CN108727463A - 一种利用聚酰胺凝胶从丹参中分离提纯丹参酮iia的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利用聚酰胺凝胶从丹参中分离提纯丹参酮IIA的方法，属中药开发技术领域。该方法通过石油醚、乙酸乙酯作为萃取剂，利用聚酰胺凝胶柱对所得富含目标物质的浸膏进行分离，利用乙醇进行梯度洗脱分离得到化合物丹参酮ⅡA，提取分离纯度约达93％。本发明萃取过程溶剂残余度小，安全可靠，应用聚酰胺凝胶进行分离，成本较低，所得的丹参酮IIA的收得率及纯度较高，是一种高效的丹参酮IIA提取分离方法，为丹参酮ⅡA的分离提取技术合理使用提供了科学依据。

Description

一种利用聚酰胺凝胶从丹参中分离提纯丹参酮IIA的方法

技术领域

本发明涉及一种分离提纯丹参中丹参酮IIA的方法，属中药开发技术领域。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhizaBunge)为唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属多年生草本植物，因其根色红形状似参而得名“丹参”，是治疗心脑血管疾病的常用中药。丹参有效成分主要包括水溶性的酚酸类化合物和脂溶性的丹参酮类化合物。丹参酮类化合物主要包括丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、二氢丹参酮等。近年来研究发现，丹参酮IIA可以抑制包括乳腺癌、肺癌、肝癌等多种肿瘤细胞株的生长；对提高心肌耐缺氧的能力，保护红细胞膜，心肌的修复有重要作用。此外还可有效改善微循环障碍，并可降低冠心病、脑缺血中风及心肌梗塞病人的全血和血浆粘度等作用。在临床上广泛应用于治疗心血管病的中成药制剂，同时也应用到保健品及化妆品行业。

丹参酮IIA在丹参中的含量较低，采用常规有机试剂萃取、硅胶柱分离技术，效率低且成本较高。本发明采用聚酰胺柱层析，并采用不同浓度的乙醇作为溶剂分离丹参酮IIA，具有提取纯度高及得率高、成本低、安全可靠等优点，是一种高效的丹参酮IIA分离提纯方法。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种从丹参中分离提纯丹参酮IIA的方法。

本发明的技术方案是:以植物丹参干燥根为原料，用一定的溶剂常温浸泡提取物；再用不同极性有机溶剂分步萃取所获得的浸膏；将浸膏放入聚酰胺分离柱中通过不同浓度的淋洗液进行梯度淋洗分离；用TLC(薄层色谱硅胶板)跟踪监测，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝10:1，用磷钼酸溶液显色；确定为单体后浓缩结晶出丹参酮IIA，包括如下具体步骤：

(1)将晾干的丹参根经打粉机粉碎后，过40-50目筛，用乙醇浸泡，回收乙醇浸提液，旋转蒸发得到乙醇浸膏；

(2)在乙醇浸膏中加入石油醚和水，将水相用乙酸乙酯进行萃取，后取乙酸乙酯相浸膏；

(3)用乙醇溶解聚酰胺胶粉，装柱；将乙酸乙酯相浸膏用二氯甲烷和甲醇溶解，加入聚酰胺胶粉搅拌混匀，聚酰胺胶粉是浸膏体积的1.5倍，旋转蒸发，干法上柱；用乙醇溶剂进行梯度(10vol％,20vol％,30vol％,40vol％,50vol％,60vol％,70vol％,80vol％,90vol％,100vol％)淋洗，每个浓度的乙醇溶剂各洗脱3～5L，控制流速13～20mL/min，分段收集含目标物质的洗脱液；

(4)结晶：真空浓缩洗脱液，用二氯甲烷和甲醇溶解，待其结晶；用石油醚洗涤至颜色均一呈棕红色，干燥。

进一步地，所述的步骤(1)中浸泡用的酒精的浓度为95vol％，且需浸泡、提取3～5次，每次周期5～7天，期间每间隔12小时搅拌一次。

进一步地，所述的步骤(2)中，用纯水和乙酸乙酯萃取所得水相后，用旋转蒸发仪旋转蒸发回收乙酸乙酯相得所述乙酸乙酯相浸膏。

进一步地，所述的步骤(3)中，装柱处理步骤为：用10vol％的无水乙醇溶解聚酰胺胶粉装入层析柱中，胶粉体积为浸膏体积的50倍，用10vol％的乙醇冲洗柱子至无气泡；

样品处理的步骤为：加入一定量二氯甲烷和甲醇溶解样品，再加入1.5倍浸膏体积的聚酰胺胶粉搅拌混匀，旋转蒸发，将混有样品的粉末取出，干法上样。

进一步地，所述的步骤(4)中用旋转蒸发仪真空浓缩合并的洗脱液，温度45±5℃，用二氯甲烷和甲醇溶解，将丹参酮ⅡA粗品溶液置于试管中，待其结晶；再用石油醚洗涤结晶至颜色成均一的棕红色结晶，干燥，即为丹参酮IIA纯品。

本发明的有益效果在于：本发明通过石油醚、乙酸乙酯作为萃取剂，利用聚酰胺凝胶柱对所得富含目标物质的浸膏进行分离，利用乙醇进行梯度洗脱分离得到化合物丹参酮ⅡA，提取分离纯度约达93％。本发明萃取过程溶剂残余度小，安全可靠，应用聚酰胺凝胶进行分离，成本较低，所得的丹参酮IIA的收得率及纯度较高，是一种高效的丹参酮IIA提取分离方法，为丹参酮ⅡA的分离提取技术合理使用提供了科学依据。

附图说明

图1为本发明获得的丹参酮IIA的CNMR图谱。

图2为本发明获得的丹参酮IIA的HNMR图谱。

图3为本发明获得的丹参酮IIA与标准品的对照的HPLC图谱；所提取的丹参酮IIA与标准品的出峰时间为29.70min左右。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。以下实施例无特殊说明的实验方法，通常按照常规条件。

实施例1：丹参有效成分提取

1.1粉碎

将10kg丹参根部材料洗净后自然晾干，粉碎。

1.2乙醇浸泡提取

加入16L的95vol％乙醇浸泡5～7天，期间每间隔12小时搅拌一次；将提取液通过砂芯漏斗过滤，取液体用旋转蒸发仪蒸出溶剂，回收浸膏；将溶剂再次倒回材料中进行浸泡提取，重复3～5次，最后合并滤液得到丹参提取浸膏。

1.3石油醚萃取

将所得的乙醇提取浸膏倒入分液漏斗中，先加入5L纯水，后加入2L石油醚进行充分振荡，待静置分层后取上层石油醚相，蒸出溶剂，重复上述操作3～5次，得到水相和石油醚相浸膏。

1.4乙酸乙酯萃取

向1.3中所得的水相中倒入2L的乙酸乙酯进行萃取，方法操作同1.3，重复上述操作3～5次，得到水相和乙酸乙酯相浸膏(64g)。

1.5装柱处理

用10vol％的无水乙醇溶解聚酰胺胶粉装入相应规格(长45厘米，直径7厘米)的层析柱中，胶粉体积约为2/3柱体积，约浸膏体积的50倍，用10vol％的乙醇冲洗柱子。

1.6样品处理

加入总体积约40mL的二氯甲烷和甲醇溶解样品，再加入1.5倍浸膏体积聚酰胺胶粉搅拌混匀，旋转蒸发，蒸出溶剂，将混有样品的粉末取出，干法上样至柱中至无气泡。二氯甲烷和甲醇可以按照任意配比。

1.7柱层析

取1.4中得到的乙酸乙酯相浸膏进行柱层析，用不同浓度的乙醇溶剂进行梯度(10vol％,20vol％,30vol％,40vol％,50vol％,60vol％,70vol％,80vol％,90vol％,100vol％)淋洗，每个浓度的乙醇溶剂洗脱3～5L，控制流速13～20mL/min，每1L接瓶，分段收集的洗脱液。

1.8薄层色谱

通过薄层色谱检识、观察洗脱情况，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝10:1，用磷钼酸溶液显色，确定为单体后合并1.7所述洗脱液，浓缩结晶出丹参酮ⅡA。

1.9结晶

真空浓缩合并的洗脱液，温度45±5℃，用二氯甲烷和甲醇溶解，将丹参酮ⅡA粗品溶液置于试管中，待其结晶；再用石油醚洗涤至颜色成均一的棕红色结晶，干燥，即为丹参酮ⅡA纯品。共提取出丹参酮ⅡA质量约2.0g。

本发明采用聚酰胺柱层析，并采用不同浓度的乙醇梯度洗脱，合理有效地控制柱层析流速为13～20mL/min，分离得到丹参酮IIA单体，纯度约达到93％，达到了高效分离提纯的效果，成本低、安全可靠，是一种高效的丹参酮IIA分离提纯方法，适宜产业化生产。本发明方法应用无毒或低毒的有机溶剂和减少有机溶剂种类及使用量，同时达到了降耗节能，减少人员危害和环境污染的效果。

Claims (5)

1.一种从丹参中分离提纯丹参酮IIA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将晾干的丹参根经打粉机粉碎后，过40-50目筛，用乙醇浸泡，回收乙醇浸提液，旋转蒸发得到乙醇浸膏；

(2)在乙醇浸膏中加入石油醚和水，得水相和石油醚相；将水相用乙酸乙酯进行萃取，后制得乙酸乙酯相浸膏；

(3)用乙醇溶解聚酰胺胶粉，装柱；将乙酸乙酯相浸膏用二氯甲烷和甲醇溶解，加入聚酰胺胶粉搅拌混匀，聚酰胺胶粉是浸膏体积的1.5倍，旋转蒸发，干法上柱；用乙醇溶剂进行梯度(10vol％,20vol％,30vol％,40vol％,50vol％,60vol％,70vol％,80vol％,90vol％,100vol％)淋洗，每个浓度的乙醇溶剂各洗脱3～5L，控制流速13～20mL/min，分段收集含目标物质的洗脱液；

(4)结晶：真空浓缩洗脱液，用二氯甲烷和甲醇溶解，待其结晶；用石油醚洗涤至颜色均一呈棕红色，干燥。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中浸泡用的酒精的浓度为95vol％，且需浸泡、提取3～5次，每次周期5～7天，期间每间隔12小时搅拌一次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，用纯水和乙酸乙酯萃取所得水相后，用旋转蒸发仪旋转蒸发回收乙酸乙酯相得所述乙酸乙酯相浸膏。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，装柱处理步骤为：用10vol％的无水乙醇溶解聚酰胺胶粉装入层析柱中，胶粉体积为浸膏体积的50倍，用10vol％的乙醇冲洗柱子至无气泡；

样品处理的步骤为：加入一定量二氯甲烷和甲醇溶解样品，再加入1.5倍浸膏体积的聚酰胺胶粉搅拌混匀，旋转蒸发，将混有样品的粉末取出，干法上样。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，用旋转蒸发仪真空浓缩合并的洗脱液，温度45±5℃，用二氯甲烷和甲醇溶解，将丹参酮ⅡA粗品溶液置于试管中，待其结晶；再用石油醚洗涤结晶至颜色成均一的棕红色结晶，干燥，即为丹参酮IIA纯品。