CN108795909A - 一种中性蛋白酶的提纯方法 - Google Patents

一种中性蛋白酶的提纯方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108795909A
CN108795909A CN201810713453.7A CN201810713453A CN108795909A CN 108795909 A CN108795909 A CN 108795909A CN 201810713453 A CN201810713453 A CN 201810713453A CN 108795909 A CN108795909 A CN 108795909A
Authority
CN
China
Prior art keywords
donkey hide
neutral proteinase
parts
donkey
hide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810713453.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108795909B (zh
Inventor
汪智杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Kaiyuan Rouge Catering Management Co Ltd
Original Assignee
Beijing Kaiyuan Rouge Catering Management Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Kaiyuan Rouge Catering Management Co Ltd filed Critical Beijing Kaiyuan Rouge Catering Management Co Ltd
Publication of CN108795909A publication Critical patent/CN108795909A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108795909B publication Critical patent/CN108795909B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
    • A23L13/20—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof from offal, e.g. rinds, skins, marrow, tripes, feet, ears or snouts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
    • A23L13/40—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof containing additives
    • A23L13/42—Additives other than enzymes or microorganisms in meat products or meat meals
    • A23L13/428—Addition of flavours, spices, colours, amino acids or their salts, peptides, vitamins, yeast extract or autolysate, nucleic acid or derivatives, organic acidifying agents or their salts or acidogens, sweeteners, e.g. sugars or sugar alcohols; Addition of alcohol-containing products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
    • A23L13/70—Tenderised or flavoured meat pieces; Macerating or marinating solutions specially adapted therefor
    • A23L13/72—Tenderised or flavoured meat pieces; Macerating or marinating solutions specially adapted therefor using additives, e.g. by injection of solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/06—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C14—SKINS; HIDES; PELTS; LEATHER
    • C14B—MECHANICAL TREATMENT OR PROCESSING OF SKINS, HIDES OR LEATHER IN GENERAL; PELT-SHEARING MACHINES; INTESTINE-SPLITTING MACHINES
    • C14B1/00—Manufacture of leather; Machines or devices therefor
    • C14B1/02—Fleshing, unhairing, samming, stretching-out, setting-out, shaving, splitting, or skiving skins, hides, or leather
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/90—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in food processing or handling, e.g. food conservation

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种中性蛋白酶的提纯方法,包括如下步骤：1)采用枯草芽孢杆菌AS1.398菌种发酵，得到中性蛋白酶发酵液；往发酵液中添加絮凝剂；2)板框过滤：将中性蛋白酶发酵液进行板框过滤收集滤液；3)离心：将板框过滤收集的滤液进行高速离心；4)粗滤：将收集的离心液进行粗滤；5)精滤：采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩；6)添加酶活保护剂：添加海藻糖和β‑环状精；7)沉淀:添加食用乙醇，收集中性蛋白酶沉淀部分；8)真空干燥：真空干燥，即可得到中性蛋白酶。本发明能有效的解决中性蛋白酶活损失问题，酶活收率明显提高。

Description

一种中性蛋白酶的提纯方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种中性蛋白酶的提纯方法。
背景技术
蛋白酶是生物体内的一类酵素(酶)，它们能够分解蛋白质。分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。抑制蛋白酶活性的小分子化合物被称蛋白酶抑制剂。许多病毒蛋白酶的抑制剂是很有效的抗病毒药。蛋白酶是水解蛋白质肽键的一类酶的总称。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。蛋白酶广泛存在于动物内遭、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。蛋白酶已广泛应用在皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面。皮革工业的脱毛和软化已大量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用，如用胃蛋白酶治疗消化不良，用酸性蛋白酶治疗支气管炎，以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗，还可用于将组织处理成为单个细胞，进行细胞组织培养。加酶洗衣粉是洗涤剂中的新产品，含碱性蛋白酶，能去除衣物上的血渍和蛋白污物，但使用时注意不要接触皮肤，以免损伤皮肤表面的蛋白质，引起皮疹、湿疹等过敏现象。按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的眎和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。
酶的应用已有千年以上的历史，虽然中性蛋白酶是最早为人类所发现并应用于工业化生产的蛋白酶制剂之一，但是广泛应用还是最近几十年的事。随着科学技术的发展，随着酶的制备、酶和细胞固定化、酶分子改造等酶技术的发展，中性蛋白酶的应用范围也不断扩大。自上世纪以来，世界各国科研工作者一直都致力于中性蛋白酶产生菌的筛选、酶提取、纯化以及酶学性质的研究和应用研究工作，取得了一定的成绩。对于中性蛋白酶的研究主要集中于以下几个方面：一是继续研究发现新的蛋白酶品种。二是对现有蛋白酶进行修饰、改性，延长和强化其功能，期望在降低应用成本的同时，减少酶本身的一些缺陷对其应用的限制。三是通过生物技术手段提高酶产量，降低酶生产成本。现代生物技术不仅发达而且发展很快，技术应用的可选择范围也很广，例如物理或化学诱变技术、细胞质融合技术、转基因技术以及克隆技术等等。四是提取和纯化技术，可以应用盐析、层析和凝胶过滤等技术，在提高纯化倍数提高的同时提高中性蛋白酶的提取率。
目前，工业上采用枯草芽孢杆菌AS1.398生产中性蛋白酶已有多年的历史,是一类被广泛应用于工业生产的酶类,在洗涤剂、制革、丝绸、食品加工等多种行业上有着广泛的用途。目前我国发酵生产中性蛋白酶工艺主要是发酵液直接喷雾干燥或盐析沉淀后再烘干，此类产品由于生产工艺过程的局限性，酶活在高温环境损失较大，酶活收率低，产品杂质多，微生物等卫生指标不符合食品行业要求，应用范围受限制，因此对发酵液中性蛋白酶的分离、提纯很有必要。
生物技术是当今迅速发展的高新技术领域，是21世纪最具有发展潜力的新兴产业，涵盖了基因工程、细胞工程、酶工程和生物化学工程等。目前，生物技术已被广泛用于食品、医药、农业、化工环保等部门。随着科学技术的进步、经济的发展和人民生活水平的提高，人们对食品的组成成分、营养价值和感官要求也越来越高，食品工业不再是传统农业食品的概念，工业食品将在人们日常生活中占据重要的地位。近30年来，细胞生物穴和分子生物学等领域在理论和方法上的突飞猛进、推动、促进了生物技术从传统技术转化为高新技术，为食品工业的技术进步注入了新的活力。
胶原是动物体内含量最多，分布最广的一类蛋白质，胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域有着广泛的应用。如中国传统的保健品阿胶，是驴皮为马科动物驴的干燥皮或鲜皮为原料制备而成。驴皮原料是极其复杂的物质，基本上是由蛋白质和非蛋白质两大组分，其中，蛋白质占鲜皮的30％-35％，生皮中的蛋白质种类很多，皮料蛋白质为纤维蛋白，非纤维蛋白等。纤维蛋白由胶原、角朊、弹性角朊等，胶原约占全部蛋白质总量的88％。
驴皮中富含驴皮胶，具有滋阴补血、安胎的功效，驴皮胶含有多种蛋白质、氨基酸、钙等，能改善血钙平衡，促进红细胞的生成。驴皮胶还能用于血虚萎黄，眩晕心悸，肌萎无力，心烦不眠等。目前，驴皮的应用主要是作为熬制阿胶的主要原料。驴皮的质量是影响阿胶质量的最重要的因素，驴皮分为三层，表面为角质层，里层为脂肪层，中层是胶原蛋白层。目前对驴皮的加工方法采用水做溶媒，长时间泡皮后用刮毛刀刮出驴皮的毛，操作周期长，工艺落后，劳动强度大。现代工艺一般采用过滤去毛、酶法脱毛、灰法脱毛、盐碱脱毛、氧化脱毛等，然而这些工艺会严重影响驴皮的质量。目前，驴皮的保存方法一般采用盐腌法或干燥法进行前处理。干燥法一般是指自然晾晒干燥，将皮张平铺在地方进行晾晒干燥。该法干燥时间长，生产效率低下，而且人工投入大，工人劳动强度大，劳动环境差，皮张在干燥过程中还会产生自然收缩、粘结、易造成局部干燥不透等现象。盐腌法保存驴皮一般指的是池法撒盐法和平地撒盐法两种方法。在两种方法中，池法撒盐腌制法保存法使用的最普遍。
中国专利201710302556.X公开了一种驴皮加工工艺，经过泡皮、碱膨胀、滚盐、酶解、灭酶、焯皮、化皮等过程，加工过程高便捷，脱毛效果好，并且减少了对环境的污染。
中国专利201410222689.2公开了一种中药阿胶原料药材驴皮的前处理方法，包括：1)鼓滚盐水腌制；2)沥水。该发明利用鼓滚盐水取代了传统的撒盐叠皮步骤，腌制的过程同时带有机械作用，腌制效率高，高浓度的食盐水对皮张的灭菌作用，有效减少皮张的腐败。
中国专利20101076321.9公开了一种驴皮胶原的制备方法，以鲜驴皮为原料，通过脱毛、脱脂、碎皮、碱液浸泡、低温酶解、纯化，改性等步骤，得到改性的驴皮胶原产品。通过该方法得到的驴皮胶原产品。
上述现有技术中的驴皮是作为阿胶的制备原料，目前市场上销售的驴皮类产品也多作为阿胶类的保健食品和药物类产品出售，而驴皮作为一种日常食用的产品却没有得到普及，此外，驴皮具有腥臭味，口感涩硬，不易咀嚼，极大地限制了驴皮的食用性。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种中性蛋白酶的提纯方法，能有效的解决中性蛋白酶活损失问题，酶活收率明显提高。
实现本发明的目的可以通过采取如下技术方案达到：
一种中性蛋白酶的提纯方法,其特征在于包括如下步骤：
1)采用枯草芽孢杆菌AS1.398菌种进行发酵，得到中性蛋白酶发酵液；然后往发酵液中添加絮凝剂，搅拌均匀，静置30分钟，使杂质与絮凝剂结合成团状；有利于过滤；
2)板框过滤：将絮凝反应完成后的中性蛋白酶发酵液进行板框过滤，过滤压力控制在0.6-0.8MPa，收集滤液；
3)离心：将板框过滤收集的滤液进行高速离心，转速为：10000rpm,进料流速为80L/h，收集离心液；
4)粗滤：将收集的离心液进行粗滤，采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤，聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um和0.1um(天津爱生膜过滤技术有限公司生产，型号分别MFOc和MFIb1)，操作压力0.1MPa；
5)精滤：将经过粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩，
聚砜超滤膜的截留分子量为10K(天津爱生膜过滤技术有限公司生产，滤膜型号USIb1)，操作压力0.1MPa；得到中性蛋白酶浓缩液；目的是过滤除去大部分水和小分子盐类等物质，截留中性蛋白酶分子，起到提纯作用；
6)添加酶活保护剂：往步骤5)得到的中性蛋白酶浓缩液中添加酶活保护剂，搅拌均匀；其中，所述酶活保护剂包括海藻糖和β-环状糊精，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.4-1.2％，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.2-0.6％；
7)沉淀:往经过步骤6)处理后的中性蛋白酶浓缩液中添加食用乙醇，边添加边缓慢搅拌，使得中性蛋白酶分子结晶沉淀出来，收集絮状的中性蛋白酶沉淀部分；
8)真空干燥：将步骤7)收集得到的絮状的中性蛋白酶沉淀部分进行真空干燥，即可得到中性蛋白酶。
实现本发明的目的还可以通过采取如下技术方案达到：
实现本发明的一种实施方式是：在步骤1)中，所述絮凝剂是阴离子聚丙烯酰胺；添加絮凝剂时，需先将絮凝剂按重量比为1:1000的比例溶解于水中，得到预溶絮凝液，然后将预溶絮凝液按重量比为1:100的比例添加到中性蛋白酶发酵液中，缓慢搅拌10分钟。
实现本发明的一种实施方式是：在步骤4)中，要求料液经过两次过滤，滤膜孔径分别为0.22um和0.1um。以达到最佳的除杂效果。
实现本发明的一种实施方式是：在步骤6)中，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8-1.2％，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5％。
实现本发明的一种实施方式是：在步骤6)中，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8％，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5％。
实现本发明的一种实施方式是：在步骤7)中，所述食用乙醇的浓度为90％；添加定量的浓度为90％的食用乙醇，使得最终的中性蛋白酶浓缩液中含食用乙醇的重量百分含量为50％。
本发明可以概述为：
本发明的目的是提供一种膳食用驴皮的制备方法，具体包括以下步骤：原料预处理，脱毛，软化，漂洗，腌制，酶解，蒸煮，切块，包装。本发明制备的驴皮不仅保持了驴皮原有的营养价值，并且改善了驴皮的口感，克服了驴皮本身的不良风味，并赋予了驴皮独特的香味，制备的膳食用驴皮营养价值丰富，解决了目前驴皮口味单一，不能满足当前驴皮的膳食需要的问题，本发明制备的膳食用驴皮食用方便，可以直接食用，也可以用于后续加工，极大地丰富了驴皮的膳食制品。本发明涉及生物食品领域，具体地涉及一种膳食用驴皮的制备方法。
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种膳食用驴皮的制备方法，此方法制备出的膳食用驴皮不仅保持了原有驴皮胶原的营养价值，并且改善了其涩、硬的口感，改善了驴皮自身的不良风味，易于保存，制备出的膳食用驴皮可以直接食用，并且可用于后续加工，制备出不同种类的驴皮膳食食品。
本发明提供了一种膳食用驴皮的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)原料预处理：将原料驴皮上的污垢和残余碎肉割除干净，刮尽皮下剩余油脂，然后将修整好的驴皮加入清水中冲洗，直至清水无色，得到预处理后的驴皮；
(2)脱毛：将步骤(1)中预处理后的驴皮浸泡到脱毛液中，加热至30-35℃，浸泡20-40分钟后，用高压水枪喷洗驴皮表面，进行脱毛处理，得到脱毛驴皮；
(3)软化：将软化液倒入塑料桶中，将步骤(2)中得到的脱毛驴皮置于1-3℃的软化液中进行第一次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-20--10℃下冷冻4-6小时后取出，然后置于1-3℃的软化液中进行第二次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-10--5℃下冷冻4-6小时后取出，然后置于1-3℃的软化液中进行第三次软化，软化8小时后将其捞出，得到软化后的驴皮；
(4)漂洗：将步骤(3)中得到的软化后的驴皮放入清水中漂洗，取一块漂洗后的驴皮切断，用pH试纸测量驴皮断面处的pH值，当驴皮断面处的pH值为中性，漂洗结束，得到漂洗后的驴皮；
(5)腌制：将步骤(4)得到的漂洗后的驴皮置于5-10℃的腌制液中腌制12小时后将驴皮捞出，晾干，得到晾干后的驴皮；
(6)酶解：将步骤(5)得到的晾干后的驴皮浸没在盐水中，并加入木瓜蛋白酶搅拌均匀，保持体系的温度为30-35℃，酶解5-15分钟后，再加入菠萝蛋白酶，酶解20-30分钟后，得到酶解后的驴皮以及酶解液；
(7)蒸煮：将步骤(6)中得到的酶解后的驴皮以及酶解液在温度为130℃的条件下加热20-30分钟后将其放入烘箱中进行过烘烤，得到烘烤后的驴皮；
(8)将步骤(7)烘烤后的驴皮进行切块、包装，即得到膳食用驴皮。
所述步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1-2:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的重量比为0.5-1.5:1-2:100；
优选地，所述步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1.2-1.8:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的质量比为0.7-1.2:1.3-1.8:100。
所述步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为1.5-2.5：1；所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述腌制液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为10-15:20-30:30-40:80-100；
优选地，所述步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为1.8-2.2：1，所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为12-14:22-28:33-37:85-95。
所述步骤(5)中的漂洗后的驴皮与腌制液的质量比为1:2.5；所述步骤(5)中的腌制液，按重量份计的包括：水：100份，食盐10-40份、山梨酸钾0.2-0.6份，乳酸钙2-5份，罗勒叶8-12份，紫苏叶5-8份，小茴香20-30份，香叶10-15份，姜黄1-1.5份，陈皮5-10份；
优选地，所述步骤(5)中的腌制液的配料，按重量份计的包括：水：100份，食盐15-35份、山梨酸钾0.3-0.5份，乳酸钙3-4份，罗勒叶9-11份，紫苏叶6-7份，小茴香22-28份，香叶11-14份，姜黄1.1-1.4份，陈皮6-9份。
所述步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:1-3:0.5-1：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.6-1.0％；
优选地，所述步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:1.5-2.5:0.6-0.9：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.7-0.9％。
所述步骤(7)中的烘烤的温度为86-90℃，烘烤的时间为10-15min；
优选地，所述步骤(7)中的烘烤的温度为87-89℃，烘烤的时间为11-14min。
无特别说明，本发明中所述的中性蛋白酶的酶活力为10000u/g；α-淀粉酶的酶活力为10000u/g；木瓜蛋白酶的酶活力为10000u/g；菠萝蛋白酶的酶活力为10000u/g。
本发明的有益效果为:
(1)本发明在脱毛液中加入了中性蛋白酶和α-淀粉酶，控制脱毛时间以及酶浓度，可以有效地去除驴毛，并且可以改善驴皮表面性质，有利于后续处理。
(2)本发明通过反复软化冷冻的过程，可以改善制备的驴皮涩硬的口感，并且可以去除驴皮的腥味。
(3)本发明采取木瓜蛋白酶和菠萝蛋白粉分步水解的方式，不仅使得制备的膳食用驴皮有弹性、易嚼，并且能大大提高人体对驴皮胶原蛋白的吸收率，提高了驴皮的食用价值。
(4)本发明在腌制液中加入了乳酸钙，罗勒叶，紫苏叶，小茴香，香叶，姜黄和陈皮，通过调节腌制液中各组分的比例可以进一步可以去除驴皮的腥味，有效地克服了驴皮本身的不良风味，赋予了驴皮的独特的风味，更加适口。
(5)本发明制备的驴皮不仅保持了驴皮原有的营养价值，并且改善了驴皮的口感，克服了驴皮本身的不良风味，营养价值丰富，解决了目前驴皮口味单一，不能满足当前驴皮的膳食需要的问题，本发明制备的膳食用驴皮食用方便，可以直接食用，也可以用于后续加工，极大地丰富了驴皮的膳食制品。
具体实施方式
实施例1一种膳食用驴皮的制备方法
(1)原料预处理：将原料驴皮上的污垢和残余碎肉割除干净，刮尽皮下剩余油脂，然后将修整好的驴皮加入清水中冲洗，直至清水无色，得到预处理后的驴皮；
(2)脱毛：将步骤(1)中预处理后的驴皮浸泡到脱毛液中，加热至30℃，浸泡20分钟后，用高压水枪喷洗驴皮表面，进行脱毛处理，得到脱毛驴皮；
(3)软化：将软化液倒入塑料桶中，将步骤(2)中得到的脱毛驴皮置于1℃的软化液中进行第一次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-20℃下冷冻4小时后取出，然后置于1℃的软化液中进行第二次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-10℃下冷冻4小时后取出，然后置于1℃的软化液中进行第三次软化，软化8小时后将其捞出，得到软化后的驴皮；
(4)漂洗：将步骤(3)中得到的软化后的驴皮放入清水中漂洗，取一块漂洗后的驴皮切断，用pH试纸测量驴皮断面处的pH值，当驴皮断面处的pH值为中性，漂洗结束，得到漂洗后的驴皮；
(5)腌制：将步骤(4)得到的漂洗后的驴皮置于5℃的腌制液中腌制12小时后将驴皮捞出，晾干，得到晾干后的驴皮；
(6)酶解：将步骤(5)得到的晾干后的驴皮浸没在盐水中，并加入木瓜蛋白酶搅拌均匀，保持体系的温度为30℃，酶解5分钟后，再加入菠萝蛋白酶，酶解20分钟后，得到酶解后的驴皮以及酶解液；
(7)蒸煮：将步骤(6)中得到的酶解后的驴皮以及酶解液在温度为130℃的条件下加热20分钟后将其放入烘箱中进行过烘烤，得到烘烤后的驴皮；
(8)将步骤(7)烘烤后的驴皮进行切块、包装，即得到膳食用驴皮。
步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的重量比为0.5:1:100；
步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为1.5：1；所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为10:20:30:80；
步骤(5)中的漂洗后的驴皮与腌制液的质量比为1:2.5；所述步骤(5)中的腌制液，按重量份计的包括：水：100份，食盐10份、山梨酸钾0.2份，乳酸钙2份，罗勒叶8份，紫苏叶5份，小茴香20份，香叶10份，姜黄1份，陈皮5份。
步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:1:0.5：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.6％。
步骤(7)中的烘烤的温度为86℃，烘烤的时间为10min。
实施例2一种膳食用驴皮的制备方法
(1)原料预处理：将原料驴皮上的污垢和残余碎肉割除干净，刮尽皮下剩余油脂，然后将修整好的驴皮加入清水中冲洗，直至清水无色，得到预处理后的驴皮；
(2)脱毛：将步骤(1)中预处理后的驴皮浸泡到脱毛液中，加热至35℃，浸泡40分钟后，用高压水枪喷洗驴皮表面，进行脱毛处理，得到脱毛驴皮；
(3)软化：将软化液倒入塑料桶中，将步骤(2)中得到的脱毛驴皮置于3℃的软化液中进行第一次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-10℃下冷冻6小时后取出，然后置于3℃的软化液中进行第二次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-5℃下冷冻6小时后取出，然后置于3℃的软化液中进行第三次软化，软化8小时后将其捞出，得到软化后的驴皮；
(4)漂洗：将步骤(3)中得到的软化后的驴皮放入清水中漂洗，取一块漂洗后的驴皮切断，用pH试纸测量驴皮断面处的pH值，当驴皮断面处的pH值为中性，漂洗结束，得到漂洗后的驴皮；
(5)腌制：将步骤(4)得到的漂洗后的驴皮置于10℃的腌制液中腌制12小时后将驴皮捞出，晾干，得到晾干后的驴皮；
(6)酶解：将步骤(5)得到的晾干后的驴皮浸没在盐水中，并加入木瓜蛋白酶搅拌均匀，保持体系的温度为35℃，酶解15分钟后，再加入菠萝蛋白酶，酶解30分钟后，得到酶解后的驴皮以及酶解液；
(7)蒸煮：将步骤(6)中得到的酶解后的驴皮以及酶解液在温度为130℃的条件下加热30分钟后将其放入烘箱中进行过烘烤，得到烘烤后的驴皮；
(8)将步骤(7)烘烤后的驴皮进行切块、包装，即得到膳食用驴皮。
步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为2:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的重量比为1.5:2:100。
步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为2.5：1；所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为15:30:40:100。
步骤(5)中的漂洗后的驴皮与腌制液的质量比为1:2.5；所述步骤(5)中的腌制液，按重量份计的包括：水：100份，食盐40份、山梨酸钾0.6份，乳酸钙5份，罗勒叶12份，紫苏叶8份，小茴香30份，香叶15份，姜黄1.5份，陈皮10份。
步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:3:1：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为1.0％。
步骤(7)中的烘烤的温度为90℃，烘烤的时间为15min。
实施例3一种膳食用驴皮的制备方法
(1)原料预处理：将原料驴皮上的污垢和残余碎肉割除干净，刮尽皮下剩余油脂，然后将修整好的驴皮加入清水中冲洗，直至清水无色，得到预处理后的驴皮；
(2)脱毛：将步骤(1)中预处理后的驴皮浸泡到脱毛液中，加热至32℃，浸泡30分钟后，用高压水枪喷洗驴皮表面，进行脱毛处理，得到脱毛驴皮；
(3)软化：将软化液倒入塑料桶中，将步骤(2)中得到的脱毛驴皮置于2℃的软化液中进行第一次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-15℃下冷冻5小时后取出，然后置于2℃的软化液中进行第二次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-8℃下冷冻5小时后取出，然后置于2℃的软化液中进行第三次软化，软化8小时后将其捞出，得到软化后的驴皮；
(4)漂洗：将步骤(3)中得到的软化后的驴皮放入清水中漂洗，取一块漂洗后的驴皮切断，用pH试纸测量驴皮断面处的pH值，当驴皮断面处的pH值为中性，漂洗结束，得到漂洗后的驴皮；
(5)腌制：将步骤(4)得到的漂洗后的驴皮置于8℃的腌制液中腌制12小时后将驴皮捞出，晾干，得到晾干后的驴皮；
(6)酶解：将步骤(5)得到的晾干后的驴皮浸没在盐水中，并加入木瓜蛋白酶搅拌均匀，保持体系的温度为32℃，酶解10分钟后，再加入菠萝蛋白酶，酶解25分钟后，得到酶解后的驴皮以及酶解液；
(7)蒸煮：将步骤(6)中得到的酶解后的驴皮以及酶解液在温度为130℃的条件下加热25分钟后将其放入烘箱中进行过烘烤，得到烘烤后的驴皮；
(8)将步骤(7)烘烤后的驴皮进行切块、包装，即得到膳食用驴皮。
步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1.2:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的质量比为0.7:1.3:100。
步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为1.8：1，所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为12:22:33:85。
步骤(5)中的漂洗后的驴皮与腌制液的质量比为1:2.5；步骤(5)中的腌制液的配料，按重量份计的包括：水：100份，食盐15份、山梨酸钾0.3份，乳酸钙3份，罗勒叶9份，紫苏叶6份，小茴香22份，香叶11份，姜黄1.1份，陈皮6份。
步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:1.5:0.6：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.7％。
步骤(7)中的烘烤的温度为87℃，烘烤的时间为11min。
实施例4一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例3，与实施例3的差别在于：
步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1.8:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的质量比为1.2:1.8:100。
步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为2.2：1，所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为14:28:37:95。
步骤(5)中的腌制液的配料，按重量份计的包括：水：100份，食盐35份、山梨酸钾0.5份，乳酸钙4份，罗勒叶11份，紫苏叶7份，小茴香28份，香叶14份，姜黄1.4份，陈皮9份。
步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:2.5:0.9：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.9％。
步骤(7)中的烘烤的温度为89℃，烘烤的时间为14min。
实施例5一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例4，与实施例4的差别在于：
步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1.5:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的质量比为1:1.5:100；
步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为2：1，所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为13:25:35:90；
步骤(5)中的腌制液的配料，按重量份计的包括：水：100份，食盐25份、山梨酸钾0.4份，乳酸钙3.5份，罗勒叶10份，紫苏叶6.5份，小茴香26份，香叶12份，姜黄1.3份，陈皮7份。
步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:2:0.7:80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.8％。
步骤(7)中的烘烤的温度为88℃，烘烤的时间为13min。
实施例6一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于
步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1.6:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的质量比为0.9:1.6:100；
步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为2：1，所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为13:26:35:88；
步骤(5)中的腌制液的配料，按重量份计的包括：水：100份，食盐20份、山梨酸钾0.4份，乳酸钙3.8份，罗勒叶10.5份，紫苏叶6.5份，小茴香24份，香叶13份，姜黄1.2份，陈皮8份。
步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:2.3:0.8:80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.8％。
步骤(7)中的烘烤的温度为88℃，烘烤的时间为12min。
对比例1一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(2)中脱毛液为中性蛋白酶和水的混合液，脱毛液中的中性蛋白酶和水的质量比为2.5:100；
对比例2一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于:
步骤(3)的软化过程为：将软化液倒入塑料桶中，将步骤(2)中得到的脱毛驴皮置于2℃的软化液中进行第一次软化，软化8小时后将驴皮捞出，得到软化后的驴皮。
对比例3一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(5)中的腌制液的配料中不含乳酸钙，其他的配料及其用量与步骤(5)相同。
对比例4一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(5)中的腌制液的配料中不含紫苏叶，其他配料及其用量与步骤(5)相同。
对比例5一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(5)中的腌制液的配料中不含乳酸钙和紫苏叶，其他配料及其用量与步骤(5)相同。
对比例6一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(6)为：将步骤(5)得到的晾干后的驴皮浸没在盐水中，并加入木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶搅拌均匀，保持体系的温度为32℃，酶解35分钟后，得到酶解后的驴皮以及酶解液。
对比例7一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(6)为中酶解体系的温度为50℃。
对比例8一种膳食用驴皮的制备方法
制备方法基本同实施例5，与实施例5的差别在于：
步骤(6)中的酶解体系的温度为28℃。
实验例1将实施例1-5和对比例1-8制备的膳食用驴皮分别请10位实验室成员品尝，进行盲选评估，然后按照设计的感官评估独立进行打分，最后交给实验设计人进行统计分析，记录平均值，感官评估的各项指标内容与分值如下:
嗅觉的香味是指样品的香气，以1-6之间的数值表示，1香味非常淡，6表示香味非常浓。
嗅觉的异味是指样品的非正常气味，以1-6之间的数值表示，1表示异味大，有明显的腥臭气味，6表示异味非常淡，无明显的腥臭气味。
口感的弹性是指样品的弹性，以1-6之间的数值表示，1表示无弹性，口感较硬，不易嚼，6表示有弹性，易嚼。
口感的滋味是指样品的味道，以1-6之间的数值表示，1表示口感发涩，6表示无明显的发涩口感。
感官评价结果如表1所示。
表1
从表1的感官评价结果可知，本发明实施例1-5中制备的膳食用驴皮的感官评分远高于对比例1-8，说明本发明制备的膳食用驴皮不仅有效克服了驴皮本身的腥臭味，而且还赋予了膳食用驴皮独特的香气，并且改善了驴皮涩硬的口感，使得驴皮有弹性并且易嚼，其中，实施例6中的感官评分最高，香味值为2.9，异味非常淡，异味值为6.1，而且口感较好，其中弹性评分为5.2，滋味评分为5.7。
惟以上所述者，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能以此限定本发明实施之范围，即大凡依本发明权利要求及发明说明书所记载的内容所作出简单的等效变化与修饰，皆仍属本发明权利要求所涵盖范围之内。此外，摘要部分和标题仅是用来辅助专利文件搜寻之用，并非用来限制本发明之权利范围。

Claims (10)

1.一种中性蛋白酶的提纯方法,其特征在于：包括如下步骤：
1)采用枯草芽孢杆菌AS1.398菌种进行发酵，得到中性蛋白酶发酵液；然后往发酵液中添加絮凝剂，搅拌均匀，静置30分钟，使杂质与絮凝剂结合成团状；
2)板框过滤：将絮凝反应完成后的中性蛋白酶发酵液进行板框过滤，过滤压力控制在0.6-0.8MPa，收集滤液；
3)离心：将板框过滤收集的滤液进行高速离心，转速为：10000rpm,进料流速为80L/h，收集离心液；
4)粗滤：将收集的离心液进行粗滤，采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤，聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um和0.1um，操作压力0.1MPa；要求料液经过两次膜过滤，膜孔径分别为0.22um和0.1um，除去杂质和细菌；
5)精滤：将经过粗滤后的料液采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩，聚砜超滤膜的截留分子量为10K，操作压力0.1MPa；得到中性蛋白酶浓缩液；
6)添加酶活保护剂：往步骤5)得到的中性蛋白酶浓缩液中添加酶活保护剂，搅拌均匀；其中，所述酶活保护剂包括海藻糖和β-环状糊精，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8-1.2％，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5％；
7)沉淀:往经过步骤6)处理后的中性蛋白酶浓缩液中添加食用乙醇，边添加边缓慢搅拌，使得中性蛋白酶分子结晶沉淀出来，收集絮状的中性蛋白酶沉淀部分；
8)真空干燥：将步骤7)收集得到的絮状的中性蛋白酶沉淀部分进行真空干燥，即可得到中性蛋白酶。
2.如权利要求1所述的中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤1)中，所述絮凝剂是阴离子聚丙烯酰胺；添加絮凝剂时，需先将絮凝剂按重量比为1:1000的比例溶解于水中，得到预溶絮凝液，然后将预溶絮凝液按重量比为1:100的比例添加到中性蛋白酶发酵液中，缓慢搅拌10分钟。
3.如权利要求1所述的中性蛋白酶的提纯方法，其特征在于:在步骤6)中，所述海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8％，β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5％。
4.一种膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)原料预处理：将原料驴皮上的污垢和残余碎肉割除干净，刮尽皮下剩余油脂，然后将修整好的驴皮加入清水中冲洗，直至清水无色，得到预处理后的驴皮；
(2)脱毛：将步骤(1)中预处理后的驴皮浸泡到脱毛液中，加热至30-35℃，浸泡20-40分钟后，用高压水枪喷洗驴皮表面，进行脱毛处理，得到脱毛驴皮；
(3)软化：将软化液倒入塑料桶中，将步骤(2)中得到的脱毛驴皮置于1-3℃的软化液中进行第一次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-20--10℃下冷冻4-6小时后取出，然后置于1-3℃的软化液中进行第二次软化，软化8小时后将驴皮捞出，将捞出后的驴皮在-10--5℃下冷冻4-6小时后取出，然后置于1-3℃的软化液中进行第三次软化，软化8小时后将其捞出，得到软化后的驴皮；
(4)漂洗：将步骤(3)中得到的软化后的驴皮放入清水中漂洗，取一块漂洗后的驴皮切断，用pH试纸测量驴皮断面处的pH值，当驴皮断面处的pH值为中性，漂洗结束，得到漂洗后的驴皮；
(5)腌制：将步骤(4)得到的漂洗后的驴皮置于5-10℃的腌制液中腌制12小时后将驴皮捞出，晾干，得到晾干后的驴皮；
(6)酶解：将步骤(5)得到的晾干后的驴皮浸没在盐水中，并加入木瓜蛋白酶搅拌均匀，保持体系的温度为30-35℃，酶解5-15分钟后，再加入菠萝蛋白酶，酶解20-30分钟后，得到酶解后的驴皮以及酶解液；
(7)蒸煮：将步骤(6)中得到的酶解后的驴皮以及酶解液在温度为130℃的条件下加热20-30分钟后将其放入烘箱中进行过烘烤，得到烘烤后的驴皮；
(8)将步骤(7)烘烤后的驴皮进行切块、包装，即得到膳食用驴皮。
5.如权利要求4所述的膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1-2:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的重量比为0.5-1.5:1-2:100。
6.如权利要求4所述的膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为1.5-2.5：1；所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为10-15:20-30:30-40:80-100；优选地，所述步骤(3)中的软化液与脱毛驴皮的质量比为1.8-2.2：1，所述的软化液为氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的混合液；所述软化液中氯化钾、碳酸钠、磷酸二氢钾和水的质量比为12-14:22-28:33-37:85-95。
7.如权利要求4所述的膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中的漂洗后的驴皮与腌制液的质量比为1:2.5；所述步骤(5)中的腌制液，按重量份计的包括：水：100份，食盐10-40份、山梨酸钾0.2-0.6份，乳酸钙2-5份，罗勒叶8-12份，紫苏叶5-8份，小茴香20-30份，香叶10-15份，姜黄1-1.5份，陈皮5-10份；优选地，所述步骤(5)中的腌制液的配料，按重量份计的包括：水：100份，食盐15-35份、山梨酸钾0.3-0.5份，乳酸钙3-4份，罗勒叶9-11份，紫苏叶6-7份，小茴香22-28份，香叶11-14份，姜黄1.1-1.4份，陈皮6-9份。
8.如权利要求4所述的膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:1-3:0.5-1：80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.6-1.0％；优选地，所述步骤(6)中的晾干后的驴皮、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和盐水的质量比为250:1.5-2.5:0.6-0.9:80；所述盐水中的氯化钠的质量百分含量为0.7-0.9％。
9.如权利要求4所述的膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：所述步骤(7)中的烘烤的温度为86-90℃，烘烤的时间为10-15min。
10.如权利要求5所述的膳食用驴皮的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的脱毛液与预处理后的驴皮的质量比为1.2-1.8:1；所述的脱毛液为中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的混合液；所述脱毛液中的中性蛋白酶、α-淀粉酶和水的质量比为0.7-1.2:1.3-1.8:100。
CN201810713453.7A 2018-05-08 2018-07-03 一种膳食用驴皮的制备方法 Active CN108795909B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810431690 2018-05-08
CN2018104316904 2018-05-08

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108795909A true CN108795909A (zh) 2018-11-13
CN108795909B CN108795909B (zh) 2020-07-03

Family

ID=64074043

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810713453.7A Active CN108795909B (zh) 2018-05-08 2018-07-03 一种膳食用驴皮的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108795909B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113699207A (zh) * 2021-08-31 2021-11-26 苏州姑苏欣颜魅丽医疗美容诊所有限公司 一种美容抗衰老功能肽的制备方法与应用
CN114561373A (zh) * 2022-04-28 2022-05-31 北京挑战农业科技有限公司 一种水溶型n- 酰基高丝氨酸内酯酶的制备方法
CN117646055A (zh) * 2024-01-29 2024-03-05 吉林大学 粗毛纤孔菌多肽及其制备方法和在抗牙周炎药物中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101851339A (zh) * 2010-05-19 2010-10-06 成都新际生物活性胶原开发有限公司 一种驴皮胶原的制备方法
CN102960749A (zh) * 2012-12-19 2013-03-13 浙江青莲食品股份有限公司 一种重组膨化猪皮的加工方法
CN107212295A (zh) * 2017-07-19 2017-09-29 安徽夏星食品有限公司 一种控制猪皮出胶的水晶肘花的生产方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101851339A (zh) * 2010-05-19 2010-10-06 成都新际生物活性胶原开发有限公司 一种驴皮胶原的制备方法
CN102960749A (zh) * 2012-12-19 2013-03-13 浙江青莲食品股份有限公司 一种重组膨化猪皮的加工方法
CN107212295A (zh) * 2017-07-19 2017-09-29 安徽夏星食品有限公司 一种控制猪皮出胶的水晶肘花的生产方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113699207A (zh) * 2021-08-31 2021-11-26 苏州姑苏欣颜魅丽医疗美容诊所有限公司 一种美容抗衰老功能肽的制备方法与应用
CN114561373A (zh) * 2022-04-28 2022-05-31 北京挑战农业科技有限公司 一种水溶型n- 酰基高丝氨酸内酯酶的制备方法
CN117646055A (zh) * 2024-01-29 2024-03-05 吉林大学 粗毛纤孔菌多肽及其制备方法和在抗牙周炎药物中的应用
CN117646055B (zh) * 2024-01-29 2024-04-05 吉林大学 粗毛纤孔菌多肽及其制备方法和在抗牙周炎药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108795909B (zh) 2020-07-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103205480B (zh) 一种用鱼皮或鱼骨生产胶原蛋白低聚肽的方法
CN101948900B (zh) 一种从牛软骨提取水解胶原蛋白的方法
CN101579132B (zh) 一种从虾头和虾壳中提取蛋白质和甲壳素的方法
CN111218495B (zh) 鱼鳞胶原蛋白及其制备方法和应用以及富含鱼鳞胶原蛋白的冰淇淋及其制备方法
CN110684816A (zh) 一种高品质牡蛎蛋白肽的制备方法及其应用
CN108795909A (zh) 一种中性蛋白酶的提纯方法
CN102599587A (zh) 一种用芒果的皮和肉制作芒果原汁的方法
CN105624250A (zh) 一种酶解-发酵偶联的制备水产蛋白活性肽方法
CN103243143A (zh) 利用骨粉提取水解胶原蛋白的方法
CN101129203A (zh) 一种鱼提取液及鱼肉膏的生产方法
CN103361393A (zh) 一种大鲵低聚肽的制备方法
CN103169942A (zh) 一种制备鹿茸胶原蛋白的酶解方法
NO342626B1 (en) A new method to improve enzyme hydrolysis and resultant protein flavor and bio-activity of fish offcuts
CN107200781B (zh) 一种从大鲵中提取胶原蛋白的方法
CN1543873A (zh) 一种柿子饮料的制备方法
CN111493292A (zh) 一种以海洋生物和/或海产品加工废弃物为原料制备精膏的方法
CN103276038B (zh) 一种试剂级蛋白胨的生产方法
CN101253924A (zh) 一种高纯度动物软骨胶原多肽的制备方法
CN101095456A (zh) 一种新型鱼奶及其生产工艺
CN108485856A (zh) 一种黑枸杞干红的酿造方法
CN109329868B (zh) 一种营养强化型风味鱼露及其加工方法
CN109497446A (zh) 采用复合酶制剂的肉制品生产工艺
CN110846367A (zh) 一种从新鲜牛棒骨中提取小分子肽的方法及其应用
CN108396048A (zh) 牡蛎活性多肽的制备方法
CN111000182B (zh) 一种普洱茶茶冻的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant