CN112007106B - 一种提高免疫力的发酵组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种辅助预防COVID‑19的发酵组合物，该组合物适于广大社会群众并具有较好的人群接受度，能够提高大众人群免疫力和抗感染能力，具有较好辅助预防COVID‑19感染的效果。本发明的中药组合物具有协同增效的效果，本发明通过增加RAW267.4细胞增殖，并且抑制IL‑2、IL‑6和TNF‑α的释放，从而提高机体的免疫力，通过提高免疫力发挥抗COVID‑19感染的作用，是一种理想的辅助预防新冠病毒感染的发酵组合物。

Description

一种提高免疫力的发酵组合物及其制备方法
技术领域
本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种辅助预防COVID-19的发酵组合物及其制备方法。
背景技术
新型冠状病毒( Severe Acute ＲespiratorySyndromeCoronavirus 2，SAＲS－CoV－ 2) 感染引起的新型冠状病毒肺炎( Corona Virus Disease 2019，COVID－19) 是一种急性感染性肺炎，初期以发热、干咳、气促、乏力为主要症状，重症患者则出现呼吸困难，进一步发展为急性呼吸窘迫症、脓毒症休克及多器官功能衰竭等，甚至死亡，严重威胁着人们的健康安全。
COVID-19西医治疗尚无确切有效的方法，西药常规就是以抗病毒、抗感染及增强免疫力等对症支持治疗为主，包括氯喹、瑞德西韦在内的抗病毒药其疗效也待进一步评价，且其临床观察用药的副作用较大。
许多中医药学者对新型冠状病毒肺炎病因病机进行了诸多有益的探索，分别从燥邪、热邪、阴虚、湿邪等方面进行了阐释并加以治疗，大大提高了中医的参与率和有效率；中医理论认为本病属于中医学“寒湿疫”，其直接病因是感受“疫戾之气”。本病在病性上属于阴病，是以伤阳为主线。早期以寒湿闭郁脾肺伤阳为主，中期以湿热遏阳为主，其治法以温散寒湿通阳为原则，宣通中上二焦，兼以透热袪邪；若失治误治，病邪则传入阳明化燥化热，治疗原则应在温散寒温基础上加大清热解毒力度，或以清热解毒通腑为主；祛湿透邪、健脾宣肺通阳贯穿始终。后期及恢复期以阳气虚损为主，治法以温补脾肾之阳为原则，温通中下焦，使先后天均得以固护，此乃治本之举。
专利CN111494469A要求保护一种抗病毒药用组合物，含有广藿香4-14份、苍术9-28份、香薷5-18份、艾叶11-33份、丁香0.1-3份和薄荷2-10份。该组合物对新冠病毒具有一定的治疗效果，但是该药物组合物适用对象是已感染新冠病毒患者，并不适用于非感染人群的预防新冠病毒；
专利CN111544442A中请求保护了芦丁作为冠状病毒广谱抑制剂，但是并未公开具体的配方。
专利CN111529625A要求保护了一种可预防复工人群感染新冠肺炎的中药配方，原料包括太子参、麦冬、荷叶、大青叶、牛蒡子、升麻、连翘、赤芍、甘草、绿茶，在提高机体抵抗力的同时，有效缓解发热、咳嗽、咽痛、乏力、气短、倦怠等症状，适用于正常人群的日常保健。但是该产品直接将各中药制备成袋泡茶，适口性差，不易被普通人群接受。
经检索，目前还未见报道一种能够让大众群众乐于接受的辅助预防COVID-19的制剂。
综上所述，提供一种易于让社会大众人群接受的辅助预防新冠病毒的发酵组合物很有必要，能够带来显著的社会效益。
发明内容
鉴于以上背景技术提到的缺陷，本发明旨在添补辅助抗辅助预防COVID-19制剂领域的空白，提供一种辅助预防COVID-19的制剂，提供一种适于广大社会群众并具有较好的人群接受度，能够提高大众人群免疫力和抗感染能力，具有较好辅助COVID-19感染预防效果的发酵组合物。
具体地，本发明提供一种辅助预防COVID-19的发酵组合物，其特征在于，所述发酵组合物包括中药原料百合、炒山药、当归、大枣、茯苓和人参。
所述的辅助预防COVID-19的发酵组合物，所述中药原料经植物乳杆菌和发酵乳杆菌组成的复合菌发酵处理。
所述的辅助预防COVID-19的发酵组合物，所述原料包括百合5-20份、炒山药5-20份、当归3-15份、大枣2-10份、茯苓2-10份、人参1-3份。
所述的辅助预防COVID-19的发酵组合物，所述原料包括百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份。
所述的辅助预防COVID-19的发酵组合物，所述发酵组合物进一步包含新资源食品原料，所述新资源食品含有牛磺酸、蛋白粉、谷氨酰胺、低聚异麦芽糖、茶氨酸。
所述的辅助预防COVID-19的发酵组合物，其特征在于新资源食品的配比为：牛磺酸：蛋白粉：谷氨酰胺：低聚异麦芽糖：茶氨酸=1-50: 1-50: 1-50: 1-50: 1-50。
本发明还提供了一种辅助预防COVID-19的发酵组合物，原料包括百合5-20份、炒山药5-20份、当归3-15份、大枣2-10份、茯苓2-10份、人参1-3份，牛磺酸1-50份、蛋白粉1-50份、谷氨酰胺1-50份、低聚异麦芽糖1-50份、茶氨酸1-50份，其中，中药原料百合、炒山药、当归、大枣、茯苓、人参经植物乳杆菌和发酵乳杆菌组成的复合菌发酵处理步骤。
本发明还提供了一种辅助预防COVID-19的发酵饮料组合物，原料包括百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份、白砂糖20份、山梨酸钾0.05份，其中，中药原料百合、炒山药、当归、大枣、茯苓、人参经植物乳杆菌和发酵乳杆菌组成的复合菌发酵处理步骤。
本发明还提供了一种辅助预防COVID-19的发酵组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：
S1：选择百合5-20份、炒山药5-20份、当归5-20份、大枣2-10份、茯苓2-10份、人参1-3份为原料，除杂后使用超微粉碎机进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水50-70份，然后加入纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶液水解，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，上清液经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：在中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
所述的发酵组合物的制备方法，所述方法进一步包含如下步骤：
S6：将发酵组合物加入辅料白砂糖20份、防腐剂山梨酸钾0.05份制备成发酵饮料产品；
或将发酵组合物加入淀粉100份、羟丙基纤维素20份、交联羧甲基纤维素钠10份制备成片剂；
或将发酵组合物加入玉米淀粉80份、滑石粉10份、交联纤维素5份制备成胶囊剂；
或加入蔗糖30、糊精10份和可溶性淀粉80份制备成颗粒冲剂；
本发明的发酵组合物可制备成的剂型并不受饮料、胶囊剂、颗粒冲剂和片剂的限制，常规的其他剂型均可实现本发明的技术效果。
本发明提供一种辅助预防COVID-19的发酵组合物，该组合物适于广大社会群众并具有较好的人群接受度，能够提高大众人群免疫力和抗感染能力，具有较好辅助预防COVID-19感染效果。
并且，本发明的中药组合物具有协同增效的效果，本发明通过增加RAW267.4细胞增殖，并且抑制IL-2、IL-6和TNF-α的释放，从而提高机体的免疫力，通过提高免疫力发挥抗COVID感染的作用，是一种理想的辅助预防新冠病毒感染的发酵组合物。
具体实施方式
实施例1
原料选择：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：
S1：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水50-70份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
实施例2
原料选择：百合20份、炒山药20份、当归15份、大枣10份、茯苓10份、人参3份，牛磺酸50份、蛋白粉50份、谷氨酰胺50份、低聚异麦芽糖50份、茶氨酸50份；制备方法按如下步骤进行：
S1：百合20份、炒山药20份、当归15份、大枣10份、茯苓10份、人参3份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水100-130份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%的植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：中药冻干粉中加入牛磺酸50份、蛋白粉50份、谷氨酰胺50份、低聚异麦芽糖50份、茶氨酸50份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
实施例3
原料选择：百合5份、炒山药5份、当归3份、大枣2份、茯苓2份、人参1份，牛磺酸1份、蛋白粉1份、谷氨酰胺1份、低聚异麦芽糖1份、茶氨酸1份；制备方法按如下步骤进行：
S1：百合5份、炒山药5份、当归3份、大枣2份、茯苓2份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水30-50份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%的植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：中药冻干粉中加入牛磺酸1份、蛋白粉1份、谷氨酰胺1份、低聚异麦芽糖1份、茶氨酸1份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
对比例1
原料选择：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：
S1：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水50-70份，加入质量体积比为1%植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；
S3：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S4：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
对比例2
原料选择：枸杞子9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：
S1：枸杞子9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水30-50份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%的植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
对比例3
原料选择：百合9份、薏仁9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：
S1：枸杞子9份、薏仁9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水30-50份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%的植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
对比例4
原料选择：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：
S1：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水50-70份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：酶解液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S4：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
实施例5
原料选择：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：
S1：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；
S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水50-70份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵，得到发酵液；
S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；
S5：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
S6：将发酵组合物加入辅料白砂糖20份、防腐剂山梨酸钾0.05份制备成发酵饮料产品。
本发明得到的发酵饮料组合物口感甜润，没有中药的苦涩口感，适合广大人群接受，具有较好的社会人群接受度。
试验例1
实验中所用的动物、动物细胞、试剂均来自商业化购买。
小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养RAW264.7 细胞加入新鲜的含10%胎牛血清的DMEM培养基，用毛细管充分吹打均，制备单细胞悬，并用血细胞计数板计数。分别按每孔1000个、2000 个、4000 个的细胞数量接种于96 孔细胞培养板中，用10 %胎牛血清的DMEM 培养基补充至每孔100 μL，在37 ℃、饱和湿度、5%CO2 培养箱中静置培养。
称取发酵组合物5mg 溶于5 mL空白DMEM 高糖培养基，得到浓度为1 mg/ml的母液，从1 mg/ml稀释100 倍，得到1 ug/ml，继续稀释10 倍，得到1 000ng/ml，依次稀释10 倍和100 倍，得到100 和10 ng/ml，取对数期生长的细胞以每孔1×105 接种于96 孔的细胞培养板中，24 h 细胞贴壁后，通过CCK-8 实验检测：在96 孔板中接种细胞悬液，将培养板放在培养箱（37 ℃，5 % CO2 的条件下）预培养，4 h 后向每孔加入10 μL 的CCK-8 溶液，将培养板在培养箱内孵育2 h 后，用酶标仪在450 nm 处测定吸光度（OD），连续重复7 d，测定每天的OD 值，得出各个密度的生长曲线。根据寇氏法计算发酵组合物的半抑制浓度，依据IC50 设定10，100，1000 ng·mL-13 个给药浓度进行实验。
实验分组及给药将对数生长期的RAW264.7 细胞分别按每孔6×106 个培养接种到6 孔细胞培养板中，随机分为空白对照组，LPS 模型组（10 μg·mL-1的LPS），中药冻干粉低、中、高剂量组（10，100，1000 ng·mL-1）。加入药物后将细胞放入CO2 培养箱中孵育2 h，再每孔加入10 μg·mL-1 LPS 继续培养10 h，备用1.7 ELISA 法测定IL-1、IL6、TNF-α的含量用磷酸缓冲盐溶液（PBS）将细胞清洗，然后用RIPALysis Buffer（RIPA 裂解液）裂解，使用蛋白定量试剂盒作蛋白定量，依照酶联免疫吸附测定（ELISA）法，按照抗原包被、加入样品、加入酶标抗体、加入底物显色、最后终止反应等步骤，使用瑞士TECAN 多功能酶标仪在450 nm 处测定OD 值，建立标准曲线，计算出IL-6、IL-10、TNF-α释放量。
发酵组合物对LPS 诱导的RAW264.7 细胞炎性因子表达的影响见表1。发酵组合物 对LPS 诱导RAW264.7 细胞释放的IL-1、IL-6、TNF-α均有不同程度的抑制作用，其中与空白 对照组比较，LPS 模型组的IL-1、IL-6、TNF-α释放均显著增高（P < 0.01）；而对比例1-3则 明显较实施例1-3结果较差，这暗示了本发明的组合物具有一定的协同增效作用；对比例1 采用了发酵而未采用酶解步骤，而对比例4采用了酶解而未采用发酵步骤，结果显示，对比 例1的IL-1、IL-6和TNF-α的释放量显著低于对比例4，和实施例1-2相当，这提示了发酵工艺 是必须的，而酶解步骤并不是必须步骤；各组间比较差异均有统计学意义（P < 0.05，P < 0.01）。
组别 IL-1 ng/L IL-6 ng/L TNF-αng/L
空白对照 36.51±10.26 30.61±6.85 28.53±8.52
LPS模型组 153.03±15.33 126.58±8.20 60.35±15.26
实施例1 58.62±15.62 53.51±9.47 35.07±12.95
实施例2 63.04±22.12 58.74±8.06 33.51±12.04
对比例1 72.54±16.07 75.98±11.58 40.25±20.67
对比例2 112.37±25.64 101.25±18.56 55.36±12.41
对比例3 108.30±15.75 95.08±14.30 56.23±18.98
对比例4 99.75±16.58 83.56±12.14 50.79±7.65
实验例2
参考文献“郑小香，金线莲多糖对小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞RAW体外免疫活性研究”第二章中的实验方法，采用小鼠实验，将文献中的金线莲多糖换成本发明的实施例1的发酵组合物，发现发酵组合物在50-800ug/ml浓度范围时，OD值较空白对照组提高17.07%，说明实施例1的发酵组合物能促进小鼠RAW267.4细胞增殖。
综上所述，本发明通过增加RAW267.4细胞增殖，并且抑制IL-2、IL-6和TNF-α的释放，从而提高机体的免疫力，通过提高免疫力发挥抗COVID感染的作用，是一种理想的辅助预防新冠病毒感染的发酵组合物。
本发明结合实施例作进一步的说明，但不能用来限制本发明的保护范围，对于药物的其他范围或其他药物的具体实施方式，可参照本发明的技术原理以及实施例的操作来实施，仍在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种提高免疫力的发酵组合物，其特征在于，原料为百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份，牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份；制备方法按如下步骤进行：S1：百合9份、炒山药9份、当归6份、大枣3份、茯苓3份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水50-70份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵，得到发酵液；S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；S5：中药冻干粉中加入牛磺酸15份、蛋白粉15份、谷氨酰胺15份、低聚异麦芽糖15份、茶氨酸15份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
2.一种提高免疫力的发酵组合物，其特征在于，原料为百合20份、炒山药20份、当归15份、大枣10份、茯苓10份、人参3份，牛磺酸50份、蛋白粉50份、谷氨酰胺50份、低聚异麦芽糖50份、茶氨酸50份；制备方法按如下步骤进行：S1: 百合20份、炒山药20份、当归15份、大枣10份、茯苓10份、人参3份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水100-130份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；S3: 将中药酶解液加入质量体积比为1%的植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉S5：中药冻干粉中加入牛磺酸50份、蛋白粉50份、谷氨酰胺50份、低聚异麦芽糖50份、茶氨酸50份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
3.一种提高免疫力的发酵组合物，其特征在于，原料为百合5份、炒山药5份、当归3份、大枣2份、茯苓2份、人参1份，牛磺酸1份、蛋白粉1份、谷氨酰胺1份、低聚异麦芽糖1份、茶氨酸1份；制备方法按如下步骤进行：S1：百合5份、炒山药5份、当归3份、大枣2份、茯苓2份、人参1份为主要原料，除杂后进行超微粉碎处理；S2：将超微粉碎获得的中药超微粉加入水30-50份，然后加入适量纤维素酶、果胶酶、蛋白酶复合酶进行酶解处理，得到中药酶解液；
S3：将中药酶解液加入质量体积比为1%的植物乳杆菌、发酵乳杆菌复合发酵菌进行发酵处理，得到发酵液；S4：发酵液经离心取上清液，经冷冻干燥得中药冻干燥粉；S5：中药冻干粉中加入牛磺酸1份、蛋白粉1份、谷氨酰胺1份、低聚异麦芽糖1份、茶氨酸1份，按比例复配，混合均匀得发酵组合物。
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