CN108853193A - 一种亚麻籽粕提取物及应用 - Google Patents

一种亚麻籽粕提取物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种亚麻籽粕提取物，其通过如下步骤制备：1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，萃取；2)低转速离心，取上清液；3)上清液旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，混合，高转速离心，取上清液；5)上清液旋蒸去除乙醇。本发明所公开的亚麻籽粕提取物为亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D环肽E及木酚素等醇溶性成分的混合物，经检测对肝癌细胞和肺癌细胞增殖有较好的抑制作用，可应有于抗肿瘤领域，也可用于进一步提取亚麻籽环肽单体，实现了亚麻籽粕的再利用，变废为宝，且提取过程中仅使用乙醇，溶剂可回收再利用，实现可持续生产，达到了降低企业生产成本的目的。因此该技术有较好的应用前景与价值。

Description

一种亚麻籽粕提取物及应用
技术领域
本发明涉及一种亚麻籽粕提取物及应用。
背景技术
亚麻籽油，是从亚麻籽中制取得的干性油油脂，呈黄色透明状，具有怡人的亚麻籽油香味，亚麻籽油中含有大量的亚麻酸，它可以在动物体内转化为二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等不饱和脂肪酸，具有极高的营养价值和多种生理功能，例如降血脂，降血压，防治心脑血管疾病、预防糖尿病、风湿、类风湿、抗肿瘤等功效，近年来逐渐得到人们的关注。
环肽广泛存在于自然界当中，动植物以及海洋生物当中都含有一定含量特定结构的环肽，亚麻籽环肽分子量约为1kDa,一般认为是由8到10个氨基酸残基组合而成的环形多肽，具有非常高的活性。从亚麻籽油中提取的环肽，被证实可影响程序性细胞死亡或细胞凋亡，细胞凋亡是细胞死亡的一种控制机制，其在生命周期的所有阶段是必不可少的，过度的细胞凋亡会导致发育障碍，而不足的细胞凋亡又会允许过度的细胞分裂，如癌症中所观察到的。因此亚麻籽环肽具有潜在的抗癌作用。
亚麻籽粕是亚麻籽压榨提取亚麻籽油后的副产品，除了含油较少外，富含亚麻籽全籽中的所有营养成分，开发潜力极大，但目前一般充当动物饲料或肥料使用，也存在把亚麻籽粕当作废料直接丢掉的情况，造成了严重的资源浪费。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供亚麻籽粕中有效成分的提取方法，实现了亚麻籽粕的有效再利用。
为解决上述技术问题，本发明公开了一种亚麻籽粕的提取物，其通过如下步骤制备：1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，萃取；2)低转速离心，取上清液；3)上清液旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；4)麻籽粕粗提物加入乙醇，混合，高转速离心，取上清液；5)上清液旋蒸去除乙醇，得亚麻籽粕有效成分提取物。
优选所述步骤1)中加入95％乙醇的量为8～12倍亚麻籽粕重量份，萃取时间为0.5～1.5小时；所述步骤2)中离心转速为800～1200rpm，离心时间为8～15分钟；所述步骤3)中上清液在45～55℃旋蒸；所述步骤4)中加入乙醇的量为0.8～1.5倍亚麻籽粕粗提物重量份，混合时间为5～15分钟，离心转速为5500～6500rpm，离心时间为5～10分钟；所述步骤5)中上清液在45～55℃旋蒸。
更优选包括如下步骤：1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，重量比1:10，萃取1小时；2)1000rpm转速离心10分钟，取上清液；3)上清液50℃旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，重量比5:4，混合5分钟，6000rpm转速离心8分钟，取上清液；5)上清液45℃旋蒸去除乙醇，得亚麻籽粕有效成分提取物。
本发明所公开的亚麻籽粕提取物，经试验验证，对肝癌细胞和肺癌细胞增值有较好的抑制作用，效果优于单独使用亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E，可用于抗肿瘤药物的制备。
经检测，本发明所公开亚麻籽粕提取物中含有亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E，故也可用于进一步提取单种的亚麻籽环肽，提取可采用从亚麻籽油中提取亚麻籽环肽相似的方法，如硅胶柱洗脱回收，高效液相制备色谱回收等。
本发明所公开的亚麻籽粕提取物为亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D环肽E及木酚素等醇溶性成分的混合物，对肝癌细胞和肺癌细胞增值有较好的抑制作用，效果优于单独使用亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E，可应有于抗肿瘤领域，也可用于进一步提取单种的亚麻籽环肽。实现了亚麻籽粕的再利用，变废为宝；且提取过程中仅使用乙醇，溶剂可回收再利用，实现可持续生产，达到了降低企业生产成本的目的，有较好的应用前景与价值。
具体实施方式
以下通过具体实施例再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅局限于以下的实施例。在不脱离本发明上述技术思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。
实施例1
制备方法：
1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，重量比1:8，萃取1.5小时；
2)800rpm转速离心8分钟，取上清液；
3)上清液55℃旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；
4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，重量比1:1，混合10分钟，5500r/pm转速离心5分钟，取上清液；
5)上清液45℃旋蒸去除乙醇，得亚麻籽粕有效成分提取物。
亚麻籽粕提取物得率：0.019％
实施例2
制备方法：
1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，重量比1:12，萃取1.5小时；
2)1200rpm转速离心10分钟，取上清液；
3)上清液50℃旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；
4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，重量比2:3，混合15分钟，6500r/pm转速离心10分钟，取上清液；
5)上清液50℃旋蒸去除乙醇，得亚麻籽粕有效成分提取物。
亚麻籽粕提取物得率：0.021％。
实施例3
制备方法：
1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，重量比1:10，萃取1小时；
2)1000rpm转速离心10分钟，取上清液；
3)上清液50℃旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；
4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，重量比1:1，混合10分钟，6000r/pm转速离心10分钟，取上清液；
5)上清液55℃旋蒸去除乙醇，得亚麻籽粕有效成分提取物。
亚麻籽粕提取物得率：0.023％
实施例4
制备方法：
1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，重量比1:10，萃取1小时；
2)1000r/pm转速离心10分钟，取上清液；
3)上清液50℃旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；
4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，重量比5:4，混合5分钟，6000rpm转速离心8分钟，取上清液；
5)上清液45℃旋蒸去除乙醇，得亚麻籽粕有效成分提取物。
亚麻籽粕提取物得率：0.025％
本发明以上实施例的亚麻籽粕提取物的试验测试结果如下：
1)以上实施例提取的亚麻籽粕提取物中亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E含量检测：采用HPLC外标对照法测定，色谱条件：使用Diamonsil C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm；柱体积2.5mL；冲洗体积50mL)，流动相A为乙腈，流动相B为蒸馏水，柱温为35℃，紫外检测波长为214nm，梯度洗脱，HPLC梯度洗脱程序如表1，，结果显示亚麻籽粕提取物中含有较高比例的亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E，具体结果见表2。
表1
表2
2)以上实施例提取的亚麻籽粕提取物采用CCK-8法(Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒))测定对肝癌细胞和肺癌细胞增值的抑制作用：将肝癌细胞以及肺癌细胞按照每孔250μL的体积分别加入到相应的孔板内，放置于37℃的CO2恒温培养箱中进行培养，经过24h之后当细胞进行贴壁生长完成之后，此时吸出旧的培养液体，将亚麻籽粕提取物稀释制备成5～500μM多级液体，再加入到相应的孔板内，并设定空白对照、阴性对照和阳性对照组(同浓度范围的亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E)，同时置于37℃的CO2恒温培养箱中进行培养。4h之后可使用酶标仪在波长为450nm处测定液体吸光值。统计其对肝癌细胞和肺癌细胞的体外抑制率和IC50，结果显示亚麻籽粕提取物对肝癌细胞和肺癌细胞增值有较好的抑制作用，效果优于单独使用亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E，具体结果见表3。
表3
3)以上实施例提取的亚麻籽粕提取物采用流式细胞仪细胞法检测对肝癌细胞和肺癌细胞的促凋亡作用：将对数生长期的肝癌细胞和肺癌细胞的细胞悬液体按照每孔4ml的体积加入到6孔板内，并于37℃的CO2恒温培养箱培养36h，随后将其吸出到干净的离心管中贮藏备用。使用不含EDTA的胰腺消化细胞加入到培养液中，进行均匀的吹打细胞，并进行离心得到沉淀细胞，随后用4℃的PBS洗涤，再次进行离心，从而进一步得到沉淀细胞。再将如2)配制的液体进行重悬细胞，并调节到适当的浓度。取150μL的细胞悬浮液于5ml流式管中，加入FITC混匀后在室温条件下避光储存10min，再加入PI以及PBS，在流式细胞仪上进行流式细胞凋亡检测。统计其对肝癌细胞和肺癌细胞的IC50，结果显示亚麻籽粕提取物对肝癌细胞和肺癌细胞增值有较好的抑制作用，效果优于单独使用亚麻籽环肽A、环肽C、环肽D和环肽E，具体结果见表4。
表4
肝癌细胞 肺癌细胞
IC50(μM) IC50(μM)
亚麻籽环肽A 47.7 65.7
亚麻籽环肽C 41.3 66.8
亚麻籽环肽D 45.7 74.1
亚麻籽环肽E 46.9 72.9
实施例1 33.4 45.6
实施例2 34.1 49.1
实施例3 32.4 43.6
实施例4 32.9 45.4

Claims (9)

1.一种亚麻籽粕的提取物，其特征在于，通过如下步骤制备：1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，萃取；2)低转速离心，取上清液；3)上清液旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，混合，高转速离心，取上清液；5)上清液旋蒸去除乙醇，即得。
2.如权利要求1所述的亚麻籽粕提取物，其特征在于：所述制备步骤1)中加入95％乙醇的量为8～12倍亚麻籽粕重量，萃取时间为0.5～1.5小时。
3.如权利要求1所述的亚麻籽粕提取物，其特征在于：所述制备步骤2)中离心转速为800～1200rpm，离心时间为8～15分钟。
4.如权利要求1所述的亚麻籽粕提取物，其特征在于：所述制备步骤3)中上清液在45～55℃旋蒸。
5.如权利要求1所述的亚麻籽粕提取物，其特征在于：所述制备步骤4)中加入乙醇的量为0.8～1.5倍亚麻籽粕粗提物重量份，混合时间为5～15分钟，离心转速为5500～6500rpm，离心时间为5～10分钟。
6.如权利要求1所述的亚麻籽粕提取物，其特征在于：所述步制备骤5)中上清液在45～55℃旋蒸。
7.如权利要求1所述的亚麻籽粕提取物，其特征在于，通过如下步骤制备：1)亚麻籽粕粉碎，加入95％乙醇，重量比1:10，萃取1小时；2)1000rpm转速离心10分钟，取上清液；3)上清液50℃旋蒸，得到亚麻籽粕粗提物；4)亚麻籽粕粗提物加入乙醇，重量比5:4，混合5分钟，6000rpm转速离心8分钟，取上清液；5)上清液45℃旋蒸去除乙醇，即得。
8.如权利要求1～7任一项亚麻籽粕提取物的用途，其特征在于：用于制备抗肿瘤药物。
9.如权利要求1～7任一项所述亚麻籽粕提取物的用途，其特征在于：用于提取亚麻籽环肽。
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