CN108651522A - 一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用。本发明利用溶藻弧菌噬菌体Vp670和海藻糖等辅剂，开发相应的噬菌体制剂，该噬菌体制剂施用后，会长期持续存在于水体环境中，保持致病的宿主菌与噬菌体数量的平衡，因此，与抗生素相比效果持久、使用量小。本发明的噬菌体Vp670制剂没有毒副作用，是一种新型绿色的生物消毒制剂，可用于海水养殖动物溶藻弧菌感染防控，促进水产养殖业的健康发展。

Description

一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及水产养殖技术领域，具体涉及一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用。
背景技术
细菌性疾病一直困扰着水产养殖业的发展，其中由致病溶藻弧菌爆发引起的流行性疾病对水产养殖业造成巨大经济损失。治疗溶藻弧菌和其他致病菌的常用方法是使用各种抗生素，但在水产养殖中使用抗生素不仅引起食品安全问题，也会引起一系列环境生态问题，包括海洋环境中大量耐药菌的出现以及耐药基因的传播。据统计从海水中分离的大约90％的细菌具有至少一种抗生素抗性，而且大约20％的细菌对于至少5种抗生素具有抗性。因此，急需研制新型抗菌制剂来解决上述问题。
噬菌体是一类以细菌为宿主的病毒，又称细菌病毒，广泛存在于自然界中，它分为烈性噬菌体以及温和噬菌体。烈性噬菌体可在敏感宿主菌内增殖，并使之裂解，也称毒性噬菌体。温和噬菌体基因组整合于宿主菌基因组中，成为细菌DNA的一部分，和宿主核酸同步复制，宿主细胞不裂解而继续生长。其中，由于烈性噬菌体具有天然的裂菌特性且具有专一性，被认为是一种安全、非常有潜力的生物杀菌剂，近几年由于超级耐药菌的出现以及抗生素的副作用报道增多，噬菌体的研究再次受到重视。
噬菌体的专一性和其快速增殖的特点促使其成为治疗细菌性疾病的有力工具。首先，噬菌体的治疗具有特异性，可以针对某一特定有害细菌菌株有选择性的杀灭，从而使生物体内或其生活环境的正常菌群平衡受到最小程度的影响，相比抗生素，其对环境毒副作用小，也保证了食品安全；其次，噬菌体可以随宿主菌的增殖而增殖，并在细菌感染的整个过程中发挥作用，而不像抗生素那样随时间的推移疗效逐渐降低；第三，噬菌体制剂获取方便，价格低廉。目前噬菌体制剂已经受到许多生物技术公司的重视，国外已经有噬菌体药物出现，但噬菌体制剂在水产养殖中的应用还在起步阶段，市场中并未见有水产噬菌体制剂开发，因此噬菌体制剂的应用具有很大的发展潜力。
前期工作中，我们已经获得到了噬菌体Vp670，又名ΦPE333，但并未进行感染能力研究和制剂开发，也未指出其应用途径。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种溶藻弧菌噬菌体制剂、制备方法及其应用，该噬菌体制剂具有专一裂解溶藻弧菌的特性，能够特异高效杀灭养殖水体和养殖动物体内的溶藻弧菌，从而起到防治水产动物的作用，不破坏水环境中的其他菌群，不会对养殖动物以及消费者产生任何影响，且能够长期存在水体环境中，保持致病宿主菌与噬菌体数量的平衡。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种溶藻弧菌噬菌体制剂，包括噬菌体Vp670和辅剂，所述辅剂包括海藻糖
上述技术方案中的制剂以噬菌体Vp670作为裂解溶藻弧菌的有效成分，具有专一裂解溶藻弧菌的特性，不破坏水环境中的其他菌群，不会对养殖动物以及消费者产生任何影响，且能够长期存在水体环境中，保持致病宿主菌与噬菌体数量的平衡。
本发明还提供了一种上述溶藻弧菌噬菌体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将溶藻弧菌菌液与噬菌体Vp670培养液混合，形成混合培养液，摇动培养4～6h；
(2)在步骤(1)中的混合培养液加入氯仿，氯仿与混合培养液的体积比为0.05％～0.1％，摇动培养10～15min后；
(3)过滤培养液；
(4)在步骤(3)的滤液中加入海藻糖，充分混匀，海藻糖与滤液的质量比为0.2％～0.4％，得到所述的噬菌体制剂。
发明人经过反复试验，优化调整溶藻弧菌噬菌体制剂的制备工艺的各项参数，制备得到对溶藻弧菌具有很强的裂解性的噬菌体制剂。
作为本发明所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，包括以下步骤：
1)采用LB培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，将过夜培养的溶藻弧菌E06333按1％的体积比例接种至新的LB培养基中，培养至OD600nm为0.4，获得溶藻弧菌液；
2)取溶藻弧菌液和噬菌体Vp670种子液按24:1的体积比混匀，30℃摇床培养3小时，离心后取上清，获得噬菌体Vp670一级培养液；
3)将噬菌体Vp670一级培养液按1％的体积比与溶藻弧菌液混匀，30℃摇床培养3小时，获得噬菌体Vp670二级培养液；
4)以VAM培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，培养温度30℃；
5)将步骤4)的溶藻弧菌E06333培养液按1％的体积比加入到新的VAM培养基中，30℃培养至OD600nm为0.4～0.6；
6)将噬菌体Vp670二级培养液按2％～5％的体积比加入到步骤5)的溶藻弧菌E06333培养液中，30℃摇动培养3～5小时，得到混合培养液。
作为本发明所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法的优选实施方式，所述步骤(4)中，海藻糖与滤液的质量比为0.3％。
本发明还提供了上述的溶藻弧菌噬菌体制剂在水产养殖中裂解溶藻弧菌的应用。
本发明的溶藻弧菌噬菌体制剂以噬菌体Vp670作为主要成分，高效裂解溶藻弧菌，能够用于防治水产养殖中由溶藻弧菌引起的感染和污染。
作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述应用包括用于水体除菌、用于养殖动物体表除菌中的至少一种。
作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述应用包括用于水体除菌，按每亩5～10公斤的比例加入噬菌体Vp670制剂，每半月施用一次。
作为本发明所述的应用的优选实施方式，所述应用包括用于养殖动物体表除菌，将养殖动物集中于小水体中，按1％～2％的体积比例加入噬菌体Vp670制剂，浸泡30min。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明噬菌体Vp670制剂具有专一裂解溶藻弧菌的特性，不破坏水环境中的其他菌群，不会对养殖动物以及消费者产生任何影响；而抗生素在杀灭细菌的同时也会破坏其他浮游生物，引起药物残留以及食品安全等问题；
2、本发明的噬菌体Vp670制剂施用后，能够长期持续存在于水体环境中，保持致病的宿主菌与噬菌体数量的平衡，与抗生素相比，效果持久、使用量小；
3、因为成本和药物残留等问题，抗生素药物不可能用于大面积水体的抑菌，但噬菌体Vp670制剂可以在大面积水体使用；
4、本发明的噬菌体Vp670制剂获取方便，生产过程环境无污染，价格低廉。
附图说明
图1为纯化后Vp670噬菌斑图。
图2为本发明的噬菌体制剂感染溶藻弧菌E06333效果及噬菌体制剂中的噬菌体观察图。其中：A，正常的未感染的溶藻弧菌E06333细胞；B，感染后的溶藻弧菌E06333细胞，箭头所示为大量的病毒粒子。
图3为基于DNA聚合酶的噬菌体Vp670种系发生分析图。箭头所指为噬菌体Vp670的位置。
图4为溶藻弧菌噬菌体Vp670的一步生长曲线图。
图5为溶藻弧菌噬菌体Vp670的吸附速率图。
图6为本发明的噬菌体制剂用于养殖水体中溶藻弧菌生物控制后水体中细菌数量计数。其中：CP1，对照组水体中TCBS平板显示黄色菌的数量；EP1，实验组水体中TCBS平板显示黄色菌的数量；CP2，对照组水体中溶藻弧菌的数量；EP2，实验组水体中溶藻弧菌的数量。
图7为本发明的噬菌体制剂用于养殖动物体表除菌效果评价图。其中：CX1，对照组鱼苗体表粘液中用TCBS平板显示黄色菌的含量；EX1，实验组鱼苗体表粘液中用TCBS平板显示黄色菌的含量；CX2，对照组鱼苗体表粘液中溶藻弧菌的数量；EX2，实验组鱼苗体表粘液中溶藻弧菌的数量。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明中采用的噬菌体Vp670保存在在中国科学院南海海洋研究所应用海洋生物学实验室，声明自申请日起二十年内可向公众发放用于验证试验。该噬菌体的基因组提取方法以及溶藻弧菌E06333来源已经在文献(Peng Luo,Qiuting Liu,Yiqin Deng,YushunTian,Long Yun,Chaoqun Hu.Strand-specific RNA-Seq analysis provides firstinsight into transcriptome response of Vibrio alginolyticus to phageinfection[J].Marine Genomics,2017.；刘秋婷,田雨顺,云龙,罗鹏,胡超群.噬菌体基因组DNA快速提取方法.热带生物学报，2017,8(2):232-235。)中公开。
本发明选用LB培养基进行宿主溶藻弧菌一级培养以及噬菌体Vp670增殖。
VAM培养基配方：蛋白胨3～6g、酵母提取物3～6g、蔗糖5～15g、NaCl5～15g、自来水1000mL，调节pH至7.0。
LB培养基配方：950mL去离子水中加入：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g，摇动容器直至溶质溶解，调pH至7.0，用去离子水定容至1L。
LB培养基及VAM培养基采用常规液体灭菌方法灭菌。
实施例1噬菌体的分离、纯化制备噬菌体
(1)海水处理以及噬菌体富集
以溶藻弧菌E06333培养过夜后作为噬菌体分离的宿主菌。海水水样经10000rpm离心10min后，取其上清液经0.45μm滤膜过滤后保留滤液。过滤液以1:1的体积比加入2×LB培养基中，再以1％的体积比例加入过夜培养的E06333菌液，于30℃培养12h，离心后，将其上清液经0.22μm滤膜过滤后，得到噬菌体富集液。
(2)噬菌体纯化
采用双层平板法，用灭菌后的SM缓冲液(0.05M Tris-HCl，pH 7.5)对噬菌体富集液进行梯度稀释，将100μL指数期的溶藻弧菌E06333与100μL的噬菌体梯度稀释液混合后加入42℃预热的5mL的LB半固体培养基(琼脂0.7％)中混匀，迅速倒入已制好的底层LB琼脂(琼脂1.5％)平板上，制成双层平板。待其凝固后，放入30℃恒温培养箱中倒置培养。
用移液枪枪头将上述双层平板中出现的大噬菌斑挑出，充分捣碎，并经SM缓冲液梯度稀释，取稀释液与溶藻弧菌E06333按体积等比例混合，同上述方法进行双层平板的制作和培养；重复此操作四次，直至出现的噬菌斑形态、大小完全一致，即可得到已纯化的单一溶藻弧菌噬菌体，结果如图1所示。
用移液枪枪头将上述双层平板中出现的大噬菌斑挑出，充分捣碎，加入LB培养基1mL，按1％的体积比例加入到新的溶藻弧菌E06333培养液中，直至OD600nm＝0.4。培养4～6小时，离心，取上清，4℃保存，即为溶藻弧菌噬菌体Vp670保存液。
实施例2溶藻弧菌噬菌体Vp670的电镜检测
将上述实施例1中的溶藻弧菌E06333培养液、噬菌体Vp670保存液分别滴在铜网上，自然沉淀2～3min。用滤纸从侧面吸去多余的液体。之后用2％的磷钨酸染色10min。然后用滤纸从侧面吸去多余的染液并于室温下风干。采用Hitachi透射电镜观察并记录溶藻弧菌以及噬菌体Vp670的形态。
电镜观察结果如图2所示，可见正常的宿主菌细胞结构完整，细胞内部质地均匀，受噬菌体Vp670感染的溶藻弧菌宿主菌细胞外膜层消失，内部出现大片浅色区域，并充满病毒粒子。对噬菌体病毒粒子的观察发现，该噬菌体含有异二十面体的头部和一条短而非收缩性的尾，应属短尾病毒科。
实施例3溶藻弧菌噬菌体Vp670分子鉴定
根据噬菌体Vp670基因组序列(GenBank:KY290756.1)，查找出其DNA聚合酶(DNAP)序列，以DNAP以及相近噬菌体的DNAP序列进行种系发生树的构建，建树工具MEGA 6.0。种系发生树见图3。由图3可见，Vp670与多株不同来源的短尾噬菌体科噬菌体聚为一枝，该分枝明显区别与其它噬菌体科形成的分枝，因此结合电子显微镜形态观察，判定噬菌体Vp670属于短尾噬菌体科的种类。
实施例4溶藻弧菌噬菌体效价检测
(1)溶藻弧菌噬菌体Vp670一步生长曲线
采用一步生长曲线法检测溶藻弧菌噬菌体Vp670效价。将过夜培养的溶藻弧菌E06333以1％的体积比例接种至新鲜的LB培养基中，于30℃恒温培养箱中培养直至OD600nm＝1.0。此时，取500μL培养液与实施例1中的溶藻弧菌噬菌体Vp670保存液等体积混匀，然后于室温下静止10min以确保噬菌体均已吸附至宿主细菌表面。之后样品于4℃，8,000g离心2min，弃上清，以除去上清中游离的噬菌体，所得沉淀用LB重悬并稀释至10-4倍。将所得的稀释液于30℃连续培养，之后在最初1小时内每隔5min取样，之后的11小时每隔60min取样。将样品进行梯度稀释并利用上述双层平板法检测噬菌体效价。
结果如图4所示，Vp670潜伏期长为120min，在这段时间里噬菌体Vp670效价增长缓慢。之后噬菌体形成单位的数值经历了一个快速的增长，持续时间为280min。噬菌体Vp670的裂解量为104个/细胞。表明Vp670感染后潜伏期短，裂解后产生的后代病毒粒子数量巨大，因此具有作为噬菌体制剂的潜力。
(2)溶藻弧菌噬菌体Vp670吸附率
将过夜培养的溶藻弧菌E06333按1％的体积比例接种至新鲜的LB培养基中直至OD600nm＝1.0。各取500μL的溶藻弧菌和实施例1中的溶藻弧菌噬菌体Vp670保存液等体积混匀，后加入19mL的LB培养基并将此时记为取样的起始点。之后的10min内每隔2min取样一次。每次取样后立刻8000rpm离心2min，以去除含有游离噬菌体的上清并对沉淀进行重悬，并梯度稀释，通过上述双层平板法测量效价。结果如图5所示，在实验测量期10分钟内，自起始点后的两分钟内吸附到宿主菌上的噬菌体占总量的3％。六分钟过去后，噬菌体的吸附量达到50％。这一结果说明噬菌体Vp670具有较高的吸附效率，具有作为噬菌体制剂的潜力。
实施例5溶藻弧菌噬菌体一级培养液制备
采用LB培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，将过夜培养的溶藻弧菌E06333按1％的体积比例接种至新鲜的LB培养基中，培养直至OD600nm＝0.4；各取9.6mL的溶藻弧菌和-80℃保存的噬菌体Vp670种子液400μL混匀，30℃摇床培养3小时；8000g，离心5min，取上清，即为噬菌体一级培养液。
实施例6溶藻弧菌噬菌体二级培养液制备
采用LB培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，将过夜培养的溶藻弧菌E06333按1％的体积比例接种至新鲜的LB培养基中，培养直至OD600nm＝0.4。取将上述实施例中5中的一级培养液10mL，按1％的体积比例加入到1L的溶藻弧菌E06333新鲜培养液中，混匀，30℃摇床培养3小时；8000g，离心5min，取上清，即为噬菌体二级培养液。
实施例7溶藻弧菌噬菌体Vp670制剂
作为本发明所述溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法的一种实施例，本实施例所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法包括以下步骤：
(1)以VAM培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，培养温度30℃；
(2)次日将步骤(1)的溶藻弧菌E06333培养液按1％(V/V)体积比例加入到新鲜VAM培养基中，30℃培养至OD600nm为0.4；
(3)将实施例6中的溶藻弧菌噬菌体Vp670二级培养液按2％(V/V)的体积比例加入到步骤(2)的溶藻弧菌E06333培养液中，30℃摇动培养3小时，得到混合培养液；
(4)在步骤(3)中的混合培养液加入氯仿，氯仿与混合培养液的体积比为0.1％，摇动培养12min；
(5)上述培养液经发酵液过滤器(上海信步，SHXB-D)过滤；
(6)在步骤(5)的滤液中加入海藻糖，充分混匀，海藻糖与滤液的质量比为0.2％，即为所述噬菌体制剂。
实施例8溶藻弧菌噬菌体Vp670制剂
作为本发明所述溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法的一种实施例，本实施例所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法包括以下步骤：
(1)以VAM培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，培养温度30℃；
(2)次日将步骤(1)的溶藻弧菌E06333培养液按1％(V/V)体积比例加入到新鲜VAM培养基中，30℃培养至OD600nm为0.6；
(3)将实施例6中的溶藻弧菌噬菌体Vp670二级培养液按5％(V/V)的体积比例加入到步骤(2)的溶藻弧菌E06333培养液中，30℃摇动培养5小时，得到混合培养液；
(4)在步骤(3)中的混合培养液加入氯仿，氯仿与混合培养液的体积比为0.1％，摇动培养12min；
(5)上述培养液经发酵液过滤器(上海信步，SHXB-D)过滤；
(6)在步骤(5)的滤液中加入海藻糖，充分混匀，海藻糖与滤液的质量比为0.4％，即为所述噬菌体制剂。
实施例9溶藻弧菌噬菌体Vp670制剂
作为本发明所述溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法的一种实施例，本实施例所述溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法包括以下步骤：
(1)以VAM培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，培养温度30℃；
(2)次日将步骤(1)的溶藻弧菌E06333培养液按1％(V/V)体积比例加入到新鲜VAM培养基中，30℃培养至OD600nm为0.5；
(3)将实施例6中的溶藻弧菌噬菌体Vp670二级培养液按3％(V/V)的体积比例加入到步骤(2)的溶藻弧菌E06333培养液中，30℃摇动培养4小时，得到混合培养液；
(4)在步骤(3)中的混合培养液加入氯仿，氯仿与混合培养液的体积比为0.1％，摇动培养12min；
(5)上述培养液经发酵液过滤器(上海信步，SHXB-D)过滤；
(6)在步骤(5)的滤液中加入海藻糖，充分混匀，海藻糖与滤液的质量比为0.3％，即为所述噬菌体制剂。
实施例10溶藻弧菌噬菌体制剂的应用
1、用于水体除菌：按水深1m，每亩5～10公斤的比例加入溶藻弧菌噬菌体制剂，每半月施用一次。
2、用于养殖动物体表除菌：将养殖动物集中于小水体中，按1％～2％的体积比例加入溶藻弧菌噬菌体制剂，浸泡30min。
实施例11溶藻弧菌噬菌体制剂的水体中应用效果
设对照组对虾养殖池3口，实验组对虾养殖池3口，按照上述实施例10中第1种应用方法施用实施例7制备的溶藻弧菌噬菌体制剂于水体中，换算用量为每亩(水深1m)7公斤，施用周期为30天。30天后，分别取对照组和实验组虾池水体，进行常规的弧菌TCBS平板培养，室温静置培养16小时，计数对照组和实验组平板上黄色菌落总数，分别标记为CP1和EP1，并对黄色菌落进行常规的菌落PCR鉴定，以鉴定其中溶藻弧菌的数量，分别标记为CP2和EP2，溶藻弧菌的PCR鉴定方法见文献报道(Luo P,Hu CQ.Vibrio alginolyticus gyrBsequence analysis and gyrB-targeted PCR identification in environmentalisolates.Diseases of Aquatic Organisms，2008,82(3):209-216.)。
实验结束后，对照组和实验组中的黄色菌以及溶藻弧菌的数量见图6。
由图6可见，养殖水体中施用本发明的溶藻弧菌噬菌体制剂后，实验组水体中TCBS显示黄色的细菌数量，主要为溶藻弧菌，明显降低，水体中溶藻弧菌的数量极明显降低，其数量仅为对照组的15％。
实施例12溶藻弧菌噬菌体制剂的水体中应用效果
取青石斑鱼20尾，体长约15cm,，随机平均分为二个组，分别为对照组CX和实验组EX，实验组和对照组青石斑鱼苗均分别置于含50L海水的养殖缸中。实验组按上述实施例10中的第2种应用方法施用实施例7制备的噬菌体制剂，噬菌体制剂用量为1.5％(V/V)；对照组则不做处理。浸泡30min后，取出对照组和实验组鱼各6尾置于灭菌海水中5min，刮取对照组和实验组各3尾鱼体表粘液，取100μL粘液加入900μL LB培养基，充分混合，分别按实施例11中的方法计数对照组中TCBS显示黄色的细菌数量(CX1)及溶藻弧菌的数量(CX2)，计数实验组中TCBS显示黄色的细菌数量(CX1)及溶藻弧菌的数量(CX2)，结果见图7。
由图7可见，施用本发明的溶藻弧菌噬菌体制剂后，与对照组相比，实验组鱼体表粘液中TCBS平板显示黄色菌的数量大幅减少；与对照组相比，实验组鱼体表粘液中溶藻弧菌的数量非常稀少，其数量只有对照组的10％。
发明人经过反复试验，优化调整溶藻弧菌噬菌体的制备工艺的各项参数，根据实施例8～9制备得到噬菌体制剂在应用中也具有降低水体中溶藻弧菌的效果。
本发明依据溶藻弧菌噬菌体Vp670，结合海藻糖等辅剂，提高噬菌体的锁水能力和保持生物酶活性能力，开发出相应的噬菌体制剂，该噬菌体制剂施用后，会长期持续存在于水体环境中，保持致病的宿主菌与噬菌体数量的平衡，因此与抗生素相比效果持久、使用量小。本发明的噬菌体Vp670制剂没有毒副作用，是一种新型绿色的生物消毒制剂，可用于海水养殖动物溶藻弧菌感染防控，促进水产养殖业健康发展。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (6)

1.一种溶藻弧菌噬菌体制剂，其特征在于，包括噬菌体Vp670和辅剂，所述辅剂包括海藻糖。
2.根据权利要求1所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将溶藻弧菌菌液与噬菌体Vp670培养液混合，形成混合培养液，摇动培养3～5h；
(2)在步骤(1)中的混合培养液加入氯仿，氯仿与混合培养液的体积比为0.05％～0.1％，摇动培养10～15min后；
(3)过滤培养液；
(4)在步骤(3)的滤液中加入海藻糖，充分混匀，海藻糖与滤液的质量比为0.2％～0.4％，得到所述的噬菌体制剂。
3.根据权利要求2所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，包括以下步骤：
1)采用LB培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，将过夜培养的溶藻弧菌E06333按1％的体积比例接种至新的LB培养基中，培养至OD600nm为0.4，获得溶藻弧菌液；
2)取溶藻弧菌液和噬菌体Vp670种子液按24:1的体积比混匀，30℃摇床培养3小时，离心后取上清，获得噬菌体Vp670一级培养液；
3)将噬菌体Vp670一级培养液按1％的体积比与溶藻弧菌液混匀，30℃摇床培养3小时，获得噬菌体Vp670二级培养液；
4)以VAM培养基过夜培养溶藻弧菌E06333，培养温度30℃；
5)将步骤4)的溶藻弧菌E06333培养液按1％的体积比加入到新的VAM培养基中，30℃培养至OD600nm为0.4～0.6；
6)将噬菌体Vp670二级培养液按2％～5％的体积比加入到步骤5)的溶藻弧菌E06333培养液中，30℃摇动培养3～5小时，得到混合培养液。
4.根据权利要求2所述的溶藻弧菌噬菌体制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，海藻糖与滤液的质量比为0.3％。
5.根据权利要求1所述的溶藻弧菌噬菌体制剂或根据权利要求2～4任一项所述方法制备得到的溶藻弧菌噬菌体制剂在水产养殖中裂解溶藻弧菌的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用包括用于水体除菌、用于养殖动物体表除菌中的至少一种。
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