CN108752191A - 一种高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,以粉碎的栀子果仁为原料,用70%乙醇溶液浸提,抽滤、旋转蒸发,得到初提液。将大孔树脂预处理,装柱后,将初提液上柱,用大孔树脂HPD100动态吸附至饱和状态。洗脱液选用乙醇‑水溶液,依次用纯水,10‑15%乙醇,30%乙醇,70%乙醇溶液对大孔树脂进行洗脱,得到的洗脱液分段定量收集。对收集到的洗脱液进行旋蒸,除去乙醇后干燥得到栀子黄粉末。本发明具有成本低,工序少,快速省时,绿色环保等特点,栀子黄中藏红花素含量可达到60%,并且可收集不同藏红花素含量的栀子黄产品,用于多种栀子黄色素制作工艺。所得栀子黄可用于医疗保健,食品添加,工业等领域。
Description
技术领域
本发明涉及中药有效成分的提取纯化方法,具体涉及一种高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法。
背景技术
栀子(学名:Gardenia jasminoides Ellis)别名:黄栀子、山栀、白蟾,是茜草科植物栀子的果实。栀子的果实是传统中药,属卫生部颁布的第l批药食两用资源,具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用。在中医临床常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤 、高血压、糖尿病等症。栀子是秦汉以前应用最广的黄色染料,栀子的果实中含有酮物质栀子黄素,还有藏红花素等,用于染黄的物质为藏红花酸。
藏红花素是一种天然的水溶性胡萝卜素衍生物,藏红花素有明显的降低血脂抗氧化以及抑制癌细胞生长的作用,并已有以此开发新药物的尝试。具有如此高药用价值的藏红花素最初发现存在于珍贵药材藏红花中,在现代社会中受众面越来越广,近年来在常用药材栀子中也发现了藏红花素类成分(也称为栀子黄色素)。此类成分既可以入药,又可以作为天然食用色素,因栀子在我国种植面积广泛,且作为中药材有较深入的开发历程,因此栀子中的栀子黄色素的精制成为了研究热点。栀子黄色素主要成分是类胡萝卜素类的藏红花素和藏红花酸 ,还含有环烯醚萜苷类的栀子苷以及黄酮、绿原酸。目前由于栀子黄色素提取过程中藏红花素的含量较低,获得高含量藏红花素的工艺较为繁琐,且成本较高,而多次过柱则会降低原料的利用率,使运作成本增加。若能够通过单一工序达到较好的纯化效果,制备高含量藏红花素的栀子黄色素,将会对工业生产产生重要影响。藏红花素作为栀子黄色素中的有效成分之一,增加其含量可以大大提高栀子黄色素的营养价值,并且一定程度上增加栀子黄的稳定性,在此基础上可以制作高含量藏红花素的栀子黄相关产品,因此开发提取效率高、时间短、提取条件温和、绿色环保、并且易于工业放大的栀子黄色素纯化方法,具有重要的现实意义和应用前景。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明提出了一种高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,以HPD100大孔树脂做吸附解吸介质,通过不同浓度乙醇溶液进行洗脱并分阶段定量收集洗脱液,分段干燥,以获得较高纯度的藏红花素。该方法工序简单,成本低,操作简便,耗时短,是一种高效,快速纯化栀子黄色素的方法。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:
(1)称取200g栀子果仁粉末放入800ml 70%乙醇溶液浸提2-3h,得到藏红花素初提液;
(2)将步骤(1)得到的初提液进行抽滤,分离滤液及滤渣;
(3)将步骤(2)中的滤液置于旋转蒸发仪,蒸出部分的乙醇和水;
(4)将步骤(3)获得藏红花素浓缩液加水定容至400ml;
(5)将步骤(4)获得的藏红花素溶液置于超声仪中3~5min,再次抽滤,确保完全溶解;
(6)将事先预处理的大孔树脂HPD100湿法装柱,并用纯水过柱30min;
(7)将步骤(5)获得的藏红花素提取液上柱,速度控制在1.5-3BV/h;
(8)藏红花素上柱直至柱体通体呈现均匀橙红色,则为吸附完全;
(9)待树脂柱吸附完全后,首先用10BV纯水上柱冲洗,洗去未吸附的初提液及少量杂质;
(10)用8BV的10-15%乙醇溶液上柱洗脱;
(11)用8BV的30%乙醇溶液上柱洗脱,并分段收集洗脱液;
(12)用10BV的70%乙醇溶液上柱洗脱,并分段收集洗脱液;
(13)将每份收集液分别旋蒸,分别干燥成粉末,加水溶解,液相检测。
所述步骤(1)中栀子果仁提取过程中注意避光,栀子果仁可提取两次,提取过程中栀子果质量(g)与乙醇溶液(ml)的比例为1:4。
所述步骤(2)中藏红花素初提液抽滤时真空度控制在0.09MPa,并放置2层滤纸。
所述步骤(3)中旋转蒸发仪温度设置为65℃,真空度为0.09MPa的条件下,减压蒸馏40min。
所述步骤(5)中超声仪温度设为25℃,功率为300W。
所述步骤(6)中湿法灌柱后用300ml纯水冲柱,时间控制在20min左右。
所述步骤(7)中藏红花素提取液上柱速度控制在90~100ml/h,流出液速度控制在80~90ml/h。
所述步骤(8)中树脂柱吸附完全需要400~500ml提取液。
所述步骤(9)中用400~500ml的纯水冲洗树脂柱。
所述步骤(10)中用300~400ml的10%乙醇溶液过树脂柱,并分段收集样品。
所述步骤(11)中用300~400ml的30%乙醇溶液过树脂柱,并分段收集样品。
本发明的有益效果是:本发明采用大孔树脂HPD100单方法进行栀子黄色素的纯化,此方法较为方便快速,省时省力,且适合工业放大生产化,通过分阶段收集流出液,可获得不同纯度的藏红花素以及高纯度藏红花素。
本发明纯化藏红花素效果佳,出产品快,是高效便捷的纯化方法。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,步骤如下:
(1)将栀子果仁粉碎后,称取200g栀子果仁粉末,加入800ml的70%乙醇溶液暗处避光浸提2~3h;
(2)将藏红花素初提液进行抽滤,使滤渣和滤液分开后弃置滤渣;
(3)将滤液倒入圆底烧瓶,置于旋转蒸发仪中,在温度65℃、真空度为0.09MPa的条件下,减压蒸馏40min,脱除乙醇和水,将初提液旋蒸至浸膏状,加纯水定容至400ml;
(4)获得的藏红花素溶液置于超声仪中3~5min,超声后再次抽滤,确保完全溶解;
(5)将事先预处理后的大孔树脂HPD100装柱,装柱后用纯水冲洗树脂柱,将藏红花素溶液上柱,速度控制在2BV/h,藏红花素上柱直至柱体通体呈现均匀橙红色,则为吸附完全。洗脱方式采用梯度洗脱,乙醇溶液浓度分别为10%,30%,70%,先用10BV(约400ml)纯水冲洗树脂柱,洗掉未吸附的提取液和树脂柱中的杂质,接着用8BV(约350ml)的10%的乙醇溶液洗去树脂吸附的部分杂质;然后用8BV(约350ml)30%的乙醇溶液洗脱,收集流出液;7BV(约300ml)70%乙醇溶液洗脱,并收集流出液。洗脱过程中共收集流出液15BV,每BV单独旋转蒸发,并置于烘箱干燥后,加水稀释进行液相检测,检测结果如表1所示:
表1. 栀子黄色素分段定量洗脱纯度计算
从上表可以得知,30%乙醇洗脱液中第3BV的藏红花素纯度达到61.7%。
本实验中的分阶段定量收集可收集到不同纯度的栀子黄色素,不同纯度的栀子黄可以分别出售,也可以用于不同需求的产品,例如:10%-30%的栀子黄用于鸡饲料添加,可以加深鸡蛋黄的色泽,增加营养,提高经济效益;30%-50%的栀子黄色素对蛋白质及淀粉具有良好的染色能力,可以用于糕点、饮料、饼干等染色剂以及食品添加剂,50-60%的栀子黄色素具有较高的医疗价值,可止血化瘀,用于药品行业。
实施例2
本实施例的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,步骤如下:
(1)将栀子果仁粉碎后,称取250g栀子果仁粉末,加入1200ml的70%乙醇溶液暗处避光浸提2~3h;
(2)将藏红花素初提液进行抽滤,使滤渣和滤液分开后弃置滤渣;
(3)将滤液倒入圆底烧瓶,置于旋转蒸发仪中,在温度65℃、真空度为0.09MPa的条件下,减压蒸馏50min,脱除乙醇和水,将初提液旋蒸至浸膏状;加纯水定容至500ml;
(4)获得的藏红花素溶液置于超声仪中3~5min,再次抽滤,确保完全溶解;
(5)将事先预处理后的大孔树脂HPD100装柱,装柱后用纯水冲洗树脂柱,将藏红花素溶液上柱,速度控制在2BV/h,藏红花素上柱直至柱体通体呈现均匀橙红色,则为吸附完全;洗脱方式采用梯度洗脱,乙醇浓度分别为10%,30%,70%,先用10BV(约400ml)纯水冲洗树脂柱,洗掉未吸附的提取液和树脂柱中的杂质,接着用8BV(约330ml)的15%的乙醇溶液洗去树脂吸附的部分杂质,然后用8BV(约330ml)30%的乙醇溶液洗脱,收集流出液,8BV(约350ml)70%乙醇溶液洗脱,并收集流出液。洗脱过程中共收集流出液16BV,每BV单独旋转蒸发,并烘箱干燥后,加水,液相检测,检测结果如表2所示:
表2.栀子黄色素分段定量洗脱纯度计算
从上表可以得知,30%乙醇洗脱液中第3BV的藏红花素纯度达到59.4%。
实施例3
本实施例的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,步骤如下:
(1)将栀子果仁粉碎后,称取220g栀子果仁粉末,加入800ml的70%乙醇溶液暗处避光浸提2~3h;
(2)将藏红花素初提液进行抽滤,使滤渣和滤液分开后弃置滤渣;
(3)将滤液倒入圆底烧瓶,置于旋转蒸发仪中,在温度60℃、真空度为0.08MPa的条件下,减压蒸馏50min,脱除乙醇和水,将初提液旋蒸至浸膏状;加纯水定容至400ml;
(4)获得的藏红花素溶液置于超声仪中10min,超声后再次抽滤,确保完全溶解;
(5)将事先预处理后的大孔树脂HPD100装柱,装柱后用纯水冲洗树脂柱,将藏红花素溶液上柱,速度控制在3BV/h,藏红花素上柱直至柱体通体呈现均匀橙红色,则为吸附完全;洗脱方式采用梯度洗脱,乙醇浓度分别为10%,30%,70%,先用10BV(约400 ml)纯水冲洗树脂柱,洗掉未吸附的提取液和树脂柱中的杂质,接着用8BV(约350 ml)的10%的乙醇溶液洗去树脂吸附的部分杂质,然后用8BV(约350ml)30%的乙醇溶液洗脱,收集流出液,8BV(约400ml)70%乙醇溶液洗脱,并收集流出液。将收集的流出液旋转蒸发,旋出多余乙醇和水,重新上柱并且吸附,分阶段分浓度定量洗脱,共收集流出液16BV,每BV单独旋转蒸发,烘箱干燥后,加水,液相检测,检测结果如表3所示:
表3.栀子黄色素分段定量洗脱纯度计算
从上表可以得知,30%乙醇洗脱液中第3BV的藏红花素纯度达到57.7%。
实施例4
本实施例的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,步骤如下:
(1)将栀子果仁粉碎后,称取200 g栀子果仁粉末,加入800 ml的70%乙醇溶液暗处避光浸提3 h;
(2)将藏红花素初提液进行抽滤,使滤渣和滤液分开后弃置滤渣;
(3)将滤液倒入圆底烧瓶,置于旋转蒸发仪中,在温度70℃、真空度为0.09 MPa的条件下,减压蒸馏30 min,脱除乙醇和水;
(4)将初提液旋蒸至浸膏状;加纯水定容至400 ml;获得的藏红花素溶液置于超声仪中5 min,超声后再次抽滤,确保完全溶解;
(5)将事先预处理后的大孔树脂HPD100装柱,装柱后用纯水冲洗树脂柱,冲洗20 min左右;
(6)将藏红花素提取液上柱,速度控制在1.5-2.5 BV/h,藏红花素上柱直至柱体通体呈现均匀橙红色,则为吸附完全;洗脱方式采用梯度洗脱,乙醇浓度分别为10%,30%,70%,先用10BV(约400ml)纯水冲洗树脂柱,洗掉未吸附的提取液和树脂柱中的杂质,接着用8BV(约320ml)的10%的乙醇溶液洗去树脂吸附的部分杂质,然后用8BV(约320ml)30%的乙醇溶液洗脱,收集流出液,10BV(约400ml)70%乙醇溶液洗脱,并收集流出液。洗脱过程中共收集流出液18BV,每BV单独旋转蒸发,并烘箱干燥后,加水,液相检测,检测结果如表4所示:
表4.栀子黄色素分段定量洗脱纯度计算
从上表可以得知,30%乙醇洗脱液中第3BV的藏红花素纯度达到58.4%。
比较例1
树脂AB-8纯化藏红花素,包括以下步骤:
栀子果仁粉碎后,称取100g栀子果仁粉末,加入400ml的50%乙醇避光浸提2h;将初提液进行抽滤,弃置滤渣,将滤液倒入圆底烧瓶,置于旋转蒸发仪中蒸馏30min,脱除乙醇和水,加纯水定容至400ml;获得的藏红花素溶液置于超声仪中3~5min,超声后再次抽滤,确保完全溶解;将事先预处理后的大孔树脂AB-8装柱,装柱后用纯水冲洗树脂柱,将藏红花素溶液上柱,速度控制在3BV/h,藏红花素上柱直至柱体通体呈现均匀橙红色,则为吸附完全;洗脱方式采用梯度洗脱,乙醇浓度分别为30%,70%,先用300~400ml纯水冲洗树脂柱,洗掉未吸附的提取液和树脂柱中的杂质,然后用约300ml30%的乙醇洗脱,收集流出液,用约400ml70%乙醇洗脱,并收集流出液。洗脱过程中共收集流出液2种,烘箱干燥后,加水,液相检测,其中30%乙醇洗脱液中藏红花素纯度达到30%,70%乙醇洗脱液中藏红花素纯度达到27.4%,并不能获得较高藏红花素含量的产品。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于步骤如下:
(1)将栀子果仁粉末放入70%乙醇溶液浸提2h,得到初提液;
(2)将步骤(1)得到的初提液进行抽滤,分离滤液及滤渣;
(3)将步骤(2)中的滤液置于旋转蒸发仪,蒸出部分的乙醇和水得到浓缩液;
(4)将步骤(3)获得浓缩液加水定容至400ml,并再次抽滤得到藏红花素提取液;
(5)将藏红花素提取液上大孔树脂吸附柱吸附,直至柱体通体为均匀橙红色;
(6)吸附完全后进行洗脱实验,用纯水冲洗树脂柱,洗去未吸附的初提液;
(7)用10%-15%乙醇溶液过柱,洗去部分杂质;
(8)用30%乙醇溶液过柱,开始收集流出液,对每BV单独收集;
(9)用70%乙醇溶液过柱,收集流出液,对每BV单独收集。
2.根据权利要求1所述的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于:所述步骤(1)中1g栀子果仁粉末需要乙醇溶液4mL。
3.根据权利要求1所述的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于:所述步骤(3)中旋蒸温度为60~70℃,真空度为0.09MPa的条件下,减压蒸馏40min。
4.根据权利要求1所述的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于:所述步骤(5)中的吸附柱为HPD100大孔树脂柱,上样速度为90-100ml/h,流出液速度为80-90ml/h,最终树脂柱吸附完全时流出液为无色透明。
5.根据权利要求1所述的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于:所述步骤(6)中纯水以及10-15%的乙醇溶液用量分别在300~400ml之间,上柱后将流出液弃置。
6.根据权利要求1所述的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于:所述步骤(7)用350ml 30%乙醇溶液上柱洗脱后将流出液分段收集,每50ml单独收集,收集7个样品。
7.根据权利要求1所述的高效快速富集栀子黄中藏红花素的提取方法,其特征在于:所述步骤(8)用400ml 70%乙醇溶液上柱洗脱至流出液近无色,并对流出液进行分段收集,每50ml单独收集,收集8个样品。
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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