CN108624612B - pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用。本发明的pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体的序列具有SEQ ID NO:1所示的序列。该pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体的构建方法具有操作简单、操作难度低的优点。SEPT8基因的siRNA干扰片段，包括siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4四个。SEPT8基因的siRNA干扰片段在制备用于抑制肿瘤细胞迁移、侵袭的应用，具有深远的开发价值。

Description

pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰 片段和应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用。

背景技术

septin 8(SEPT8)基因定位于人染色体5q31.1，是Septin基因家族成员之一。Septin蛋白是构成细胞骨架的主要成分，并在细胞内物质运输、细胞分裂、细胞周期调控与凋亡等过程中发挥重要作用。近年来发现SEPT8在鳞状细胞癌(SCC)等恶性肿瘤中呈高表达状态，并且与患者预后不良相关。迄今为止，尚未见SEPT8在胃癌细胞中的表达以及细胞功能实验研究的报道。

发明内容

本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体。

本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法。

本发明的目的之三在于针对现有技术的不足，提供SEPT8基因的siRNA干扰片段。

本发明的目的之四在于针对现有技术的不足，提供SEPT8基因的siRNA干扰片段的应用。

为了实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案：

提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体，所述pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的序列具有SEQ ID NO:1所示的序列。

为了实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案：

提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法，它包括以下步骤：

步骤一，在NCBI上查找SEPT8(NM_001098811.1)的序列作为目的基因序列，然后设计出引物SEPT8-P1、SEPT8-P2；其中，引物SEPT8-P1的序列具有SEQ ID NO:2所示的序列，引物SEPT8-P2的序列具有SEQ ID NO:3所示的序列；所述目的基因序列具有SEQ ID NO:4所示的序列；

步骤二，用引物SEPT8-P1、SEPT8-P2扩增目的基因序列，其中，目的基因序列的两端分别含酶切位点NheI和HindIII；

步骤三，目的基因序列经NheI和HindIII消化后与载体pEGFP-N1连接，得到重组载体pEGFP-N1/SEPT8，即为所述pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体。

为了实现上述目的之三，本发明采用如下技术方案：

提供SEPT8基因的siRNA干扰片段，包括siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4四个干扰片段；

所述siRNA1干扰片段具有SEQ ID NO:5所示的序列；

所述siRNA2干扰片段具有SEQ ID NO:6所示的序列；

所述siRNA3干扰片段具有SEQ ID NO:7所示的序列；

所述siRNA4干扰片段具有SEQ ID NO:8所示的序列。

为了实现上述目的之四，本发明采用如下技术方案：

提供SEPT8基因的siRNA干扰片段的应用，在制备用于抑制肿瘤细胞迁移、侵袭的应用。

本发明与现有技术相比较，有益效果在于：

(1)本发明的pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体，该pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体转染胃癌细胞后，对细胞增殖和克隆形成无明显影响，但能提高细胞横向和纵向迁移率，并能提高细胞的侵袭率。

(2)本发明的pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法，该pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法具有操作简单、操作难度低的优点。

(3)本发明提供的SEPT8基因的siRNA干扰片段，转染胃癌细胞后，对细胞增殖和克隆形成无明显影响，但能降低细胞横向和纵向迁移率，并能降低细胞的侵袭率。

(4)本发明提供的SEPT8基因的siRNA干扰片段的应用，在制备用于抑制肿瘤细胞迁移、侵袭的应用，具有深远的开发价值。

附图说明

图1是pEGFP-N1表达载体的图。

图2是RT-qPCR检测过表达SEPT8的mRNA表达改变图。

图3是Western blot检测过表达SEPT8后蛋白的改变图。

图4是CCK-8检测过表达SEPT8对细胞增殖的影响图。

图5是平板克隆形成实验图。

图6是细胞划痕实验：实验组细胞愈合明显比对照组快的对比图。

图7是Transwell细胞迁移实验检测过表达SEPT8对细胞迁移的影响图。其中，*：P<0.05。

图8是Transwell细胞侵袭实验检测过表达SEPT8对细胞迁移的影响图。其中，*：P<0.05。

图9是RT-qPCR检测SEPT8基因干扰片段干扰效率的结果图。其中，*：P<0.05。

图10是Western blot检测干扰SEPT8基因后蛋白改变的结果图。其中，*：P<0.05。

图11是干扰SEPT8基因后对MGC-803细胞增殖的影响图。

图12是干扰SEPT8基因后对MGC-803细胞克隆形成的影响图。

图13是干扰SEPT8基因后对MGC-803细胞横向迁移的影响图。其中，*：P<0.05。

图14是干扰SEPT8基因后对MGC-803细胞纵向迁移的影响图。其中，*：P<0.05。

图15是干扰SEPT8基因后对MGC-803细胞侵袭的影响图。其中，*：P<0.05。

具体实施方式

为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

其中，本发明提及的NCBI(National Center for Biotechnology Information)是指美国国立生物技术信息中心。

实施例1。

pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体，该pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的序列具有SEQID NO:1所示的序列。

实施例2。

实施例1的pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法，它包括以下步骤：

步骤一，在NCBI上查找SEPT8(NM_001098811.1)的序列作为目的基因序列，然后设计出引物SEPT8-P1、SEPT8-P2；其中，引物SEPT8-P1的序列具有SEQ ID NO:2所示的序列，引物SEPT8-P2的序列具有SEQ ID NO:3所示的序列；所述目的基因序列具有SEQ ID NO:4所示的序列；

步骤二，用引物SEPT8-P1、SEPT8-P2扩增目的基因序列，其中，目的基因序列的两端分别含酶切位点NheI和HindIII；

步骤三，目的基因经NheI和HindIII消化后与真核表达载体pEGFP-N1连接，得到重组载体pEGFP-N1/SEPT8，即为所述pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体。

实施例3。

实施例2的SEPT8基因的siRNA干扰片段，包括siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4四个干扰片段；

siRNA1干扰片段具有SEQ ID NO:5所示的序列；

siRNA2干扰片段具有SEQ ID NO:6所示的序列；

siRNA3干扰片段具有SEQ ID NO:7所示的序列；

siRNA4干扰片段具有SEQ ID NO:8所示的序列。

实施例4。

实施例3的SEPT8基因的siRNA干扰片段的应用，在制备用于抑制肿瘤细胞迁移、侵袭的应用。

实验：

1.1 SEPT8基因在胃癌细胞的过表达验证

把构建的pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体转染胃癌细胞，转染24h后提取RNA，48h后提蛋白，分别用RT-qPCR、WB验证过表达是否成功。RT-qPCR实验结果显示，过表达SEPT8组的mRNA表达水平明显升高(P<0.001，图2)。WB结果显示，过表达SEPT8后SEPT8蛋白水平明显升高(图3)，表明SEPT8基因在胃癌细胞内成功过表达。

引物如下表1：

表1

1.2过表达SEPT8对MGC-803细胞功能的影响

质粒转染48h后，收集细胞，分别检测实验组和对照组的细胞各项生物学行为指标，结果如下：

1)用CCK-8细胞增殖实验和平板克隆形成实验，检测过表达SEPT8对细胞增殖和克隆形成的影响

1.0×10³细胞均匀布于96孔板内，每组5复孔，分别于0h，24h，48h，72h测CCK8，CCK-8细胞增殖实验结果显示：与对照组相比，过表达SEPT8组的细胞增殖速度无明显变化(P>0.05，图4)；1.0×10³细胞均匀布于6孔板内，每组3复孔，十天后将细胞固定、染色、拍照，平板克隆形成实验结果显示：与对照组相比，实验组集落形成的数量无明显变化(P>0.05，图5)。

2)采用细胞划痕实验检测过表达SEPT8对细胞横向迁移的影响

待6孔板内细胞汇合度达100％，利用枪头在孔内划痕，于0h，24h，48h进行拍照，细胞划痕实验结果显示：过表达SEPT8组的细胞迁移速率明显高于对照组(图6)。

3)采用Transwell细胞迁移实验检测过表达SEPT8对细胞纵向迁移的影响

5.0×10⁴细胞用200μl DMEN培养基重悬，均匀布于Transwell小室内，小室下加入800μl含10％血清DMEN，6h后将细胞固定、染色、拍照。迁移实验结果显示：过表达SEPT8组的细胞迁移率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，图7)。

4)采用Transwell细胞侵袭实验检测过表达SEPT8对细胞侵袭能力的影响

按8:1的比例混匀DMEN培养基与凝胶，每个Transwell小室加入60μl混合液，然后将小室放入37℃孵育1h，5.0×10⁴细胞用200μl DMEN培养基重悬，均匀布于Transwell小室内，小室下加入800μl含10％血清DMEN，24h后将细胞固定、染色、拍照。侵袭实验结果显示：过表达SEPT8组的细胞迁移率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，图8)。

1.3合成并验证SEPT8的siRNA干扰片段

分别合成siRNA干扰片段干扰SEPT8在MGC-803的表达。RT-qPCR结果显示，分别转染SEPT8的条干扰片段，siRNA1，siRNA2，siRNA3，siRNA4四个干扰片段都有干扰作用(P<0.001，图9)，其中siRNA4干扰效果最好，选择siRNA4做后续实验。Western blot结果显示，转染SEPT8的siRNA干扰片段后，干扰组中SEPT8蛋白的表达水平明显减少(图10)。

1.4干扰SEPT8对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响

1)干扰SEPT8对MGC-803细胞增殖的影响

1.0×10³细胞均匀布于96孔板内，每组5复孔，分别于0h，24h，48h，72h测CCK8，CCK-8细胞增殖实验结果显示：与对照组NC-SEPT8相比，干扰组细胞的增殖速度没有明显变化(P>0.05，图11)；1.0×10³细胞均匀布于6孔板内，每组3复孔，十天后将细胞固定、染色、拍照，平板克隆形成实验结果显示：与对照组相比，干扰组的细胞克隆形成数量没有明显变化(P>0.05，图12)。

2)干扰SEPT8对MGC-803细胞横向迁移的影响

采用细胞划痕实验检测干扰SEPT8对细胞横向迁移的影响。待6孔板内细胞汇合度达100％，利用枪头在孔内划痕，于0h，24h，48h进行拍照，细胞划痕实验结果显示：干扰组的细胞迁移速率明显低于对照组(图13)。

3)采用Transwell细胞迁移实验检测干扰SEPT8对细胞纵向迁移的影响

5.0×10⁴细胞用200μl DMEN培养基重悬，均匀布于Transwell小室内，小室下加入800μl含10％血清DMEN，6h后将细胞固定、染色、拍照。迁移实验结果显示：干扰组的细胞迁移率明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，图14)。

4)采用Transwell细胞侵袭实验检测干扰SEPT8对细胞侵袭能力的影响

按8:1的比例混匀DMEN培养基与凝胶，每个Transwell小室加入60μl混合液，然后将小室放入37℃孵育1h，5.0×10⁴细胞用200μl DMEN培养基重悬，均匀布于Transwell小室内，小室下加入800μl含10％血清DMEN，24h后将细胞固定、染色、拍照。侵袭实验结果显示：干扰组的细胞迁移率明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，图15)。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

基因序列表

<110> 广东医科大学

<120> pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段

<160> 8

<210> SEQ ID NO: 1

<211>6163

<212> DNA

<213> pEGFP-N1/SEPT8

<400> SEQ ID NO: 1

TAGTTATTAA TAGTAATCAA TTACGGGGTC ATTAGTTCAT AGCCCATATA

TGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA ATGGCCCGCC TGGCTGACCG

CCCAACGACC CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG TTCCCATAGT

AACGCCAATA GGGACTTTCC ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT

AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTACGCCC

CCTATTGACG TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT ATGCCCAGTA

CATGACCTTA TGGGACTTTC CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA

TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC AGTACATCAA TGGGCGTGGA

TAGCGGTTTG ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA TTGACGTCAA

TGGGAGTTTG TTTTGGCACC AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA

ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG

GTCTATATAA GCAGAGCTGG TTTAGTGAAC CGTCAGATCC GCTAGCGCCA

CCATGGCGGC CACCGACCTG GAGCGCTTCT CGAATGCAGA GCCAGAGCCC

CGGAGCCTCT CCCTGGGCGG CCATGTGGGT TTCGACAGCC TCCCCGACCA

GCTGGTCAGC AAGTCGGTCA CTCAGGGCTT CAGCTTCAAC ATCCTCTGTG

TGGGGGAGAC CGGCATTGGC AAATCCACAC TGATGAACAC ACTCTTCAAC

ACGACCTTCG AGACTGAGGA AGCCAGTCAC CATGAGGCAT GCGTGCGCCT

GCGGCCCCAG ACCTATGACC TCCAGGAGAG CAACGTGCAG CTCAAGCTGA

CCATTGTGGA TGCCGTGGGC TTTGGGGATC AGATCAATAA GGATGAGAGT

TACAGGCCCA TAGTTGACTA CATCGATGCG CAGTTTGAAA ATTATCTGCA

GGAGGAGCTG AAGATCCGCC GCTCGCTCTT CGACTACCAT GACACAAGGA

TCCACGTTTG CCTCTACTTC ATCACGCCCA CAGGGCACTC CCTGAAGTCT

CTAGATCTAG TGACCATGAA GAAACTAGAC AGCAAGGTGA ACATTATTCC

CATCATCGCC AAGGCTGACA CCATCTCCAA GAGCGAGCTC CACAAGTTCA

AGATCAAGAT CATGGGCGAG TTGGTCAGCA ACGGGGTCCA GATCTACCAG

TTCCCCACGG ATGATGAGGC TGTTGCAGAG ATTAACGCAG TCATGAATGC

ACATCTGCCC TTTGCCGTGG TGGGCAGCAC CGAGGAGGTG AAGGTGGGGA

ACAAGCTGGT CCGAGCACGG CAGTACCCCT GGGGAGTGGT GCAGGTGGAG

AATGAGAATC ACTGCGACTT CGTGAAGCTG CGGGAGATGT TGATCCGGGT

GAACATGGAA GACCTCCGCG AGCAGACCCA CAGCCGGCAC TACGAGCTCT

ACCGGCGCTG CAAGTTGGAG GAGATGGGCT TTCAGGACAG CGATGGTGAC

AGCCAGCCCT TCAGCCTACA AGAGACATAC GAGGCCAAGA GGAAGGAGTT

CCTAAGTGAG CTGCAGAGGA AGGAGGAAGA GATGAGGCAG ATGTTTGTCA

ACAAAGTGAA GGAGACAGAG CTGGAGCTGA AGGAGAAGGA AAGGGAGCTC

CATGAGAAGT TTGAGCACCT GAAGCGGGTC CACCAGGAGG AGAAGCGCAA

GGTGGAGGAA AAGCGCCGGG AACTGGAGGA GGAGACCAAC GCCTTCAATC

GCCGGAAGGC TGCGGTGGAG GCCCTGCAGT CGCAGGCCTT GCACGCCACC

TCGCAGCAGC CCCTGAGGAA GGACAAGGAC AAGAAGAACA GATCAGATAT

AGGAGCACAC CAGCCGGGCA TGAGCCTCTC CAGCTCTAAG GTGATGATGA

CCAAGGCCAG TGTGGAGCCC TTGAACTGCA GCAGCTGGTG GCCCGCCATA

CAGTGCTGCA GCTGCCTGGT CAGGGATGCG ACGTGGAGGG AAGGATTCCT

CAAGCTTCGA ATTCTGCAGT CGACGGTACC GCGGGCCCGG GATCCACCGG

TCGCCACCAT GGTGAGCAAG GGCGAGGAGC TGTTCACCGG GGTGGTGCCC

ATCCTGGTCG AGCTGGACGG CGACGTAAAC GGCCACAAGT TCAGCGTGTC

CGGCGAGGGC GAGGGCGATG CCACCTACGG CAAGCTGACC CTGAAGTTCA

TCTGCACCAC CGGCAAGCTG CCCGTGCCCT GGCCCACCCT CGTGACCACC

CTGACCTACG GCGTGCAGTG CTTCAGCCGC TACCCCGACC ACATGAAGCA

GCACGACTTC TTCAAGTCCG CCATGCCCGA AGGCTACGTC CAGGAGCGCA

CCATCTTCTT CAAGGACGAC GGCAACTACA AGACCCGCGC CGAGGTGAAG

TTCGAGGGCG ACACCCTGGT GAACCGCATC GAGCTGAAGG GCATCGACTT

CAAGGAGGAC GGCAACATCC TGGGGCACAA GCTGGAGTAC AACTACAACA

GCCACAACGT CTATATCATG GCCGACAAGC AGAAGAACGG CATCAAGGTG

AACTTCAAGA TCCGCCACAA CATCGAGGAC GGCAGCGTGC AGCTCGCCGA

CCACTACCAG CAGAACACCC CCATCGGCGA CGGCCCCGTG CTGCTGCCCG

ACAACCACTA CCTGAGCACC CAGTCCGCCC TGAGCAAAGA CCCCAACGAG

AAGCGCGATC ACATGGTCCT GCTGGAGTTC GTGACCGCCG CCGGGATCAC

TCTCGGCATG GACGAGCTGT ACAAGTAAAG CGGCCGCGAC TCTAGATCAT

AATCAGCCAT ACCACATTTG TAGAGGTTTT ACTTGCTTTA AAAAACCTCC

CACACCTCCC CCTGAACCTG AAACATAAAA TGAATGCAAT TGTTGTTGTT

AACTTGTTTA TTGCAGCTTA TAATGGTTAC AAATAAAGCA ATAGCATCAC

AAATTTCACA AATAAAGCAT TTTTTTCACT GCATTCTAGT TGTGGTTTGT

CCAAACTCAT CAATGTATCT TAAGGCGTAA ATTGTAAGCG TTAATATTTT

GTTAAAATTC GCGTTAAATT TTTGTTAAAT CAGCTCATTT TTTAACCAAT

AGGCCGAAAT CGGCAAAATC CCTTATAAAT CAAAAGAATA GACCGAGATA

GGGTTGAGTG TTGTTCCAGT TTGGAACAAG AGTCCACTAT TAAAGAACGT

GGACTCCAAC GTCAAAGGGC GAAAAACCGT CTATCAGGGC GATGGCCCAC

TACGTGAACC ATCACCCTAA TCAAGTTTTT TGGGGTCGAG GTGCCGTAAA

GCACTAAATC GGAACCCTAA AGGGAGCCCC CGATTTAGAG CTTGACGGGG

AAAGCCGGCG AACGTGGCGA GAAAGGAAGG GAAGAAAGCG AAAGGAGCGG

GCGCTAGGGC GCTGGCAAGT GTAGCGGTCA CGCTGCGCGT AACCACCACA

CCCGCCGCGC TTAATGCGCC GCTACAGGGC GCGTCAGGTG GCACTTTTCG

GGGAAATGTG CGCGGAACCC CTATTTGTTT ATTTTTCTAA ATACATTCAA

ATATGTATCC GCTCATGAGA CAATAACCCT GATAAATGCT TCAATAATAT

TGAAAAAGGA AGAGTCCTGA GGCGGAAAGA ACCAGCTGTG GAATGTGTGT

CAGTTAGGGT GTGGAAAGTC CCCAGGCTCC CCAGCAGGCA GAAGTATGCA

AAGCATGCAT CTCAATTAGT CAGCAACCAG GTGTGGAAAG TCCCCAGGCT

CCCCAGCAGG CAGAAGTATG CAAAGCATGC ATCTCAATTA GTCAGCAACC

ATAGTCCCGC CCCTAACTCC GCCCATCCCG CCCCTAACTC CGCCCAGTTC

CGCCCATTCT CCGCCCCATG GCTGACTAAT TTTTTTTATT TATGCAGAGG

CCGAGGCCGC CTCGGCCTCT GAGCTATTCC AGAAGTAGTG AGGAGGCTTT

TTTGGAGGCC TAGGCTTTTG CAAAGATCGA TCAAGAGACA GGATGAGGAT

CGTTTCGCAT GATTGAACAA GATGGATTGC ACGCAGGTTC TCCGGCCGCT

TGGGTGGAGA GGCTATTCGG CTATGACTGG GCACAACAGA CAATCGGCTG

CTCTGATGCC GCCGTGTTCC GGCTGTCAGC GCAGGGGCGC CCGGTTCTTT

TTGTCAAGAC CGACCTGTCC GGTGCCCTGA ATGAACTGCA AGACGAGGCA

GCGCGGCTAT CGTGGCTGGC CACGACGGGC GTTCCTTGCG CAGCTGTGCT

CGACGTTGTC ACTGAAGCGG GAAGGGACTG GCTGCTATTG GGCGAAGTGC

CGGGGCAGGA TCTCCTGTCA TCTCACCTTG CTCCTGCCGA GAAAGTATCC

ATCATGGCTG ATGCAATGCG GCGGCTGCAT ACGCTTGATC CGGCTACCTG

CCCATTCGAC CACCAAGCGA AACATCGCAT CGAGCGAGCA CGTACTCGGA

TGGAAGCCGG TCTTGTCGAT CAGGATGATC TGGACGAAGA GCATCAGGGG

CTCGCGCCAG CCGAACTGTT CGCCAGGCTC AAGGCGAGCA TGCCCGACGG

CGAGGATCTC GTCGTGACCC ATGGCGATGC CTGCTTGCCG AATATCATGG

TGGAAAATGG CCGCTTTTCT GGATTCATCG ACTGTGGCCG GCTGGGTGTG

GCGGACCGCT ATCAGGACAT AGCGTTGGCT ACCCGTGATA TTGCTGAAGA

GCTTGGCGGC GAATGGGCTG ACCGCTTCCT CGTGCTTTAC GGTATCGCCG

CTCCCGATTC GCAGCGCATC GCCTTCTATC GCCTTCTTGA CGAGTTCTTC

TGAGCGGGAC TCTGGGGTTC GAAATGACCG ACCAAGCGAC GCCCAACCTG

CCATCACGAG ATTTCGATTC CACCGCCGCC TTCTATGAAA GGTTGGGCTT

CGGAATCGTT TTCCGGGACG CCGGCTGGAT GATCCTCCAG CGCGGGGATC

TCATGCTGGA GTTCTTCGCC CACCCTAGGG GGAGGCTAAC TGAAACACGG

AAGGAGACAA TACCGGAAGG AACCCGCGCT ATGACGGCAA TAAAAAGACA

GAATAAAACG CACGGTGTTG GGTCGTTTGT TCATAAACGC GGGGTTCGGT

CCCAGGGCTG GCACTCTGTC GATACCCCAC CGAGACCCCA TTGGGGCCAA

TACGCCCGCG TTTCTTCCTT TTCCCCACCC CACCCCCCAA GTTCGGGTGA

AGGCCCAGGG CTCGCAGCCA ACGTCGGGGC GGCAGGCCCT GCCATAGCCT

CAGGTTACTC ATATATACTT TAGATTGATT TAAAACTTCA TTTTTAATTT

AAAAGGATCT AGGTGAAGAT CCTTTTTGAT AATCTCATGA CCAAAATCCC

TTAACGTGAG TTTTCGTTCC ACTGAGCGTC AGACCCCGTA GAAAAGATCA

AAGGATCTTC TTGAGATCCT TTTTTTCTGC GCGTAATCTG CTGCTTGCAA

ACAAAAAAAC CACCGCTACC AGCGGTGGTT TGTTTGCCGG ATCAAGAGCT

ACCAACTCTT TTTCCGAAGG TAACTGGCTT CAGCAGAGCG CAGATACCAA

ATACTGTCCT TCTAGTGTAG CCGTAGTTAG GCCACCACTT CAAGAACTCT

GTAGCACCGC CTACATACCT CGCTCTGCTA ATCCTGTTAC CAGTGGCTGC

TGCCAGTGGC GATAAGTCGT GTCTTACCGG GTTGGACTCA AGACGATAGT

TACCGGATAA GGCGCAGCGG TCGGGCTGAA CGGGGGGTTC GTGCACACAG

CCCAGCTTGG AGCGAACGAC CTACACCGAA CTGAGATACC TACAGCGTGA

GCTATGAGAA AGCGCCACGC TTCCCGAAGG GAGAAAGGCG GACAGGTATC

CGGTAAGCGG CAGGGTCGGA ACAGGAGAGC GCACGAGGGA GCTTCCAGGG

GGAAACGCCT GGTATCTTTA TAGTCCTGTC GGGTTTCGCC ACCTCTGACT

TGAGCGTCGA TTTTTGTGAT GCTCGTCAGG GGGGCGGAGC CTATGGAAAA

ACGCCAGCAA CGCGGCCTTT TTACGGTTCC TGGCCTTTTG CTGGCCTTTT

GCTCACATGT TCTTTCCTGC GTTATCCCCT GATTCTGTGG ATAACCGTAT

TACCGCCATG CAT

<210> SEQ ID NO: 2

<211> 50

<212> DNA

<213> SEPT8-P1

<400> SEQ ID NO: 2

TTTAGTGAACCGTCAGATCCGCTAGCGCCACCATGGCGGCCACCGACCTG

<210> SEQ ID NO: 3

<211> 32

<212> DNA

<213> SEPT8-P2

<400> SEQ ID NO: 3

ACCGTCGACTGCAGAATTCGAAGCTTGAGGAA

<210> SEQ ID NO: 4

<211> 1467

<212> DNA

<213> septin 8

<400> SEQ ID NO: 4

GCTAGCGCCACCATGGCGGCCACCGACCTGGAGCGCTTCTCGAATGCAGAGCCAGAGCCCCGGAGCCTCTCCCTGGGCGGCCATGTGGGTTTCGACAGCCTCCCCGACCAGCTGGTCAGCAAGTCGGTCACTCAGGGCTTCAGCTTCAACATCCTCTGTGTGGGGGAGACCGGCATTGGCAAATCCACACTGATGAACACACTCTTCAACACGACCTTCGAGACTGAGGAAGCCAGTCACCATGAGGCATGCGTGCGCCTGCGGCCCCAGACCTATGACCTCCAGGAGAGCAACGTGCAGCTCAAGCTGACCATTGTGGATGCCGTGGGCTTTGGGGATCAGATCAATAAGGATGAGAGTTACAGGCCCATAGTTGACTACATCGATGCGCAGTTTGAAAATTATCTGCAGGAGGAGCTGAAGATCCGCCGCTCGCTCTTCGACTACCATGACACAAGGATCCACGTTTGCCTCTACTTCATCACGCCCACAGGGCACTCCCTGAAGTCTCTAGATCTAGTGACCATGAAGAAACTAGACAGCAAGGTGAACATTATTCCCATCATCGCCAAGGCTGACACCATCTCCAAGAGCGAGCTCCACAAGTTCAAGATCAAGATCATGGGCGAGTTGGTCAGCAACGGGGTCCAGATCTACCAGTTCCCCACGGATGATGAGGCTGTTGCAGAGATTAACGCAGTCATGAATGCACATCTGCCCTTTGCCGTGGTGGGCAGCACCGAGGAGGTGAAGGTGGGGAACAAGCTGGTCCGAGCACGGCAGTACCCCTGGGGAGTGGTGCAGGTGGAGAATGAGAATCACTGCGACTTCGTGAAGCTGCGGGAGATGTTGATCCGGGTGAACATGGAAGACCTCCGCGAGCAGACCCACAGCCGGCACTACGAGCTCTACCGGCGCTGCAAGTTGGAGGAGATGGGCTTTCAGGACAGCGATGGTGACAGCCAGCCCTTCAGCCTACAAGAGACATACGAGGCCAAGAGGAAGGAGTTCCTAAGTGAGCTGCAGAGGAAGGAGGAAGAGATGAGGCAGATGTTTGTCAACAAAGTGAAGGAGACAGAGCTGGAGCTGAAGGAGAAGGAAAGGGAGCTCCATGAGAAGTTTGAGCACCTGAAGCGGGTCCACCAGGAGGAGAAGCGCAAGGTGGAGGAAAAGCGCCGGGAACTGGAGGAGGAGACCAACGCCTTCAATCGCCGGAAGGCTGCGGTGGAGGCCCTGCAGTCGCAGGCCTTGCACGCCACCTCGCAGCAGCCCCTGAGGAAGGACAAGGACAAGAAGAACAGATCAGATATAGGAGCACACCAGCCGGGCATGAGCCTCTCCAGCTCTAAGGTGATGATGACCAAGGCCAGTGTGGAGCCCTTGAACTGCAGCAGCTGGTGGCCCGCCATACAGTGCTGCAGCTGCCTGGTCAGGGATGCGACGTGGAGGGAAGGATTCCTCAAGCTT

<210> SEQ ID NO: 5

<211> 42

<212> RNA

<213> siRNA1

<400> SEQ ID NO: 5

UGAAGAAACUAGACAGCAATT

UUGCUGUCUAGUUUCUUCATT

<210> SEQ ID NO: 6

<211> 42

<212> RNA

<213> siRNA2

<400> SEQ ID NO: 6

GAGCUGAAGGAGAAGGAAATT

UUUCCUUCUCCUUCAGCUCTT

<210> SEQ ID NO: 7

<211> 42

<212> RNA

<213> siRNA3

<400> SEQ ID NO: 7

AGGACAAGGACAAGAAGAATT

UUCUUCUUGUCCUUGUCCUTT

<210> SEQ ID NO: 8

<211> 42

<212> RNA

<213> siRNA4

<400> SEQ ID NO: 8

CCUGAAGUCUCUAGAUCUATT

UAGAUCUAGAGACUUCAGGTT

Claims (1)

1.SEPT8基因的siRNA干扰片段的应用，其特征在于：所述SEPT8基因的siRNA干扰片段在制备用于抑制胃癌细胞迁移、侵袭的制剂的应用；

所述siRNA干扰片段为siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4四个干扰片段；

所述siRNA1干扰片段具有SEQ ID NO:5所示的序列；

所述siRNA2干扰片段具有SEQ ID NO:6所示的序列；

所述siRNA3干扰片段具有SEQ ID NO:7所示的序列；

所述siRNA4干扰片段具有SEQ ID NO:8所示的序列。

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