中,将容器放在磁力搅拌器上,打开磁力搅拌器,将速度设置为5-10转/秒,采用点滴方式将3-9g的HA匀速滴入蒸馏水中,待所有HA进入溶液后,均质3 -5h。
步骤2、称量2g PLGA,20-50ml分析纯N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和分析纯二氯甲烷(CH2Cl2)(8:2 v/v);将容器封口放入置物台上,加入磁力搅拌,调整磁力搅拌为10-20转/秒,并将磁力搅拌器加热至50-80℃,时间3-5h;然后将2-8g的PLGA均质3-5h,入封口容器中,再均质3-5h;控制容器温度50-80℃以控制反应速度,至液体反应均匀。
步骤3、将反应后的溶液置入三口容器中,容器中间置入机械搅拌,使用增力搅拌器,速度为5-10转/秒,将含有HA的悬浮液以2-3滴/分的速度滴定于反应后的PLGA混合溶液中,得到白色乳状反应液体,均质3-5h。加入过量无水乙醇10-20ml,以10-30滴/分的速度滴定,搅拌速度为5-10转/秒;滴定结束后,将混合液置入0-4℃的空间内内静置5-10h。
步骤4、取出冷藏溶液,用循环真空抽滤泵进行抽滤,强度1Mpa,得到乳白色固体;高温清洗5-10次后,于温度为60℃的条件下,烘干3h,即得HA/PLGA复合材料。
所述PLGA的制备方法,包括以下步骤。
步骤1、精确量取一定量粘稠状液体异辛酸亚锡(Sn(Oct)),溶于二氯甲烷中,配成浓度为1 g/mL的溶液,摇匀后转移至棕色瓶中,密封避光保存,备用。
步骤2、封管中加入重量比例为(5-9):(5-1)的单体丙交酯和乙交酯,分子量调节剂0.2-0.3L叔丁基二甲基硅烷醇,和步骤1制备的8-10L引发剂Sn(Oct)的二氯甲烷溶液;反复抽真空,通氩气保护,达到10-3pa;将封管置于160℃恒温箱中,5h后,反应物熔融,每隔10分钟摇晃一次,摇晃三次以上,反应5-10h;抽滤强度为1Mpa,60℃条件下干燥3-5h,得到所需不同分子量的PLGA。
本发明的显著效果。
本发明所用的PLGA是非常规PLGA,其玻璃化温度在40-60℃之间;纯的乳酸或羟基乙酸聚合物比较难溶,PLGA展现了更为广泛的溶解性,它能够溶解于更多更普遍的溶剂当中。传统PLGA合成路线,分子量差别较大,得到的PLGA往往呈团状,不易于分解,因此无法控制降解时间,本发明采用的是阶段控制反应过程,匹配反应温度和均质速度的关系,促使PLGA分子均匀化、细小化,最终实现分子量可控,达到降解速度可控的效果。
本发明在制备过程中,由于PLGA粘度较高,选用单一溶剂中溶解速度较慢,因此选择混合溶剂DMF溶解性能高于其他溶剂,可以通过强力溶解达到分子量均匀化。同时还需要适当加热,以促进溶解;将HA水悬浮液加入PLGA溶液时,需缓慢滴加,如果速度控制不好,容易造成团聚或结块;随着PLGA含量的增加,HA/PLGA复合材料韧性增加,在溶液中容易结块,可以采用组织粉碎机将结块的部分磨碎,或者使用粉碎机将得到的复合材料粉碎至需要的粒度;为了得到需要目数的骨粉,需要将制得的复合材料过筛子。本发明取乳酸(LA)、乙醇酸(GA)分别脱水环化二聚成丙交酯和乙交酯两种单体,再按不同比例在引发剂的作用下开环共聚,这样得到的PLGA为无规共聚物(PLGA),其组成可用丙交酯和乙交酯(5-9):(5-1)进行控制;通过对实验材料的大白鼠动物实验发现,对于使用本发明制备的HA/PLGA复合材料得到的组织工程支架材料及纳米可吸收膜,组织吸收效果明显。
本发明骨组织工程材料具有一定的可塑性的和优良的生物活性,制得的骨粉、骨块呈现白色颗粒状,颗粒度为控制在300-2000μm,该颗粒度最适合体内支架和降解的平衡,空隙率85%以上,具有可控降解性,降解时间为2-3个月。其他工艺方法得到的是圆状颗粒,无法实现充分降解。
附图说明
图1埋植入股骨里的材料。
图2一周组织切片的变化。
图3两周组织切片的变化。
图4四周组织切片的变化。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做详细的说明。
实施例1。
可降解组织工程填充材料的制备方法,具体包括以下步骤。
步骤1、PLGA的制备:精确量取一定量粘稠状液体异辛酸亚锡(Sn(Oct)),溶于二氯甲烷中,配成浓度为1g/mL的溶液,摇匀后转移至棕色瓶中,密封避光保存,备用;封管中加入82:18的单体丙交酯、乙交酯,分子量调节剂0.3L叔丁基二甲基硅醇(市售产品),和8L引发剂Sn(Oct)的二氯甲烷溶液;反复抽真空,通氩气保护,达到10-3pa;将封管置于160℃恒温箱中,5h后反应物熔融,然后每隔10 min摇晃一次,摇晃三次以上,再反应5h;抽滤强度为1Mpa,60℃条件下干燥3h,得到PLGA。
步骤2、称量3g HA,20ml蒸馏水;将蒸馏水盛放于容器中,将容器放在磁力搅拌器上,搅拌速度设置为10转/秒,采用点滴方式(2滴/分钟)将3g的HA均匀滴入蒸馏水中,待所有HA进入溶液后,均质3h;分别称量2g 步骤1制备的PLGA,40mlN,N-二甲基甲酰胺(分析纯)和10ml二氯甲烷(分析纯),置于封口容器中,60℃加热条件下进行磁力搅拌,搅拌为20转/秒,均质5h;控制反应速度,至液体反应均匀;将反应后的溶液置入三口容器中,容器中置入机械搅拌,搅拌速度为8转/秒,同时将含有HA的悬浮液滴定于反应后的PLGA混合溶液中,得到白色乳状反应液体,均质5h,均质过程中加入无水乙醇10ml;冷藏室(0-4℃)内静置5h;取出冷藏溶液,用循环真空抽滤泵进行抽滤,得到乳白色固体;高温清洗5次后,180℃条件下烘干5 h,即得HA/PLGA复合材料。
采用实施例1制备的HA/PLGA复合材料,对大白鼠进行股骨植入,结果见图1(其中A-B表示操作工人成功将HA/PLGA复合材料植入大白鼠股骨中,C-D表示材料植入后大白鼠的状态),通过组织切片观察,埋入骨组织的骨粉与骨组织有相对好的契合;植入一周后,与骨组织接触的的部位逐渐开始形成新骨,埋入的骨粉诱导骨组织的生长,见图2,由图可见,骨形成可见少量材料还未降解;植入两周后,见图3,由图可见材料中新骨形成,同时血管生成,材料开始降解;植入四周后,见图4,由图可见大量新骨形成,材料降解约50%,新骨长成大于50%。
Claims (7)
1.一种可降解组织工程填充材料的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
步骤1、溶解:将3-9g的HA溶解于20-100 mL水中,搅拌成为悬浮液,静置3 -5h;
步骤2、将2-8g的PLGA溶解于40-100mL 分析纯N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和10-50mL分析纯二氯甲烷(CH2Cl2)中,均质5h;
步骤3、待PLGA完全溶解后,将HA制成悬浮液缓慢滴加至PLGA溶液中,得到白色乳状液,将此乳状液室温下均质5h,使PLGA与HA悬浮液混合均匀;边均质边加入过量无水乙醇,将得到的悬浮液置入0-4℃空间,静置5h;
步骤4、抽滤:将冷藏好的溶液用循环真空抽滤泵进行抽滤,然后用100度蒸馏水煮5次,放入烘干箱,180℃条件下烘干5-10h。
2.如权利要求1所述的可降解组织工程填充材料的制备方法,其特征在于,所述的HA与PLGA的重量比为2:8,4:6,6:4或8:2。
3.如权利要求1所述的可降解组织工程填充材料的制备方法,其特征在于,所述的分析纯N,N-二甲基甲酰胺与分析纯二氯甲烷的体积比为8:2。
4.如权利要求1所述的可降解组织工程填充材料的制备方法,其特征在于,所述的PLGA的原料按重量分数配比为50-90%乳酸和50-20%羟基乙酸。
5.如权利要求1所述的可降解组织工程填充材料的制备方法,其特征在于,所述的缓慢滴加的速度为2-3滴/分。
6.如权利要求1所述的可降解组织工程填充材料的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
步骤1、称量3g HA,20ml蒸馏水;将蒸馏水盛放于容器中,将容器放在磁力搅拌器上,打开磁力搅拌器,将速度设置为5-10转/秒,采用点滴方式将3-9g的HA匀速滴入蒸馏水中,待所有HA进入溶液后,均质3 -5h;
步骤2、称量2g PLGA,20-50ml分析纯N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和分析纯二氯甲烷(CH2Cl2)(8:2 v/v);将容器封口放入置物台上,加入磁力搅拌,调整磁力搅拌为10-20转/秒,并将磁力搅拌器加热至50-80℃,时间3-5h;然后将2-8g的PLGA均质3-5h,入封口容器中,再均质3-5h;控制容器温度50-80℃以控制反应速度,至液体反应均匀;
步骤3、将反应后的溶液置入三口容器中,容器中间置入机械搅拌,使用增力搅拌器,速度为5-10转/秒,将含有HA的悬浮液以2-3滴/分的速度滴定于反应后的PLGA混合溶液中,得到白色乳状反应液体,均质3-5h;
加入过量无水乙醇10-20ml,以10-30滴/分的速度滴定,搅拌速度为5-10转/秒;滴定结束后,将混合液置入0-4℃的空间内内静置5-10h;
步骤4、取出冷藏溶液,用循环真空抽滤泵进行抽滤,强度1Mpa,得到乳白色固体;高温清洗5-10次后,于温度为60℃的条件下,烘干3h,即得HA/PLGA复合材料。
7.如权利要球求1-6任一所述的可降解组织工程填充材料中的PLGA的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、精确量取一定量粘稠状液体异辛酸亚锡(Sn(Oct)),溶于二氯甲烷中,配成浓度为1 g/mL的溶液,摇匀后转移至棕色瓶中,密封避光保存,备用;
步骤2、封管中加入重量比例为(5-9):(5-1)的单体丙交酯和乙交酯,分子量调节剂0.2-0.3L叔丁基二甲基硅烷醇,和步骤1制备的8-10L引发剂Sn(Oct)的二氯甲烷溶液;反复抽真空,通氩气保护,达到10-3pa;将封管置于160℃恒温箱中,5h后,反应物熔融,每隔10 分钟摇晃一次,摇晃三次以上,反应5-10h;抽滤强度为1Mpa,60℃条件下干燥3-5h,得到所需不同分子量的PLGA。
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