CN108782018B - 一种桑黄菌种的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种桑黄菌种的培养方法，本发明采用由桑枝木屑提取液、葡萄糖、魔芋精粉等成分制成的特异培养基，能有效促使桑黄菌丝粗壮，促进菌丝生长，利用本发明技术培养的桑黄菌丝，生长繁殖速度快、繁殖能力强。

Description

一种桑黄菌种的培养方法
技术领域
本发明涉及食用菌培养领域，具体涉及一种桑黄菌种的培养方法。
背景技术
桑黄菌(Phellinus igniarius)，又称桑臣、桑耳、胡孙眼、桑黄菇，属担子菌亚门多孔菌科木层孔菌属，是一种珍贵的多年生药用真菌，由于其通常生长在桑属植物上，且子实体为黄褐色而得名“桑黄”。桑黄主要具有抗肿瘤、抗氧化、保肝、增强免疫力、抗菌、降低血脂、预防和治疗类风湿性关节炎、抑制尿酸和抗过敏等功效。在国内桑黄菌集中分布在黑龙江省东部乌苏里江与兴凯湖之间、西北地区陕西与甘肃交界处的“子午岭”自然保护区。另外，西南各省区亦有出产少量的桑树生桑黄菌。桑黄菌产量极为有限，有“森林黄金”之美称。桑黄菌，这味古老的中药，功效作用比较全面。其子实体入药，味微苦，能利五脏、软坚、排毒、止血、活血、和胃止泻，民间用以治疗淋病、崩漏带下、疮窟积聚、癖软、脾虚泄泻。日本《原色日本菌类图鉴》则记载桑黄菌可治偏瘫一类中风病及腹痛、淋病；《神农本草经》将桑黄菌描述为“久服轻身不老延年”；桑黄菌还有解毒、提高消化系统机能的作用；民间则认为桑黄菌可以提高肝脏机能，对治疗肝硬化有效。桑黄菌也因其良好的疗效而被誉为“菌种极品”。
随着桑黄的用量日益加大，特别是韩、日对我国野生资源掠夺式收购，野生桑黄资源的储备越来越少，因此发展人工桑黄培育是当前研究和开发的热点之一。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供了一种桑黄菌种的培养方法，利用本方法培养的桑黄菌种菌丝粗壮，生长旺盛。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种桑黄菌种的培养方法，包括如下步骤：
1)培养基配置：所述培养基各组分的质量百分比如下：以配置1L桑黄培养基为基准，需要桑枝木屑提取液5-15g/L、葡萄糖5-20g/L、魔芋精粉6-12g/L、马铃薯(去皮)150-250g/L、酵母粉2.0-6.0g/L、KH2PO42.0-5.0g/L、MgSO4·7H2O 1.0-2.0g/L、琼脂6.0-12.0g/L；培养基的配制步骤为：
A.加热溶解：将马铃薯提取液倒入1000ml烧杯中，量取桑枝提取液5-15g/L加入烧杯中，添加水至1000ml，将烧杯中液体倒入锅中，分别加入葡萄糖5-20g，酵母粉2.0-6.0g/L、KH2PO42.0-5.0g/L、MgSO4·7H2O 1.0-2.0g/L、琼脂6.0-12.0g/L，用电磁炉低档加热至沸腾，期间不断搅拌，防止糊底或溢出；
B.添加魔芋精粉：称取6-12g魔芋精粉，缓慢加入不断沸腾的液体培养中，不断搅拌，防止结块糊化，分装前保持沸腾状态；
C.pH值调节：在沸腾状态下测液体培养基的pH值，用10％NaOH或稀盐酸调节pH值至5.5～7.5；
D.高压蒸汽灭菌：将配置好的液体培养基倒入2000ml的锥形瓶内，瓶口用棉塞塞住后，再用牛皮纸包裹棉线捆扎，放入灭菌锅中于0.15MPa高压条件下灭菌20min；
E.平板制备：在超净工作台上进行无菌操作，趁热先将灭菌完成后的培养基倒入无菌的培养皿中，厚度约1-1.5cm制成平板备用；
2)菌种接种：将步骤(1)中的培养基冷却至室温，待培养基凝固后，接入桑黄菌丝；
3)培养：将接种好菌丝的平板培养皿封口倒扣放入恒温箱中，在无光或弱光，20—26℃条件下进行培养，相对湿度控制在50％左右。
进一步地，所述步骤(1)中桑枝木屑提取液的制备方法包括如下步骤：
A.取桑枝木屑100g备用；
B.将步骤A中的桑枝木屑放入锅中，加入1000mL纯水，用大火煮至沸腾，维持10-15min；
C.将步骤B中的液体趁热过滤，取滤液即得桑枝木屑提取液。
进一步地，所述步骤(1)中马铃薯提取液的制备方法包括如下步骤：
A.称取去皮土豆150-250g备用；
B.将称好的土豆切成小块放入锅中，加入水1000mL，在电磁炉上加热至沸腾，保持20-30min；
C.用2层纱布趁热过滤，取滤液待用。
本发明的有益效果为：
(1)本发明采用由桑枝木屑提取液、葡萄糖、魔芋精粉等成分制成的特异培养基，能有效促使桑黄菌丝粗壮，促进菌丝生长。
(2)利用本发明技术培养的桑黄菌丝，生长繁殖速度快，能够在25±1℃，无光条件下培养7天后就开始萌发，随后以平均2.2mm/d的速度生长繁殖。
(3)本发明添加的魔芋粉可作为替代琼脂用量，并提供桑黄菌丝对糖分的要求。
附图说明
图1为桑黄菌丝在培养基平板生长的照片。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的描述，但是本发明的保护范围不局限于以下所述：
实施例1
一种桑黄菌种的培养方法包括，首先制备桑枝提取液和马铃薯提取液，桑枝提取液的制备方法为：称取桑枝木屑100g，放入锅中，加水1000ml，在电磁炉上加热至沸腾，维持10－15min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。制得桑枝提取液备用。马铃薯提取液制备方法为：称取去皮土豆200g，土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在电磁炉上加热至沸腾，维持20－30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤液待用。将马铃薯提取液倒入1000ml烧杯中，量取桑枝木屑提取液10g/L加入烧杯中，添加水至1000ml，将烧杯中液体倒入锅中，分别加入葡萄糖9g/L、酵母粉5.0g/L、KH2PO43.0g/L、MgSO4·7H2O1.5g/L、琼脂8.0g/L，用电磁炉低档加热至沸腾，期间不断搅拌，防止糊底或溢出；称取9g魔芋精粉，缓慢加入不断沸腾的液体培养中，不断搅拌，防止结块糊化；在沸腾状态下测液体培养基的pH值，用10％NaOH调节pH值至7.0；将配置好的液体培养基倒入2000ml的锥形瓶内，瓶口用棉塞塞住后，再用牛皮纸包裹棉线捆扎，放入灭菌锅中于0.15MPa高压条件下灭菌20min；在超净工作台上进行无菌操作，趁热先将灭菌完成后的培养基倒入无菌的培养皿中，厚度1.0cm制成平板备用；待培养基冷却至室温、培养基凝固后，接入桑黄菌丝；将接种好菌丝的平板培养皿封口倒扣放入恒温箱中，在无光或弱光，控制温度在25±1℃条件下进行培养，相对湿度控制在50％左右，培养7天后就开始萌发，随后以平均2.2mm/d的速度生长。
实施例2
与上述实施例不同的是，马铃薯提取液制备方法为：称取去皮土豆150g，土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在电磁炉上加热至沸腾，维持20－30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤液待用。将马铃薯提取液倒入1000ml烧杯中，量取桑枝木屑提取液5g/L加入烧杯中，添加水至1000ml，将烧杯中液体倒入锅中，分别加入葡萄糖5g/L、酵母粉2.0g/L、KH2PO42.0g/L、MgSO4·7H2O 1.0g/L、琼脂6.0g/L，用电磁炉低档加热至沸腾，期间不断搅拌，防止糊底或溢出；称取9g魔芋精粉，缓慢加入不断沸腾的液体培养中，不断搅拌，防止结块糊化；在沸腾状态下测液体培养基的pH值，用10％NaOH调节pH值至5.5；将配置好的液体培养基倒入2000ml的锥形瓶内，瓶口用棉塞塞住后，再用牛皮纸包裹棉线捆扎，放入灭菌锅中于0.15MPa高压条件下灭菌20min；在超净工作台上进行无菌操作，趁热先将灭菌完成后的培养基倒入无菌的培养皿中，厚度1.3cm制成平板备用；待培养基冷却至室温、培养基凝固后，接入桑黄菌丝；将接种好菌丝的平板培养皿封口倒扣放入恒温箱中，在无光或弱光，控制温度在20℃条件下进行培养，相对湿度控制在50％左右，培养7天后就开始萌发，随后以平均2.0mm/d的速度生长。
实施例3
与上述实施例不同的是，马铃薯提取液制备方法为：称取去皮土豆250g，土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在电磁炉上加热至沸腾，维持20－30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤液待用。将马铃薯提取液倒入1000ml烧杯中，量取桑枝木屑提取液15g/L加入烧杯中，添加水至1000ml，将烧杯中液体倒入锅中，分别加入葡萄糖20g/L、酵母粉6.0g/L、KH2PO45.0g/L、MgSO4·7H2O 2.0g/L、琼脂12.0g/L，用电磁炉低档加热至沸腾，期间不断搅拌，防止糊底或溢出；称取12g魔芋精粉，缓慢加入不断沸腾的液体培养中，不断搅拌，防止结块糊化；在沸腾状态下测液体培养基的pH值，用稀盐酸调节pH值至7.5；将配置好的液体培养基倒入2000ml的锥形瓶内，瓶口用棉塞塞住后，再用牛皮纸包裹棉线捆扎，放入灭菌锅中于0.15MPa高压条件下灭菌20min；在超净工作台上进行无菌操作，趁热先将灭菌完成后的培养基倒入无菌的培养皿中，厚度1.5cm制成平板备用；待培养基冷却至室温、培养基凝固后，接入桑黄菌丝；将接种好菌丝的平板培养皿封口倒扣放入恒温箱中，在无光或弱光，控制温度在22℃条件下进行培养，相对湿度控制在50％左右，培养7天后就开始萌发，随后以平均2.1mm/d的速度生长。

Claims (3)

1.一种桑黄菌种的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)培养基配置：所述培养基各组分的质量百分比如下：以配置1L桑黄培养基为基准，需要桑枝木屑提取液5-15g/L、葡萄糖5-20g/L、魔芋精粉6-12g/L、马铃薯(去皮)150-250g/L、酵母粉2.0-6.0g/L、KH2PO4 2.0-5.0g/L、MgSO4·7H2O 1.0-2.0g/L、琼脂6.0-12.0g/L；培养基的配制步骤为：
A.加热溶解：将马铃薯提取液倒入1000ml烧杯中，量取桑枝提取液5-15g/L加入烧杯中，添加水至1000ml，将烧杯中液体倒入锅中，分别加入葡萄糖5-20g，酵母粉2.0-6.0g/L、KH2PO42.0-5.0g/L、MgSO4·7H2O 1.0-2.0g/L、琼脂6.0-12.0g/L，用电磁炉低档加热至沸腾，期间不断搅拌，防止糊底或溢出；
B.添加魔芋精粉：称取6-12g魔芋精粉，缓慢加入不断沸腾的液体培养中，不断搅拌，防止结块糊化，分装前保持沸腾状态；
C.pH值调节：在沸腾状态下测液体培养基的pH值，用10％NaOH或稀盐酸调节pH值至5.5～7.5；
D.高压蒸汽灭菌：将配置好的液体培养基倒入2000ml的锥形瓶内，瓶口用棉塞塞住后，再用牛皮纸包裹棉线捆扎，放入灭菌锅中于0.15MPa高压条件下灭菌20min；
E.平板制备：在超净工作台上进行无菌操作，趁热将灭菌完成后的培养基倒入无菌的培养皿中，厚度约1-1.5cm制成平板备用；
2)菌种接种：将步骤(1)中的培养基冷却至室温，待培养基凝固后，接入桑黄菌丝；
3)培养：将接种好菌丝的平板培养皿封口倒扣放入恒温箱中，在无光或弱光，20—26℃条件下进行培养，相对湿度控制在50％左右。
2.如权利要求1所述的一种桑黄菌种的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中桑枝木屑提取液的制备方法包括如下步骤：
A.取桑枝木屑100g备用；
B.将步骤A中的桑枝木屑放入锅中，加入1000mL纯水，用大火煮至沸腾，维持10-15min；
C.将步骤B中的液体趁热过滤，取滤液即得桑枝木屑提取液。
3.如权利要求1所述的一种桑黄菌种的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中马铃薯提取液的制备方法包括如下步骤：
A.称取去皮土豆150-250g备用；
B.将称好的土豆切成小块放入锅中，加入水1000mL，在电磁炉上加热至沸腾，保持20-30min；
C.用2层纱布趁热过滤，取滤液待用。
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