CN107854590A - 一种甘薯皂苷提取物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品或医药化学领域，涉及一种甘薯皂苷提取物及其在制备预防和/或治疗肿瘤药物或食品中的应用，所述提取物是通过本发明的方法从甘薯淀粉母液中提取的。一方面，本发明的甘薯皂苷提取物能够明显抑制肿瘤细胞的增殖，具有良好的预防和/或治疗肿瘤前景，另一方面，本发明提供的方法将淀粉废水资源再利用，减轻了环境污染，具有重要的经济价值和环保意义。
Description
技术领域
本发明属于食品或医药化学领域，涉及一种甘薯皂苷提取物及其在制备预防和/或治疗肿瘤药物、保健食品中的应用。
背景技术
肿瘤是严重威胁人类健康的恶性疾病，在我国，癌症已成为疾病死因之首，且发病率和死亡率还在攀升，2015年中国预计有429.2万例新发肿瘤病例，相当于平均每天新发12000例癌症，和281.4万例死亡病例，相当于平均每天7500人死于癌症。寻找开发疗效确切、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是药物创新研发的热点和难点。传统中药因其独特的优势，从中药中提取安全有效部位用于预防和/或治疗癌症一直是肿瘤化疗研究的热点。
甘薯是薯蓣科薯蓣属缠绕草质藤本，又称红薯、甜署、白薯、番薯、地瓜等，是我国的粮食作物之一，其种植面积及产量均居世界首位。据《本草纲目》记载，甘薯“味甘、平、无毒。主治补虚乏、益气力、健脾胃、强肾阴。功同薯蓣”。现代研究结果表明(王洪云等，中国食物与营养，2013，19(12)：59-62)甘薯具有抗癌、提高免疫、降血脂、降血糖、抑制血栓形成、防治动脉硬化和心脏血管疾病等多种功效。但目前，甘薯开发利用主要还是提取甘薯淀粉，而在甘薯淀粉生产过程中，甘薯蛋白、多糖、维生素等多种成分却随着甘薯淀粉母液(俗称黄浆或淀粉废水)一并流失，不仅污染了环境，而且大大浪费了资源。
关于甘薯淀粉母液的再利用，主要是以下几个方面：作为原料直接用于微生物培养，如蜡样芽孢杆菌、木霉菌、苏云金芽孢杆菌等；甘薯蛋白提取、多酚氧化酶、β-淀粉酶和储藏蛋白提取。本领域技术人员周知，中药成分复杂，药效多样，不同提取工艺提取的中药提取物，无论是活性成分的种类还是含量，差异都很大，产生的药效也会差异甚远，如专利文献ZL2012100523560公开的甘薯淀粉母液提取工艺提取的提取物富含甘薯蛋白，专利文献ZL2013101948990公开的甘薯淀粉母液提取工艺提取的提取物分别富含多酚氧化酶、β-淀粉酶和储藏蛋白。因此，研究更多甘薯淀粉母液的提取方法，丰富多样化甘薯淀粉母液的再利用渠道，不仅具有重要的环保价值，还且具有重要的经济价值。
本发明提供的甘薯淀粉母液提取工艺提取的甘薯皂苷提取物对肿瘤细胞增殖具有显著的抑制效果，可用于预防和/治疗肿瘤药物和/或保健食品的制备，具有重要的意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种新的甘薯皂苷提取物，其具有优异的肿瘤细胞生长抑制活性。
本发明的另一个目的是提供本发明的甘薯皂苷提取物的制备方法。
本发明的还有一个目的是提供本发明的甘薯皂苷提取物在制备用于预防和/或治疗肿瘤药物中的应用。
本发明的再一个目的是提供本发明的甘薯皂苷提取物在制备用于预防和/或治疗肿瘤功能性食品中的应用。
上述发明目的，通过以下技术方案得以实现。
本发明的甘薯皂苷提取物，以重量计，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的5％以上。
在一些优选的实施方案中，本发明的甘薯皂苷提取物，以重量计，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的10％以上。
在另一些优选的实施方案中，本发明的甘薯皂苷提取物，以重量计，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的50％以上。
本发明的甘薯皂苷提取物，是通过以下方法制备的：
一定温度下，向甘薯淀粉母液中加入沉淀剂，将得到的混合物离心或过滤，取固体物得到。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，所述温度为50-100℃。优选地，所述温度为60-90℃。进一步优选地，所述温度为70-90℃。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，所述的沉淀剂选自二价或三价的金属盐、有机酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶。优选地，所述沉淀剂选自钙盐、镁盐、铝盐、醋酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶。进一步优选地，所述沉淀剂选自硫酸钙、硫酸镁、酒石酸、苹果酸、柠檬酸和葡萄糖酸内酯。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，所述沉淀剂的加入量为甘薯淀粉母液重量的0.01％-5％(重量/重量)。优选地，所述沉淀剂的加入量为甘薯淀粉母液重量的0.05％-1％(重量/重量)。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，所述混合物可以进一步冷却至0-80℃再离心或过滤。优选地，所述的混合物可以进一步冷却至20-50℃再离心或过滤。
在另一些优选的实施方案中，本发明的甘薯皂苷提取物的制备方法，还可以进一步包括以下纯化步骤：
将获得的固体物加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩得到。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，纯化步骤中所述有机溶剂选自水溶性醇或酮中的一种或多种。优选地，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种，例如10％-100％(v/v)乙醇。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，纯化步骤中所述有机溶剂的使用量为固体物重量的1-10倍。优选地，所述的有机溶剂的使用量为固体物重量的2-5倍。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，所述的纯化步骤可以重复1-5次。优选地，所述的纯化步骤可以重复2-4次。进一步优选地，所述的纯化步骤可以重复2-3次。
在另一些优选的实施方案中，本发明的甘薯皂苷提取物的制备方法，还可以进一步包括以下纯化步骤：
步骤A：将获得的固体物加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩得到膏状物。
步骤B：将步骤A所得膏状物通过层析法进行梯度洗脱，收集富集皂苷的洗脱部位，浓缩洗脱液得到。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，其中步骤A中所述有机溶剂选自水溶性醇或酮中的一种或多种。优选地，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种，例如10％-100％(v/v)乙醇。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，其中步骤A中所述的有机溶剂的使用量为固体物重量的1-10倍。优选地，所述的有机溶剂的使用量为固体物重量的2-5倍。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，其中所述步骤A可以重复1-5次。优选地，其中所述步骤A可以重复2-4次。进一步优选地，其中所述步骤A可以重复2-3次。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，步骤B中所述层析法包括硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析、葡萄糖凝胶柱层析和高效液相色谱。优选地，步骤B中所述的层析法是硅胶柱层析。
根据本发明甘薯皂苷提取物的制备方法，步骤B中所使用的梯度洗脱液依次为石油醚、乙酸乙酯、95％乙醇和甲醇。优选地，步骤B中所使用的梯度洗脱液依次为1-5倍柱体积的石油醚、1-5倍柱体积的乙酸乙酯、1-5倍柱体积的乙醇、1-5倍柱体积的甲醇。
在一些具体的实施方案中，本发明甘薯皂苷提取物，是通过以下步骤制备的：
步骤1：一定温度下，向甘薯淀粉母液中加入沉淀剂，将得到的混合物离心或过滤，获得固体物；
步骤2：将步骤1获得的固体物加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩得到；
其中：
步骤1中所述的温度为50-100℃；优选地，所述温度为60-90℃；进一步优选地，所述温度为70-90℃。
步骤1中所述的沉淀剂选自二价或三价的金属盐、有机酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶；优选地，所述沉淀剂选自钙盐、镁盐、铝盐、醋酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶；进一步优选地，所述沉淀剂选自硫酸钙、硫酸镁、酒石酸、苹果酸、柠檬酸和葡萄糖酸内酯；
步骤1中所述的沉淀剂加入量为甘薯淀粉母液重量的0.01％-5％(重量/重量)；优选地，所述沉淀剂的加入量为甘薯淀粉母液重量的0.05％-1％(重量/重量)；
步骤2中所述的有机溶剂选自水溶性醇或酮中的一种或多种；优选地，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种，例如10％-100％(v/v)乙醇；
步骤2中所述的有机溶剂的使用量为步骤1获得的固体物重量的1-10倍；优选地，所述的有机溶剂的使用量为步骤1获得的固体物重量的2-5倍。
步骤2可以重复1-5次；优选地，步骤2可以重复2-4次；进一步优选地，步骤2可以重复2-3次。
在另一些具体的实施方案中，本发明甘薯皂苷提取物，是通过以下步骤制备的：
步骤a：一定温度下，向甘薯淀粉母液中加入沉淀剂，将得到的混合物离心或过滤，获得固体物；
步骤b：将步骤a获得的固体物加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩得到膏状物；
步骤c：将步骤b所得膏状物通过层析法进行梯度洗脱，收集富集皂苷的洗脱部位，浓缩洗脱液得到；
其中：
步骤a中所述的温度为50-100℃；优选地，所述温度为60-90℃；进一步优选地，所述温度为70-90℃；
步骤a中所述的沉淀剂选自二价或三价的金属盐、有机酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶；优选地，所述沉淀剂选自钙盐、镁盐、铝盐、醋酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶；进一步优选地，所述沉淀剂选自硫酸钙、硫酸镁、酒石酸、苹果酸、柠檬酸和葡萄糖酸内酯；
步骤a中所述的沉淀剂加入量为甘薯淀粉母液重量的0.01％-5％(重量/重量)；优选地，所述沉淀剂的加入量为甘薯淀粉母液重量的0.05％-1％(重量/重量)；
步骤b中所述的有机溶剂选自水溶性醇或酮中的一种或多种；优选地，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种，例如10％-100％(v/v)乙醇；
步骤b中所述的有机溶剂的使用量为步骤1获得的固体物重量的1-10倍；优选地，所述的有机溶剂的使用量为步骤1获得的固体物重量的2-5倍。
步骤b可以重复1-5次；优选地，步骤b可以重复2-4次；进一步优选地，步骤b可以重复2-3次；
步骤c中所述的层析法包括硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析、葡萄糖凝胶柱层析和高效液相色谱；优选地，步骤c中所述的层析法是硅胶柱层析；
步骤c中所使用的梯度洗脱液依次为石油醚、乙酸乙酯、95％乙醇和甲醇；优选地，步骤c中所使用的梯度洗脱液依次为1-5倍柱体积的石油醚、1-5倍柱体积的乙酸乙酯、1-5倍柱体积的乙醇、1-5倍柱体积的甲醇。
本发明的较佳实施方案是本发明提供一种甘薯皂苷提取物，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的10％以上(重量/重量)。
其可以通过以下步骤制备：
步骤i：70-90℃下，向甘薯淀粉母液中沉淀剂，将得到的混合物离心或过滤，获得固体物。所述的沉淀剂选自钙盐、镁盐、铝盐、醋酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶，所述的沉淀剂加入量为甘薯淀粉母液重量的0.05％-1％(重量/重量)；
步骤ii：将步骤i获得的固体物中加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩获得膏状物。所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种，所述的有机溶剂的使用量为沉淀物重量的2-5倍；
步骤iii：重复步骤ii 1-5次。
本发明的另一个较佳实施方案是本发明提供一种甘薯皂苷提取物，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的50％以上(重量/重量)。
其可以通过以下步骤制备：
步骤I：70-90℃下，向甘薯淀粉母液中沉淀剂，将得到的混合物离心或过滤，获得固体物。所述的沉淀剂选自钙盐、镁盐、铝盐、醋酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶，所述的沉淀剂加入量为甘薯淀粉母液重量的0.05％-1％(重量/重量)；
步骤II：将步骤I获得的固体物中加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩获得膏状物。所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种，所述的有机溶剂的使用量为沉淀物重量的2-5倍；
步骤III：重复步骤II 1-5次；
步骤IV：将所得步骤III所得膏状物通过层析法进行梯度洗脱，收集富集皂苷的洗脱部位，浓缩洗脱液得到。所述层析法包括硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析、葡萄糖凝胶柱层析和高效液相色谱；所使用的梯度洗脱液依次为1-5倍柱体积的石油醚、1-5倍柱体积的乙酸乙酯、1-5倍柱体积的乙醇、1-5倍柱体积的甲醇。
另一方面，本发明提供本发明的甘薯皂苷提取物用于制备预防和/或治疗肿瘤药物的应用。
本发明的甘薯皂苷提取物可以与药学上可接受的载体一起制成药物制剂，所述剂型可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、粉针剂、注射剂、滴丸、缓释剂、控释剂、纳米制剂、包合物等。所述的药学上可接受的载体包括填充剂、崩解剂、润湿剂、抗氧剂、螯合剂、表面活性剂、矫味剂、螯合剂、pH调节剂、色素等。
本发明的甘薯皂苷提取物可以通过口服、喷雾、舌下含服、静脉注射、静脉输注、肌内注射、腹腔内给药、皮内给药等途径给药。
本发明的甘薯皂苷提取物可以单独用于预防和/或治疗肿瘤，也可以与其它抗肿瘤药物联合使用。
此外，本发明的甘薯皂苷提取物由于取自食材，因此对人体非常安全。
本发明的甘薯提取物还可以用于保健食品、食品加工和其它领域。本发明的甘薯提取物可以与其它营养物质和/或食品添加剂加工制备为食品、饮料、功能性食品、功能性饮料等，发挥食疗功能。
本发明的甘薯提取物对肿瘤细胞的生长抑制作用显著，未经任何纯化步骤的甘薯皂苷提取物在100ppm浓度上，对肝癌细胞HepG2生长抑制率为50％、对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制率为60％、对结肠癌细胞HCT8生长抑制率为55％；而经进一步有机溶剂搅拌纯化的甘薯皂苷提取物在100ppm浓度上，对肝癌细胞HepG2生长抑制率为70％、对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制率为70％、对结肠癌细胞HCT8生长抑制率为80％；特别是进一步经过有机溶剂搅拌、层析柱洗脱纯化的甘薯皂苷提取物，在100ppm浓度上对肝癌细胞HepG2生长抑制率为80％、对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制率为85％、对结肠癌细胞HCT8生长抑制率为80％。
术语解释
本发明所述的甘薯淀粉母液是指除去了甘薯淀粉的母液，俗称黄浆或淀粉废水。可以是甘薯淀粉生产中产生的废液，也可以通过将甘薯与水一并粉碎，过筛得甘薯浆，然后除去淀粉，收集浆液的方法制备，如将甘薯与0-2倍水一并粉碎，过80目筛得甘薯浆，然后过滤除去淀粉，收集浆液的方法制备。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步详细阐述，但本发明并不限于这些实施例。本文中使用的试剂和原料均可以通过商购或本领域常规方法制备得到。
实施例1 甘薯皂苷提取物的制备
100℃下，向100L甘薯母液中加入重量为母液重量0.01％的硫酸钙，搅拌均匀，冷却到80℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量6.1％。
实施例2 甘薯皂苷提取物的制备
50℃下，向100L甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量1％的硫酸铝，搅拌均匀，冷却到20℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量6.5％。
实施例3 甘薯皂苷提取物的制备
70℃下，向100L甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量0.1％的醋酸，搅拌均匀，冷却到20℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量6.1％。
实施例4 甘薯皂苷提取物的制备
90℃下，向100L甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量0.05％的柠檬酸，搅拌均匀，冷却到30℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量6.7％。
实施例5 甘薯皂苷提取物的制备
80℃下，向100L甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量0.5％的苹果酸，搅拌均匀，冷却到40℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量7.7％。
实施例6 甘薯皂苷提取物的制备
60℃下，向100L甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量2％的葡萄糖酸内酯，搅拌均匀，冷却到25℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量6.3％。
实施例7 甘薯皂苷提取物的制备
60℃下，向100L新鲜的甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量2％的海藻酸钠，搅拌均匀，冷却到25℃，离心，60℃下真空干燥，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量6.4％。
实施例8 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例1所得物中加入所得物重量1倍量的10％乙醇(重量/重量)搅拌1min，重复3次，收集并合并乙醇部分，减压蒸除乙醇，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量11.3％。
实施例9 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例2所得物中加入所得物重量5倍量的50％丙醇(重量/重量)搅拌20min，重复5次，收集并合并丙醇部分，减压蒸除丙醇，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量17.5％。
实施例10 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例3所得物中加入所得物重量3倍量的80％丙酮(重量/重量)搅拌10min，重复4次，收集并合并丙酮部分，减压蒸除丙酮，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量17.4％。
实施例11 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例4所得物中加入所得物重量7倍量的95％乙醇(重量/重量)搅拌30min，重复3次，收集并合并乙醇部分，减压蒸除乙醇，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量16.2％。
实施例12 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例5所得物中加入所得物重量2倍量的80％乙醇(重量/重量)搅拌30min，重复3次，收集并合并乙醇部分，减压蒸除乙醇，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量15.7％。
实施例13 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例6所得物中加入所得物重量3倍量的60％乙醇(重量/重量)搅拌30min，重复3次，收集并合并乙醇部分，减压蒸除乙醇，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量14.6％。
实施例14 甘薯皂苷提取物的制备
向实施例7所得物中加入所得物重量3倍量的30％乙醇(重量/重量)搅拌30min，重复3次，收集并合并乙醇部分，减压蒸除乙醇，干燥得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量13.4％。
实施例15 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例8所得物与硅胶按照重量比1:10的比例进行硅胶柱层析，依次用5倍柱体积的石油醚、5倍柱体积的乙酸乙酯、5倍柱体积的乙醇、5倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量54％。
实施例16 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例9所得物与硅胶按照重量比1:100的比例进行硅胶柱层析，依次用2倍柱体积的石油醚、2倍柱体积的乙酸乙酯、2倍柱体积的乙醇、2倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量67％。
实施例17 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例10所得物与硅胶按照重量比1:50的比例进行硅胶柱层析，依次用3倍柱体积的石油醚、3倍柱体积的乙酸乙酯、3倍柱体积的乙醇、3倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量62％。
实施例18 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例11所得物与硅胶按照重量比1:500的比例进行硅胶柱层析，依次用2倍柱体积的石油醚、2倍柱体积的乙酸乙酯、2倍柱体积的乙醇、2倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量70％。
实施例19 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例12所得物与硅胶按照重量比1:200的比例进行硅胶柱层析，依次用3倍柱体积的石油醚、3倍柱体积的乙酸乙酯、3倍柱体积的乙醇、3倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量68％。
实施例20 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例13所得物与硅胶按照重量比1:600的比例进行硅胶柱层析，依次用2倍柱体积的石油醚、2倍柱体积的乙酸乙酯、2倍柱体积的乙醇、2倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量71％。
实施例21 甘薯皂苷提取物的制备
将实施例14所得物与硅胶按照重量比1:600的比例进行硅胶柱层析，依次用2倍柱体积的石油醚、2倍柱体积的乙酸乙酯、2倍柱体积的乙醇、2倍柱体积的甲醇洗脱，并以薯蓣皂苷为对照，显色收集皂苷部分，浓缩洗脱液，得到甘薯皂苷提取物，甘薯皂苷含量72％。
实施例22 皂苷的鉴别试验
参考文献周晶，周晔，翟慧娟。正北芪中总皂苷的鉴别与含量测定[J]。天津医科大学学报，19(4):480,2003。Molish反应：取供试液0.5mL置试管中,加入5％α-萘酚乙醇溶液3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入几滴浓硫酸，呈玫瑰色环，表明含有糖或苷类。Liebermann-Burchard反应：取供试液1mL，水浴蒸干，置白瓷板上，用1mL冰醋酸溶解残渣，加入1mL醋酐-浓硫酸试剂(19:1)，混合均匀，颜色变化为黄色→红色→棕色→棕褐色，变化缓慢，表明含有皂苷类成分。
鉴别结论：本发明的甘薯皂苷提取物中含有皂苷成分。
实施例23 皂苷的含量测定
参考文献王俊，杨克迪，陈钧。分光光度法测定薯蓣皂苷元。分析试验室,23(1)：73,2004。准确吸取0.5mL标准品溶液于25mL的比色管中，挥干溶剂，加高氯酸5mL，置25℃水浴中保温25min，取出冷却至室温。以薯蓣皂苷为对照品，以高氯酸为空白对照，在紫外-可见分光光度计上与190-600nm范围内扫描测定标准品和样品紫外吸收光谱，计算皂苷含量。
实验例1 本发明提取甘薯提取物不同条件下的提取效果比较
实验例a：90℃下，向100L新鲜的甘薯淀粉母液中加入重量为母液重量1％的硫酸钙，搅拌均匀，冷却到30℃，离心，60℃下真空干燥，得到固体物。取固体物并加入其总重量3倍量的无水甲醇搅拌60min，重复1次，合并甲醇部分，减压蒸除甲醇，干燥，获得甘薯皂苷提取物。
对比例1：90℃下，新鲜的甘薯淀粉母液100L，搅拌均匀，冷却到30℃，离心，60℃下真空干燥，得到固体物；取固体物并加入其总重量3倍量无水甲醇搅拌60min，重复1次，合并甲醇部分，减压蒸除甲醇，干燥，获得甘薯提取物。
对比例2：30℃下，向100L新鲜的甘薯淀粉母液中加入重量为淀粉母液重量1％的硫酸钙，搅拌均匀，冷却到30℃，离心，60℃下真空干燥，得到固体物；取固体物并加入其总重量3倍量无水甲醇搅拌60min，重复1次，合并甲醇部分，减压蒸除甲醇，干燥，获得甘薯提取物。
表1、甘薯提取物收率和含量比较
| 样品 | 收率(％) | 皂苷含量(％) |
| 实验例 | 2.0 | 16.5 |
| 对比例1 | 0.8 | 12.3 |
| 对比例2 | 0.7 | 12.5 |
实验例2 本发明甘薯皂苷提取物的肿瘤细胞抑制活性
实验材料：HepG2肝癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞、HCT8结肠癌细胞均购自第三军医大学，牛血清等其他生化试剂以及细胞培养材料购自北京鼎国生物技术有限责任公司。
细胞的复苏和培养：将细胞冻存管从液氮中取出，迅速放入37℃的温水中，待其完全融化，迅速转移到超净工作台中，把溶液转入到灭菌后的10mL离心管中，加入7mL的RIPM-1640培养基(含10％FBS，1％青链霉素混合液)，于离心机中3000rmp离心5min，后弃掉上清，加入4mL RIPM-1640培养基(含10％FBS，1％青链霉素混合液)，吹打混匀后转到培养瓶中进行培养。培养条件为37℃，5％的CO2。
细胞的给药：选择形态正常，长势良好的HepG2细胞、MCF-7细胞和HCT8细胞，待细胞长满到80％左右，用胰蛋白酶消化细胞，加入有血培养基，把细胞吹打下来，后转入到90mm培养皿，进行贴壁培养。培养24h后加入本发明实施例1-24提取物，控制终浓度为100mg/L，培养18h。利用MTT法检测细胞存活率，与空白对照组比较计算细胞存活率。不加药物为空白对照组。
实验结果表明，空白对照组的细胞生长抑制率均为0，实施例1-7皂苷提取物对HepG2细胞抑制率为45-50％，对MCF-7细胞的抑制率为55％-60％，对CT8细胞的抑制率为53％-55％；实施例8-14皂苷提取物对HepG2细胞抑制率为65-70％，对MCF-7细胞的抑制率为68％-74％，对CT8细胞的抑制率为75％-82％；实施例15-21皂苷提取物对HepG2细胞抑制率为78-82％，对MCF-7细胞的抑制率为83％-87％，对CT8细胞的抑制率为85％-88％。
本发明的甘薯皂苷提取物对HepG2肝癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞、HCT8结肠癌细胞表现出明显的生长抑制作用，具有良好的肿瘤预防和/或治疗前景。
Claims (10)
1.一种甘薯皂苷提取物，以重量计，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的5％以上。
2.根据权利要求1所述的甘薯皂苷提取物，以重量计，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的10％以上。
3.根据权利要求1所述的甘薯皂苷提取物，以重量计，所述皂苷的含量占甘薯皂苷提取物总量的50％以上。
4.权利要求1-3所述甘薯皂苷提取物的制备方法，包括以下制备步骤：
步骤a：一定温度下，向甘薯淀粉母液中加入沉淀剂，将得到的混合物离心或过滤，获得固体物；
步骤b：将步骤a获得的固体物加入有机溶剂，充分搅拌后过滤，收集滤液并浓缩得到膏状物；
步骤c：将步骤b所得膏状物通过层析法进行梯度洗脱，收集富集皂苷的洗脱部位，浓缩洗脱液得到；
其中：
步骤a中所述的温度为50-100℃；
步骤a中所述的沉淀剂选自二价或三价的金属盐、有机酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶；
步骤a中所述的沉淀剂加入量为甘薯淀粉母液重量的0.01％-5％(重量/重量)；
步骤b中所述的有机溶剂选自水溶性醇或酮中的一种或多种；
步骤b中所述的有机溶剂的使用量为步骤1获得的固体物重量的1-10倍；
步骤b可以重复1-5次；
步骤c中所述的层析法包括硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析、葡萄糖凝胶柱层析和高效液相色谱；
步骤c中所使用的梯度洗脱液依次为石油醚、乙酸乙酯、95％乙醇和甲醇。
5.根据权利要求4所述甘薯皂苷提取物的制备方法，其中：
步骤a中所述的温度为70-90℃；
步骤a中所述的沉淀剂选自钙盐、镁盐、铝盐、醋酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、葡萄糖酸内酯、海藻酸钠、黄原胶和卡拉胶；
步骤a中所述的沉淀剂加入量为甘薯淀粉母液重量的0.01％-5％(重量/重量)；
步骤b中所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮中的一种或多种；
步骤b中所述的有机溶剂的使用量为步骤1获得的固体物重量的2-5倍；
步骤b可以重复2-4次；
步骤c中所述的层析法包括硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析、葡萄糖凝胶柱层析和高效液相色谱；
步骤c中所使用的梯度洗脱液依次为1-5倍柱体积的石油醚、1-5倍柱体积的乙酸乙酯、1-5倍柱体积的乙醇、1-5倍柱体积的甲醇。
6.一种药物组合物，其包含权利要求1-3所述甘薯皂苷提取物和至少一种药学可接受的载体。
7.根据权利要求6的药物组合物，其中所述药物组合物配制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、粉针剂、注射剂、滴丸。
8.根据权利要求1-3之任一项的甘薯皂苷提取物或根据权利要求6或7的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。
9.一种保健食品，其包含权利要求1-3所述甘薯皂苷提取物和至少一种食品添加剂。
10.根据权利要求1-3之任一项的甘薯皂苷提取物或根据权利要求9的保健食品在制备食品、保健品中的应用。
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