CN108812314A - 地果组织培养及再生体系建立 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及地果组织培养繁殖方法。包括以下步骤：(1)外植体的消毒；(2)带芽茎段诱导增殖培养；(3)愈伤组织分化培养；(4)组培苗生根培养(5)炼苗与移栽。本发明通过对地果的不同外植体诱导培养的方法进行了改进，解决了增殖系数低，分化率低，生根周期长等问题，通过本方法培养出的地果组培苗很大程度上提高了增殖系数、分化率和生根率，成活率可达90％。

Description

地果组织培养及再生体系建立
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，设计一种培养方法，更具体的涉及一种新型园林观赏植物—地果的组织培养方法。
背景技术：
地果(Ficus tikoua Bur.)，又名地枇杷、野地瓜、地石榴等。为桑科榕属常绿匍匐木质藤本。地果株形整齐，在园林植物配置中是一种优良的地被植物，适宜于公园或易遭游人践踏的场所绿化。地果耐半阴、耐贫瘠，高度适中，茎蔓纵横交错，是防风固沙的优良植物。还可以在城市园林景观建设中作为立体绿化材料，亦可作观果、观叶吊挂盆景。
地果生产中通常采用扦插和压条繁殖，繁殖系数也较低，生长缓慢，难以满足市场要求。利用植物组织培养技术，不仅可以提高繁殖速度，还可保持植物优良的观赏特性。对于实现产业化开发具有重要的意义。
发明内容：
针对目前技术中的不足，本发明的目的是提供一种可操作性强、重现性高且可以有效提高增殖系数、分化率和生根率的组织培养方法。
本发明采用的地果组织培养方法，包含带芽茎段的腋芽诱导与增殖，茎段愈伤组织的诱导与分化，不定芽的生根与移栽，步骤如下：
(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽、带芽茎段和叶片。
(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽、茎段和叶片接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L-1；叶片愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.02mg·L-1，氯苯氧乙酸(2,4-D)0.5mg·L-1；三种培养基蔗糖和琼脂含量一致，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1。20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(6)生根培养过程中，将(5)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；
(7)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。
与现有方法相比，本发明具有的有益效果在于：
1.本发明通过改进外植体消毒程序，对诱导培养基、分化增殖培养基和生根培养基的配方改良，以提高繁殖效率，解决了地果组培中容易污染，分化困难，增殖倍数低，不宜成活的问题，通过本方法培养出的地果长势较好。
2.本发明在生根培养基中加入活性炭，活性炭可以模拟暗环境从而促进植物生根，还可以防止植物材料褐化。解决了组培实验中经常出现的褐化现象，以及地果生根时间漫长的问题。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步阐述本发明，这些实施例仅具有范例性质，而不对于本发明的范围构成任何限制。本技术领域的普通技术人员应理解，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。
实施例1
一种地果组织培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽。
(2)顶芽愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0。
(3)芽的继代增殖培养，将(2)中的带愈伤的顶芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(4)生根培养过程中，将(3)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；
(5)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。
实施例2
一种地果组织培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌带芽茎段。
(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中茎段接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L-1；20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0。
(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1。20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(6)生根培养过程中，将(5)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；
(7)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。
实施例3
一种地果组织培养方法，包括如下步骤：
(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的带芽茎段。
(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(3)将(2)中经初代培养的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，直接获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(NAA)0.1mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；
(4)在(3)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。
对比例1
本实施例的一种地果组织培养方法，其培养基本步骤同实施例1，不同的是，生根培养基的配方是在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0。没有添加活性炭1.0g·L-1。
对比上述实施例1-3的培养结果如下：
实施例1-3中，生根培养基的分化率在90％-96％，植株生长健壮，叶片浓绿，生根培养过程中，根系健康粗壮。移栽后的成活率均大于90％。
对比例1中，生根率为30％，并且生根速度缓慢。
由此可见，本发明的组织培养方法的改进，对地果的增殖繁育结果有很大的影响，显著提高了地果的分化率和生根率，可以为快速繁殖提供有效的技术支持，为满足市场需求提供了新途径。
上述是对本发明的具体实施例进行了描述，需要理解的是，本发明并不局限于上述实施例的内容。对于本领域中的技术人员来说，在本发明技术方案的构思范围内可以有各种变化和更改，所作的任何变化和更改，均在本发明保护范围之内。

Claims (3)

1.地果的组织培养方法，所述方法包括如下步骤：
(1)外植体选择与消毒过程；选取生长状况良好的嫩茎，对其进行30s酒精消毒，12min升汞消毒处理，得到无菌的顶芽、带芽茎段和叶片。
(2)初代培养，将(1)中带芽茎段接种于初代培养基进行培养，所述初代培养基为在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中顶芽、茎段和叶片接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述顶芽愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1；茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.5mg·L-1；叶片愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.4mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.02mg·L-1，氯苯氧乙酸(2,4-D)0.5mg·L-1；三种培养基蔗糖和琼脂含量一致，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)2.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1。20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在MS培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)1.0mg·L-1，萘乙酸(NAA)1.0mg·L-1，苯基噻二唑(TDZ)0.5mg·L-1，20-25g·L-1蔗糖，6-7g·L-1琼脂，并调节pH值为5.8-6.0；
(6)生根培养过程中，将(5)中高2-3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加吲哚丁酸(IBA)1.0mg·L-1，碳粉1.0g·L-1，20-25g·L-1蔗糖，并调节pH值为5.8-6.0；
(7)在(6)生根培养结束后，将组培苗移栽驯化，正常养护。
2.根据权利要求1所述的地果组织培养方法，其特征为：选择外植体时，挑选当年生无病虫害的健壮嫩茎，然后进行预处理。消毒过程选择0.1％的氯化汞溶液，茎段浸泡10-12min，后用无菌水冲洗3-5次。
3.根据权利要求1所述的地果组织培养方法，其特征为：所述培养基pH值均为5.8-6.0，组织培养过程中培养条件均是温度为25±2℃，光照强度为2000lx，光周期为16h·d-1。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN103444540A (zh) * 2013-09-11 2013-12-18 武爱龙 一种组织培养快速繁育红花鸡蛋花的方法
CN104663447A (zh) * 2015-03-01 2015-06-03 陈凤佳 一种钝叶瓦松组织培养再生体系的建立方法

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