CN108795830B - 一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacilluselgii）SWL-W8及其应用 - Google Patents

一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacilluselgii）SWL-W8及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL‑W8，保藏编号为CCTCC NO.M 2017113，保藏日期为2017年3月，保藏在中国典型培养物保藏中心。该菌剂可应用于植物病原真菌和细菌的拮抗，尤其适用于魔芋软腐病等植物病原细菌引起土传病害防治；其无污染、无有害残留，生产工艺简单、成本低廉，易于推广。

Description

一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacilluselgii）SWL-W8及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，涉及一种埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8及其应用。
背景技术
魔芋又称鬼芋、蒟蒻等，属被子植物门、单叶植物纲、天南星科魔芋属，多年生草本块茎植物，具有重要的药用、保健功能及观赏价值。魔芋块茎富含葡甘聚糖(KGM)，可广泛用于食品、医疗、化工、造纸、纺织、石油等行业，被称为“东方魔粉”。我国是魔芋生产大国，占世界总产量60％，魔芋精粉年产量约为1.5万吨。但是，魔芋软腐病的危害严重影响了魔芋产业的发展，特别是随着连作和种植面积的扩大，软腐病的发病率越来越高，每年基本达到20-30％，高温多雨季节更高达50％左右。该病害造成的损失一般在30％左右，严重者可达80％甚至绝收，被称为魔芋的“癌症”。目前尚未针对软腐病的抗病品种，也没有特效药剂，严重制约着魔芋产业发展。魔芋软腐病的防治主要依赖普通药剂，如农用链霉素，多效霉素，宁南霉素、多菌灵、腐烂灵、芋腐灵、硫酸铜等进行防治，但防治效果不理想，急需寻找有效防治方法。农药的过度使用和不当滥用也容易引起软腐病病菌的抗性，同时造成环境污染、生态破坏、食品污染等严重问题。因此，利用无公害防治技术防治软腐病，减少农药使用量和减轻农药污染，已成为魔芋产业可持续发展的当务之急。
利用生物防治技术手段进行植物病害防治，具有安全、高效、无污染等特点，符合绿色植保理念，与生态环境可持续发展吻合，是未来农药发展的必然趋势。
发明内容
本发明的提供一种埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8及其应用，该菌株能够对多种植物病原真菌和细菌起到很好的拮抗作用，特别是对魔芋软腐病病原菌具有很好的抑制作用，防治魔芋软腐病的效果与化学防治效果无明显差别，并具有促生作用。该菌绿色无污染，是环境友好的新型农药制剂，解决现有技术中存在的问题。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8，保藏编号为CCTCC NO.M2017113，保藏在中国典型培养物保藏中心，该菌株能够对多种植物病原真菌和细菌起到拮抗作用。
进一步的，所述埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂的制备方法，包括以下步骤：
菌种活化：将4℃保藏的埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8 菌株接种至LB固体培养基上，30～37℃培养24～48小时，然后挑取单菌落接种于LB斜面培养基上，30～37℃恒温培养24～48小时；
种子液的制备：将上述活化好的菌种接种至LB液体培养基中，30～37℃下摇床培养24～48小时，得到种子液；
发酵培养：将种子液接入发酵培养基中，接种量为8％，30～37℃，摇床转速为150～230rpm的条件下培养48～72小时，得到菌液孢子数为109 cfu/mL的液体制剂；发酵培养基的组分为：葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉10g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸镁0.6g、水1000mL， pH 6。
固体菌剂制备：将发酵液与载体混匀后制成微生物菌剂。
进一步的，所述载体是麸皮、稻糠的一种或几种。
进一步的，所述埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂的使用方法如下，将埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂按1:20～1:100的体积比例用水稀释，将稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤。
本发明的有益效果是
本发明埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8能有效抑制多种病原细菌和病原真菌，从而防止植物病害的发生，其主要抑菌成份为抗菌蛋白。尤其适用于魔芋软腐病等植物病原细菌引起土传病害防治。其有益效果在于：抑菌谱广，对多种植物常见细菌病害和真菌病害都有很好的抑菌效果；具有明显的促生作用，对植株生长、提高植物抗逆性具有促进作用；对高温、酸碱和紫外辐射的耐受力较强，具有很强的抗逆性；无污染、无有害残留，是环境友好型生物农药；本发明生产工艺简单、成本低廉，易于推广。
附图说明
图1是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌落形态图；
图2是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8扫描电镜观察图；
图3是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8的BIOLOG鉴定图；
图4是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对魔芋软腐病病原菌的拮抗作用图；
图5是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对水稻恶苗病菌的拮抗作用图；
图6是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对番茄早疫病菌的拮抗作用图；
图7是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8抗菌蛋白DEAE 离子层析图(左)和Sephadex G-75层析图(右)；
图8是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8抗菌蛋白电泳图谱；
图9是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8抗菌蛋白LS51 对甘蓝黑腐病菌的抑制活性图；
图10是不同温度处理后埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8 抗菌蛋白LS51对魔芋软腐病菌的抑制活性图；
图11是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对魔芋软腐病的盆栽和大田预防试验图；
图12是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对魔芋块茎的促生长作用。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
埃吉类芽孢杆菌SWL-W8由陕西省微生物研究所在云南腾冲温泉分离得到。对该菌进行了形态、BIOLOG及16S rDNA鉴定,确定为埃吉类芽孢杆菌 (Paenibacillus elgii)。菌落凸起，乳白色，表面光滑，湿润。革兰氏阳性菌，菌株形态为长杆状，大小约为0.2～0.5×3～10μm，参见图2。
在抗菌谱方面，本发明的菌株埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii) SWL-W8对魔芋软腐病菌(Pectobacterium carotovorum)、烟草青枯病菌 (Ralstoniasolanacearum)、甘蓝黑腐病菌(Xanthomonas campestris)、水稻恶苗病菌(Fusariummoniliforme Sheld.)、棉立枯病菌(Rhizoctonia solani KChn)、苹果青霉病菌(Penicillium sp.)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)等植物病原菌都有抑制作用。
在抗菌机制方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii) SWL-W8通过产生抗菌蛋白抑制植物病原菌的生长。
在诱导抗性方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii) SWL-W8可通过诱导植物蛋白组和抗病相关基因表达水平的变化等，从而提高抗病性能，达到减少病害发生的目的。
在促进植物生长方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii) SWL-W8对魔芋等作物具有很好的促生作用，施用该菌剂后，作物农艺性状均优于对照组。
在抗逆性方面，本发明的埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8 具有对紫外线不敏感，耐高温，耐储存等特点，易于在田间推广使用。
在田间防效方面，埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂对魔芋软腐病具有很好的防治作用。
从埃吉类芽孢杆菌SWL-W8中提取出主要抑菌成分为抗菌蛋白。发酵液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE离子层析柱、Sephadex G-75葡聚糖凝胶层析获得约25KD抗菌蛋白。对抗菌蛋白进行生物学特性研究，该蛋白对酸稳定，碱度变大，抑菌活性减低；40℃-80℃处理30min，抑菌活性不变，100℃处理30min抑菌活性下降至74.5％。紫外照射2-24h，蛋白抑菌活性不变。对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感。
埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌剂制备方法步骤为菌种活化、种子液的制备、发酵培养，获得菌液孢子数为109cfu/mL的液体制剂；发酵培养基的组分为：葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉10g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸镁0.6g、水1000mL，pH 6。
埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌剂对魔芋软腐病的预防效果为78.30％，对魔芋软腐病的治疗作用为74.44％，与常用药剂农用链霉素的防治效果相当，可作为替代药剂使用。同时，施用埃吉类芽孢杆菌SWL-W8菌剂后，魔芋全株高，块茎膨大系数等农艺性状均比清水和药剂对照组有所提高，对植物促生长效果明显。
一、埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8的分离
埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8由陕西省微生物研究所在云南腾冲温泉分离得到。从温泉中收集水样，对水样进行梯度稀释，分别将102、103、104倍稀释液100μL，涂布于LB培养基中，32℃恒温培养2 天，挑取单菌落继续在LB培养基中划线纯化。将纯化菌种以魔芋软腐病菌为靶标菌进行拮抗菌的筛选。结果筛选出一株对靶标菌有很好拮抗作用的菌株，命名为SWL-W8。
二、埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8的形态、BIOLOG 及16S rDNA鉴定
(1)形态观察
SWL-W8菌株在LB平板上培养，观察菌落形态，并参照周德庆《微生物实验教程》进行革兰氏染色、芽孢染色等。菌落形态如图1所示。菌落凸起，乳白色，表面光滑，湿润。革兰氏阳性菌，菌株形态为长杆状，大小约为0.2～ 0.5×3～10μm。
(2)BIOLOG鉴定
参见图3，对菌株SWL-W8进行BIOLOG GenⅢ分析，将菌株接种到LB 培养基上，24h后用棉签将菌落沾起，分散到IF-A专用接种液中，制备成均一的菌悬液，调整浊度到52％±2％，接种到GenⅢ鉴定板上，接种量150μL， 30℃培养24h，在Biolog微生物自动分析仪上读取数据。
表1不同碳源生化反应测试结果
Figure BDA0001728004180000051
Figure BDA0001728004180000061
Figure BDA0001728004180000071
Figure BDA0001728004180000081
注：+表示阳性反应，-表示阴性反应，b表示边界值(阳性反应不明显)
(3)16S rDNA鉴定
提取SWL-W8菌株DNA，以该DNA为模板，采用16S rDNA通用引物 (7F:5'-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3'和1540R：5'-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3') 进行PCR扩增，PCR产物进行测序，序列大小16S rDNA为1385bp，通过核糖体数据库http://rdp.cme.msu.edu/index.jsp上比对，显示菌株SWL-W8 为埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)。与埃吉类芽孢杆菌 (Paenibacillus elgii)TBT3-4基因序列同源性达100％，最终确定菌株 SWL-W8为埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)。
埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)16S rDNA序列如下：
GACCCTTTCGGGGTTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGCAACCTGCCTGTAAGAC TGGGATAACTACCGGAAACGGTAGCTAAGACCGGATAAGTGATTCTCTTGCATGAGAGGATCAAG AAACACGGGGCAACCTGTGGCTTACAGATGGGCCTGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACG GCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACAC GGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGCAAGTCTGACGGAGC AACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGCCAGGGAAGAACGTCGTGG AGAGTAACTGCTCTGCGAATGACGGTACCTGAGAAGAAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGC CGCGGTAATACGTAGGGGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCGCTTAAGTCTGGTGTTTAAGCCCGAGGCTCAACCTCGGTTCGCACTGGAAACTGGGTGGCTTGAG TGCAGGAGAGGAAAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCA GTGGCGAAGGCGGCTTTCTGGCCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGG ATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGGGTTTCGATACCCT TGGTGCCGAAGTAAACACAATAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGCTCGCAAGAGTGAAACTCAAA GGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCAGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACC TTACCAGGTCTTGACATCCCTCTGAATATCCTAGAGATAGGGTAGGCCTTCGGGACAGAGGAGAC AGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCA ACCCTTGAACTTAGTTGCCAGCATTGAGTTGGGCACTCTAAGTTGACTGCCGGTGACAAACCGGA GGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTACTACAATG GCCGGTACAACGGGAAGCGAAGTCGCGAGATGGAGCCAATCCTAAGAAAGCCGGTCTCAGTTCGG ATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATTGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCG GTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTACAACACCCGAAG TCGGTGGGGTAAACCGCAAGGAGC
本发明提供的埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编：430072；本发明菌株的信息为：埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii) SWL-W8，保藏号为CCTCC NO.M 2017113，保藏日期为2017年3月。
三、供试菌拮抗植物病原菌性能测试
参见图4-图6，植物病原细菌采用倒平板法。将植物病原细菌在LB液体培养基中培养24h，吸取1mL菌液加入到融化并冷却至50℃的LB固体培养基中，混匀后倒平板，冷却凝固后在平板的四个角上点接埃吉类芽孢杆菌 (Paenibacillus elgii)SWL-W8，32℃培养2d后测量抑菌圈大小。LB培养基：胰蛋白胨20g，酵母浸粉，氯化钠，琼脂15-20(液体不加琼脂)，自来水1L，pH7.0-7.2,121℃灭菌20min。
植物病原真菌采用平皿对峙培养法。将植物病原真菌接种在PDA培养基中，28℃培养5d，用直径9mm的打饼器将病原真菌打成菌饼，在每个PDA培养基中央放置一个菌饼，距离菌饼圆心直线距离2cm位置的四个角上接种埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8。同时设对照培养。28℃培养5d后测量病原真菌菌落直径，计算抑制率。
抑制率＝(对照病原真菌菌落直径-实验病原真菌菌落直径)/对照病原真菌菌落直径×100％。
PDA培养基：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
结果显示，埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对多种病原真菌和病原细菌均有较强的抑制作用。
表2埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8对不同病原菌的抑制作用
Figure BDA0001728004180000101
四、埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8抗菌蛋白的纯化及对病原菌的抑制性能检测
埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8接种于LB斜面，培养 24小时，刮取少量菌体接种在LB液体培养基中，30℃，140r/min培养48h。 4℃，4000r/min离心收集上清液，在发酵上清液中加入一定浓度的硫酸铵(范围50％-80％)，沉淀，4℃，8000r/min离心收集蛋白沉淀，用pH7.4Tris-HCl 缓冲液溶解。蛋白溶液用透析袋去除小分子盐等杂质，即得抗菌粗蛋白溶液。粗蛋白经DEAE高流速琼脂糖微球离子层析，分别用0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mol/L NaCl溶液各100mL洗脱，收集各洗脱峰，进行抑菌活性检测，其中第5个洗脱峰具有抑菌活性。对该洗脱峰进一步用Sephadex G-75葡聚糖凝胶层析，获得单一蛋白洗脱峰，即为本发明抗菌蛋白LS51。各层析图谱见图7。蛋白电泳显示抗菌蛋白LS51分子量约为25KD，电泳图见图8。
对抗菌蛋白LS51进行生物学特性研究，该蛋白对酸稳定，碱度变大，抑菌活性减低；40℃-80℃处理30min，抑菌活性不变，100℃处理30min 抑菌活性下降至74.5％；紫外照射2-24h，蛋白抑菌活性不变；该蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感。
抑菌活性检测方法：病原细菌用LB液体培养24h，吸取1mL菌液至100mL 融化后冷却至50℃的LB固体培养基中，倒平板，待平板凝固后，用7mm打孔器打孔，每孔加入蛋白溶液100μL，并用缓冲液做对照。32℃培养24h，观察抑菌效果。
结果见图9、图10，埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8 抗菌蛋白LS51对病原菌有很好的抑制作用。可见抗菌蛋白LS51是埃吉类芽孢杆菌(Paenibacilluselgii)SWL-W8的主要抑菌成分之一。
五、埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂的制备
菌种活化：将4℃保藏的SWL-W8菌株接种至LB固体培养基上，30～37℃培养24～48小时，然后挑取单菌落接种于LB斜面培养基上，30～37℃恒温培养24～48小时；
种子液的制备：将上述活化好的菌种接种至LB液体培养基中，30～37℃下摇床培养24～48小时，得到种子液；
发酵培养：将种子液接入发酵培养基中，接种量为8％，30～37℃，摇床转速为150～230rpm的条件下培养48～72小时，得到菌液孢子数为109 cfu/mL的液体制剂；发酵培养基的组分为：葡萄糖30g、酵母浸粉9g、鱼粉10g、磷酸氢二钾1.5g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸镁0.6g、水1000mL， pH 6。
固体菌剂制备：
将发酵液与载体(可以是麸皮、稻糠等载体的一种或几种)混匀后制成微生物菌剂。
微生物菌剂的使用方法，将微生物菌剂按1:20～1:100的体积比例用水稀释，将稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤。
六、埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂在防治魔芋软腐病病害的应用
试验时间：2016年6-7月在安康市农科所温室进行。
试验品种：花魔芋
供试病原菌菌株：魔芋软腐病病原菌(陕西省微生物研究所分离并保藏)
试验设计3个处理：①埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8 菌液(孢子数109cfu/mL)，②市售72％农用链霉素，③清水。
预防作用的测定：选取健康、长势均匀的魔芋盆栽苗，分别灌根3个处理的药液，每棵灌根500mL。24h后接种魔芋软腐病病原菌，采用灌根方法接种，将魔芋软腐病病原菌菌液配成105cfu/mL菌液，每棵接种100mL 菌液。每个处理3次重复，每重复10棵苗，5d后按分级标准进行病情调查。
治疗作用的测定：选取健康、长势均匀的魔芋盆栽苗，接种魔芋软腐病病原菌，采用灌根方法接种，将魔芋软腐病病原菌菌液配成105cfu/mL菌液，每棵接种100mL菌液。24h后分别灌根3个处理的药液，每棵灌根500mL。每个处理3次重复，每重复10棵苗，5d后按分级标准进行病情调查。
表3病情严重度分级标准
0级 长势良好无发病症状
1 叶梢发黄
3 叶片部分发黄
5 叶片全部发黄，萎蔫，植株不倒伏
7 植株倒伏，茎中空腐烂，有腐臭味
病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100,相对防治效果(％)＝(对照病情指数—处理病情指数)/对照病情指数×100,计算结果用SPSS软件进行方差分析，清水对照防效记为0，统计结果如下。
表4埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂对魔芋软腐病的预防作用
Figure BDA0001728004180000121
表5埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂对魔芋软腐病的治疗作用
Figure BDA0001728004180000122
由结果可见，埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂对魔芋软腐病的预防效果达78.30％，对魔芋软腐病的治疗作用达74.44％，与常用药剂农用链霉素的防治效果相当，可作为替代药剂使用。
七、埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂防治魔芋软腐病的大田试验，参见图11。
试验时间：2017年3-11月在汉中市农科所魔芋种植基地进行。
试验品种：花魔芋
供试病原菌菌株：魔芋软腐病病原菌(陕西省微生物研究所分离并保藏)
选取100g左右，大小均匀的魔芋种芋下种，种植时按照以下处理进行药剂防治。设计以下处理组：①实验组用埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂原液、10倍稀释液、100倍稀释液分别进行灌根处理，②对照组分别采用清水和72％农用链霉素进行灌根处理。每株灌根100mL，每处理50株，重复3次，正常水肥管理。每月调查病情，记录软腐病发病率，收获期计算软腐病总发病率。8月测量魔芋株高，11月收获时对魔芋块茎进行称重，计算膨大系数。膨大系数＝收获时魔芋块茎重量/种芋重量。
表6埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂对魔芋软腐病的大田防治效果
菌剂 软腐病发病率％ 全株高cm 块茎膨大系数
菌剂原液 12.58 37.72 8.64
菌剂10倍稀释液 25.45 35.69 7.43
菌剂100倍稀释液 32.79 33.41 6.79
72％农用链霉素 11.74 36.15 7.59
清水 37.81 32.87 6.12
结果见表6，清水对照组软腐病发病率为37.81％，而不同浓度埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂灌根处理后，魔芋软腐病的发病率均有下降，其中施用菌剂原液的发病率最低，为12.58％，与72％农用链霉素效果相当。随着菌剂浓度降低，对魔芋软腐病的防效逐渐减弱。同时，施用埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂后，魔芋全株高，块茎膨大系数等农艺性状均比清水和药剂对照组有所提高。其中菌剂原液全株高37.72cm，块茎膨大系数8.64，清水对照全株高仅为32.87cm，块茎膨大系数6.12，可见埃吉类芽孢杆菌(Paenibacillus elgii)SWL-W8菌剂促生长效果明显，参见图12，上排为菌剂处理后收获的魔芋块茎，下排为对照处理收获的魔芋块茎。
以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。
SEQUENCE LISTING
<110> 陕西省微生物研究所
<120> 一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1385
<212> DNA
<213> 埃吉类芽孢杆菌SWL-W8（Paenibacillus elgii SWL-W8）
<400> 1
gaccctttcg gggtttagcg gcggacgggt gagtaacacg taggcaacct gcctgtaaga 60
ctgggataac taccggaaac ggtagctaag accggataag tgattctctt gcatgagagg 120
atcaagaaac acggggcaac ctgtggctta cagatgggcc tgcggcgcat tagctagttg 180
gtggggtaac ggctcaccaa ggcgacgatg cgtagccgac ctgagagggt gatcggccac 240
actgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttccgcaa 300
tggacgcaag tctgacggag caacgccgcg tgagtgatga aggttttcgg atcgtaaagc 360
tctgttgcca gggaagaacg tcgtggagag taactgctct gcgaatgacg gtacctgaga 420
agaaagcccc ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggggg caagcgttgt 480
ccggaattat tgggcgtaaa gcgcgcgcag gcggccgctt aagtctggtg tttaagcccg 540
aggctcaacc tcggttcgca ctggaaactg ggtggcttga gtgcaggaga ggaaagcgga 600
attccacgtg tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga acaccagtgg cgaaggcggc 660
tttctggcct gtaactgacg ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac 720
cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg ctaggtgtta ggggtttcga tacccttggt 780
gccgaagtaa acacaataag cactccgcct ggggagtacg ctcgcaagag tgaaactcaa 840
aggaattgac ggggacccgc acaagcagtg gagtatgtgg tttaattcga agcaacgcga 900
agaaccttac caggtcttga catccctctg aatatcctag agatagggta ggccttcggg 960
acagaggaga caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag 1020
tcccgcaacg agcgcaaccc ttgaacttag ttgccagcat tgagttgggc actctaagtt 1080
gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg 1140
acctgggcta cacacgtact acaatggccg gtacaacggg aagcgaagtc gcgagatgga 1200
gccaatccta agaaagccgg tctcagttcg gattgcaggc tgcaactcgc ctgcatgaag 1260
tcggaattgc tagtaatcgc ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggtcttgta 1320
cacaccgccc gtcacaccac gagagtttac aacacccgaa gtcggtgggg taaaccgcaa 1380
ggagc 1385

Claims (5)

1.一种埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8，保藏编号为CCTCC NO. M2017113，保藏日期为2017年3月，保藏在中国典型培养物保藏中心。
2.根据权利要求1所述的埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8，其特征在于，通过所述埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8制备埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8菌剂，包括以下步骤：
菌种活化：将4℃保藏的埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8菌株接种至LB固体培养基上，30～37℃培养24～48小时，然后挑取单菌落接种于LB斜面培养基上，30～37℃恒温培养24～48小时；
种子液的制备：将上述活化好的菌种接种至LB液体培养基中，30～37℃下摇床培养24～48小时，得到种子液；
发酵培养：将种子液接入发酵培养基中，接种量为8%，30～37℃，摇床转速为150～230rpm的条件下培养48～72小时，得到菌液孢子数为109 cfu/mL的液体制剂；发酵培养基的组分为：葡萄糖30 g、酵母浸粉9 g、鱼粉10 g、磷酸氢二钾1.5 g、磷酸二氢钾1g、七水硫酸镁 0.6 g、水1000 mL，pH 6；
固体菌剂制备：将发酵液与载体混匀后制成微生物菌剂；
所述载体是麸皮、稻糠的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8，其特征在于，通过所述埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8制得的埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8菌剂，使用方法如下，将埃吉类芽孢杆菌（Paenibacilluselgii）SWL-W8菌剂按1:20～1:100的体积比例用水稀释，将稀释后的液体菌剂进行灌根、叶面、花蕾和果实表面喷施或全株喷施，或同时喷洒于植物栽培的土壤。
4.根据权利要求1所述的埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8在植物病原真菌和细菌拮抗中的应用。
5.根据权利要求1所述的埃吉类芽孢杆菌（Paenibacillus elgii）SWL-W8在防治魔芋软腐病病害中的应用。
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