CN108617510B - 一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法，本发明利用植物组织培养技术对宽叶弹簧草鳞茎进行诱导再生，并进行继代培养、生根培养以及后续的炼苗移植，提高了后代稳定性、缩短诱导周期、提高增殖率、提高移植成活率。

Description

一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法。
背景技术
宽叶弹簧草(Ornithogalum concodianum)属百合科虎眼万年青属多年生观赏多肉植物。具圆形或不规则形鳞茎，地下部分表皮黄白色，露出土面的部分经日晒后为绿白色。肉质叶由鳞茎顶部抽出，最初直立生长，后扭曲盘旋。它们多产于非洲南部的沙漠地带，南非是其主产地。作为珍奇花卉，宽叶弹簧草在自然条件下，生长缓慢，繁殖率低，且夏天处于休眠状态。国内目前数量稀少，价格昂贵，一粒种子的价格就高达30-50元。但目前对宽叶弹簧草组织培养报道甚少，仅有报道以花蕾作为外植体进行组培繁殖。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法。
本发明的技术方案如下：
一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法，包括如下步骤：
(1)取直径1～3cm，处于休眠期的宽叶弹簧草鳞茎为材料在阴凉处晾7～10d后，剥除其外层干枯的鳞片，切除根部，冲洗干净，然后于在超净工作台，用65～75％的酒精浸泡20～60s，再用含有适量吐温-80的0.08～0.12wt％的升汞溶液消毒5～10min，用无菌水冲洗3～5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分，切除上端鳞片，留下直径1.0～2.0cm的消毒鳞茎；
(2)在无菌条件下，将消毒后的鳞茎2分切后接入诱导培养基中进行培养以获得初代培养诱导的朱顶红小鳞茎，每瓶接1个，以防止交叉感染；该步骤的培养条件为温度24～32℃，暗培养4～11d后，转入光培养，每天光照培养9～11h，光照强度为1900～2100lx；该诱导培养基的配方如下：MS+6-BA 1.0～3.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～40g+卡拉胶5.0～8.0g/L，pH＝5.7～5.9，其中，MS中的KH2PO4加倍；
(3)将上述初代培养诱导的朱顶红小鳞茎的上半部分切除，带有鳞茎盘的下半部分切成两块，接入继代培养基中进行培养以获得直径≧0.5cm的继代增殖所长出的小鳞茎；该步骤的培养条件为温度24～32℃，每天光照培养9～11h，光照强度为1900～2100lx；该继代培养基的配方如下：MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+KT 0.5～2.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖20～40g+卡拉胶5.0～8.0g/L，pH＝5.7～5.9，其中，MS中的KH2PO4加倍；
(4)将上述继代增殖所长出的小鳞茎分离，在离小鳞茎0.8～1.2cm高的地方将叶片切除，接种到生根培养基中进行培养以获得具3条根以上、带3～4片叶、且鳞茎直径≧0.8cm的生根苗；该步骤的培养条件为温度24～32℃，每天光照培养9～11h，光照强度为1900～2100lx；该生根培养基的配方如下：1/2MS+IBA0.5～3.0mg/L+KT 0.1～0.5mg/L+NAA0.5～2.0mg/L+活性炭0.5～2.0g/L+蔗糖20～40g+卡拉胶5.0～8.0g/L+活性炭0.5～2.0g/L，pH＝5.7～5.9，其中，1/2MS中的KH2PO4加倍；
(5)将上述生根苗移到炼苗大棚，进行适应性炼苗14～16d，获得炼好的生根苗；
(6)将上述炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，在离鳞茎1.8～2.2cm将叶片切除，用内吸性的杀菌剂45～55％多菌灵可湿性粉剂500～800倍液或45～55％甲基托布津可湿性粉剂700～1000倍液浸泡1～2min消毒，然后放在阴凉通风处将水分晾干，获得组培苗；
(7)将上述组培苗移栽入到消毒好的移栽基质中，移栽时有1/4～1/2的鳞茎埋入土内即可，然后及时浇定植水。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(1)为：取直径1～3cm，处于休眠期的宽叶弹簧草鳞茎为材料在阴凉处晾7～10d后，剥除其外层干枯的鳞片，切除根部，冲洗干净，然后于在超净工作台，用70％的酒精浸泡20～60s，再用含有适量吐温-80的0.1wt％的升汞溶液消毒5～10min，用无菌水冲洗3～5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分，切除上端鳞片，留下直径1.0～2.0cm的消毒鳞茎。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)中的培养条件为：温度25～30℃，暗培养5～10d后，转入光培养，每天光照培养10h，光照强度为2000lx。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(3)中的培养条件为：温度25～30℃，每天光照培养10h，光照强度为2000lx。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(4)中的培养条件为：温度25～30℃，每天光照培养10h，光照强度为2000lx。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(5)为：将上述生根苗移到炼苗大棚，进行适应性炼苗15d，获得炼好的生根苗。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(6)为：将上述炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，在离鳞茎1.9～2.2cm将叶片切除，用内吸性的杀菌剂50％多菌灵可湿性粉剂500～800倍液或50％甲基托布津可湿性粉剂700～1000倍液浸泡1～2min消毒，然后放在阴凉通风处将水分晾干，获得组培苗。
本发明的有益效果是：本发明利用植物组织培养技术对宽叶弹簧草鳞茎进行诱导再生，并进行继代培养、生根培养以及后续的炼苗移植，提高了后代稳定性、缩短诱导周期、提高增殖率、提高移植成活率。
附图说明
图1为本发明实施例1中诱导培养获得的小鳞茎的照片。
图2为本发明实施例1中继代培养获得的小鳞茎的照片。
图3为本发明实施例1中生根培养获得的生根苗的照片。
图4为本发明实施例1中移栽后的成活照片。
图5为本发明实施例1中长势旺盛的宽叶弹簧草的照片。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
1培养基配制：
1)诱导培养基：MS(其中KH2PO4加倍)+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.0g/L，pH＝5.8
2)继代培养基：MS(其中KH2PO4加倍)+6-BA 1.0mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.0g/L，pH＝5.8
3)生根培养基：1/2MS(其中KH2PO4加倍)+IBA 1.0mg/L+KT 0.2mg/L+NAA 1.0mg/L+活性炭1.0g/L+蔗糖20g/L+卡拉胶6.0g/L，pH＝5.8
2.外植体的选取与消毒：
取直径2cm，处于休眠期的宽叶弹簧草鳞茎为材料在阴凉处晾8d。剥除其外层干枯的鳞片，切除根部，冲洗干净。在超净工作台，用70％的酒精浸泡30s，再用0.1％的升汞(加1～2滴吐温-80)消毒5～10min，用无菌水冲洗4次后，用无菌滤纸滤干残余的水分。然后，切除消毒过的鳞茎上端鳞片，留下直径1.5cm鳞茎。
3、鳞茎的诱导培养
在无菌条件下，将消毒后的鳞茎2分切后接入诱导培养基。每瓶接1个，以防止交叉感染。培养条件为温度26～28℃。暗培养7d后，转入光培养，每天光照培养10h,光照强度为2000lx。7d后外侧鳞片开始向外开张，鳞茎切口处的生长点膨大，并逐渐形成小鳞茎，鳞茎顶端长成新叶片。30d后诱导率可达到60％，所获得的小鳞茎如图1所示。
3、鳞茎继代培养
将初代培养诱导的朱顶红小鳞茎的上半部分切除，带有鳞茎盘的下半部分切成两块，接入继代培养基。将鳞茎盘的下半部分切成两块接入继代培养基中，培养条件为温度26～28℃，每天光照培养10h,光照强度为2000lx。7d后最外层鳞片的基部外侧便开始萌动，15d左右露白，40d左右可以形成直径为0.5cm的小鳞茎。40d后统计增殖率为3.57倍/40d，所获得的小鳞茎如图2所示。
4、鳞茎生根培养
将继代增殖所长出的小鳞茎(直径≧0.5cm)分离，在离小鳞茎1.0cm左右高的地方将叶片切除，接种到生根培养基。将小鳞茎接入生根培养基进行培养，培养条件为温度26～28℃，每天光照培养10h,光照强度为2000lx。30d左右小鳞茎增粗长壮成为球状的鳞茎，上部叶片开始伸长并转绿，底部产生白色的根。生根培养30d，生根率可达100％，所获得的生根苗如图3所示。
5、鳞茎的移植
5.1炼苗将具3条根以上、带3～4片叶、且鳞茎直径≧0.8cm的生根苗，移到炼苗大棚，进行适应性炼苗15d。
5.2生根苗的清洗及消毒将炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，在离鳞茎2.0cm左右将叶片切除，用内吸性的杀菌剂50％多菌灵可湿性粉剂500～800倍液或50％甲基托布津可湿性粉剂700～1000倍液浸泡1～2分钟消毒,将消毒好的组培苗放在阴凉通风处将水分晾干。
5.3移栽：然后移入到消毒好的移栽基质中(基质一般要求疏松透气、排水要好，含适量的腐殖质，以中性为宜。基质在使用之前，均须严格消毒)。基质配比为：泥炭土：园土：珍珠岩(体积比)＝3:3:1；移栽容器为：6.5cm*6.5cm*6.5cm的小方杯。移栽时有1/3左右的鳞茎埋入土内即可(种的太深浇水后鳞茎容易烂掉)。移栽后及时浇“定植水”，移栽成活后如图4所示。
5.4移栽后的管理
5.4.1水分管理：宽叶弹簧草喜湿润环境。生长期宜保持基质湿润而不积水，不能等到基质完全干透再浇。一般在基质表层稍干白而中下部湿润时浇水，浇水一定要浇透。若长期干旱、缺水，植株生长停滞，叶片发黄，甚至枯萎。但长期积水，则鳞茎容易腐烂。宽弹属“冬种型”，夏天要休眠，休眠时控制水分，避免雨淋。
5.4.2光照管理：宽弹喜凉爽，阳光充足的环境。在其生长期要给予充足光照，若光照不足，叶片就会长而细弱，且卷曲程度差，很难显示其独有的魅力。在阳光充足的地方，则叶片粗壮，盘旋扭曲，具较高的观赏性。但要避免阳光直晒，以免造成叶尖干枯，影响其观赏性。
5.4.3温度管理：宽弹怕湿热，耐半阴，较耐寒。属“冬型种”多肉植物，具有夏季高温休眠，秋季到春季生长的习性。每年10月至次年3月为其生长旺盛期。到5月中下旬稳定升高，叶片逐渐枯萎，其将进入休眠状态。8月底天气转凉，新叶从鳞茎顶端长出。移栽后做好田间管理，定期喷水、杀菌、喷肥。60d后植株的成活率可达92％，长势旺盛，如图5所示。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (7)

1.一种提高宽叶弹簧草组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）取直径1~3cm，处于休眠期的宽叶弹簧草鳞茎为材料在阴凉处晾7~10d后，剥除其外层干枯的鳞片，切除根部，冲洗干净，然后置于超净工作台，用65~75%的酒精浸泡20~60s，再用含有适量吐温-80的0.08~0.12wt%的升汞溶液消毒5~10min，用无菌水冲洗3~5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分，切除上端鳞片，留下直径1.0~2.0cm的消毒好的鳞茎；
（2）在无菌条件下，将消毒后的鳞茎2分切后接入诱导培养基中进行培养，以获得初代培养诱导的朱顶红小鳞茎，每瓶接1个，以防止交叉感染；该步骤的培养条件为温度24~32℃，暗培养4~11d后，转入光培养，每天光照培养9~11h，光照强度为1900~2100lx；该诱导培养基的配方如下：MS+6-BA 2.0mg/L+ NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L +卡拉胶6.0g/L ，pH=5.8，其中，MS中的KH2PO4 加倍；
（3）将上述初代培养诱导的朱顶红小鳞茎的上半部分切除，带有鳞茎盘的下半部分切成两块，接入继代培养基中进行培养以获得直径≥0.5cm的继代增殖所长出的小鳞茎；该步骤的培养条件为温度24~32℃，每天光照培养9~11h，光照强度为1900~2100lx；该继代培养基的配方如下：MS +6-BA 1.0mg/L+ KT 1.0mg/L+ NAA 0.2mg/L +蔗糖30g/L +卡拉胶6.0g/L ，pH=5.8，其中，MS中的KH2PO4 加倍；
（4）将上述继代增殖所长出的小鳞茎分离，在离小鳞茎0.8~1.2cm高的地方将叶片切除，接种到生根培养基中进行培养，以获得具3条根以上、带3~4片叶、且鳞茎直径≥0.8cm的生根苗；该步骤的培养条件为温度24~32℃，每天光照培养9~11h，光照强度为1900~2100lx；该生根培养基的配方如下：1/2MS+IBA 1.0mg/L+ KT 0.2mg/L+ NAA 1.0mg/L+活性炭1.0g/L+蔗糖20g/L +卡拉胶6.0g/L ，pH=5.8，其中，1/2 MS中的KH2PO4 加倍；
（5）将上述生根苗移到炼苗大棚，进行适应性炼苗14~16d，获得炼好的生根苗；
（6）将上述炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，在离鳞茎1.8~2.2cm将叶片切除，用内吸性的杀菌剂45~55%多菌灵可湿性粉剂 500~800 倍液或 45~55%甲基托布津可湿性粉剂 700~1000 倍液浸泡 1~2 min消毒，然后取出放在阴凉通风处将水分晾干，获得组培苗；
（7）将上述组培苗移栽入到消毒好的移栽基质中，移栽时有1/4~1/2的鳞茎埋入土内即可，然后及时浇定植水。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）为：取直径1~3cm，处于休眠期的宽叶弹簧草鳞茎为材料在阴凉处晾7~10d后，剥除其外层干枯的鳞片，切除根部，冲洗干净，然后于在超净工作台，用70%的酒精浸泡20~60s，再用含有适量吐温-80的0.1wt%的升汞溶液消毒5~10min，用无菌水冲洗3~5次后，用无菌滤纸滤干残余的水分，切除上端鳞片，留下直径1.0~2.0cm的消毒鳞茎。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的培养条件为：温度25~30℃，暗培养5~10d后，转入光培养，每天光照培养10h，光照强度为2000lx。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的培养条件为：温度25~30℃，每天光照培养10h，光照强度为2000lx。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中的培养条件为：温度25~30℃，每天光照培养10h，光照强度为2000lx。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（5）为：将上述生根苗移到炼苗大棚，进行适应性炼苗15d，获得炼好的生根苗。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（6）为：将上述炼好后的生根苗取出，用水冲洗根部残留的培养基，在离鳞茎1.9~2.2cm将叶片切除，用内吸性的杀菌剂50%多菌灵可湿性粉剂 500~800 倍液或 50%甲基托布津可湿性粉剂 700~1000 倍液浸泡 1~2min消毒，然后放在阴凉通风处将水分晾干，获得组培苗。
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