CN108653340A - 一种鸡营分证模型的构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中兽医技术领域，特别涉及一种鸡营分证模型的构建方法。该鸡营分证模型的构建方法包括以30‑60日龄SPF雏鸡为试验动物，采用禽源大肠杆菌强毒株胸部肌肉注射进行感染。该鸡营分证模型的构建方法创造性的采用禽源大肠杆菌强毒株以肌肉注射的方式，可使病邪迅速传入营分，构建简单，易操作，临床症状明显，稳定可靠，适合于中兽医鸡营分证的中药防治研究。

Description

一种鸡营分证模型的构建方法

技术领域

本发明涉及中兽医技术领域，特别涉及一种鸡营分证模型的构建方法。

背景技术

中草药是我国传统医学的一大宝库，具有功能作用广泛、毒副作用少、不易产生耐药性以及资源广、成本低廉、效果持久等特点，是我国传统医学文化遗产的瑰宝，蕴藏着不可估量的医学潜力。

家禽养殖中，抗生素的大量使用，一方面导致了严重的细菌耐药性、直接影响家禽疾病的防治，另一方面造成抗生素残留、进而影响人类健康。中药具有平衡阴阳、祛邪扶正、标本兼治的特点，中兽药的天然性、无残留性和无抗药性是化学西药所无法比拟的，研发新型中兽药已成为保障绿色健康养殖的必然趋势。在中兽药的新药研发过程中，只有构建出稳定、科学的中兽医证候模型，才能通过临床试验对中兽药的药效做出客观的评价。但目前尚缺乏稳定科学的中兽医证候模型构建方法，已成为制约中兽药研发的瓶颈。

温病是由温邪引起的以发热为主症，是具有热象偏重、易化燥伤阴等特点的一类外感急性热病，中医理论认为现代医学中的病毒、细菌性传染病大多属中医温病范畴，采用中医药治疗具有一定的优势。卫分证、气分证、营分证、血分证是对温病四类证候的概括，同时又代表着温热病发展过程中由浅入深，由轻转重的四个阶段。具体来说，温热病邪首先犯卫，邪在卫分不解，则内传于气分，气分病邪不解，则入营分，邪在营分不解，则入血分。如此病邪步步深入，病情逐渐加重。营分证为温热病邪入血的轻浅阶段，以营阴受损、心神被扰为其特点，证见高热，舌质红绛，斑疹隐隐，神昏或躁动不安。临床上许多家禽传染病典型病症期均表现为营分证，因此针对营分证开展中兽药新制剂研制具有重要意义。同样，中兽药研制所需要的稳定的家禽营分证发病模型，目前尚未有一种有效的感染途径或感染方法能够进行构建。

发明内容

本发明提供了一种鸡营分证模型的构建方法，解决了现有技术中存在的问题。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：

一种鸡营分证发病模型的构建方法，包括对发病鸡按照以下标准进行挑选：(1)具有羽毛逆立、缩头闭眼、食欲不振等精神萎顿症状，此为发热、营热阴伤、扰及心神的表现；(2)测定体温，高于正常体温1℃以上，此为身热的体现；(3)剖检具有心包积液或心、肝、气囊表面覆盖纤维素性渗出物的病变，为劫灼营阴的表现；(4)鸡冠发绀，皮肤、可视粘膜、肌肉、内脏器官充血或有出血斑点，为热窜血络、斑疹隐隐的表现；以30-60日龄SPF雏鸡为试验动物，采用禽源大肠杆菌强毒株胸部肌肉注射进行感染。

所述禽源大肠杆菌强毒株为禽源大肠杆菌C84008株。

攻毒剂量为：取禽源大肠杆菌强毒株C84008株18-24h新鲜培养物，每只鸡肌注0.2-0.5mL(含菌量为3.0×10⁹/mL)。

攻毒剂量为：取禽源大肠杆菌强毒株C84008株20-22h新鲜培养物，每只鸡肌注0.3mL(含菌量为3.0×10⁹/mL)。

本发明的有益效果：

中兽医中所指的证，即证候，是指机体在疾病发展过程中某一阶段，多方面病理特性的概括，其病理特性包括疾病的起因、病变的部位、性质、程度、正邪之间的关系及疾病可能发展的趋势等，反映着疾病发展过程中某一阶段病理变化的本质。中医的“证”与“症”、“病”有着本质的区别。辨证论治是中兽医临床诊治的基本原则，构建出科学的符合中兽医理论的证候模型，才能对中兽药临床效果做出准确评价,但中医理论与西医有着很大的差异，因此构建符合中医理论的证候模型一直是中药研发中的难点。营分证是指温邪深入营分、劫灼营阴、扰神窜络而出现的证候类型，

本发明鸡营分证模型的构建方法，创造性的采用禽源大肠杆菌强毒株以肌肉注射的方式，可使病邪迅速传入营分，避免了自然感染或点眼、滴鼻感染状态下，病鸡先表现为卫分证，再逐次出现气分证、营分证的一般传变规律，使营分证的构建简单、易操作；同时通过对病症标准的制定，所选取的病鸡符合营分证温邪深入营分、劫灼营阴、扰神窜络的证候特点，所构建的营分证模型科学准确，临床症状明显，稳定可靠，适合于中兽医鸡营分证的中药防治研究。

具体实施方式

为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本发明进行详细阐述。

实施例1：

1材料与方法：

1.1禽源大肠杆菌强毒株：E.coli c84008株，取保存的菌种0.2mL，接种于50mL营养肉汤中，37℃摇床培养22h，测定菌液浓度达3×10⁹/mL。

1.2试验鸡：60日龄SPF雏鸡；数量100只。

1.3感染途径及剂量：每只鸡胸部肌肉注射大肠杆菌新鲜肉汤培养物0.5mL。

1.4攻毒后，每天观察发病情况。

1.5判断标准挑选出同时具有以下发病特征的病鸡，可判定为病鸡表现为营分证：(1)具有明显的羽毛逆立、缩头闭眼、食欲不振等精神萎顿症状；(2)用体温计对每只鸡进行体温测定，体温应比正常鸡高出1℃以上；(3)挑取几只症状典型的鸡，剖检，具有心包积液或心、肝、气囊表面覆盖纤维素性渗出物的病理变化；(4)鸡冠发绀，皮肤、粘膜具有充血现象，随机挑选发病鸡剖检时，肌肉、内脏器官充血或有出血斑点。

2结果：

人工感染大肠杆菌12h后，感染鸡开始出现发病症状，高热，体温测定平均达43.1℃，病鸡精神萎靡，食欲减退，羽毛蓬乱，闭目嗜睡。随着病程的发展，病鸡精神更加沉郁，个别鸡尖叫不安，有的昏睡、卧地不起，有的排灰白或黄绿色稀粪。鸡冠、肉髯发绀，皮肤、肌肉淤血，呈紫黑色。心包和体腔内渗出液蓄积，最后渗出液逐渐变成黄白色干酪样物质，附着在心包、肝脏、气囊表面，形成纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎。脾、肺、肠粘膜等脏器有出血斑点。死亡数量0只。

3结论：营分证为温热病邪入血的轻浅阶段，以营阴受损、心神被扰为其特点，证见高热，舌质红绛，斑疹隐隐，神昏或躁动不安。按中医论述，精神萎靡、食欲减退、闭目嗜睡是高热的表现；鸡冠、肉髯发绀则是粘膜红绛的表现(在禽病诊断中舌质红绛难以观察，可通过冠、肉髯等可视粘膜红绛色替代辨别)；皮肤、肌肉淤血，呈紫黑色，内脏器官充血、出血，则是热窜血络、斑疹隐隐之表现；有的病鸡昏睡、卧地不起，个别鸡尖叫不安，则是神昏或躁动不安的表现。心包、肝等内脏器官大量津液渗出形成干酪样物质则为热灼营阴所致；拉绿色稀粪说明热结肠道。所有这些符合中兽医营分证特点。基于上述辨证基础，说明本方法成功构建出了鸡营分证模型。

实施例2：

1材料与方法：

1.1禽源大肠杆菌强毒株：E.coli c84008株，于营养肉汤中，37℃摇床培养24h，测定菌液浓度达3×10⁹/mL。

1.2试验鸡：40日龄SPF雏鸡；数量200只。

1.3感染途径及剂量：每只鸡胸部肌肉注射大肠杆菌新鲜肉汤培养物0.3mL。

1.4攻毒后，每天观察发病情况。

1.5判断标准：同实施例1。

2结果：

人工感染大肠杆菌24h后，感染鸡发病症状明显，出现精神萎靡、食欲减退、闭目嗜睡的高热症状；具有鸡冠、肉髯发绀的粘膜红绛表现；皮肤、肌肉淤血，呈紫黑色，内脏器官充血、出血，表现出斑疹隐隐的特点；有的病鸡昏睡、卧地不起，个别鸡尖叫不安，表现为神昏或躁动不安的症状。心包、肝等内脏器官大量津液渗出，并进一步形成干酪样物质附着，出现热灼营阴的病证。死亡5只。

3结论：病鸡表现出了明显的高热，舌质红绛，斑疹隐隐，神昏或躁动不安等营分证特征，说明营分证构建成功。

实施例3：

1材料与方法：

1.1禽源大肠杆菌强毒株：E.coli c84008株，于营养肉汤中，37℃摇床培养18h。

1.2试验鸡：35日龄SPF公雏鸡；数量150只。

1.3感染途径及剂量：每只鸡胸部肌肉注射大肠杆菌新鲜肉汤培养物0.2mL。

1.4攻毒后，每天观察发病情况。

1.5判断标准：同实施例1。

2结果：

试验鸡群表现出了与实施例1相同的症状及病变，符合营分证的发病特点，表明鸡营分证构建成功。死亡数量6只。

本发明上述鸡营分证发病模型的构建方法构建出的发病模型成功率高，达96％以上，稳定性高，为后续中药新药研发提供了坚实的基础。

上述E.coli c84008株为标准菌株，市面可获得。

上述具体实施方式不能作为对本发明保护范围的限制，对于本技术领域的技术人员来说，对本发明实施方式所做出的任何替代改进或变换均落在本发明的保护范围内。

本发明未详述之处，均为本技术领域技术人员的公知技术。

Claims (4)

1.一种鸡营分证发病模型的构建方法，包括对发病鸡按照以下标准进行挑选：(1)具有羽毛逆立、缩头闭眼、食欲不振等精神萎顿症状，此为发热、营热阴伤、扰及心神的表现；(2)测定体温，高于正常体温1℃以上，此为身热的体现；(3)剖检具有心包积液或心、肝、气囊表面覆盖纤维素性渗出物的病变，为劫灼营阴的表现；(4)鸡冠发绀，皮肤、可视粘膜、肌肉、内脏器官充血或有出血斑点，为热窜血络、斑疹隐隐的表现；其特征在于：以30-60日龄SPF雏鸡为试验动物，采用禽源大肠杆菌强毒株胸部肌肉注射进行感染。

2.如权利要求1所述的一种鸡营分证模型的构建方法，其特征在于：所述禽源大肠杆菌强毒株为禽源大肠杆菌C84008株。

3.如权利要求2所述的一种鸡营分证模型的构建方法，其特征在于：攻毒剂量为：取禽源大肠杆菌强毒株C84008株18-24h新鲜培养物，每只鸡肌注0.2-0.5mL(含菌量为3.0×10⁹/mL)。

4.如权利要求3所述的一种鸡营分证模型的构建方法，其特征在于：攻毒剂量为：取禽源大肠杆菌强毒株C84008株20-22h新鲜培养物，每只鸡肌注0.3mL(含菌量为3.0×10⁹/mL)。