CN108619228B - 一种药物组合物及其制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物领域，尤其涉及一种药物组合物及其制备方法及应用。针对现有的王枣子作为药物使用，需要对王枣子进行提取，提取步骤复杂，繁琐，且得到有效成分的治疗范围有限的问题。本发明提供一种药物组合物，本发明的药物组合物利用如下原料制备得到：王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花。本发明的药物组合物采用水煎煮即可得到，提取方法简单，本发明药物组合物中，四种原料得到的各提取物具有较好的协同作用，能够显著的提高人体的免疫力，拓宽了王枣子的应用范围。同时本发明还提供了一种药物组合物的制备方法及该药物组合物的应用。
Description
技术领域
本发明属于药物领域，尤其涉及一种药物组合物及其制备方法及应用。
背景技术
王枣子(Rabdosia amethystoides(Benth)Hara)是唇形科香茶菜属中少有的可药食两用的中草药植物之一，是安徽省宿州市地产的传统药食两用植物。王枣子中富含有多种活性成分，具有抗菌消炎、凉血化瘀、防癌抗癌，抗氧化及提高免疫力等功效，被誉为“天然植物抗生素”。
中国专利，公开号CN104435095B，公开日20150325，其公开了王枣子总萜有效部位及其提取方法、应用、组合物。该王枣子总萜有效部位含有齐墩果酸和熊果酸，按原料重量百分比组成含有0.02-0.5％的齐墩果酸、0.05-1％的熊果酸。该发明以药物的主要成分生产加工成为适宜的药物制剂作为治疗免疫肝损伤疾病，能改善肝脏状态。
中国专利，公开号CN106800579A，公开日20170606，其公开了提取王枣子的内折香茶菜苷A方法，具体如下：干燥王枣子根粉末，过筛后加入乙醇，搅拌均匀，超声提取，合并后的提取液进行减压蒸馏，馏分乙醇回收再利用，浓缩液分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液减压浓缩，馏分回收再利用，浓缩干粉得到乙酸乙酯浓缩物。浓缩物进行硅胶柱层析收集目标段馏分并浓缩，浓缩干粉用少量甲醇加热溶解后重结晶，结晶后抽滤，用甲醇多次冲洗，真空干燥后得到内折香茶菜苷A。其初步证实内折香茶菜苷A具有抗癌作用和氧化损伤作用，可以促进癌细胞的凋亡，从而开发新一代抗癌药物。
上述两篇专利公开了王枣子总萜有效部位在治疗免疫肝损伤疾病的应用，王枣子中的内折香茶菜苷A具有初步抗癌作用。但是这两种应用都需要对王枣子进行复杂的提取。同时只公开了王枣子的治疗肝损伤和抗癌的作用。
因此，现有的王枣子作为药物使用存在如下问题：需要对王枣子进行提取，提取步骤复杂，繁琐，且得到的有效成分的治疗范围有限。
发明内容
1、要解决的问题
针对现有的王枣子作为药物使用，需要对王枣子进行提取，提取步骤复杂，繁琐，且得到有效成分的治疗范围有限的问题。本发明提供一种药物组合物，本发明的药物组合物包括如下原料制备得到：王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花。本发明的药物组合物采用水煎煮即可得到，提取方法简单。本发明药物组合物中，四种原料得到的各提取物具有较好的协同作用，能够显著的提高人体的免疫力，拓宽了王枣子的应用范围。同时本发明的还提供了一种药物组合物的制备方法及该药物组合物的应用。
2、技术方案
为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。
王枣子是唇形科香茶菜属中少有的可药食两用的中草药植物之一，是安徽省宿州市地产的传统药食两用植物。王枣子中富含有多种活性成分，具有抗菌消炎、凉血化瘀、防癌抗癌，抗氧化及提高免疫力等功效，被誉为“天然植物抗生素”。随着研究的深入，发现王枣子植物中含有萜类、生物碱和挥发油等多种天然活性物质，这些活性物质还具有抗氧化、抗血栓、抗癌等作用。其中，王枣子萜类成分主要有王枣子甲素、乙素和丙素，毛叶醇、齐墩果酸和卜谷街醇，具有抗菌消炎、抗肿瘤、清热解毒、抗炎、抗病毒、免疫调节等功效。经研究证明王枣子对多种肿瘤具有抑制作用，且抑制作用远高于其他植物抗癌药。另外，王枣子的煎剂有良好的抑菌作用，可以消除炎症。
甜叶菊(Folium Steviae Rebaudianae)干叶中的主要成分为甜菊糖苷，不仅甜度高、热量低，还具有一定的药理作用，多用作矫味剂。甜叶菊糖主要有治疗糖尿病、控制血糖、降低血压、抗肿瘤、抗腹泻、提高免疫力，促进新陈代谢等作用，对控制肥胖症、调节胃酸、恢复神经疲劳有很好的功效，对心脏病、小儿龋齿等也有显著疗效。甜叶菊含有多种功能性成分，包括糖苷类化合物、黄酮类化合物、绿原酸类等。甜菊糖苷作为甜味剂在食品、医药行业有重要的应用价值，黄酮类和绿原酸类物质也具有抗氧化、抗炎、抗癌等活性。联合国粮农组织、世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会在2008年6月第69届会议报告中明确表明：正常人甜菊糖每日摄入量在4毫克/千克体重以下时对人体没有副作用。
杭菊花(Flos Chrysanthemi)是菊花茶的主要原料，自古以来即为药用植物，经济价值高。杭菊花原产地为浙江桐乡，最早记载于明末清初的《补农书》中，提到“甘菊性甘温，久服最有益”，其辛、甘、苦、微寒。具有疏散风热，平肝明目，清热解毒，益阴滋肾的功能。杭菊花体轻达表，气清上浮，微寒清热，故常用治风热感冒，温病初起，温邪犯肺，发热、头疼、咳嗽等症状。另外杭菊花甘寒益阴，清热解毒，尤善解疗毒，故可用治疗疮肿毒。
甘草是一种补益中草药。中国药典2015年版一部，本品为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去须根，晒干。性温，主治清热解毒，祛痰止咳，脘腹等症状；有补脾益气，健脾胃之功效。甘草有类似肾上腺皮质激素样作用，对组胺引起的胃酸分泌过多有抑制作用，并有抗酸和缓解胃肠平滑肌痉挛作用。祛痰止咳是甘草的另一大功效。有时感冒会伴随咳嗽、多痰的情况，而用甘草泡水饮用可以很大程度减轻这些症状，能够化痰止咳，使喉咙更加舒服畅通，同时也可以缓解咽喉肿痛，对口干舌燥的人也可以选择甘草茶。此外甘草还有缓解疼痛、减轻乏力、补脾益气等作用。甘草副作用较小，常与菊花等搭配饮用。甘草，性味甘平，具有清热解毒、益气补脾、调和诸药、抗肿瘤及抗疲劳等作用，素有“和事老”之称，甘草不但在医药中运用广泛，在食品，饮料等领域也有极大的需求量。
经试验表明：王枣子叶与杭菊花，甘草，甜叶菊四种原料制备得到的药物组合物，不仅口感极佳，药用疗效也特别显著。在药物组合物中加入甘草不仅有利于药物组合物澄清，还能作为矫味剂，调和其口感，增加香气。
一种药物组合物，包括如下原料制备得到：王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花。
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的原料制备得到：
优选的，包括如下重量份比例的水提液制备得到：
一种药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备水提液：
将王枣子叶用水提取，过滤，得到王枣子叶水提取液；
将甜叶菊用水提取，过滤，得到甜叶菊水提取液；
将甘草用水提取，过滤，得到甘草水提取液；
将杭菊花用水提取，过滤，得到杭菊花水提取液。
(2)混匀：将各所述水提液，混合，得到混合液，所述混合液即为所述药物组合物。
一种药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花混合，加水，搅拌，煎煮，过滤除去滤渣，得到混合提取液，所述混合提取液即为所述药物组合物。
一种药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(S1)制备醇提液：
将王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花混合，加入乙醇，搅拌，加热，回流，过滤，收集滤液，将滤液进行浓缩，得到浸膏；
(S2)将浸膏进行烘干，加水溶解，得到药物组合物。
优选的，所述步骤(2)之后还包括如下步骤：
(3)灌装及封口：将混合液加热至80～100℃，趁热灌装并封口；
(4)杀菌：置于100～12l℃高压灭菌锅灭菌15～45min；
(5)冷却：冷却至35℃以下，包装。
优选的，各组分制备水提液过程中水提的温度为80～100℃，提取时间为30～90min。
一种药物组合物，采用上述任意一种制备方法制备得到。
3、有益效果
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
(1)以王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花为原料制备的药物组合物，四种原料得到的提取物协同作用，能够显著的提高人体的免疫力；
(2)以王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花为原料制备的药物组合物，通过小鼠体重影响实验可知，本发明的药物组合物安全性高；
(3)以王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花为原料制备的药物组合物，四种原料得到的提取物协同作用，能够显著的降低血糖；
(4)本发明的制备方法无添加任何食品添加剂，无蔗糖，以甜叶菊的甜味来调理王枣子的苦味，甜而不腻，口感适宜，各成分风味明显且协调，香气清新，色泽均匀，呈黄褐色，澄清透明。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
实施例1药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶5.0g，甜叶菊125.0g，甘草100g，杭菊花75g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过1h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取100ml水，加热至80℃，将5.0g王枣子叶加入，煎煮30min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为100ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。此时王枣子叶水提液的料液比为1:20。药材料液比＝药材投料重量/提取液的体积。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取3750ml水，加热至80℃，将125.0g甜叶菊加入，煎煮30min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为3750ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。此时甜叶菊水提液的料液比为1:30。
(5)制备甘草水提取液：称取3000ml水，加热至80℃，将100.0g甘草加入，煎煮30min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为3000ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。此时甘草水提液的料液比为1:30。
(6)制备杭菊花水提取液：称取2250ml水，加热至80℃，将75.0g杭菊花加入，煎煮30min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为2250ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。此时杭菊花水提液的料液比为1:30。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取100ml王枣子叶水提液，取65ml甜叶菊水提液，取85ml甘草水提液，取80ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
本实施例的过滤方式也可以为离心过滤、压滤、膜过滤等常见的过滤形式。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至80℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于100℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例2药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶50.0g，甜叶菊1.0g，甘草40.0g，杭菊花30.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取1500ml水，加热至100℃，将50.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用压滤缸过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为1500ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取40ml水，加热至100℃，将1.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用压滤缸过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为40ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取1600ml水，加热至100℃，将40.0g甘草加入，煎煮90min，用压滤缸过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为1600ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取1800ml水，加热至100℃，将30.0g杭菊花加入，煎煮90min，用压滤缸过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为1800ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取80ml王枣子叶水提液，取40ml甜叶菊水提液，取90ml甘草水提液，取120ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至100℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌45min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例3药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶50.0g，甜叶菊40.0g，甘草1.0g，杭菊花30.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取6250ml水，加热至90℃，将50.0g王枣子叶加入，煎煮60min，用离心机过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为6250ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取5000ml水，加热至90℃，将40.0g甜叶菊加入，煎煮60min，用离心机过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为5000ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取250ml水，加热至90℃，将1.0g甘草加入，煎煮60min，用离心机过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为250ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取7500ml水，加热至90℃，将30.0g杭菊花加入，煎煮60min，用离心机过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为7500ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取130ml王枣子叶水提液，取30ml甜叶菊水提液，取70ml甘草水提液，取100ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至90℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于110℃高压灭菌锅灭菌30min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例4药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶500.0g，甜叶菊400.0g，甘草400.0g，杭菊花10.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取25000ml水，加热至85℃，将500.0g王枣子叶加入，煎煮40min，用渗透膜过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为25000ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取32000ml水，加热至85℃，将400.0g甜叶菊加入，煎煮40min，用渗透膜过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为32000ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取32000ml水，加热至85℃，将400.0g甘草加入，煎煮40min，用渗透膜过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为32000ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取200ml水，加热至80℃，将10.0g杭菊花加入，煎煮40min，用渗透膜过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为200ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取105ml王枣子叶水提液，取55ml甜叶菊水提液，取55ml甘草水提液，取115ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于105℃高压灭菌锅灭菌35min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例5药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶5.0g，甜叶菊3.0g，甘草2.0g，杭菊花2.5g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取200ml水，加热至100℃，将5.0g王枣子叶加入，煎煮80min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为250ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取200ml水，加热至100℃，将3.0g甜叶菊加入，煎煮80min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为250ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取200ml水，加热至100℃，将2.0g甘草加入，煎煮80min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为250ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取200ml水，加热至100℃，将2.5g杭菊花加入，煎煮80min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为250ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取110ml王枣子叶水提液，取55ml甜叶菊水提液，取55ml甘草水提液，取110ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至83℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例6药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶10.0g，甜叶菊4.0g，甘草6.0g，杭菊花4.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将10.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将4.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将6.0g甘草加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将4.0g杭菊花加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取130ml王枣子叶水提液，取30ml甜叶菊水提液，取40ml甘草水提液，取130ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例7药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶10.0g，甜叶菊400.0g，甘草400.0g，杭菊花300.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取500ml水，加热至80℃，将10.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取16000ml水，加热至80℃，将400.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为16000ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取60000ml水，加热至80℃，将400.0g甘草加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为60000ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取27000ml水，加热至80℃，将300.0g杭菊花加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为27000ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取100ml王枣子叶水提液，取60ml甜叶菊水提液，取40ml甘草水提液，取130ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例8药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶250.0g，甜叶菊10.0g，甘草200.0g，杭菊花150.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取20000ml水，加热至80℃，将250.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为20000ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取500ml水，加热至80℃，将10.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取8000ml水，加热至80℃，将200.0g甘草加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为8000ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取12000ml水，加热至80℃，将150.0g杭菊花加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为12000ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取20ml王枣子叶水提液，取200ml甜叶菊水提液，取40ml甘草水提液，取70ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例9药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶10.0g，甜叶菊10.0g，甘草10.0g，杭菊花10.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将10.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将10.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将10.0g甘草加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取400ml水，加热至80℃，将10.0g杭菊花加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为500ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取110ml王枣子叶水提液，取30ml甜叶菊水提液，取40ml甘草水提液，取150ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例10药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶25.0g，甜叶菊20.0g，甘草1.0g，杭菊花15.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取600ml水，加热至80℃，将25.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为600ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取800ml水，加热至80℃，将20.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为800ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取100ml水，加热至80℃，将1.0g甘草加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为100ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取600ml水，加热至80℃，将15.0g杭菊花加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为600ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取100ml王枣子叶水提液，取50ml甜叶菊水提液，取40ml甘草水提液，取140ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例11药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶25.0g，甜叶菊20.0g，甘草20.0g，杭菊花1.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过2h。
(3)制备王枣子叶水提取液：称取1500ml水，加热至80℃，将25.0g王枣子叶加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为1500ml时停止加水，得到王枣子叶水提液，待用。
(4)制备甜叶菊水提取液：称取800ml水，加热至80℃，将20.0g甜叶菊加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为900ml时停止加水，得到甜叶菊水提液，待用。
(5)制备甘草水提取液：称取700ml水，加热至80℃，将20.0g甘草加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为700ml时停止加水，得到甘草水提液，待用。
(6)制备杭菊花水提取液：称取200ml水，加热至80℃，将1.0g杭菊花加入，煎煮90min，用过滤网过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为200ml时停止加水，得到杭菊花水提液，待用。
(7)以制备330ml药物组合物为例：取130ml王枣子叶水提液，取30ml甜叶菊水提液，取40ml甘草水提液，取130ml杭菊花水提液，将上述四种水提液混合均匀，得到混合液，所述混合液即为药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(8)灌装及封口：将混合液加热至85℃，趁热灌装并封口；
(9)杀菌：置于12l℃高压灭菌锅灭菌15min；
(10)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例12药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶1.0g，甜叶菊25.0g，甘草20g，杭菊花30g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用水煎煮的间隔不得超过1h。
(3)制备水提液：将上述四种原料放入提取罐中，加入2300ml水，搅拌，加热到80℃，煎煮1h，过滤去除药渣，收集滤液。加水到滤液中定容，至体积为2300ml时停止加水，得到四种原料的水提液的混合液，分装到330ml的易拉罐中，即得到药物组合物。也可以采用其它形式的包装。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(4)灌装及封口：将混合液加热至80℃，趁热灌装并封口；
(5)杀菌：置于100℃高压灭菌锅灭菌15min；
(6)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例13药物组合物的制备
(1)称取王枣子叶18.0g，甜叶菊25.0g，甘草10.0g，杭菊花5.0g。
(2)对上述4种药材分别进行多次漂洗，直至漂洗水基本变清为止。每种药材从清洗结束到开始用乙醇提取的时间间隔不得超过1h。
(3)制备醇提液：将上述四种原料放入提取罐中，加入3000ml 95％的乙醇，搅拌，加热，回流1.5h，过滤去除药渣，收集滤液。将滤液于50℃下，进行减压浓缩，得到含有四种原料的提取液浸膏，置55℃下，烘3h，得到干燥好的浸膏，称取10g浸膏，加入300ml水溶解，得到药物组合物。
为了让药物组合物能够长时间保藏，作为本实施例的进一步优选，还可以对药物组合物进行进一步处理，包括如下步骤：
(4)灌装及封口：将混合液加热至90℃，趁热灌装并封口；
(5)杀菌：置于105℃高压灭菌锅灭菌20min；
(6)冷却：冷却至35℃以下，进行外包装，得到成品。
实施例14药物组合物增强免疫力功能活性研究
一、试药、动物和仪器
药物组合物、RPMI1640细胞培养液、酸性异丙醇溶液、SA缓冲液、都氏试剂、碳酸钠、印度墨汁、琼脂、PBS缓冲液、Giemsa染液、绵羊红细胞(SRBC)、鸡红细胞、MTT、刀豆蛋白A、无菌Hank's液、补体(豚鼠血清)、清洁级ICR雌性小鼠。
其中，药物组合物，取自实施例5得到的药物组合物成品；绵羊红细胞(SRBC)，广州鸿泉生物科技有限公司生产；鸡红细胞，广州鸿泉生物科技有限公司生产；MTT，来自北京索莱宝科技有限公司；刀豆蛋白A(也即ConA)，来自北京索莱宝科技有限公司；无菌Hank's液，天津市灏洋生物制品科技有限责任公司生产；补体(豚鼠血清)，广州鸿泉生物科技有限公司生产；DMSO，无锡展望化工试剂有限公司生产；印度墨汁，上海源叶生物科技有限公司生产；清洁级ICR雌性小鼠，源自南京大学-南京生物医药研究院；RPMI1640细胞培养液，吉诺生物医药技术有限公司生产；酸性异丙醇溶液，国药集团化学试剂有限公司；SA缓冲液，实验室自己配制；都氏试剂，sigma公司生产；碳酸钠，国药集团化学试剂有限公司；琼脂，国药集团化学试剂有限公司；PBS缓冲液，北京索莱宝科技有限公司；Giemsa染液，北京索莱宝科技有限公司。
仪器：FA1604电子分析天平(上海天平仪器厂)、722分光光度仪(上海分析仪器厂)、CO2恒温培养箱(SHEL-LAB公司)、ELX800酶标仪(BioTek公司)，3K15台式冷冻离心机(Sigma公司)、BX53显微镜(日本OLYMPUS公司)、超净工作台(苏州宏瑞净化科技有限公司)、恒温水浴锅(上海建恒仪器)、高压灭菌器(山东博科公司)、96孔细胞板(FALCON公司)、微量注射器(上海上天精密仪器公司)。
二、实验方法及实验结果
1药物组合物对小鼠体重的影响
1.1实验方法
选取清洁级ICR雌性小鼠，体重18～22g，在室温20～25℃，相对湿度55～65％，以基础饲料喂饲3天后。按随机分组原则分为实验组和对照组，其中实验组包括低剂量组(20ml/kg)、中剂量组(40ml/kg)和高剂量组(80ml/kg)。实验组以相应剂量的药物组合物灌胃，对照组均以20ml/kg蒸馏水灌胃。每天一次，连续灌胃30天。实验组所用药物组合物来源于实施例5得到的药物组合物成品。
1.2实验结果
如表1，实验中各组小鼠的生长状况良好，各剂量组小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，生理体征、外观、行为等均未见异常。表明了本发明的药物组合物对小鼠的体重的没有显著影响。
表1药物组合物对小鼠体重的影响
注：*表示与对照组相比P<0.05。
2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验
2.1实验方法
选取清洁级ICR雌性小鼠，体重18～22g，在室温20～25℃，相对湿度55～65％，以基础饲料喂饲3天后，按随机分组原则分为对照组和实验组，其中实验组包括低剂量组(20ml/kg)、中剂量组(40ml/kg)和高剂量组(80ml/kg)。实验组以相应剂量的药物组合物灌胃，对照组均以20ml/kg蒸馏水灌胃。每天一次，连续灌胃30天。实验组所用药物组合物来源于实施例5得到的药物组合物成品。
对每组小鼠无菌取脾，置Hank's液中，制成脾细胞悬液，用完全培养液调整细胞浓度为2.5×106个/ml。将每一份脾细胞悬液分两孔加入到24孔培养板中，1ml/孔，一孔加入75μl ConA液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作为对照组，置5％CO2，37℃培养72h，在培养结束前5h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，用酶标测定仪测光密度值。
按照MTT法，在570nm波长处测定吸光度值(OD)。用加ConA孔的光密度度值减去不加ConA孔的光密度度值代表淋巴细胞的增殖能力。公式如下：
光密度差值＝加ConA孔的吸光度值—不加ConA孔的光密度度值
2.2实验结果
如表2，ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验，经方差分析，各实验组小鼠的淋巴细胞转化能力与对照组比，显著增强，光密度差值均有显著性差异(P<0.05)，说明本发明的药物组合物能够提高实验小鼠的免疫功能。
表2药物组合物对小鼠淋巴细胞转化的影响
注：*表示与对照组相比P<0.05；**表示与对照组相比P<0.01。
3迟发型变态反应(DTH)实验
3.1实验方法及材料
选取清洁级ICR雌性小鼠，体重18～22g，在室温20～25℃，相对湿度55～65％，以基础饲料喂饲3天后，按随机分组原则分为对照组和实验组，其中实验组包括低剂量组(20ml/kg)、中剂量组(40ml/kg)和高剂量组(80ml/kg)。实验组以相应剂量的药物组合物灌胃，对照组均以20ml/kg蒸馏水灌胃。每天一次，连续灌胃30天。实验组所用药物组合物来源于实施例5得到的药物组合物成品。
于26天灌胃后，给每组小鼠腹腔注射2％(V/V)的绵羊红细胞(SRBC)，4d后在其左后足跖部皮下注射20％(V/V)SRBC进行攻击。于攻击前和攻击后24h分别测量左后足跖部厚度，计算攻击前、后的差值。
3.2实验结果
如表3，迟发型变态反应(DTH)实验，经方差分析，实验组肿胀度均高于对照组，中、高剂量组对小鼠迟发性变态反应的影响与对照组相比，显著增强，足跖肿胀度有显著性差异(P<0.05)，表明药物组合物能够显著提高小鼠的细胞免疫功能。
表3药物组合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
注：*表示与对照组相比P<0.05；**表示与对照组相比P<0.01。
4血清溶血素测定(半数溶血值的测定)
4.1实验方法及材料：
选取清洁级ICR雌性小鼠，体重18～22g，在室温20～25℃，相对湿度55～65％，以基础饲料喂饲3天后，按随机分组原则分为对照组和实验组，其中实验组包括低剂量组(20ml/kg)、中剂量组(40ml/kg)和高剂量组(80ml/kg)。实验组以相应剂量的药物组合物灌胃，对照组均以20ml/kg蒸馏水灌胃。每天一次，连续灌胃30天。实验组所用药物组合物来源于实施例5得到的药物组合物成品。
于26天灌胃后，将脱纤维处理后的羊血处理后(SRBC)，每只鼠经腹腔注射2％(V/V)SRBC 0.2ml进行免疫。4d后摘其眼球取血，进行血清半数溶血值(HC50)测定。
4.2实验结果
如表4，在小鼠血清溶血素测定实验中，经方差分析，各实验组与对照组相比，半数溶血值有显著性差异(P<0.05)，并且呈现一定的剂量依赖性。表明药物组合物对小鼠的体液免疫具有显著的增强作用。
表4药物组合物对小鼠血清溶血素的影响
注：*表示与对照组相比P<0.05；**表示与对照组相比P<0.01。
5药物组合物对小鼠碳廓清的影响
5.1实验方法及材料
选取清洁级ICR雌性小鼠，体重18～22g，在室温20～25℃，相对湿度55～65％，以基础饲料喂饲3天后，按随机分组原则分为对照组和实验组，其中实验组包括低剂量组(20ml/kg)、中剂量组(40ml/kg)和高剂量组(80ml/kg)。实验组以相应剂量的药物组合物灌胃，对照组均以20ml/kg蒸馏水灌胃。每天一次，连续灌胃30天。实验组所用药物组合物来源于实施例5得到的药物组合物成品。
末次灌胃后，从小鼠尾静脉注入稀释4倍的印度墨汁，注入后2min、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立即加到2ml 0.1％Na2CO3溶液中。以0.1％Na2CO3溶液作空白对照，分光光度仪检测600nm波长处的OD值。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，称重，计算吞噬指数。
5.2实验结果
如表5，小鼠碳廓清实验中，各实验组与对照组小鼠相比，吞噬指数有显著性差异(P<0.05)。表明药物组合物各实验组对小鼠的体液免疫具有显著的增强作用。
表5药物组合物对小鼠碳廓清的影响
注：*表示与对照组相比P<0.05；**表示与对照组相比P<0.01。
6药物组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
6.1实验方法及材料
选取清洁级ICR雌性小鼠，体重18～22g，在室温20～25℃，相对湿度55～65％，以基础饲料喂饲3天后，按随机分组原则分为对照组和实验组，其中实验组包括低剂量组(20ml/kg)、中剂量组(40ml/kg)和高剂量组(80ml/kg)。实验组以相应剂量的药物组合物灌胃，对照组均以20ml/kg蒸馏水灌胃。每天一次，连续灌胃30天。实验组所用药物组合物来源于实施例5得到的药物组合物成品。
于26天灌胃后，小鼠腹腔注射2％(V/V)SRBC 0.2ml。于末次给药后颈椎脱臼处死小鼠，给予每只小鼠腹腔注射4ml无菌Hank’s液，将0.5ml腹腔洗液与0.5ml 0.1％鸡血红细胞混匀，取出0.5ml混合液加入琼脂圈孵育培养、染色、冲洗、晾干后，显微镜下观察计数(“滴片法”检测)，计算吞噬率和吞噬指数。
6.2实验结果
如表6，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的实验中，经方差分析，药物组合物各实验组与对照组小鼠相比，腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数有显著性差异(P<0.05)。表明药物组合物各实验组对小鼠的免疫功能具有显著的增强作用。
表6药物组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
注：*表示与对照组相比P<0.05；**表示与对照组相比P<0.01。
实施例15药物组合物各提取液口感协同作用研究
1实验方法及材料：
组别1-7中，王枣子水提取液、甜叶菊水提取液、甘草水提取液、杭菊花水提取液的制备方法均采用实施例6中所用制备方法提取得到。组别5、组别6、组别7中各水提取液比例均为体积比。如王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1，表示王枣子水提取液的体积：甜叶菊水提取液的体积：甘草水提取液的体积＝2：1：1。
1.1实验结果
考察各提取液对药物组合物口感的影响，评价结果如表7，表明单独使用某种原料水提取液或者三种水提取液组合物，其口感都不好。实施例1-6所得成品各组口感基本协调、适宜，优于单独使用某种原料的水提取液和三种提取液组合物的口感。实施例所得成品中，实施例5和实施例6所得成品，口感适宜，各成分风味明显且协调，香气清新，色泽均匀，呈黄褐色，澄清透明。
表7各提取液对药物组合物口感的影响
实施例16药物组合物协同作用研究
1增强免疫力的协同作用研究
1.1实验方法及材料
选取清洁级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄不限，随机分为18个实验组。组别1-7，每组给予相应的提取液，比如组别1，给予的是王枣子水提取液。组别8-18，每组给予相应实施例所得成品，比如组别8，给予的是实施例1所得成品。分组如下：
组别1为王枣子水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别2为甜叶菊水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别3为甘草水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别4为菊花水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别5为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1组，每次给药量为80ml/kg；
组别6为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：杭菊花水提取液＝2：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别7为甜叶菊水提取液：甘草水提取液：杭菊花水提取液＝1：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别8为实施例1所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别9为实施例2所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别10为实施例3所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别11为实施例4所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别12为实施例5所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别13为实施例6所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别14为实施例7所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别15为实施例8所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别16为实施例9所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别17为实施例10所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别18为实施例11所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别1-7中，所用的各种水提液，如王枣子水提取液、甜叶菊水提取液、甘草水提取液、杭菊花水提取液的制备方法均采用实施例6中所用制备方法提取得到。组别5、组别6、组别7中各提取液比例均为体积比。如组别5中，王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1，其表示组别5中，王枣子提取液的体积：甜叶菊提取液的体积：甘草水提取液的体积＝2：1：1。
组别1-18均采用灌胃方式给药，每天一次，连续灌胃20天。于最后给药2h后小鼠腹腔注射2％(V/V)SRBC 0.2ml。96h后颈椎脱臼处死小鼠，给予每只小鼠腹腔注射4ml无菌Hank’s液，将0.5ml腹腔洗液与0.5ml 0.1％鸡血红细胞混匀，取出0.5ml混合液加入琼脂圈孵育培养、染色、冲洗、晾干后，显微镜下观察计数(“滴片法”检测)，计算吞噬率和吞噬指数。
1.2实验结果
结果分析如表8，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的实验中，三个提取液组合物组(组别5-7)与单个提取液组(组别1-4)相比，腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数都有较明显的提高；各药物组合物成品组(组别8-18)与组别5相比，腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数都有显著性提高。表明药物组合物成品组比单个提取液组和三个提取液组合物组相比，对小鼠的免疫功能具有显著的增强作用。
表8对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
注：与组别5比：*P<0.05，**P<0.01。
2抗炎协同作用研究
2.1实验方法及材料
选取清洁级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄不限，随机分为20个实验组。组别3-9，每组给予相应的提取液，比如组别3，给予的是王枣子水提取液。组别10-20，每组给予相应实施例所得成品，比如组别10，给予的是实施例1所得成品。分组如下：
组别1为空白对照组，给予生理盐水80ml/kg；
组别2为模型对照组，给予生理盐水80ml/kg；
组别3为王枣子水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别4为甜叶菊水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别5为甘草水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别6为杭菊花水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别7为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1组，每次给药量为80ml/kg；
组别8为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：杭菊花水提取液＝2：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别9为甜叶菊水提取液：甘草水提取液：杭菊花水提取液＝1：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别10为实施例1所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别11为实施例2所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别12为实施例3所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别13为实施例4所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别14为实施例5所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别15为实施例6所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别16为实施例7所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别17为实施例8所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别18为实施例9所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别19为实施例10所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别20为实施例11所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别3-9中，所用的各种水提液，如王枣子水提取液、甜叶菊水提取液、甘草水提取液、杭菊花水提取液的制备方法均采用实施例6中所用制备方法提取得到。
组别7-9中各提取液比例均为体积比。如组别7中，王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1，其表示组别7中，王枣子提取液的体积：甜叶菊提取液的体积：甘草水提取液的体积＝2：1：1。
组别1-20均连续灌胃7天，每天一次。末次给药后1h(组别1和组别2是末次给予生理盐水后)，除空白对照组外，在每只小鼠左耳涂二甲苯50μL，右耳为对照，涂二甲苯45min后处死小鼠，沿耳廓线剪下左右耳，用直径5mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，分别称重，以左、右耳片重量之差为肿胀度。计算抑制率，如表9。
抑制率＝(模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度×100％
2.2实验结果
如表9所示，小鼠耳廓二甲苯致炎的实验中，模型组与空白对照组有显著性差异(P<0.01)，表明模型很成功。单个药材提取液组(组别3-6)及三个提取液组合物组(组别7-9)与模型组相比，具有一定程度抑制小鼠耳肿胀作用。药物组合物各成品组(组别10-20)与组别7相比，对小鼠耳廓二甲苯致炎症具有显著性抑制(P<0.05)。表明药物组合物各成品组具有较好的协同作用，较三个提取液组合物组(组别7-9)，对小鼠耳廓二甲苯致炎症具有显著的抑制作用(P<0.05)。
表9对小鼠耳廓二甲苯致炎的影响
注：与空白组比：##P<0.01；与组别7比：*P<0.05，**P<0.01。
3降血糖协同作用研究
3.1实验方法及材料
造模：建立小鼠糖尿病(DM)模型。选取清洁级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄不限，标记，禁食不禁水13h，尾静脉注射四氧嘧啶100mg/kg，3d后测空腹血糖，血糖浓度达到11.1mmol/L以上者可选用。
取造模成功小鼠，随机分为20组。组别3-20中，对每组造模成功小鼠的给予相应组别的成分。具体分组如下：
组别1为空白对照组，给予生理盐水80ml/kg；
组别2为DM模型组，给予生理盐水80ml/kg；
组别3为王枣子水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别4为甜叶菊水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别5为甘草水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别6为杭菊花水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别7为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1组，每次给药量为80ml/kg；
组别8为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：杭菊花水提取液＝2：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别9为甜叶菊水提取液：甘草水提取液：杭菊花水提取液＝1：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别10为实施例1所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别11为实施例2所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别12为实施例3所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别13为实施例4所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别14为实施例5所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别15为实施例6所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别16为实施例7所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别17为实施例8所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别18为实施例9所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别19为实施例10所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别20为实施例11所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别3-9中，所用的各种水提液，如王枣子水提取液、甜叶菊水提取液、甘草水提取液、杭菊花水提取液的制备方法均采用实施例6中所用制备方法提取得到。
组别7-9各提取液比例均为体积比。如组别7中，王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1，其表示组别7中，王枣子提取液的体积：甜叶菊提取液的体积：甘草水提取液的体积＝2：1：1。
模型组及空白对照组以生理盐水灌胃。每天一次，连续灌胃7天，第8天空腹测血糖。期间小鼠自由饮水和摄食，以普通饲料喂养。组别3-20均以相应的成分及剂量给药，每天一次，连续灌胃7天，第8天空腹测血糖。结果如表10。
3.2实验结果
如表10所示，对DM小鼠的血糖影响的实验中，DM组与空白对照组有显著性差异(P<0.01)，表明模型很成功。单个药材提取液组(组别3-6)及三个提取液组合物组(组别7-9)与模型组相比，对DM小鼠的血糖具有一定程度抑制作用。药物组合物各成品组(组别10-20)与组别7相比，对DM小鼠的血糖具有显著性抑制作用(P<0.05)。表明药物组合物各成品组具有较好的协同降血糖作用，较三个提取液组合物组(组别7-9)，对DM小鼠的血糖具有显著性抑制作用(P<0.05)。
表10对DM小鼠的血糖影响
注：与空白组比：##P<0.01；与组别7比：*P<0.05，**P<0.01。
4抗疲劳协同研究
4.1实验方法及材料
选取清洁级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄不限，随机分为16个实验组，每组给予相应组别的成分。分组如下：
组别1为王枣子水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别2为甜叶菊水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别3为甘草水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别4为杭菊花水提取液组，每次给药量为80ml/kg；
组别5为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1组，每次给药量为80ml/kg；
组别6为王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：杭菊花水提取液＝2：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别7为甜叶菊水提取液：甘草水提取液：杭菊花水提取液＝1：1：2组，每次给药量为80ml/kg；
组别8为实施例1所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别9为实施例2所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别10为实施例3所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别11为实施例4所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别12为实施例5所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别13为实施例6所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别14为实施例7所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别15为实施例8所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别16为实施例9所得成品组，每次给药量为80ml/kg；
组别1-7中，所用的各种水提液，如王枣子水提取液、甜叶菊水提取液、甘草水提取液、杭菊花水提取液的制备方法均采用实施例6中所用制备方法提取得到。组别5、组别6、组别7中各提取液比例均为体积比。如组别5中，王枣子水提取液：甜叶菊水提取液：甘草水提取液＝2：1：1，其表示组别5中，王枣子提取液的体积：甜叶菊提取液的体积：甘草水提取液的体积＝2：1：1。
每组均连续灌胃12d，每天一次。末次给药后2h，负荷体重5％的铅丝，小鼠置于水深30cm，50cm×40cm×40cm水箱游泳，水温30±2℃。参照MCARDLE推荐力竭实验的判断标准，记录游泳开始时间至力竭的时间作为小鼠负重游泳时间。如表11。
4.2实验结果
如表11所示，对小鼠负重游泳持续时间影响的实验中，组别1-7中的提取液组合物能够适当地延长小鼠负重游泳持续的时间。药物组合物各成品组(组别8-16)与组别5相比，能够显著地延长小鼠负重游泳持续的时间(P<0.05)。表明药物组合物各成品组具有较好的协同抗疲劳作用，较三个提取液组合物组(组别5-7)，对小鼠负重游泳持续时间具有显著性延长作用(P<0.05)。
表11对小鼠负重游泳持续时间的影响
注：与组别5比：*P<0.05，**P<0.01。
Claims (14)
1.一种药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
2.根据权利要求1所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
3.根据权利要求2所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
4.根据权利要求3所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
5.根据权利要求4所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
6.根据权利要求5所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
7.根据权利要求6所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
8.根据权利要求6所述的药物组合物，由如下重量份比例的原料制备得到：
9.根据权利要求1所述的药物组合物，由如下重量份比例的水提液制备得到：
10.一种药物组合物的制备方法，使用权利要求1-9任一项所述的一种药物组合物，包括如下步骤：
(1)制备水提液：
将王枣子叶用水提取，过滤，得到王枣子叶水提取液；
将甜叶菊用水提取，过滤，得到甜叶菊水提取液；
将甘草用水提取，过滤，得到甘草水提取液；
将杭菊花用水提取，过滤，得到杭菊花水提取液；
(2)混匀：将各所述水提液，混合，得到混合液，所述混合液即为所述药物组合物；
所述各组分制备水提液过程中水提的温度为80～100℃，提取时间为30～90min。
11.一种药物组合物的制备方法，使用权利要求1-9任一项所述的一种药物组合物，包括如下步骤：
将王枣子叶、甜叶菊、甘草和杭菊花混合，加水，搅拌，煎煮，过滤，得到混合提取液，所述混合提取液即为所述药物组合物；所述各组分制备水提液过程中水提的温度为80～100℃，提取时间为30～90min。
12.根据权利要求10所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)之后还包括如下步骤：
(3)灌装及封口：将混合液加热至80～100℃，趁热灌装并封口；
(4)杀菌：置于100～12l℃高压灭菌锅灭菌15～45min；
(5)冷却：冷却至35℃以下，包装。
13.一种药物组合物，采用权利要求10-12任意一项制备方法制备得到。
14.权利要求1-9任意一项药物组合物在制备降血糖药物中的应用。
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