CN108676741A - 一种功能性复合微生物育苗基质及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种功能性复合微生物育苗基质，该功能性复合微生物育苗基质是在以酒槽、牛粪堆肥、蛭石为原料组成的育苗基质中接种微生物NJHR92和NJQL‑A6后经发酵制成；菌株NJHR92，分类命名为球形赖氨酸芽孢杆菌，菌种保藏号为CGMCC No.6629；菌株NJQL‑A6，分类命名为皮氏罗尔斯通氏菌，菌种保藏号为CGMCC No.6628。本发明还公开了功能性复合微生物育苗基质在培育瓜果蔬菜类作物幼苗中的应用。本发明功能性复合微生物育苗基质不仅为植物提供生长的介质和养分，促进植物生长，还具有防控病害的作用，增加种子出苗率，培育出优质的种苗，增强幼苗的适应性，增强其移栽至大田后生长的稳定性。

Description

一种功能性复合微生物育苗基质及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于农业微生物技术生产领域，涉及一种功能性复合微生物育苗基质，具体涉及一种加入了菌株NJHR92和NJQL-A6的功能性复合微生物育苗基质。
背景技术
随着对生存环境质量要求的提高，耕地面积的减少，农业生产集约性发展，育苗基质由于具有节能、生产效率高、育苗质量好、且缓苗快成活率高等优点，而在作物、蔬菜及花卉等种植中得到广泛的应用。优质的种苗是作物高产优质的前提，基质是保障优质种苗的基础，采用基质育苗技术是今后的推广方向。植物育苗基质的功能不仅仅是支持和固定植株，同时具有支持水分、提供营养物质和供应氧气的作用。但是，育苗基质普遍具有营养元素失衡、微生物菌群单一及肥力较差、后劲不强的特点。通过添加有益微生物的功能性育苗基质能够有效的提高育苗的质量，对苗期幼苗的生长具有稳定的促生作用，增强移栽后种苗的生长和田间产量，同时满足现代生态农业和有机农业发展的需求。
育苗基质通过接种有益微生物能够有效的发挥有益菌的作用，从而促进培育壮苗，提高作物产量。微生物功能性育苗基质具有环境简单、稳定可控的特点，有利于微生物发挥作用，同时符合现代农业对环境保护、食品安全等要求。目前，通过接种有益微生物用于蔬菜、果树和粮食作物的增产和抗病已得到广泛应用。市场上已有一些用于农业生产的生物菌剂，但由于生物菌剂在植物根系的定殖能力差，养分的供应不均衡，田间效果通常不稳定。有益微生物成功定殖于植物根际是其发挥作用的关键。因此需要接种具有较强定殖能力菌株，同时为其提供一个舒适的微环境，避免在接入土壤后细菌数量迅速下降。
发明内容
本发明的目的是以牛粪堆肥和酒槽两大废弃物为主要原料，辅以蛭石为原料组成的基质为载体，接种具有促生作用的功能菌株，通过有益功能菌在育苗基质中的定殖促进植物生长。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种功能性复合微生物育苗基质，该功能性复合微生物育苗基质是在以酒槽、牛粪堆肥、蛭石为原料组成的育苗基质中接种微生物NJHR92和NJQL-A6后经发酵制成。
菌株NJHR92，分类命名为球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus)，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6629。
菌株NJQL-A6，分类命名为皮氏罗尔斯通氏菌(Ralstonia pickettii)，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6628。具体见申请人于2012年12月19日申请的发明专利申请，发明名称为：一种能防治番茄青枯病的微生物植物疫苗，申请号：201210466659.7。
本发明所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)、菌株NJHR92、NJQL-A6分别采用NA固体培养基活化；挑取NJHR92单菌落于NA液体培养基，28-32℃、170-200r·min-1摇床过夜培养，得到NJHR92发酵液，生理盐水洗涤除去培养基，用无菌生理盐水调节得到OD600＝0.3～0.6的NJHR92种子液；挑取NJQL-A6单菌落于液体NA培养基，28-32℃、170-200r·min-1摇床过夜培养，得到NJQL-A6发酵液，生理盐水洗涤除去培养基，用无菌生理盐水调节得到OD600＝0.3～0.6的NJQL-A6种子液；
步骤(2)、将酒糟、牛粪堆肥和蛭石制成育苗基质，121℃、30min置于灭菌锅中间歇灭菌两次，采用氨基酸叶面肥调节基质的pH为5.5-7.5；将NJHR92种子液和NJQL-A6种子液混合得到混合种子液，以5-15％的接种量接种到育苗基质中进行二次发酵，此时功能菌组合NJHR92+NJQL-A6总数量为8-10(Log10CFUg-1DW)，二次发酵条件为：维持育苗基质的含水量为50-65％，发酵温度为25-35℃，每隔12-24h左右翻抛一次，发酵周期为约5d；获得功能性复合微生物育苗基质。
步骤(1)中，菌株NJHR92、NJQL-A6分别采用NA固体培养基划线，30℃培养箱培养48h左右活化。
所述的NA液体培养基的配方为：葡萄糖10g·L-1，蛋白胨5g·L-1，酵母粉0.5g·L-1，牛肉膏3g·L-1，pH 7.0，115℃高压灭菌30min。
所述的NA固体培养基为在NA液体培养基中加入液体培养基体积2-3％的琼脂制成。
生理盐水洗涤除去培养基的具体操作为：用生理盐水重悬菌体，4500r·min-1离心5min收集菌体，重复3次以除去残留的培养基。
步骤(2)中，将酒糟、牛粪堆肥和蛭石按照体积比60～65:10～20:15～25制成育苗基质，优选为62:15:20。
所述的氨基酸叶面肥是利用废弃的动植物(蛋白)研制的氨基酸叶面肥，由江阴市联业生物科技有限公司生产，为市售产品。
所述的NJHR92种子液和NJQL-A6种子液的体积比为1:1。
本发明中，NJHR92种子液和NJQL-A6种子液也可以分别接种到育苗基质中。
所述的混合种子液的接种量优选为10％。
所述的二次发酵条件优选为：维持育苗基质的含水量为50-60％，发酵温度为30℃，每隔12-24h翻抛一次，发酵周期为5d。采用无菌水调节育苗基质的含水量。
本发明所述的功能性复合微生物育苗基质在培育瓜果蔬菜类作物幼苗中的应用。优选的，所述的作物为番茄。
本发明的有益效果：
一方面，本发明功能性复合微生物育苗基质不仅可为植物提供生长的介质和养分，促进植物生长，还具有防控病害的作用，减少植物生长调节剂、化肥以及农药的使用。通过微生物作用增加种子出苗率，改善幼苗生长、生理特性，与常规处理相比，采用功能性复合微生物育苗基质可以培育出更为优质的种苗，增强幼苗的适应性，最大程度的发挥促生类微生物的促生效果，提高作物在育苗基质中的生长活性、对病原菌的抗性，增强其移栽至大田后生长的稳定性，并增加产量。具体表现为：
(1)本发明筛选出的NJHR92+NJQL-A6功能菌组合，在番茄育苗试验中具有相对较好的根际定殖能力，可在番茄根际有效定殖存活，促进番茄生长，并防控番茄枯萎病的爆发。
(2)本发明筛选出的NJHR92+NJQL-A6功能菌组合，具有较高的溶磷含量，且具有高产IAA能力。
(3)功能性复合微生物育苗基质对幼苗出苗率产生显著影响，以番茄为例，不仅提高了出苗速度，显著快于常规对照处理，而且出苗率高达到94％，而菌液灌根处理出苗率仅为85％，常规处理出苗率仅为85％。
(4)采用本发明功能性复合微生物育苗基质培育的番茄幼苗的株高、茎粗、叶龄均显著高于常规处理，且与灌根处理相比，更能显著地增加植物各生长指标。功能基质处理与常规对照相比，番茄的株高、茎粗、叶龄和叶面积生长指标上分别增加50％、28％、56％和53％，而灌根处理比常规处理在此4项生长指标上比常规处理仅仅增加了26％、13％、28％和23％。同时，采用本发明功能性复合微生物育苗基质能够显著提高番茄幼苗的地上部干重、地下部干重、根体积和根系活力。
(5)采用本发明功能性复合微生物育苗基质培育的番茄幼苗在移栽后3天，在株高、茎粗指标上均显著高于常规处理，分别显著增加了35％、23％，在移栽后10天，较常规处理在株高、茎粗上分别增加30％、17％。在移栽后20天，功能性育苗基质的茎粗明显高于常规处理，增强了幼苗的抗倒伏和适应性。
另一方面，功能性复合微生物育苗基质在农业上的运用，符合农业可持续发展的要求，有效利用了固体废弃物，研发出成本低，污染低，出苗整齐的育苗基质，与优良功能菌群有效结合，菌株定殖于育苗基质，研发出功能性复合微生物育苗基质，极大地减少了农用化肥与农药的使用，为生产无公害食品提供了重要保障。
附图说明
图1为NJHR92的系统发育树。
图2为NJHR92、NJQL-A6功能菌组合(NJHR92+NJQL-A6)的生长曲线。
图3为基质含水量对功能性复合微生物育苗基质菌数量的影响。
图4为发酵时间对功能性复合微生物育苗基质菌数量的影响。
图5为接种量对功能性复合微生物育苗基质菌数量的影响。
图6为翻抛时间对功能性复合微生物育苗基质菌数量的影响。
图7为温度对功能性复合微生物育苗基质菌数量的影响。
图8为不同处理下番茄出苗率；其中横坐标9.3表示9月3日。
图9为不同处理移栽后株高变化。
图10为不同处理移栽后茎粗的变化。
生物材料保藏信息
菌株NJHR92，分类命名为球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus)，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6629；
菌株NJQL-A6，分类命名为皮氏罗尔斯通氏菌(Ralstonia pickettii)，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6628。
具体实施方法
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
菌株NJHR92的分离筛选：
土壤样品采自南京麒麟镇后村番茄种植区塑料大棚，采集于青枯病发病地块健康植株根际土，把健康植株连根拔起，轻轻抖动，待大部分土抖落后，剩余紧贴根的土壤连同部分须根作为根际土壤，取1g根际土壤置于装有9mL的无菌水的50mL三角瓶中(含玻璃珠)，170rpm振荡30min，土壤悬液10倍系列稀释后，取108悬浮液涂布于NA培养基平板上，30℃培养48h左右。从NA培养基平板上挑选单菌落，划线于NA培养基平板上进行纯化，获得菌株NJHR92。
NJHR92属于球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus)，球形，好氧，无运动性，菌落在NA培养基上米白色，菌落表面湿润、光滑、不透明，表面有褶皱。NJHR92是有内生芽孢和耐热抗逆的杆状革兰氏阳性细菌G+，对丙酸的趋化性较强，对柠檬酸和富马酸趋化性低。NJHR92能利用的碳源为L-精氨酸、L-天门冬酰胺、瓜氨酸、L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-苹果酸、肌醇、2-酮戊二酸、L-脯氨酸、丙酮酸、乙醇胺、异亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-阿拉伯糖、D-核糖，但是不能利用乙酸、L-丙氨酸、β-丙氨酸、柠檬酸、果糖、半乳糖醛酸、苹果酸、琥珀酸、蔗糖、酒石酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、麦芽糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-甘露醇、肌苷。NJHR92的生长曲线在24h左右达到对数期，耐受酸碱度范围为6～9，对有机溶剂和蛋白酶有耐受性，其具有抗逆、功能性强、易储藏运输、分布广泛和防病稳定性高等特点，可广泛的应用于生防的微生物。
将纯化NJHR92送到测序公司进行16S rRNA基因测序，根据基因测序结果作如图1所示的NJHR92的系统发育树。
菌株NJHR92，分类命名为球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericus)，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6629。
采用点接喷雾发检测根际细菌在NA培养基平板上对青枯病致病致病菌的抑制能力，具体方法如下：用无菌牙签挑取单菌落点接到NA培养基平板上，30℃，培养24h后，用装有青枯病病原菌QL-Rs1115[1]的菌悬液(109cfu/mL)喷瓶喷一次(约0.2mL)，30℃培养48h后测定抑菌圈直径D和菌落直径d。每株菌重复4次，抑菌效果(Inhibition zone,IZ)计算公式：IZ＝D-d。
表1根际细菌对青枯菌QL-Rs1115的平板抑制效果
菌株NJQL-A6为青枯菌同属的细菌皮氏罗尔斯通氏菌(Ralstonia pickettii)，对青枯菌平板抑制作用弱，但在番茄根际和植物内部定殖能力强，能抑制茄科罗尔斯通氏菌对番茄植株的侵染。
实施例2
1.菌株培养方法
菌株NJHR92、NJQL-A6分别采用NA固体培养基划线，30℃培养箱培养48h活化；分别挑取NJHR92、NJQL-A6单菌落于NA液体培养基，30℃、170r·min-1摇床过夜培养，分别得到NJHR92发酵液和NJQL-A6发酵液；分别用生理盐水重悬菌体，4500r·min-1离心5min收集菌体，重复3次以洗涤除去残留的培养基，最后用无菌生理盐水调节得到OD600＝0.5的NJHR92种子液、OD600＝0.5的NJQL-A6种子液。
分别将NJHR92种子液、NJQL-A6种子液及功能菌组合种子液(NJHR92种子液和NJQL-A6种子液按照体积比1:1)以1％的接种量加入含有NA液体培养基的96孔细胞培养板(Costar)，170r·min-1、30℃摇床培养，定时用酶标仪测定菌液的OD600值，检测各功能菌液分别培养至稳定期即可。
功能菌NJQL-A6与功能菌组合NJHR92+NJQL-A6生长曲线相似，NJQL-A6与功能菌组合的对数期生长为4～20h，平稳期维持在20～48h，期间虽有上下浮动，但总体保持平稳，随后为衰亡期。功能菌NJHR92的延滞期相对其他功能菌要长，延滞期时间为0～12h，在12～24h期间为对数增长期，增长迅速，OD值达到所有功能菌株之最高，平稳期维持在20～48h。
2.紫外分光光度计测定细菌产IAA含量
分别将实施例2制得的NJHR92种子液、NJQL-A6种子液及功能菌组合(NJHR92种子液和NJQL-A6种子液按照体积比1:1)以1％接种量接种于landy培养基，22℃、90r·min-1避光培养3d。将摇好的功能菌液分装于2mL离心管，8000r·min-1，离心10min去菌体。取1mL上清液加入2mL比色液中，在暗处反应30min，以landy培养基做空白，OD535比色。其中，Landy培养基：葡萄糖20g(单独配成液体)，L-谷氨酸5g，酵母粉1g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，MnSO4·4H2O 5mg，CuSO4·7H2O 0.16g，FeSO4·7H2O 0.15g，L-苯丙氨酸2mg，L-色氨酸1g，蒸馏水定容至1000mL，pH 7.0。
如表2，NJHR92、NJQL-A6和功能菌组合NJHR92+NJQL-A6均能产生IAA，但是功能菌组合NJHR92+NJQL-A6的IAA含量最高。
3.钼锑抗比色法测定溶磷活性
50mL三角瓶中加10mL NBRIP培养基(解磷培养基)，灭菌，冷却后，将实施例2制得的NJHR92种子液、NJQL-A6种子液及功能菌组合(NJHR92种子液和NJQL-A6种子液按照体积比1:1)以1％的接种量接种于已灭好的三角瓶中，30℃，170r·min-1培养7d，7d后加入钼锑抗显色测定并测定pH。
功能菌均有一定的溶磷能力，功能菌组合NJHR92+NJQL-A6的溶磷含量最高。pH值均在4.4-4.9之间波动，功能菌溶磷能力的差异与其自身pH值的关系不大。
4.紫外分光光度计测定铁载体含量
50mL三角瓶中加5mL MKB(酪蛋白氨基酸5.0g，甘油15mL，KH2PO4 2.5g(单独配成液体)，MgSO4·7H2O2.5g(单独配成液体))，121℃，30min灭菌。加入准备好的功能菌液(OD600为0.5左右)，30℃、170r·min-1培养2d。8000r·min-1离心15min，取2mL上清液加入2mL CAS检测液中，摇匀，1h后OD630比色，并取无菌水作为对照。另取2mL CAS检测液与2mL未接种菌的MKB混匀，得Ar，测定A·Ar-1。功能菌组合NJHR92+NJQL-A6的嗜铁素相对含量最低，其值为0.179。
表2功能菌株促生特性
实施例3菌株在番茄根际的定殖数量考察
根部定殖实验，按照酒糟：牛粪堆肥：蛭石的体积比62:15:20的基质加入组培瓶中，用自来水调整基质含水量为40％、121℃灭菌1h。冷却至室温，随后在超净台中操作试验，每个组培瓶里种植4株经25-28℃催芽处理露白番茄幼苗，3个重复，接入NJHR92+NJQL-A6功能菌组合种子液(同实施例2，NJHR92、NJQL-A6分别在NA液体培养基中过夜培养，离心收集菌体，用无菌生理盐水制成菌悬液，调节OD600＝0.5，分别得到NJHR92种子液、NJQL-A6种子液，两者按照体积比1:1混合)，接种量为10％。置于光照培养箱，30℃、16h光照，8h黑暗，培养8d，待两叶一心时进行间苗，留下生长茎粗壮、叶色浓绿的健壮幼苗，每个组培瓶里留两株苗。无菌条件下，称取1g附有基质的根，置于9mL无菌水中，涡旋1min，170r·min-1震荡30min，进行系列梯度稀释，涂于NA固体培养基，30℃培养48h，计数。功能菌组合NJHR92+NJQL-A6在番茄根际定殖的数量最多，其总数量达到5.23×108(CFU g-1DW)，而单独接种NJHR92或NJQL-A6在番茄根际定殖能力相对较低，其数量级均保持在107(CFUg-1DW)。
实施例4功能性复合微生物育苗基质发酵参数优化
菌株种子液的制备同实施例2，得到OD600＝0.5的NJHR92种子液和OD600＝0.5的NJQL-A6种子液按照体积比1:1混合的功能菌组合。
以酒糟：牛粪堆肥：蛭石体积比为65:15:20为基质材料，用氨基酸叶面肥(江阴市联业生物科技有限公司)调节使每个处理的pH为6.0。通过测定基质在不同发酵时间(1d、3d、5d、7d、9d)、功能菌组合初始接种量(1％、2.5％、5％、10％、15％)、含水量(30、40、50、60％、70％)、翻抛频率(1次/8h、1次/12h、1次/24h、1次/36h、1次/48h)、发酵温度(25℃、30℃、35℃、40℃、45℃)，共5个因素进行研究。
在考察其中的一个因素时，其它的四个因素是不变的，进行比较确定考察的因素条件下的最佳处理。(1)考察基质含水量时，发酵时间为5d，初始接种量10％，翻抛频率为12h，发酵温度30℃；在样品发酵后，称取处理后的基质样品10g，加入提前灭菌处理、内有玻璃珠的三角瓶，加入无菌水90mL，30℃170r·min-1振荡30min，进行系列梯度稀释(每次稀释10倍)、涂布在NA固体培养基上，30℃培养箱培养2天，计数。根据功能菌在基质中存活数量的影响，探索功能菌组合在育苗基质中发酵培养的最优发酵参数。由图3可知，基质的含水量在50-60％之间对功能菌在基质中存活数量没有显著影响，因此在考察发酵时间、接种量、翻抛频率和发酵温度时，可以调节基质的含水量在50-60％之间；(2)在考察发酵时间时，初始接种量为10％，含水量控制在50-60％，翻抛频率为12h一次，发酵温度控制在30℃；(3)在考察接种量时，发酵时间为5d，翻抛频率为12h一次，含水量控制在50-60％，发酵温度为30℃；(4)在考察翻抛频率时，发酵时间为5d，初始接种量10％，含水量控制在50-60％，发酵温度为30℃；(5)考察发酵温度时，发酵时间为5d，初始接种量10％，含水量50-60％，翻抛频率为12h。
由图3-图7可知，较佳工艺条件为：发酵周期为5d，接种量为5-15％，育苗基质的含水量为50-65％，发酵温度为25-35℃，翻抛时间间隔为12-24h。最佳工艺条件为：发酵周期5d，初始接种量10％，基质的含水量为50-60％，翻抛时间间隔为24h左右，培养温度为30℃。功能菌组合NJHR92+NJQL-A6在基质二次发酵过程中，数量最多，为9.24(Log10CFU g-1DW)。
实施例5
进行番茄育苗盆栽试验，研究对番茄幼苗的影响。
选择功能菌组合NJHR92+NJQL-A6：实施例2制得的OD600＝0.5的NJHR92种子液和OD600＝0.5的NJQL-A6种子液按照体积比1:1混合。
供试基质：酒糟(江阴市联业生物科技有限公司)、牛粪堆肥(江阴市联业生物科技有限公司)和蛭石按照体积比62:15:20制成的育苗基质。
番茄品种：合作903。
实验设置3个处理，具体如下：
处理1(功能性复合微生物育苗基质处理)：称取育苗基质，置于灭菌锅内，121℃、30min间歇灭菌两次，调节含水量为60％，氨基酸叶面肥(江阴市联业生物科技有限公司)调节基质的pH为6；按照10％的接种量接种功能菌组合NJHR92+NJQL-A6处理，置于周装箱，进行固体二次发酵，置于温度为30-35℃的培养箱，发酵过程中每24h翻抛一次，发酵5d，获得功能性复合微生物育苗基质。番茄种子催芽两天，种子露白率达到90％以上，选取露白长度一致的种子播种于装有功能性复合微生物育苗基质的50孔育苗盘。
处理2(灌根处理)：称取育苗基质，121℃、30min间歇灭菌两次，调节含水量为60％，氨基酸叶面肥调节基质的pH为6；加入与处理1功能菌组合等量的无菌水，二次发酵条件同处理1。番茄种子催芽两天，种子露白率达到90％以上，选取露白长度一致的种子播种于装有处理上述基质的50孔育苗盘，待出苗一致后以10％的接种量灌根法接种功能菌组合NJHR92+NJQL-A6。
CK(常规对照处理)：称取育苗基质，121℃，30min间歇灭菌两次，调节含水量为60％，氨基酸叶面肥调节基质的pH为6；加入与处理1功能菌组合等量的无菌水，不发酵。番茄种子催芽两天，种子露白率达到90％以上，选取露白长度一致的种子播种于装有上述基质的50孔育苗盘。
30天后测定其农艺性状：苗高、茎粗、叶片数，地上部鲜重及干重，地下部鲜重及干重，根体积，根系活力。钢卷尺测量苗高(精确到1mm)，游标卡尺测量茎粗(精确到0.1mm)；鲜重测定：采样后，用自来水将植物根清理干净，擦干称其鲜重；干重测定：将称好鲜重的植物装入信封中，105℃杀青30min，随后75℃烘干至恒重，称其重量。幼苗根系活力的测定采用TTC法；根系形态特征釆用根系扫描分析仪(Epson Perfection V700)进行测定，经专用数字化软件(WinRhizo Pro 2008a)分析根系根体积。
表3不同处理对番茄幼苗生长影响
表4不同处理对番茄幼苗生理指标的影响
如图8所示，功能性复合微生物育苗基质处理的出苗速度快于常规对照处理，出苗率达94％，灌根处理的出苗率为85％，常规对照处理出苗率为85％，表明功能性复合微生物育苗基质处理的出苗率显著高于另外2个处理。
由表3可知，功能性复合微生物育苗基质处理的番茄的株高、茎粗、叶龄和叶面积生长指标上较常规处理分别增加50％、28％、56％和53％，而灌根处理比常规处理在此4项生长指标上比常规处理增加26％、13％、28％和23％。由表4可知，功能性复合微生物育苗基质处理的番茄地上部干重、地下部干重、根系活力分别是13.70g、1.49g、227.53mg·g-1·h-1，均显著高于灌根处理(其值分别是11g、1.29g、190.37mg·g-1·h-1)。且灌根处理与常规对照处理相比在地上部干重和根系活力上的差异并不显著。可见，功能性复合微生物育苗基质处理的番茄的株高、茎粗、叶龄、地上部干重、地下部干重和根系活力均显著高于常规处理。
功能性复合微生物育苗基质、灌根处理以及常规对照处理培育番茄幼苗移栽后生长状况如图9、图10所示，移栽后3天，功能性复合微生物育苗基质处理的番茄幼苗，在株高、茎粗指标上均显著高于常规对照处理，分别显著增加了35％、23％，而灌根处理的茎粗与常规对照处理的差异不显著。在移栽后10天，功能性复合微生物育苗基质处理的株高、茎粗上比常规对照处理分别增加30％、17％。在移栽后20天，功能性复合微生物育苗基质处理与常规对照处理和灌根处理间在株高上没有显著差异，但是功能性育苗基质的茎粗明显高于常规对照处理，增强了番茄幼苗的抗倒伏和适应性。
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Claims (9)

1.一种功能性复合微生物育苗基质，其特征在于该功能性复合微生物育苗基质是在以酒槽、牛粪堆肥、蛭石为原料组成的育苗基质中接种微生物NJHR92和NJQL-A6后经发酵制成。
2.根据权利要求1所述的功能性复合微生物育苗基质，其特征在于菌株NJHR92，分类命名为球形赖氨酸芽孢杆菌Lysinibacillus sphaericus，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6629；
菌株NJQL-A6，分类命名为皮氏罗尔斯通氏菌Ralstonia pickettii，2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，菌种保藏号为CGMCC No.6628。
3.权利要求1所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤(1)、菌株NJHR92、NJQL-A6分别采用NA固体培养基活化；挑取NJHR92单菌落于NA液体培养基，28-32℃、170-200r·min-1摇床过夜培养，得到NJHR92发酵液，生理盐水洗涤除去培养基，用无菌生理盐水调节得到OD600＝0.3～0.6的NJHR92种子液；挑取NJQL-A6单菌落于液体NA培养基，28-32℃、170-200r·min-1摇床过夜培养，得到NJQL-A6发酵液，生理盐水洗涤除去培养基，用无菌生理盐水调节得到OD600＝0.3～0.6的NJQL-A6种子液；
步骤(2)、将酒糟、牛粪堆肥和蛭石制成育苗基质，采用氨基酸叶面肥调节基质的pH为5.5-7.5；将NJHR92种子液和NJQL-A6种子液混合得到混合种子液，以5-15％的接种量接种到育苗基质中进行二次发酵，二次发酵条件为：维持育苗基质的含水量为50-65％，发酵温度为25-35℃，每隔12-24h翻抛一次，发酵周期为5d，获得功能性复合微生物育苗基质。
4.根据权利要求3所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，其特征在于步骤(2)中，将酒糟、牛粪堆肥和蛭石按照体积比60～65:10～20:15～25制成育苗基质。
5.根据权利要求3所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述的育苗基质121℃、30min间歇灭菌两次。
6.根据权利要求3所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述的NJHR92种子液和NJQL-A6种子液的体积比为1:1。
7.根据权利要求3所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述的混合种子液的接种量为10％。
8.根据权利要求3所述的功能性复合微生物育苗基质的制备方法，其特征在于步骤(2)中，所述的二次发酵条件为：维持育苗基质的含水量为50-60％，发酵温度为30℃，每隔12-24h翻抛一次，发酵周期为5d。
9.权利要求1所述的功能性复合微生物育苗基质在培育瓜果蔬菜类作物幼苗中的应用。
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