CN108575558A - 基于农业废弃物原料的菌体培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于农业废弃物原料的菌体培养方法，将农业废弃物作为菌体的培养材料，制作培养基对菌体进行培养，使用该培养基培养菌体子实体，其多糖含量达到原来的基本培养基生产的2.61倍，高达8.26％，有效提高了栽培菌体的药用成分，具有较高的应用价值，此外，中药药渣作为食品行业的废弃物，主要用于燃烧或者作为猪饲料，本发明提供了中药药渣的另一种高附加值的利用方式，和废弃的桑枝一起用于栽培菌体，可以变废为宝，提高了栽培菌体的药用品质，对于今后中药药渣的规模化利用，具有一定的启发意义。
Description
技术领域
本发明属于菌体培养工艺技术领域，涉及一种菌体培养方法，具体是一种基于农业废弃物原料的菌体培养方法。
背景技术
菌体作为一种名贵中药材，不管是在医药行业还是化妆品行业都具有很高的应用价值。而大量的农业废弃物，如桑枝、药渣等，如果处理不当将会造成严重的环境污染。为了更好的利用这些农业废弃物，需要研究一种将农业废弃物作为菌体人工栽培基质，培养菌体的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于农业废弃物原料的菌体培养方法，将桑树、药渣等农业废弃物作为具体培养材料，极大的减少了农业资源的浪费。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
基于农业废弃物原料的菌体培养方法，包括以下步骤：
步骤S1，以农业废弃物为原料，制作菌体培养基，在120-130摄氏度灭菌1.5小时；
步骤S2，待培养基温度下降至30摄氏度以下开始接种；
步骤S3，将接种后的菌体栽培袋搬入菌丝体培养室，室内温度保持在22-28摄氏度，遮光培养；
步骤S4，一周后，当菌丝覆盖整个培养基表面并向下蔓延1-2cm时，打开菌体栽培袋，然后在菌丝体培养室悬挂湿布保持湿度；
步骤S5，培养20-25天后，当菌丝长满菌体栽培袋时,给予一定光照，在菌柄原基出现时，四周遮光，光线只从上方射入，待菌丝生长到所需要的高度后，上方遮光，使光线固定从一侧射入，从而长出菌盖和菌柄垂直的子实体；
步骤S6，加强菌丝体培养室的通风换气，并根据气温的高低缩短和延长通风时间，以保持室内适宜的生长温度，再经过10-15天的培养，当培养基表面出现白色或黄色的突起物时,表示菌丝达到生理成熟；
步骤S7，20-30天后，当子实体的菌盖边缘由黄白色变成红褐色，菌盖已经定型，不再生长，开始采收。
进一步地，所述步骤S1中培养基制作时，加入桑树木屑63％，中药渣20％，玉米粉10％，麸皮5％，石膏粉1％，蔗糖1％，pH自然，其中，料水比为1：1.5。
进一步地，所述步骤S2中，菌体接种时，用报纸包好几个尖底塑料管和接种枪，灭菌，灭菌后在超净台中用无菌的尖底塑料管在菌体栽培袋中间压出一个接种孔，然后接入培养好的固体菌种，在孔的底部接入少量菌丝，同时在孔的上部也接入少量菌丝。
进一步地，所述步骤S2中，菌体接种时，在用打孔器在菌体栽培袋侧面两端戳2-3个孔穴，用接种器由孔中接入菌种，然后将接种孔朝上摆放菌体栽培袋。
进一步地，所述步骤S4中，菌体培养室的空气湿度维持在60-70％。
进一步地，所述步骤S7中，采收时先将菌盖上表面和下表面的孢子粉收集，然后采收子实体，剪去菌柄基部的根皮，晒干或40-50摄氏度烘干保藏。
本发明的有益效果：本发明提供的菌体培养方法，将农业废弃物作为菌体的培养材料，制作培养基对菌体进行培养，使用该培养基培养菌体子实体，其多糖含量达到原来的基本培养基生产的2.61倍，高达8.26％，有效提高了栽培菌体的药用成分，具有较高的应用价值，此外，中药药渣作为食品行业的废弃物，主要用于燃烧或者作为猪饲料，本发明提供了中药药渣的另一种高附加值的利用方式，和废弃的桑枝一起用于栽培菌体，可以变废为宝，提高了栽培菌体的药用品质，对于今后中药药渣的规模化利用，具有一定的启发意义。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种基于农业废弃物原料的菌体培养方法，将农业废弃物作为菌体的培养材料，制作培养基对菌体进行培养。
其中，培养基含水量对菌体生长的影响：菌体子实体组成成分中含量最高的是水，菌体所需的营养物质必须先溶于水，才能被菌丝吸收利用，细胞内的各种生化反应也都要在水溶液中才能进行。水分过低，不能满足生长的需要，而水分过高，容易造成袋内培养料通气不良，不利于菌丝体生长和子实体分化。只有当培养料水分合适时菌丝才能生长得很好，因此选择培养基中料水比大约为1：1.5。
其中，温度对菌体生长的影响：当培养室温度低于20℃时子实体生长极慢，长期低于20℃生长的子实体不仅个小而且光泽差产量低；当培养室温度高于30℃以上子实体停止生长，长期超过30℃，子实体就会僵化不长，因此，菌体栽培过程中培养室温度长期控制在25-28℃，有利于菌体的生长才能得到高产高品质的菌体。
其中，湿度对菌体生长的影响：菌体栽培料本身含有水分，因此菌体菌丝体生长阶段对栽培室内空气相对湿度的要求没那么高；因为菌丝体生长阶段菌袋是密闭着的，与空气隔绝，因此培养室内空气湿度对菌丝体生长无直接影响；但如果栽培室内空气湿度太大，培养袋容易染菌。而菌体子实体生长阶段则要求培养室内湿度相对较高，因为菌体子实体的生长需要靠水分来传送营养物质，如果培养室相对湿度低于60％，子实体停止生长，即使再将其移至适宜湿度条件下，也很难恢复生长；但若湿度超过95％，不仅容易滋生杂菌，而且由于湿度大培养室内空气流通差、二氧化碳含量高，导致菌体子实体分芝长成鹿角菌体，因此，菌体菌丝体生长阶段培养室内空气相对温度控制在60％-70％，菌体子实体生长阶段培养室内空气相对湿度则控制在85％-95％范围内。
其中，通气性对菌体生长的影响：菌体在吸收氧气的同时也在排出二氧化碳，菌体菌丝体的生长和子实体的生长都需要开窗换气，菌丝体生长阶段需要的氧气相对少些，但是子实体的生长则需要更多的氧气，因此栽培室内的通风换气至关重要，应开门、窗1-2小时进行通风换气，并根据栽培室内的温湿度缩短和延长通风时间，以保证充足的氧气，促进子实体分化和长大。
其中，菌体子实体成熟时要及时采收，采收过早，子实体细嫩，菌盖小而薄，质量差，产量低；采收过迟，子实体衰老，光泽变差，药效降低，基质营养不良，不利于第二潮菌体再生，有的甚至会因吸水而霉烂，影响菌体品质。当菌体子实体的菌盖边缘由黄白色变成褐色，并且有孢子粉从菌盖上下表面喷出时，表明菌体生长成熟，应及时采收、烘干，并密封藏于干燥的仓库内。
综上所述，本发明的菌体培养方法包括以下步骤：
步骤S1，以农业废弃物为原料，制作菌体培养基，在120-130摄氏度灭菌1.5小时。
具体地，培养基制作时，加入桑树木屑63％，中药渣20％，玉米粉10％，麸皮5％，石膏粉1％，蔗糖1％，pH自然，其中，料水比为1：1.5(即100g干料+150ml水)。
步骤S2，待培养基温度下降至30摄氏度以下开始接种，其中，菌体接种的方式主要有两种，一是：用报纸包好几个尖底塑料管和接种枪，灭菌，灭菌后在超净台中用无菌的尖底塑料管在菌体栽培袋中间压出一个接种孔，然后接入培养好的固体菌种，在孔的底部接入少量菌丝，同时在孔的上部也接入少量菌丝。二是：在用打孔器在菌体栽培袋侧面两端戳2-3个孔穴，用接种器由孔中接入菌种，然后将接种孔朝上摆放菌体栽培袋。
步骤S3，将接种后的菌体栽培袋搬入菌丝体培养室，室内温度保持在22-28摄氏度，菌体的菌丝生长不需要光，在黑暗中生长最快。
步骤S4，一周后，当菌丝覆盖整个培养基表面并向下蔓延1-2cm时，表示菌丝进入生长旺盛期(占据了生长优势)，此时打开菌体栽培袋，以便使菌种加速生长，然后在菌丝体培养室悬挂湿布保持湿度，其中，空气湿度维持在60-70％。
步骤S5，培养20-25天后，当菌丝长满菌体栽培袋时,给予一定光照，在菌柄原基出现时，四周遮光，光线只从上方射入，使得菌柄垂直向上生长，避免子实体产生畸形；待生长到所需要的高度后，上方遮光，使光线固定从一侧射入，从而长出菌盖和菌柄垂直的子实体。
步骤S6，加强菌丝体培养室的通风换气，并根据气温的高低缩短和延长通风时间，以保持室内适宜的生长温度，再经过10-15天的培养，当培养基表面出现白色或黄色的突起物(子实体原基)时,表示菌丝达到生理成熟。
步骤S7，20-30天后，当子实体的菌盖边缘由黄白色变成红褐色，菌盖已经定型，不再生长，开始采收。
其中，采收时先将菌盖上表面和下表面的孢子粉收集，孢子粉也是菌体的一类副产品。然后采收子实体，剪去菌柄基部的根皮，晒干或40-50摄氏度烘干保藏。
本发明提供的菌体培养方法，将农业废弃物作为菌体的培养材料，制作培养基对菌体进行培养，使用该培养基培养菌体子实体，其多糖含量达到原来的基本培养基生产的2.61倍，高达8.26％，有效提高了栽培菌体的药用成分，具有较高的应用价值，此外，中药药渣作为食品行业的废弃物，主要用于燃烧或者作为猪饲料，本发明提供了中药药渣的另一种高附加值的利用方式，和废弃的桑枝一起用于栽培菌体，可以变废为宝，提高了栽培菌体的药用品质，对于今后中药药渣的规模化利用，具有一定的启发意义。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上内容仅仅是对本发明结构所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.基于农业废弃物原料的菌体培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1，以农业废弃物为原料，制作菌体培养基，在120-130摄氏度灭菌1.5小时；
步骤S2，待培养基温度下降至30摄氏度以下开始接种；
步骤S3，将接种后的菌体栽培袋搬入菌丝体培养室，室内温度保持在22-28摄氏度，遮光培养；
步骤S4，一周后，当菌丝覆盖整个培养基表面并向下蔓延1-2cm时，打开菌体栽培袋，然后在菌丝体培养室悬挂湿布保持湿度；
步骤S5，培养20-25天后，当菌丝长满菌体栽培袋时,给予一定光照，在菌柄原基出现时，四周遮光，光线只从上方射入，待菌丝生长到所需要的高度后，上方遮光，使光线固定从一侧射入，从而长出菌盖和菌柄垂直的子实体；
步骤S6，加强菌丝体培养室的通风换气，并根据气温的高低缩短和延长通风时间，以保持室内适宜的生长温度，再经过10-15天的培养，当培养基表面出现白色或黄色的突起物时,表示菌丝达到生理成熟；
步骤S7，20-30天后，当子实体的菌盖边缘由黄白色变成红褐色，菌盖已经定型，不再生长，开始采收。
2.根据权利要求1所述的基于农业废弃物原料的菌体培养方法，其特征在于，所述步骤S1中培养基制作时，加入桑树木屑63％，中药渣20％，玉米粉10％，麸皮5％，石膏粉1％，蔗糖1％，pH自然，其中，料水比为1：1.5。
3.根据权利要求1所述的基于农业废弃物原料的菌体培养方法，其特征在于，所述步骤S2中，菌体接种时，用报纸包好几个尖底塑料管和接种枪，灭菌，灭菌后在超净台中用无菌的尖底塑料管在菌体栽培袋中间压出一个接种孔，然后接入培养好的固体菌种，在孔的底部接入少量菌丝，同时在孔的上部也接入少量菌丝。
4.根据权利要求1所述的基于农业废弃物原料的菌体培养方法，其特征在于，所述步骤S2中，菌体接种时，在用打孔器在菌体栽培袋侧面两端戳2-3个孔穴，用接种器由孔中接入菌种，然后将接种孔朝上摆放菌体栽培袋。
5.根据权利要求1所述的基于农业废弃物原料的菌体培养方法，其特征在于，所述步骤S4中，菌体培养室的空气湿度维持在60-70％。
6.根据权利要求1所述的基于农业废弃物原料的菌体培养方法，其特征在于，所述步骤S7中，采收时先将菌盖上表面和下表面的孢子粉收集，然后采收子实体，剪去菌柄基部的根皮，晒干或40-50摄氏度烘干保藏。
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