CN108785331A - 一种具有气血双补的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有气血双补的组合物及其制备方法和应用。所述组合物包括以下成分及重量份：益生菌包10‑15份和载体45‑75份；还包括中药提取物15‑30份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g。本发明开发了益生菌的新用途，所述益生菌包具有补气补血的作用，且效果优于中药组。

Description

一种具有气血双补的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有气血双补的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
中医认为，健康的标准就是气血充足；气血充盈百病不生，当气血不足时就会滋生各种疾病。气血不足即为中医学中的气虚和血虚，临床上主要表现为面色白或萎黄，心悸气短；头目眩晕，失眠健忘，多梦自汗，少气懒言，神疲乏力；或发色不泽，唇甲淡白；或食少纳呆，饮食无味，形体消瘦；或手足麻木，肌肤不仁。
研究发现：血虚证和气虚证者存在骨髓造血功能和免疫功能异常，最终表现为外周血红细胞、血红蛋白和白细胞数量及功能的异常，可出现骨髓造血干细胞及外周血红蛋白细胞的数量和功能下降。血虚证与红细胞水平呈正相关，血虚证的程度越严重，红细胞水平下降越明显；气虚证者的白细胞计数、中性粒细胞计数及淋巴细胞计数均明显低于非气虚证者，说明气虚证者存在免疫功能低下。因此，气血双虚与贫血及免疫力低下具有密切的关系。
贫血(Deficiency Anemia，DA)是世界范围内常见疾病之一，是单位容积血液内红细胞数和血红蛋白浓度低于某一界定值，同时影响到机体内氧运输能力的一种疾病，我国诊断贫血的血红蛋白标准为：成人男性低于120g/L，女性低于110g/L，孕妇低于100g/L，可诊断为贫血。据WHO最新资料统计，全世界贫血人数约有30亿，其中育龄妇女占总人口的10％～20％，在发达国家的育龄期女性中的发病率为30％，在发展中国家的发病率高50％-80％，轻度的贫血可无明显临床症状，或只表现为皮肤、口唇粘膜和险结膜稍苍白；重者可有不同程度的乏力、头晕、气短、食欲缺乏、皮肤粘膜苍白、口腔炎、舌炎，以及产后缺乳等。孕妇是贫血最主要的易感人群，孕妇一旦发生贫血，在妊娠和分娩时死亡的危险性将增加5倍，同时发生早产、胎儿畸形和体重偏低的可能性也会升高；产后贫血(ostpartm Anemia，PA)是贫血中的第二大人群，是产褥期一种常见病和多发病，是指在产褥期，也就是产后6周内发生的贫血，在产祷期发生的严重贫血所带来的危害是致命性的，贫血使世界上每年约几万孕产妇死亡。因此，近年来越来越受到国内外研究者们的重视。
针对气血双虚及贫血，目前市场上的补血产品琳琅满目，缺铁性的贫血有单一的铁制剂：例如硫酸亚铁、右旋糖酐铁片、富马酸亚铁、琥珀酸亚铁等，服用后患者可能会有胃肠反应导致腹痛腹泻，吸收效果不好；补气养血的纯中药复方制剂如阿胶、红桃K、太太乐口服液、九味补血口服液等，价格昂贵，胃肠功能失调的患者吸收不好，市面上的产品很少有将益生菌应用于其中的，因此，对于胃肠功能失调导致吸收不良的患者，可能造成虚不受补的现象。
综上，铁制剂及纯中药制剂用于补气血效果都不理想，其根源在于脾胃虚弱、肠道功能失调而导致的消化、吸收减弱，补而不进或者甚微，没有从根本上解决气血双虚的症候所在。
益生菌具有辅助治疗贫血的作用，特别对于脾胃功能虚弱吸收不好，长期有感染：腹泻、便秘、痢疾等胃肠功能紊乱的患者有很好的改善贫血及免疫力提高的作用。原因有：一、益生菌可以通过定植于肠道，调节肠道菌群平衡，修复肠粘膜，有效促进铁的吸收，促进血红蛋白合成；二、益生菌有效刺激机体免疫，同时强化细胞免疫和体液免疫，尤其是益生菌中的双歧杆菌等可显著提升巨噬细胞的吞噬性能，提升补体系统和网状内皮系统的临床功能，进而增强患者免疫功能，改善气虚状况。
中国专利《一种贫血体质者食用的特殊膳食》(CN103462028B)公开了贫血体质者食用的特殊膳食，包括以下重量计的组分：荞麦花粉900g-1100g、阿胶900g-1100g、桂圆900g-1100g、枸杞900g-1100g、红枣900g-1100g、陈皮900g-1100g、茯苓900g-1100g、松花粉900g-1100g、海洋鱼低聚肽粉900g-1100g、干酪乳杆菌800g-1000g、嗜热链球菌800g-1000g、蚕蛹800g-1000g、共轭亚油酸800g-1000g、牛磺酸800g-1000g、库拉索芦荟凝胶800g-1000g、水苏糖800g-1000g、平卧菊三七800g-1000g、抗性糊精800g-1000g、紫云英花粉800g-1000g、鱼油提取物800g-1000g、嗜酸乳杆菌800g-1000g、双歧杆菌800g-1000g、盐藻提取物700g-900g、牛奶碱性蛋白700g-900g、玉米花粉700g-900g、叶酸700g-900g、高蛋白豆粉700g-900g、人参700g-900g、玫瑰茄700g-900g、磷酸氢钙700g-900g、泛酸700g-900g、桑椹700g-900g、乳酸亚铁700g-900g、杏仁600g-800g、蒲公英600g-800g、荞麦粉600g-800g、维生素C600g-800g、纳豆600g-800g、低聚木糖600g-800g、昆布600g-800g、酵母600g-800g、螺旋藻600g-800g、裙带菜600g-800g、骨胶原蛋白600g-800g、山楂600g-800g、黑米600g-800g、向日葵花粉600g-800g。该发明特殊膳食虽然具有稳定健康状态，减少贫血等病症发展的结果，但其成分诸多且复杂，生产成本较高；并且对贫血的治疗效果还需进一步提高。
中国专利申请《制备具有调理人体经络补气补血功能的植物酵素的发酵组合物及制法》(CN107080258A)公开了一种制备具有调理人体经络补气补血功能的植物酵素的发酵组合物，所述发酵组合物为直投式植物酵素发酵菌剂，该发酵组合物包括如下重量份数的组分：功能性低聚糖3-22份、益生菌0.1-5份和中药提取物0.01-10份。该发明通过益生菌和功能性低聚糖结合使用，两者具有相互促进作用，能够倍增对肠道菌群的调节功能，从而基于肠道菌群的作用发挥更好的增强免疫力；而添加的中药成分，进一步实现预防或治疗肥胖、糖尿病、高血压、高血脂或肿瘤等功效。
因此，成分简单、能够增强贫血治疗效果的补血产品，是目前所亟需的。
发明内容
本发明主要目的是，提供一种具有气血双补功效的组合物及其制备方法和应用。本发明组合物具有气血双补的功效，能够有效治疗贫血；并且本发明组合物成分简单，生产成本低，适宜广大贫血患者使用。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明第一个方面，提供一种气血双补的组合物，所述组合物包括以下成分及重量份：益生菌包10-25份和载体45-75份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比1-300:1-300:1-50:1-50:1-300组成，各菌活菌数为2×107-2×109CFU/g。
优选的，所述益生菌包的制备方法，包括以下步骤：S1.分别将鼠李糖乳杆菌，植物乳杆菌，唾液乳杆菌，嗜酸乳杆菌，乳双歧杆菌的斜面经培养基活化后，分别接种于发酵培养基中30-37℃培养，使菌体浓度达到对数生长期0.2～2×109CFU/mL；
S2.将步骤S1中各菌种发酵液分别离心，弃上清，收集菌泥；
S3.配制保护剂；
S4.将保护剂和菌泥混合均匀，然后将混合物预冻，再冷冻干燥，将各益生菌按活菌数比1-300:1-300:1-50:1-50:1-300配制成活性益生菌菌粉。
优选的，所述组合物还包括中药提取物15-30份，所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣8-15份、龙眼肉8-15份、茯苓10-15份、枸杞子5-12份、人参5-10份、莲子5-10份、甘草5-10份。
原卫生部于2002年发布了《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》(卫法监发〔2002〕51号)公布了《既是食品又是药品的物品名单》，该名单包含本发明中所用的中药：大枣、龙眼肉、茯苓、枸杞子、人参、莲子、甘草，可用于普通食品生产，安全性高。
优选的，所述中药提取物的制备方法为：
(1)按照重量份数称取大枣、龙眼肉、茯苓、枸杞子、人参、莲子、甘草；
(2)将步骤(1)称取的中药置于10-15倍水中浸泡40-60min，煎煮，水开后继续煎煮30-60min，过滤得到第一滤液；药渣用5-10倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮30-45min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，通过真空减压旋转蒸发仪浓缩中药液，至固形物含量为25％以上，进行喷雾干燥，进风温度控制120-150℃，出风温度90-100℃，雾化器转速45-50转/分钟，进料速度为3-6ml/分钟，得喷雾干燥粉，粉碎，过100目以上筛子即得中药提取物。
优选的，所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包12份、中药提取物28份、载体60份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g；所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣12份、龙眼肉12份、茯苓12份、枸杞子10份、人参10份、莲子10份、甘草10份。
优选的，所述组合物还包括一种或多种食品或药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。
优选的，所述组合物的剂型为固体口服制剂、液体口服制剂。
本发明第二个方面，提供一种以上所述组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)益生菌包的制备；
2)中药提取物的制备；
3)将步骤1)和步骤2)制备得到益生菌包和中药提取物分别过100目以上筛子后，称量混合，并添加载体，充分混匀，即得。
本发明第三个方面，提供所述组合物在制备治疗贫血类食品、药物和/或保健品的应用。
本发明第四个方面，提供所述组合物在制备气血双补产品中的应用。
本发明所用植物乳杆菌为植物乳杆菌BLCC2-0126，保藏编号CCTCC NO：M2015128，保藏日期为2015年3月18日，保藏于中国典型培养物保藏中心；该菌株保藏信息已在授权专利《一株具有吸附或降解肠毒素功能的乳酸菌及其应用》(CN104988104B)中公开。该菌株是一株具有吸附或降解肠毒素功能的乳酸菌，所述乳酸菌具有吸附或降解肠毒素功能，且有较好的耐酸、耐胆盐及耐人工胃液、肠液的效果。
鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌均为市售的各类菌种的粉剂或通过市售的各类菌种经液体培养，离心收集和洗涤菌体后，干燥制备成活性粉剂。
鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)，是人体正常菌群之一，肠道黏着率高，定植能力强，并具有高效降胆固醇，促进细胞分裂，可起到调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、提高机体免疫力的生理保健功能。唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)属人体原生菌种，具有抗过敏，刺激免疫细胞、分泌抗过敏相关细胞激素等作用。嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)不仅胃中存活，也是人体小肠内的主要益生菌。它能够调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖。双歧杆菌是人体的健康标志，是对人体有诸多好处的有益菌群。婴儿出生3-4个月即出现双歧杆菌，幼儿时期双歧杆菌数量逐渐增多并达到顶峰，约占肠内细菌总量的25％，随着年龄的增加，双歧杆菌数量逐年递减，老年时期双歧杆菌数量递减至7.9％以下。乳双歧杆菌能够耐酸、耐胆盐及耐人工胃液及肠液，具有抑制病原菌、增强肠屏障功能以及提高免疫力等作用，这几株菌混合使用能够更好的调节肠道的菌群、治疗便秘腹泻、并能很好的保护胃肠道的黏膜，促进吸收和排泄。
目前，在补气补血产品中，添加益生菌的主要功效：一方面是将中药大分子成分转变成小分子，从而促进中药活性成分在肠道的吸收，二是益生菌能够调节肠道的菌群，特别是对长期腹泻、便秘、长期服用抗生素等的患者引起的肠道菌群失调，能够调节其肠道菌群的平衡，修复肠黏膜，促进吸收；三是益生菌本身能够提高人体的免疫力，对于气虚患者有一定的补益作用。另外，益生菌本身对补气补血效果的研究较少。肠道环境非常复杂，外源添加的益生菌能否在肠道内定植并促进肠道微生态菌群的健康发展，关键在于益生菌对肠道环境的适应力以及不同益生菌间的相互作用；此外，益生菌中有效活菌数，对于益生菌在肠道内功能的发挥也具有十分重要的作用。本发明针对于此，通过筛选组合后，将鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按特定比例组合后用于气血双虚小鼠模型，可升高小鼠血虚模型的红细胞、血红蛋白的数目，说明本发明益生菌包对气血双虚症状具有一定的治疗作用，且效果优于中药组以及其它益生菌组合。
本发明在益生菌粉制备过程中，添加保护剂，可有效防止益生菌在冻干处理过程中的失活。并且，本发明筛选得到的益生菌不仅单个菌株具有较强的耐受能力，而且各菌株之间具有相互协同、相互促进作用，保证了本发明益生菌包在肠道中功能性的发挥。
此外，为了进一步提高本发明含益生菌包组合物对气血双虚病症的治疗效果，将本发明所述益生菌包与中药组合物复合后，补气补血效果显著增高。本发明强化了益生菌补气补血功效，拓展了益生菌的应用范围及其在中药方面的强化应用。
本发明取得的有益效果：
(1)本发明通过筛选组合得到特定的益生菌包，所述益生菌包具有补气补血的作用，且效果优于中药组及其它益生菌组合；本发明拓展了益生菌的用途。
(2)本发明提供的气血双补功能的组合物采用中药提取物和益生菌为原料，通过优化中药与益生菌的配合，使本发明组合物补气补血效果显著，且本发明组合物质量稳定，功效确切。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本发明的技术方案。
实施例1：一种具有气血双补功效的组合物
所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包12份和麦芽糊精88份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g。
所述益生菌包的制备方法，具体如下：
1材料
1.1种子液体培养基
种子液体培养基：葡萄糖2.0％，柠檬酸铵0.2％，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.5％，硫酸锰0.02％，硫酸镁0.05％，蛋白胨1.0％，牛肉膏1.0％，酵母膏0.5％，吐温-80 0.1％、PH6.0，0.1MPa灭菌15min。
1.2固体斜面培养基
固体斜面培养基为1.1.1种子液体培养基中添加质量分数为1.5％的琼脂粉。
1.3发酵培养基
同1.1种子液体培养基。
2方法
2.1菌粉的制备工艺
①菌种：选用鼠李糖乳杆菌，植物乳杆菌BLCC2-0126，唾液乳杆菌，嗜酸乳杆菌，将其冻干粉菌种分别接种于斜面培养基上，在37℃兼性厌氧菌培养24～48h；乳双歧杆菌严格厌氧培养24～48h。
②菌种活化：将其乳酸菌冻干粉菌种分别接种于斜面培养基上，在37℃培养24～48h；乳双歧杆菌冻干菌粉菌种分别接种于斜面培养基上，在37℃厌氧培养24～48h。
③分别将培养好的斜面，在无菌条件下用接种环接两环于100mL种子液体培养基中，在37℃条件下，静置培养16～48h；乳双歧杆菌严格厌氧培养16～48h。
④菌体的发酵：
采用5％的接种量，接种至3L大三角瓶中(装液量为2.5L)，37℃培养24～48小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿/毫升，即可作为乳杆菌液体发酵终止。
⑤将各菌种发酵液分别离心，弃上清，菌体沉淀洗涤，离心，弃上清，获得菌泥。
⑥配制菌粉保护剂，配方为蔗糖含量为8g、脱脂奶粉25g、甘油1mL，蒸馏水100mL，115℃，灭菌15min。
⑦将菌粉保护剂分别和菌泥充分混合，然后将各混合物分别预冻，再进行真空冷冻干燥。
⑧粉碎过筛
将上述益生菌干粉，经超微粉碎后，过80-100目筛。
2.2菌粉计数
利用平板菌落计数法测量益生菌冻干粉的活菌数。
2.3配料
称量过筛后的益生菌干粉，按照鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌及乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25进行配料，其中鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、嗜酸乳杆菌、唾液乳杆及乳双歧杆菌各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g，辅料为脱脂奶粉。
2.4混合
将配好的益生菌及辅料充分混匀至色泽均匀一致，无色差，即得到具有气血双补功能的组合物1。
实施例2：一种具有气血双补功效的组合物
所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包10份和麦芽糊精75份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比1:1:1:1:1组成，各菌活菌数为2×107CFU/g。
所述益生菌包的制备方法与实施例1的制备方法相似。所述组合物记为组合物2。
实施例3：一种具有气血双补功效的组合物
所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包25份和麦芽糊精45份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比300:300:50:50:300组成，各菌活菌数为3×109CFU/g、3×109CFU/g、5×108CFU/g、5×108CFU/g和3×109CFU/g。
所述益生菌包的制备方法与实施例1的制备方法相似。所述组合物记为组合物3。
实施例4：一种具有气血双补功效的组合物
所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包12份、中药提取物28份、麦芽糊精60份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g；所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣12份、龙眼肉12份、茯苓12份、枸杞子10份、人参10份、莲子10份、甘草10份。
所述益生菌包的制备方法与实施例1的制备方法相似。所述组合物记为组合物4。
所述中药提取物的制备方法为：
(1)按照重量份数称取大枣、龙眼肉、茯苓、枸杞子、人参、莲子、甘草；
(2)将步骤(1)称取的中药置于10倍水中浸泡40min，煎煮，水开后继续煎煮30min，过滤得到第一滤液；药渣用8倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮30min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，通过真空减压旋转蒸发仪浓缩中药液，至固形物含量为25％以上，进行喷雾干燥，进风温度控制140℃，出风温度90℃，雾化器转速45转/分钟，进料速度为5ml/分钟，得喷雾干燥粉，粉碎，过100目以上筛子即得中药提取物。
实施例5：一种具有气血双补功效的组合物
所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包10份、中药提取物15份、麦芽糊精75份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g；所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣8份、龙眼肉8份、茯苓10份、枸杞子5份、人参5份、莲子5份、甘草5份。
所述益生菌包的制备方法与实施例1的制备方法相似。
所述中药提取物的制备方法与实施例4的制备方法相似。所述组合物记为组合物5。
实施例6：一种具有气血双补功效的组合物
所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包25份、中药提取物30份、麦芽糊精45份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌BLCC2-0126、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g；所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣15份、龙眼肉15份、茯苓15份、枸杞子12份、人参10份、莲子10份、甘草10份。
所述益生菌包的制备方法与实施例1的制备方法相似。
所述中药提取物的制备方法与实施例4的制备方法相似。所述组合物记为组合物6。
对比例1
益生菌粉剂，由双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、布氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g；记为组合物7。
对比例2
与实施例1的区别在于，各菌活菌数为2.5×109CFU/g，其它均与实施例1相似。所述组合物记为组合物8。
对比例3
所述组合物由以下成分及其重量份组成：中药提取物12份、麦芽糊精88份；所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣12份、龙眼肉12份、茯苓12份、枸杞子10份、人参10份、莲子10份、甘草10份。
所述益生菌包的制备方法与实施例1的制备方法相似。所述组合物记为组合物9。
所述中药提取物的制备方法为：
(1)按照重量份数称取大枣、龙眼肉、茯苓、枸杞子、人参、莲子、甘草；
(2)将步骤(1)称取的中药置于10倍水中浸泡40min，煎煮，水开后继续煎煮30min，过滤得到第一滤液；药渣用8倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮30min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，通过真空减压旋转蒸发仪浓缩中药液，至固形物含量为25％以上，进行喷雾干燥，进风温度控制140℃，出风温度90℃，雾化器转速45转/分钟，进料速度为5ml/分钟，得喷雾干燥粉，粉碎，过100目以上筛子即得中药提取物。
实施例7：一种具有气血双补功效的组合物的制备方法
所述制备方法，包括以下步骤：
1)益生菌包的制备；
2)中药提取物的制备；
3)将步骤1)和步骤2)制备得到益生菌包和中药提取物分别过100目以上筛子后，称量混合，并添加麦芽糊精，充分混匀，即得。
试验例1
将本发明实施例1、实施例2、对比例1益生菌，用无菌生理盐水制备成活菌数为2×108CFU/mL的待测溶液，于4℃保存备用；
取保存好的10mL的待测溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上，迅速摇匀。再将装有10mL的待测溶液的试管2置于40-50℃水浴锅中加热15-25min，取加热后的待测溶液进行十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35℃条件下培养24h，计算加热前后的活菌数量。结果表明，活菌存活率分别为71.8％和65.6％及57.5％，实施例1中的益生菌包的耐高温的能力较强。
1、模拟胃液及肠液的耐受试验
取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为1.5、2.5和3.5，取100mL稀盐酸溶液，分别加1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。
取1mL保存好的实施例1、实施例2、对比例1益生菌加入到9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，并取对数，结果见表1
表1实施例1、实施例2、对比例1益生菌在人工胃液中不同时间的存活率
实施例1(％) 实施例2(％) 对比例1(％)
1h 27.95 25.28 16.37
2h 0.255 0.149 0.098
3h 0.0125 0.0033 0.00042
由上表结果看出：实施例1中的存活率在1h、2h、3h的存活率都比实施例2和对比例1中的活菌数高。
然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL，分别接种于9mL pH值为6.8的人工肠液中，置于30-45℃静置培养2-8h，并分别在0、2、4、8h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果见表2
表2实施例1、实施例2、对比例1益生菌在人工肠液中不同时间的存活率
由上表看出：实施例1、实施例2、对比例1中的益生菌包在人工肠液中随着时间的延长都有上升的趋势，但是实施例1中的益生菌包上升的最多、最快，并在肠液中能够生长。
综上所述，实施例1中的益生菌包不管是在高温状态下、还是在人工胃液及人工肠液中其存活率最高。
试验例2气血双虚的动物实验验证产品效果
选取18-20g的昆明白雌鼠，随机分为10组，每组10只，空白组(生理盐水)，模型组(生理盐水)，组合物1(0.05g/只，2.27×109CFU/g)，组合物2(0.05g/只，1.0×108CFU/g)，组合物3(0.05g/只，1×1010CFU/g)，组合物4-6(0.05g/只，2.27×109CFU/g)，组合物7(0.05g/只，2.27×109CFU/g)，组合物8(0.05g/只，1.25×1010CFU/g)，组合物9(0.05g/只)，除空白组外，小鼠尾静脉、动脉放血约0.5mL/只，次日腹腔注射环磷酰胺溶液0.1ml，浓度为0.5mg/20g，隔天注射一次，共注射4次，在注射第一次时就开始灌胃，连续灌胃21天。
实验结束后处死小鼠，取肝、脾、胸腺及血清，分别测定WBC(白细胞)、淋巴细胞、RBC(红细胞)、HGB(血红蛋白)、PLT(血小板)，然后用SPSS 16.0软件分析。
(1)各个实验组体重、肝指数、脾指数、胸腺指数采用SPSS 16.0进行统计，采用One-way ANOVA进行单因素方差分析，用Duncan氏法进行多重比较，结果以平均值±标准差表示，表中同一列标有不同小写字母者表示组间差异显著(P<0.05)；标有相同小写字母表示组间差异不显著。
表3各实验组对小鼠内脏指数的影响(x±s，n＝10)
由上表3看出：模型组与空白组比较，体重、肝指数没有差异显著性(p>0.05)，脾指数、胸腺指数有差异显著性(p<0.05)。说明小鼠的免疫器官受到了损伤。
实验组与模型组比较：
体重、肝指数：各个实验组与模型组比较没有显著性差异(p>0.05)，各实验组之间也没有显著性差异(p>0.05)。
脾指数：组合物1、组合物4与模型组比较有差异显著性(p<0.05)，而其他组与模型组比较没有差异显著性(p>0.05)，组合物1、组合物4两组比较没有差异显著性，但是组合物4的平均值高于组合物1。说明组合物4对免疫器官脾的修复作用好于组合物1，组合物1组好于其他实验组。
胸腺指数：组合物1-6与模型组比较有差异显著性(p<0.05)，而这六个组比较没有差异显著性，但是以组合物4平均值最高，其次是组合物5与组合物1，说明这三个组的对胸腺的修复作用好于其他实验组，以组合物4的修复作用最强。
(2)小鼠血液指标：用迈瑞Mindray全自动三类血液分析测定血液指标结果见下表
表4各实验组对小鼠血液指标的影响(x±s，n＝10)
实验结果显示：模型组与空白组比较，白细胞、淋巴细胞、红细胞、血红蛋白都有显著性差异(P<0.05)，结合表3中小鼠内脏指数，说明气血双虚模型成立。
实验组与模型组比较
白细胞：
各个实验组与模型组比较，组合物1、组合物4、组合物5、组合物6有差异但不显著，(P>0.05)，与空白组比较也有差异但不显著(P>0.05)，说明这四个实验组的白细胞有升高但还没恢复至正常水平；这四个实验组比较组合物4的平均值最高，其效果最好。组合物1的平均值高于组合物2、组合物3，也高于组合物7、组合物8、组合物9的白细胞。其他各组与模型组比较无差异显著性(P>0.05)，说明升高白细胞的能力较弱。
淋巴细胞：
各个实验组与模型组比较，组合物4与模型组有差异显著性(P<0.05)，其他实验组与模型组比较都无差异显著性，组合物4升高淋巴细胞的能力最强。从实验的平均值比较，其次是组合物5、组合物6、组合物1；组合物1的平均值高于其他实验组的均值，说明组合物1效果好于组合物2、组合物3、组合物7、组合物8、组合物9。组合物4好于组合物1，组合物4效果最好。
红细胞：
各个实验组与模型组比较，组合物4、组合物6、组合物1与模型组比较有差异显著性(P<0.05)，其他实验组有差异但不显著。组合物1、组合物2、组合物3比较虽然没有差异显著性，但是，组合物1红细胞平均值最高，组合物1平均值高于组合物7、组合物8、组合物9；所以组合物4的升高红细胞的能力最强，其次为组合物5和组合物6，再次是组合物1，说明组合物4为最佳组合物。
血红蛋白：
各个实验组中只有组合物7、组合物8与模型组比较有差异但不显著，其他实验组与模型组比较都有差异显著性(P<0.05)，其中组合物4血红蛋白的平均值显著高于其他实验组；组合物1与组合物2、组合物3比较有差异但不显著，其平均值高于组合物2、组合物3；组合物1的血红蛋白的平均值高于组合物7、组合物8、组合物9。从而说明，组合物4升高血红蛋白的效果最佳，益生菌包以组合物1最佳。
结论：
(1)通过建立气血双虚模型，用益生菌、中药及两者的混合物进行灌胃小鼠21天，动物实验表明，中药复合益生菌组合物4能够修复免疫器官脾脏、胸腺，提高脾指数、胸腺指数至正常水平
(2)通过检测血液的血细胞，中药复合益生菌组合物4为最佳配方，能够提高血虚模型的白细胞和淋巴细胞，提高其免疫细胞接近于正常水平，并且好于单独的中药、益生菌及其他菌株。
(3)中药复合益生菌组合物4能够升高小鼠血虚模型的红细胞、血红蛋白的浓度至正常水平，并且好于单独的中药或者益生菌。
(4)益生菌组合物1能够升高小鼠血虚模型的红细胞、血红蛋白的浓度至正常水平，且好于其他益生菌组方和单独的中药组方，表明本发明的益生菌组合物具有较好的气血双补功效。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种气血双补的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下成分及重量份：益生菌包10-25份和载体45-75份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比1-300:1-300:1-50:1-50:1-300组成，各菌活菌数为2×107-2×109CFU/g。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述益生菌包的制备方法，包括以下步骤：S1.分别将鼠李糖乳杆菌，植物乳杆菌，唾液乳杆菌，嗜酸乳杆菌，乳双歧杆菌的斜面经培养基活化后，分别接种于发酵培养基中30-37℃培养，使菌体浓度达到对数生长期0.2～2×109CFU/mL；
S2.将步骤S1中各菌种发酵液分别离心，弃上清，收集菌泥；
S3.配制保护剂；
S4.将保护剂和菌泥混合均匀，然后将混合物预冻，再冷冻干燥，将各益生菌按活菌数比1-300:1-300:1-50:1-50:1-300配制成活性益生菌菌粉。
3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述组合物还包括中药提取物15-30份，所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣8-15份、龙眼肉8-15份、茯苓10-15份、枸杞子5-12份、人参5-10份、莲子5-10份、甘草5-10份。
4.根据权利要求3所述组合物，其特征在于，所述中药提取物的制备方法为：
(1)按照重量份数称取大枣、龙眼肉、茯苓、枸杞子、人参、莲子、甘草；
(2)将步骤(1)称取的中药置于10-15倍水中浸泡40-60min，煎煮，水开后继续煎煮30-60min，过滤得到第一滤液；药渣用5-10倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮30-45min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，通过真空减压旋转蒸发仪浓缩中药液，至固形物含量为25％以上，进行喷雾干燥，进风温度控制120-150℃，出风温度90-100℃，雾化器转速45-50转/分钟，进料速度为3-6ml/分钟，得喷雾干燥粉，粉碎，过100目以上筛子即得中药提取物。
5.根据权利要1或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物由以下成分及其重量份组成：益生菌包12份、中药提取物28份、麦芽糊精60份；所述益生菌包由鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌按活菌数比2:150:40:10:25组成，各菌活菌数分别为2×107CFU/g、1.5×109CFU/g、4×108CFU/g、1×108CFU/g和2.5×108CFU/g；所述中药提取物是由以下重量份的中药提取得到：大枣12份、龙眼肉12份、茯苓12份、枸杞子10份、人参10份、莲子10份、甘草10份。
6.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括一种或多种食品或药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。
7.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于，所述组合物的剂型为固体口服制剂或液体口服制剂。
8.一种权利要求1-5任一所述组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)益生菌包的制备；
2)中药提取物的制备；
3)将步骤1)和步骤2)制备得到益生菌包和中药提取物分别过100目以上筛子后，称量混合，并添加载体，充分混匀，即得。
9.权利要求1-5任一所述组合物在制备治疗贫血类食品、药物和/或保健品的应用。
10.权利要求1-5任一所述组合物在制备气血双补产品中的应用。
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