具体实施方式
在下文中,将通过实施例更详细地描述本发明,但是这些实施例仅用于说明性目的,而意图限制本发明的范围。在不脱离本发明的精神的情况下对下面描述的实施例的改动对于本领域技术人员而言是显而易见的。
实施例1.抗CD43抗体的制备
1-1.小鼠抗体的制备
1-1-1.产生单克隆抗体的细胞的制备
其通过使已将人胸腺细胞作为抗原注入其内的Balb/c白鼠的脾细胞与8-氮杂鸟嘌呤抗性小鼠的骨髓瘤细胞系SP2/0-Ag14(ATCC,CRL-1581)的融合来制备。
每2周(持续6周)将107个人胸腺细胞(首尔国立大学医院)腹膜内注射到Balb/c白色小鼠中以诱导免疫应答,并且在最后一次附加接种后3天提取脾脏,以制备细胞悬液。根据Koeler&Milstein(1975)的方法,通过使用400聚乙二醇使108个脾细胞和107个骨髓瘤细胞进行细胞融合。洗涤融合的细胞,然后将其悬浮于补充有100uM次黄嘌呤、0.44uM鸟嘌呤核苷和16uM胸苷的DMEM培养液(HAT培养液)中,将细胞等分到96孔板中,并使其在37℃、供有5%CO2下于培养基中进行培养。
在2周后观察到集落形成时,收集上清液,并且通过使用免疫组织化学法和流式细胞术测量抗体滴度。
阳性组意味着每孔形成了105或更多个细胞的情况。通过收集孔中的细胞来收获具有高抗体滴度的单克隆细胞,在孔中形成了上清液的具有高抗体滴度的集落,并且根据有限稀释测定法进行亚克隆。通过收集上清用于后面的实验来储存单克隆细胞的培养液。
1-1-2.产生抗胸腺细胞表面蛋白的抗体的单克隆细胞的筛选
将胸腺的冷冻组织(首尔国立大学医院)和石蜡包埋组织(首尔国立大学医院)切成4微米厚度,以备使用。在通过除去石蜡并然后加入正常山羊血清(BioGenex公司产品)的过程之后,将石蜡包埋组织在室温下放置1小时。在向组织施用各种初级抗体(Dinona)并然后它们置于4℃冷藏室中过夜以备反应之后,次日用磷酸盐缓冲液洗涤3次。用生物素化的山羊抗小鼠免疫球蛋白(2滴,DAKO)作为第二抗体在室温下孵育1小时,然后用磷酸盐缓冲盐水洗涤3次,并且处理链霉亲和素-HRP偶联物。在施用H2O2-氨基乙基咔唑溶液20分钟后,用磷酸盐缓冲盐水洗涤3次,并且在光学显微镜下观察显色。
因此,可以分选产生仅与人胸腺细胞特异性反应的抗体的单克隆细胞系H-JL1。所得的细胞系于1997年1月13日捐献给位于韩国首尔钟路区莲贞洞的韩国细胞系研究基金会(KCLRF),并且登记号为KCLRF-BP-00010。
用选择的单克隆细胞系的上清液对胸腺组织进行免疫组织化学染色,并且证实了胸腺细胞染色为阳性(图10)。另外,染色为阳性的胸腺细胞表现出细胞周围强烈染色的形貌,由此证明了单克隆细胞系产生了针对细胞表面蛋白的抗体。
为了证实胸腺细胞发育阶段的抗体反应,进行流式细胞术。将提取用于心脏手术的人胸腺切成小碎片并用载玻片研磨,收集胸腺细胞。在分离的胸腺细胞中使抗体(1*10^5细胞/抗体10μg/mL)在4℃下反应30分钟后,用冷的磷酸盐缓冲盐水进行洗涤,并且使FITC(异硫氰酸荧光素)连接的山羊抗人IgG抗体(Jackson ImmunoResearch)在4℃下反应30分钟。然后,它用冷磷酸盐缓冲盐水进行洗涤,并加入5μL的每种PE(藻红蛋白)连接的抗CD8抗体(BD Bioscience)和APC连接的抗CD4抗体(BD Bioscience),并使其在4℃下反应30分钟。它用冷磷酸盐缓冲盐水进行洗涤,并且通过使用FACSCalibur(Becton Dickinson,Mountain View,CA)进行流式细胞术。根据CD4和CD8的表达形貌,将胸腺细胞分类为CD4-CD8-胸腺细胞→CD4+CD8+胸腺细胞→CD4+CD8-或CD4-CD8+胸腺细胞,并且该抗体与所有4种胸腺细胞反应,但是特别地,它与CD4+CD8+胸腺细胞反应性高(参见图11)。图11中的灰色区是阴性对照组,并且实线是用分选的抗体染色的曲线图。
1-1-3.从分选的单克隆细胞系中产生单克隆抗体
在对Balb/c小鼠腹腔内注射0.5mL的姥鲛烷3周前,在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养107个单克隆细胞并且将其注射到这些小鼠的腹腔中,然后在2~3周后收集小鼠的腹水。从腹水积水中获得5~10mg/mL的高浓度抗体。
为了纯化来自腹水积水的抗体,进行Q-琼脂糖凝胶(Pharmacia产品)层析和羟基磷灰石(Bio-gel HTP Gel,Pharmacia产品)层析。每10mL腹水积水加入3.14g硫酸铵((NH4)2SO4),并且使其在冰上缓慢溶解(50%(NH4)2SO4沉淀)。将该混合物以15000rpm离心30分钟,并且使沉淀物溶解于去离子水中,然后在1L缓冲溶液(20mM磷酸盐,pH7.4)中透析。
使溶液通过预先用缓冲溶液(20mM磷酸盐,pH7.4)平衡的Q-琼脂糖凝胶柱并被吸附,然后用缓冲溶液I(20mM磷酸盐,pH7.4)和缓冲溶液II(20mM磷酸盐,0.5M NaCl,pH7.4)使NaCl浓度梯度流动到0M至0.8M的线性梯度,以获得洗脱液。通过15%SDS-PAGE收集含有大量抗体的级分的各个级分。该级分用缓冲液(20mM磷酸盐,pH6.8)进行透析,并且通过预先用缓冲液(20mM磷酸盐,pH6.8)平衡的羟基磷灰石柱进行吸附,然后通过使用缓冲溶液III(20mM磷酸盐,pH6.8)和缓冲溶液IV(300mM磷酸盐,pH6.8)使磷酸盐的浓度梯度流动到0M至0.3M的线性梯度,以获得洗脱液。通过15%SDS-PAGE对级分仅收集具有95%或更高抗体纯度的级分。通过实验,对于每1ml积水腹水可以收集5~10mg的单克隆抗体。
所得的抗体被称为YG5。
1-1-4.CD43表位的分析
<构建包括CD43部分片段的结构>
如图12所示,构建每个CD43缺失突变体,并且测试YG5抗体对缺失突变体的反应性,并分析CD43的表位。CD43蛋白(NCBI登录号M61827.1)由总共400个氨基酸组成,并且第1位至第19位的氨基酸序列是信号序列,第20位至第254位的氨基酸序列是胞外结构域,并且第255位至第277位的氨基酸序列是跨膜结构域,并且第278位至第400位的氨基酸序列是胞内结构域。
在构建DNA结构以使在谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的C端上表达每个缺失突变体后,将它插入到pGEX-2T(Pharmacia Biotech Inc.,Piscataway,NJ)载体中。在下文中,包含CD43蛋白的第1位至第253位的氨基酸序列的载体被称为pGEX1-253,并且包含第1位至第87位的氨基酸序列的载体被称为pGEX1-87,并且包含CD43蛋白的第1位至第87位的氨基酸序列的载体被称为pGEX1-81,并且包含CD43蛋白的第1位至第75位的氨基酸序列的载体被称为pGEX1-75,并且包含CD43蛋白的第1位至第70位的氨基酸序列的载体被称为pGEX1-70,并且包含CD43蛋白的第70位至第98位的氨基酸序列的载体被称为pGEX70-98,并且pGEX71-81、pGEX76-81、pGEX73-81和pGEX73-80以与上述相同的原则命名。
从人CD43 cDNA扩增编码缺失突变体的序列,并且从Genebank上的序列构建PCR引物,并且包含BamHI/EcoRI或BamHI/BglII限制酶位点。PCR产物用BamHI/EcoRI或BamHI/BglII进行切割,并连接到相同限制酶位点的pGEX-2T,然后转化到大肠杆菌感受态TOP10F'细胞[F'[lacIq,Tn10(TetR)]、mcrA、D(mrr-hsdRMS-mcrBC)、80lacZDM15、lacX74、deoR、recA1、araD139 D(ara-leu)7697、galK、rpsL(StrR)、endA1、nupG]。分析转化体的序列,从而再次证实缺失突变体的序列。
<GST-CD43缺失突变体融合蛋白的表达>
在37℃下在LB培养基(其中加入50μg/mL氨苄青霉素)中培养过夜转化的大肠杆菌TOP10细胞,并且将培养的细胞用LB培养基稀释20倍,然后将将它培养3~4小时至OD为0.6。将IPTG(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)加入到最终浓度为1mM的培养物中并且使它再培养4小时,并且以6000g离心15分钟。在收集每1g细胞用3ml的细胞裂解缓冲溶液(50mMTris,pH 8.0,1mM EDTA,100mM NaCl)使其悬浮的细胞后,添加最终浓度为0.2mM的苯甲基磺酰氟(Sigma Chemical Co.),然后将其置于冰上30分钟。
<CD43表位分析>
在使表达总共11种缺失突变体的每种转化体的裂解物经受10%SDS-PAGE后,分别用YG5抗体和抗GST抗体进行蛋白质印迹。
图13是证实YG5抗体对11种缺失突变体的反应性的蛋白质印迹,其中,A是使用YG5抗体的情况,而B是使用GST抗体的情况。另外,泳道1是pGEX1-253,泳道2是pGEX1-98,泳道3是pGEX1-87,泳道4是pGEX1-81,泳道5是pGEX1-75,泳道6是pGEX1-70,泳道7是pGEX70-98,泳道8是pGEX71-81,泳道9是pGEX73-81,泳道10是pGEX76-81,泳道11是pGEX73-80,泳道12是pGEX-2T,并且泳道13是人胸腺细胞。如图13所示,证实了对YG5抗体具有反应性的缺失突变体的最小单位是pGEX73-81,由此证明CD43的抗原决定簇是第73位至第81位的氨基酸序列(Glu Gly Ser Pro Leu Trp Thr Ser Ile;SEQ ID NO:4)。
总结这些实例证实了YG5直接识别第73位至第81位的氨基酸序列,而不是CD43糖蛋白的糖组分,这与传统的其他抗体不同。该序列主要暴露于造血细胞发育阶段的淋巴细胞祖细胞和胸腺细胞中,由此YG5抗体识别它,并且它被造血干细胞(而不是成熟的白细胞和血小板)中第73位至第81位的氨基酸序列周围的糖基化或结构变化所覆盖,因此YG5抗体不能识别它。
1-2.嵌合抗体制备
基于构建的抗CD43小鼠抗体YG5的氨基酸序列,制备抗CD43嵌合抗体。
1-2-1.质粒制备
为了表达抗CD43嵌合抗体,分别制备用于重链表达和轻链表达的质粒。pOptiVEC(Invitrogen Company)载体用于重链表达质粒,并且pcDNA3.3(Invitrogen Company)载体用于轻链表达质粒。通过使用Ig引物组(Novagen Company)克隆用于抗体表达的重链和轻链的cDNA编码可变区,并且将其插入到pGem-T载体(Promega Company)中,然后通过测序来确定DNA序列,并且通过IMGT网站(www.imgt.org)来证实小鼠抗体基因。
为了将每个抗体的cDNA编码可变区和cDNA编码不变区表达成没有额外氨基酸插入的连续氨基酸序列,分别合成这样的基因片段(Bioneer Inc):其中,克隆的可变区的编码序列与已知的人IgG1不变区(重链)和卡帕不变区(轻链)编码序列连接。在用限制性酶Xho I和Sal I切割如上合成的表达基因的重链和轻链后,分别将重链基因片段连接到pOptiVec载体中,并将轻链基因片段连接到pcDNA3.3载体中,从而构建用于抗体表达的完整质粒(pcDNA3.3-抗CD43轻链表达质粒和pOptiVEC-抗CD43重链表达质粒)。图14示意性地示出重链和轻链表达质粒的构建过程。
2-1-2.转化
通过将构建的pcDNA3.3-抗CD43轻链表达质粒和pOptiVEC-抗CD43重链表达质粒转染到来自CHO的DG44细胞(Invitrogen)中来进行转化过程。
首先,在转染前3天使悬浮的DG44细胞适应于含有5%FBS的MEMα培养基,从而将它转变为适应提高转染效率的吸附细胞。使用Effectene转染试剂(QIAGEN公司)在6孔板中进行转染。在转染前一天制备以1×105个细胞/孔的浓度继代培养的适合的DG44细胞,并且转染所用的DNA量分别以2μg的pcDNA3.3-抗CD43轻链表达质粒和pOptiVEC-抗CD43重链表达质粒的相同量使用。转染进行48小时。为了分选转染的细胞群,进行流式细胞仪和酶联免疫吸附测定(ELIA),由此选择了两个克隆E#4、E#5。在包含含有30nM甲氨蝶呤(MTX)的5%透析胎牛血清以及400μg/mL的G418(遗传霉素)的MEMα选择培养基中培养选择的细胞群,并且逐渐增加MTX和G418的浓度以选择转化的细胞群。
2-1-3.转化的细胞培养和抗体纯化
在37℃和5%的CO2的条件下,培养上述选择的转染细胞群(24.0×105个细胞/mL或更多,90%或更多的存活率(%)),直至表达量在功效CHO2 CDM(Lonza;最终培养基量880L)中达到600mg/L(根据IPC(过程中对照)标准)。
在收集800L如上获得的培养液进行细胞澄清(使用POD过滤器(1.1/0.2μm))处理之后,通过3段柱法(蛋白A亲和层析(固定相:蛋白A;平衡缓冲溶液:50mM磷酸钠、50mM氯化钠,pH7.5;洗脱缓冲液:20mM柠檬酸钠,pH3.0)、阳离子交换层析(固定相:SP FF;平衡缓冲液:20mM柠檬酸钠,pH5.5;洗脱缓冲液:20mM柠檬酸钠,150mM,氯化钠,pH 6.1);阴离子交换层析(固定相:QFF;平衡缓冲液:20mM柠檬酸钠,pH6.5))对抗体进行纯化。
层析条件如下:
|
蛋白质A |
阳离子交换 |
阴离子交换 |
柱类型 |
层析介质(Mabselect sure) |
SP FF |
Q FF |
柱控制器 |
6mm生物处理(CL-3271) |
10mm生物处理(CL-3201) |
10mm生物处理(CL-3201) |
柱尺寸 |
BPG 200 |
BPG 300 |
BPG 300 |
柱体积 |
6.5L |
14.0L |
14.0L |
柱高度 |
20cm |
20cm |
20cm |
流率 |
62.8L/hr |
141L/hr |
141L/hr |
通过超滤/渗滤(UF/DF)方法同时进行缓冲液更换和浓缩过程来完成最终粗液的配制,并且将最终蛋白质的浓度调节至11.5mg/mL。
按照上述方法获得了抗CD43嵌合抗体,并将其命名为DNP001。
2-1-4.确认嵌合抗体的表位区的结合能力
为了确认所制备的嵌合抗体DNP001(与小鼠抗体具有相同的CDR区)结合到与小鼠抗体相同的表位,将合成的表位肽化学结合到牛血清白蛋白(BSA)蛋白,然后进行ELISA。
表位肽合成序列(命名为DN2)
EGSPLWTSIGASTGSC(SEQ ID NO:129;表位以下划线表示)
通过经由EDC连接子将合成的DN2肽偶联到BSA蛋白来制备DN2肽-BSA偶联物。然后,肽:BSA蛋白质的摩尔比为15:1。
在用50μg/mL制备的DN2肽-BSA偶联物覆盖每孔后,以各种浓度梯度孵育嵌合抗体DNP001。接下来,通过测量嵌合抗体对DN2肽-BSA偶联物的反应性来检测与偶联物连接的抗体。用抗人抗体-HRP(抗人Ig-HRP)检测连接的抗体,并且测量450nm处的OD值并且将其示于下表和图42。
Chi.Ab(ug/ml) |
OD值 |
100 |
1.878 |
50 |
1.398 |
25 |
0.803 |
12.5 |
0.5 |
6.25 |
0.327 |
3.13 |
0.204 |
1.56 |
0.137 |
0 |
0.007 |
如该表和图42的结果所示,证明了嵌合抗体DNP001以浓度依赖性方式结合到表位肽。
实施例2:对人实体癌细胞系中CD43表位的表达水平的研究
为了研究各种实体癌细胞系中CD43的表达水平,进行免疫染色和流式细胞术。
用于分析的细胞系的信息如下:
名称 |
来源 |
组织病理学 |
登记号 |
SNU-1 |
胃、胃的 |
腺癌 |
ATCC,CRL-5971 |
SNU-719 |
胃 |
腺癌,原发性 |
KCLB,No.00719 |
NCI-N87 |
胃 |
癌;转移到肝脏 |
ATCC,CRL-5822 |
AGS |
胃 |
腺癌 |
ATCC,CRL-1739 |
HT29 |
结肠 |
腺癌 |
ATCC,HTB-38 |
LS174T |
结肠 |
Dukes'B型,结直肠腺癌 |
ATCC,CL-188 |
HCT116 |
结肠 |
结直肠癌 |
ATCC,CCL-247 |
C3A |
肝 |
肝细胞癌 |
ATCC,CRL-10741 |
HepG2 |
肝 |
肝母细胞瘤 |
ATCC,HB-8065 |
PLC/PRF/5 |
肝 |
肝癌 |
ATCC,CRL-8024 |
具体而言,在100mm的细胞培养容器中接种并培养各细胞系,并且当70~80%的表面密集有培养细胞时,用磷酸缓冲液洗涤培养细胞,然后用胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)处理并离解,并且随后进行离心。使沉淀的细胞再悬浮于缓冲溶液中并且以1×105每份等分,并且加入1.5μL的实施例1-1中制备抗CD43抗体(YG5)-藻红蛋白(PE)并使其在4℃冰箱中反应20分钟。在4℃下反应20分钟后,再次用4ml缓冲溶液(1×磷酸盐缓冲盐水,PBS缓冲液)洗涤细胞,然后用流式细胞仪(Becton,Dickinson and Company,Franklin Lakes,NJ,USA)对它进行分析。为了比较,使用DFT-1抗体(2μL,Ancell公司)替换抗CD43抗体进行相同的测试。
所得结果示于图1和图2a~图2c。在图1中,X轴示出了与引用的细胞系中的抗体YG5反应的抗原CD43的表达水平,而Y轴表示读取细胞数量(计数)。如图1和图2a~图2c所示,在直肠癌中的Duke型B腺癌(LS174T)中显示出了60%的表达水平,在HCT116和HT29中显示出了约50%和37%的表达水平,并且证实了在其他各种实体癌细胞系中CD43(表位)的表达。
实施例3:抗CD43抗体对癌细胞的细胞毒性的测试(体外)
3-1.抗体-毒素偶联物的制备
根据常规方法(Polito等人,2004)进行单克隆抗体的皂草素(Sigma,St.Louis,MO)偶联。在将浓度分别为2mg/mL(抗体浓度)和8mg/mL(皂草素浓度)的抗体(DNP001;实施例1-2中制备的)和皂草素溶解于50mM硼酸钠缓冲液(pH9.0)中之后,分别用浓度为0.4mM和1.0mM的2-亚氨基四氢噻吩(Sigma)进行处理。之后,使抗体和皂草素以10:1的比率混合并且在室温下反应16小时,并且通过凝胶过滤来纯化抗体-皂草素结合物。在下文中,将制备的偶联物描述为抗CD43-皂草素偶联物。
参照上述方法,分别制备抗CD43抗体(DNP001;实施例1~2中制备的)与单甲基奥瑞他汀E(MMAE;Creative Biolabs)偶联的抗CD43-MMAE偶联物、抗CD43抗体(DNP001)与N2'-去乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)美登素(DM1;The Chemistry ResearchSolution LLC)偶联的抗CD43-DM1偶联物,以及抗CD43抗体(DNP001)与倍癌霉素(TheChemistry Research Solution LLC)偶联的抗CD43-倍癌霉素偶联物,和抗CD43抗体(DNP001)-DM1偶联物。
3-2.抗CD43抗体-毒素偶联物对胃癌细胞的细胞毒性
对实施例3-1中制备的抗体-毒素偶联物(抗CD43-皂草素偶联物、抗CD43-DM1偶联物、抗CD43-MMAE偶联物和抗CD43-倍癌霉素偶联物)对胃癌细胞的细胞毒性进行测试。
在测试前一天,以每孔4×103分别铺板胃癌细胞系NCI-N87、AGS和SNU719。每种抗体-毒素偶联物以10000ng/mL(在(抗CD43抗体)-MMAE偶联物和(抗CD43)-DM1偶联物的情况下)或1000ng/mL(在(抗CD43)-倍癌霉素偶联物的情况下)的浓度处理各个胃癌细胞系。之后,在24小时、48小时和72小时后将10μL的EzCytox(韩国Daeil实验室)加入每个孔中,在37℃的CO2容器中培养细胞,然后通过显微分光光度法测量它们的存活率。
所获得的每种偶联物的细胞毒性示出于图3((抗CD43抗体)-MMAE偶联物)、图4((抗CD43)-DM1偶联物)和图5((抗CD43)-倍癌霉素偶联物)中。用以下式计算细胞毒性:
细胞毒性(%)=[1-(存活细胞数/初始细胞数)]×100
如图3、图4和图5所示,证实了抗CD43-DM1偶联物和抗CD43-MMAE偶联物在所有3种细胞系中显示出细胞毒性,并且抗CD43-倍癌霉素偶联物在NCI-N87和AGS中显示出细胞毒性。
实施例4:在动物模型中抗CD43抗体的抗癌效果的测试(体内)
4-1.胃癌动物模型的制备(肿瘤发生)
通过使用在实施例2的结果中证实CD43表达的细胞系(NCI-N87;ATCC,CRL-5822)来制备胃癌模型。首先,制备2.8×107的NCI-N87细胞。将制备的细胞以5×106个细胞/100μL(RPMI)皮下接种到裸鼠的右侧。将接种的裸鼠放入到对照组(PBS给药)和测试组,并且在第3天将实施例1-2中制备的抗CD43抗体(DNP001)以12mg/kg的量注射到尾静脉每周2次持续3周,或者在接种癌细胞后3周将0.2mg/kg的实施例3-1中制备的抗CD43-倍癌霉素偶联物(DNP001-倍癌霉素)腹膜内注射每周一次持续3周。在施用治疗剂之前测量肿瘤的尺寸每周2次,并且通过以下式计算肿瘤的尺寸:
肿瘤尺寸(mm3)=(长轴×短轴2)/2
所得结果示于图6。如图6所示,证实了:从开始测试后的第7天起,在DNP001-倍癌霉素给药组(D-Duo)中肿瘤的生长与对照组相比开始受到抑制。在开始测试后的26天,施用DNP001-倍癌霉素、仅DNP001和PBS的小鼠的平均肿瘤尺寸分别为447.2mm3、510.9mm3和784.6mm3。在施用抗CD43-倍癌霉素偶联物和抗CD43抗体的组的情况下,与对照组相比,肿瘤的生长分别被抑制了约43%和34%。这个结果表明仅抗CD43抗体和抗CD43-倍癌霉素偶联物的胃癌生长的抑制效果显著。
实施例5:对人实体癌组织中CD43的分布的研究
除胃癌之外,为了证实在各种实体癌(胃癌、印戒细胞胃癌、乳腺癌、乳腺癌中的导管浸润性腺癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、宫颈癌、子宫颈癌、膀胱癌、粒细胞肉瘤)中CD43的表达以及测试靶向CD43治疗功效的可能性,在各种人源肿瘤组织中进行免疫组织化学。
按以下顺序进行免疫组织化学染色。使用石蜡包埋实体癌组织(韩国国立忠北大学医院)作为实体癌组织。首先,石蜡实体癌载玻片在去石蜡过程中经二甲苯洗涤3次(每次10分钟)、经100%酒精洗涤两次(每次5分钟),经80%酒精洗涤两次(每次3分钟),经50%酒精洗涤两次(每次1分钟),经20%酒精洗涤两次(每次1分钟),然后用流水洗涤两次。然后,将其浸泡在1×TBS(Tris-缓冲盐水)中10分钟。为了在组织中再生抗原,加入10mM HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸,pH8.0)缓冲液并且使其在微波中进行15分钟并且在流水中迅速冷却,然后将载玻片浸泡在1×TBS中20分钟。用0.1%H2O+100%甲醇在10分钟去除内源性过氧化物酶,并且经流水洗涤两次。然后,为了除去生物素和抗原-抗体的非特异性反应,进行阻断处理。该阻断处理通过滴加4滴生物素溶液,并使其在室温下反应15分钟来进行。在将4滴亲和素溶液(VECTOR实验室)滴入组织后,使其在室温下反应15分钟,然后用1×PBS洗涤。
将10μg/mL,5μg/mL在实施例1-1中制备的抗CD43(YG5)抗体和DFT-1抗体(对照组;Ancell公司)悬浮在150μL的1×TBS中以覆盖组织,并使其在室温下反应30分钟。在用1×TBST(1×TBS+0.1%吐温20)洗涤3次(每次15分钟)后,使第二抗体(抗小鼠/兔子HRP;DAKO)覆盖组织(每个2滴),并在室温下反应30分钟。然后,在用1×TBST(1×TBS+0.1%吐温20)洗涤3次(每次15分钟)之后,用DAB(二氨基联苯胺)进行显色反应。在用1×TBS洗涤5分钟两次并复染色后,用流水洗涤。然后,在进行脱水过程之后,将它安装。
所得结果示于图7和图8和表1。确定每个组织中CD43阳性的标准如下:阴性:0;阳性:根据肿瘤区域中YG5的染色水平分为1至3个等级。
[表1]
表1:CD43在各种癌组织切片中的表达
(在表1中,
阳性是指除了YG5未染色的阴性组织以外的阳性组织数量除以相应癌症的总组织数目得到的数值;
总计是指用于染色的组织总数;
阳性是指示出所用组织中YG5呈阳性反应的组织数量)
如表1、图7和图8中所证实的,证明了:CD43在主要出现于上皮细胞中的肿瘤中表达,诸如胃癌、印戒细胞胃癌、乳腺癌、乳腺癌中的导管浸润性腺癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、宫颈癌、子宫颈癌、膀胱癌、粒细胞肉瘤等。
实施例6:胃癌的癌症干细胞中CD43的表达
测试了各种肿瘤的癌症干细胞中CD43的表达水平。CD44和CD133(Prominin-1)是公知的癌症干细胞标记物。对癌症干细胞标记物CD44和CD133三重染色以证实CD43表达,从而证明CD43在CD44或CD44+CD133+阳性组中表达。在100mm的细胞培养容器中接种并培养NCI-N87细胞,并且当70~80%的表面密集有培养细胞时,用磷酸缓冲液洗涤培养细胞,然后用胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)处理并离解,然后进行离心。使沉淀的细胞再次悬浮于缓冲溶液中。在使它们与抗CD44-别藻蓝蛋白(APC)(10μL,Miltenyi Biotec)、抗CD133-异硫氰酸荧光素(FITC)(10μL,Miltenyi Biotec)和抗CD43抗体(实施例1中制备;YG5)-藻红蛋白(PE;1.5μL,Dinona)在4℃的冰箱中反应20分钟之后,洗涤未反应的抗体并且用1%多聚甲醛进行固定。然后通过流式细胞仪(Becton,Dickinson and Company,Franklin Lakes,NJ,USA)分析细胞。使用小鼠IgG1替换抗CD44抗体和抗CD133抗体作为阴性对照组进行相同测试。
所得结果示于图9。
如图9所示,作为证实胃癌的癌症干细胞中CD43的表达的结果,证实了CD43在鉴别胃癌的癌症干细胞的标记物(CD44或CD133)为阳性的细胞中,CD43为阳性。这个结果表明根据本发明的抗CD43抗体能特异性结合到在胃癌的癌症干细胞表面上表达的CD43。
实施例7:对在各种实体癌症干细胞中CD43表达的研究
通过实施例6中所用的相同方法来证实实施例5中所用的CD43阳性实体癌的癌症干细胞中CD43的表达。
使用了来源于实施例5中公开的各CD43阳性组织的细胞(乳腺癌、肺癌、直肠癌、肝癌和胆囊癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫颈癌、膀胱癌-来源的细胞系)。在100mm的细胞培养容器中接种并培养各细胞,并且当70~80%的表面密集有培养细胞时,用磷酸缓冲液洗涤培养细胞,然后用胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)处理并离解,然后进行离心。使沉淀的细胞块再次悬浮于缓冲溶液中并且与100倍稀释的抗CD44-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD44-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD326(EpCAM)-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD133-异硫氰酸荧光素(FITC)、抗CD43抗体-藻红蛋白(PE)在4℃的冰箱中反应20分钟。洗涤未反应的抗体并用1%多聚甲醛进行固定,然后通过流式细胞仪(Becton,Dickinson and Company,Franklin Lakes,NJ,USA)分析细胞。
由此,依据确认实施例5中的CD43阳性组织来源细胞的癌症干细胞中的CD43表达的结果,证实了在鉴定各癌症干细胞的标记物(CD44、CD133或EpCAM)是阳性的细胞中,CD43是阳性的。
实施例8:测试患者的新鲜癌组织的癌症干细胞中CD43的表达
基于实施例5的结果,在使用癌症干细胞标记物在患者的癌症组织中进行分类之后,测试CD43的表达。
患者的新鲜癌症组织进行精细地单克隆化。将单克隆化的肿瘤细胞以1700rpm离心3分钟,然后除去上清液,并且使它再悬浮于10%FBS的10mL培养基中,然后在1700rpm下离心3分钟。除去上清液并且使它经10mL的1×PBS再悬浮,然后进行计数。将细胞放入到FACS试管中,然后在与100倍稀释的抗CD44-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD44-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD326(EpCAM)-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD133-异硫氰酸荧光素(FITC)、抗CD43抗体-藻红蛋白(PE)在4℃的冰箱中反应20分钟之后,洗涤未反应的抗体并用1%多聚甲醛进行固定,然后通过流式细胞仪(Becton,Dickinson and Company,Franklin Lakes,NJ,USA)分析细胞。
如上所述,依据检测患者的癌组织中的癌症干细胞中的胃癌的癌症干细胞中的CD43表达的结果,证实了CD43在源自患者的癌组织的癌症干细胞中是阳性的。
实施例9:抗CD43抗体对癌症干细胞的集落形成的抑制(体外)
证实了:实施例6中证实的抗CD43抗体抑制了实施例5中存在的CD43阳性干细胞的集落形成。使用了来源于实施例5中公开的各CD43阳性组织的细胞(乳腺癌、肺癌、直肠癌、肝癌和胆囊癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫颈癌、膀胱癌-来源的细胞系)。在100mm的细胞培养容器中接种并培养各细胞系,并且当70~80%的表面密集有培养细胞时,用磷酸缓冲液洗涤培养细胞,然后用胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)处理并离解,然后进行离心。将沉淀的细胞块再次悬浮于缓冲溶液中,并且以每107个肿瘤细胞加入浓度为20μg/mL抗CD43抗体,并且使它在4℃冰箱中反应20分钟,然后用1×PBS洗涤未反应的抗体。在加入20μL的磁珠结合的IgG后,它在4℃冰箱中反应15分钟,然后用1×PBS洗涤,并且用MACS分离系统对CD43阳性细胞进行分类。
在使分类的CD43阳性细胞或阴性细胞与抗CD44-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD326(EpCAM)-别藻蓝蛋白(APC)、抗CD133-异硫氰酸荧光素(FITC)、抗磁珠抗体-藻红蛋白(PE,20ul,Miltenyi Biotec)在4℃冰箱中反应15分钟之后,进行洗涤并用1%多聚甲醛继续固定,然后通过流式细胞仪(Becton,Dickinson and Company,Franklin Lakes,NJ,USA)进行分析。
将从实施例获得的CD43阳性细胞或阴性细胞以每孔5000个的数量加入到超低附着6孔板(Corning Inc.,Corning,NY,USA)中,该孔含有包括以下的无血清培养基:100IU/ml青霉素G、100μg/mL链霉素、20ng/mL人重组表皮生长因子(hrEGF)、10ng/ml人重组碱性成纤维细胞生长因子、2%不含维生素A的B27补充物、1%N2补充剂(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)。然后,每孔添加100μg/mL抗CD43抗体和对照抗体并随后进行培养。之后,观察到球体。通过在患者的新鲜癌症组织中分类CD43阳性细胞来进行相同的实验。
由此,证实了:依据向患者的各种肿瘤和癌组织的CD43阳性癌症干细胞施用抗CD43抗体的结果,癌症干细胞的肿瘤发生与对照组相比被抑制。这个结果表明抗CD43抗体对癌症干细胞的癌形成显著的抑制效果。
实施例10:在多种癌症动物模型中测试抗CD43抗体的抗癌效果(体内)
使用实施例7和8的结果证实的CD43表达的细胞系和新鲜的癌组织来制备动物模型,并且其方法与实施例4相同。将小鼠随机分入对照组(PBS给药)和测试组,并且在接种癌细胞后3天将实施例2中制备的抗CD43抗体(DNP001mAb)以8mg/kg的量注射到尾静脉,每周2次持续3周;或者将0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、5mg/kg的实施例3-1中制备的抗CD43-皂草素、DM1、MMAE、倍癌霉素偶联物腹膜内注射,每周一次持续3周。
实施例11:神经氨酸酶处理后正常血细胞的结合能力变化的测试
证实了与正常淋巴细胞的结合能力是否发生了变化,其中,识别正常血液中表达的CD43的抗体(DFT-1)和识别肿瘤特异性CD43的抗CD43抗体(YG5)经神经氨酸酶处理。
从健康人身上采集10mL血液,向该血液中加入40mL红细胞裂解液(RBC裂解液;NH4Cl,NaHCO3,EDTA pH8.0),并且在室温下裂解10分钟。将其中红细胞被裂解的血液以1700rpm离心5分钟,然后除去上清液,并用10mL的PBS洗涤2次。使3×106个淋巴细胞悬浮于130μL上述得到的红血细胞裂解液中,并且加入50μL神经氨酸酶(ELPIS,韩国)和20μL缓冲液。然后,细胞在37℃下反应50分钟,并经PBS洗涤。为了证实神经氨酸酶对抗体识别CD43的表位是否发生了变化,将FITC和PE结合的DFT-1和YG5抗体加入到细胞中,并在4℃下反应15分钟后,然后用4ml的PBS洗涤细胞。然后用流式细胞术测量细胞,并测量与正常淋巴细胞的滴度。
结果示于图15中,证实了上述获得的两种针对CD43的抗体(DFT-1和YG5)的滴度。如图15所示,证实了DFT-1在处理神经氨酸苷酶前显示出高滴度,但是在处理神经氨酸酶之后未显示滴度;然而,YG5在处理神经氨酸酶之前未显示滴度,但在处理神经氨酸酶之后显示出16.16%的滴度。由此,证实了根据本发明的抗CD43抗体(YG5)不识别CD43蛋白的唾液酸化表位,并且这表明根据本发明的抗CD43抗体不结合正常细胞,而特异性结合癌细胞,特别是癌症干细胞。
实施例12:CEACAM5和CEACAM6的交叉反应性的测试
已知的是,识别CD43蛋白的已知5F1克隆同时识别CD43和CEACAM6,并结合两种蛋白的岩藻糖基化位置。经测试,抗CD43抗体显示出与CEACAM5和CEACAM6的交叉反应性,并且测试了几夫碱(kifunensine)和岩藻糖苷酶糖基化改变CD43表位而使抗CD43抗体的结合能力改变。
在将rCEACAM5-hFC(Sinobiologics,Cat.No:11077-H03H-50)和rCEACAM6-hFC(DinonA公司)重组蛋白以每孔200μL的量添加到maxisorp ELISA板中并在37℃下反应1小时之后,由此产生阻断。将IgG1、YG5、DFT-1、9A6或8F5单克隆抗体(8F5:Biomaterials,2015Oct,67,32-41,9A6:SantaCruz Biotechnology,Cat.No:sc-59899)以每孔100ng的量分别添加到经rCEACAM5-hFC和rCEACAM6-hFC蛋白覆盖的孔中并在37℃下反应1小时,然后用PBS洗涤以除去未结合的抗体。然后,稀释并加入山羊抗小鼠IgG-HRP(Jackson),并使其反应30分钟,然后用PBS洗涤,并且以每孔50μL的量加入TMB溶液并使其反应10分钟,然后加入50μL硫酸以停止反应,并且测量450nm处的吸光度。
所得结果示于图16。如图16所示,证明了抗CD43抗体(YG5)对重组蛋白CEACAM5和CEACAM6具有很小的反应性。
另外,抗CD43抗体对岩藻糖苷酶和几夫碱处理的CEM7细胞(根据与单细胞培养从ATCC(CCL-119)获得的CCRF-CEM细胞的原始细胞相比,CD43的细胞表面表达水平增加了50%或更多来分选出的细胞;下文相同)的结合能力没有变化。结果表明,即使在CD43的糖条件改变的条件下,本发明提供的抗体(例如(抗CD43抗体(YG5))也保持与CD43的结合能力,这意味着抗体的表位不独立于糖。另一方面,已知常规CD43抗体5F1显示出糖依赖性表位结合能力,由此证明本发明提供的抗体与常规抗体具有区别。
实施例13:胃癌细胞的三维培养实验(肿瘤球分析)
在实验前,将胃癌细胞系NCI-N87细胞制备到80~90%的150mm培养皿。通过1×胰蛋白酶·EDTA处理使NCI-N87细胞悬浮,然后进行洗涤。使制备的NCI-N87细胞再悬浮在培养基(DMEM/F12(GIBCO)、B27(Invitrogen)、EGF&bFGF(Invitrogen))中,然后以1×105/2ml等分在6孔(超低附着板)中,然后在37℃的CO2培养箱中培养5天。在用光学显微镜拍摄各孔的细胞后,通过1×TE200μL将细胞分离成单细胞,然后用PBS进行洗涤。将1/50的正常小鼠血清添加到细胞中,并它在4℃下阻断10分钟。随后,将细胞以100μL每份等分至流式细胞计数管中,并且分别以10μL和1μL的量加入抗CD44抗体(eBioscience,目录号17-0441-82)和抗CD43抗体(YG5,DFT-1),并且在4℃下反应25分钟。在通过与上述相同的方法洗涤后,每个试样加入1%(w/v)的多聚甲醛以固定细胞,然后进行流式细胞术。
所得结果示于图17a(培养时的结果)和图17b(培养5天后的结果)。每个图的顶部是显微图像,而底部是示出流式细胞术结果的曲线图。如图17a和图17b所示,通过使用流式细胞术在培养5天的NCI-B87肿瘤球中证实了CD44和CD43双阳性细胞的增加,并且证实了随时间推移而形成肿瘤集落。另外,确认了通过形成肿瘤球体而使CD43的表达增加。这个结果表明CD43表达在肿瘤干细胞中特异性增加。
实施例14:使用悬浮液中的悬浮细胞测量修饰的细胞结合能力的ELISA方案
这种分析被设计成初步(pilot)研究,以通过在聚-D-赖氨酸板中使用具有降低的背景信号的ELISA实验来验证scFv或IgG对悬浮液中悬浮细胞的结合能力。
方法:
1、收集细胞的步骤。
a.将细胞放入50mL Falcon管中并且以500×g离心5分钟(丸化),来使细胞丸化;
b.用10ml的PBS洗涤获得的细胞丸一次并且以500×g离心5分钟(丸化),来使细胞丸化;
c.用1mL的PBS使细胞再悬浮后,对细胞进行计数(计数细胞);
d.用阻断缓冲液(PBS+3%FCS)稀释细胞(细胞稀释液浓度:5×105细胞/孔(10×106细胞/mL));
e.将50μL/孔的细胞储液加入到V型底96孔板中。
2、加入50μL/孔的细胞质提取物(抗CD43 scFv)或IgG1(所需终浓度×2倍浓缩的储液;例如,当需要25μg/mL的最终浓度时,制备50μg/mL储液)(根据布局(Layout)分析,制备成一式两份或一式三份)。通过小心移液4次使试样混合。
3、在室温下培养1小时。
4、以500×g离心5分钟,以使细胞丸化。
5、通过抽吸或将板内翻,来除去上清液。
6、用200μL阻断缓冲液洗涤细胞,并且通过移液4次使试样混合。
7、以500×g离心5分钟,以使细胞丸化。
8、小心地将板内翻或抽吸,来除去上清液。
9、将100μL的在阻断缓冲液中以1:1,500稀释的抗标签的HRP偶联抗体加入到细胞丸,并小心使其再悬浮,并且在室温下培养30分钟。
10、以500×g离心5分钟,使细胞丸化。
11、小心地将板内翻或抽吸,来除去上清液。
12、加入200μL阻断缓冲液来小心洗涤细胞,并且通过移液4次使所得试样混合。
13、以500×g离心5分钟,使细胞丸化。
14、小心地将板内翻或抽吸,来除去上清液。
15、加入200μL阻断缓冲液来小心洗涤细胞,并且通过移液4次使所得试样混合。
16、以500×g离心5分钟,使细胞丸化。
17、小心使细胞再悬浮于80μL的SureBlueTM TMB Microwell Peroxidase底物,并在室温下培养5分钟,然后用1M HCl终止反应。
18、将100μL的各个试样转移到标准96孔板。
19、在450nm处对板进行读取(吸光度)。
实施例15:使用悬浮液中的悬浮细胞来测量修饰的细胞结合能力的FACS方案
该分析被设计成FCAS实验的另一种方法,以降低聚-D-赖氨酸板中的背景信号并且评价scFv或IgG的结合能力。
方法:
1、流式细胞术:
a.收集细胞的步骤:
i.以500×g离心5分钟(丸化),在50mL的falcon管中使细胞丸化;
ii.用10ml的PBS洗涤获得的细胞丸一次并且以500×g离心5分钟(丸化),来使细胞丸化;
iii.用1mL的PBS使细胞再悬浮后,对细胞进行计数(计数细胞);
iv.用阻断缓冲液(PBS+3%FCS)稀释细胞(细胞稀释液浓度:5×105细胞/孔(10×106细胞/mL));
v.将50μL/孔的细胞储液加入到V型底96孔板中。
2、根据布局(Layout)分析,细胞添加50μL/孔的IgG(所需最终浓度×2倍浓缩的储液;例如,当需要25μg/mL最终浓度时,制备50μg/ml储液),一式两份或一式三份,通过移液4次使试样混合。
3、在室温下孵育30分钟。
4、加入200μL阻断缓冲液。
5、以500×g离心5分钟,以使细胞丸化。
6、小心地将板内翻或抽吸,来除去上清液。
7、加入200μL阻断缓冲液并轻轻洗涤细胞,然后通过使用移液管约4次来使混合均匀。
8、以500×g离心5分钟,以使细胞丸化。
9、除去介质。
10、将200μL的在阻断缓冲液中以1:20稀释的山羊抗人IgG Alexa Fluor488加入到细胞丸中,并小心地使其再悬浮,并在光被阻挡的地方于冰上放置1小时。
11、以500×g离心5分钟,以使细胞丸化。
12、除去介质。
13、加入200μL阻断缓冲液并轻轻洗涤细胞,然后通过使用移液管约4次来使混合均匀。
14、以500×g离心5分钟,以使细胞丸化。
15、加入200μL阻断缓冲液并使细胞轻轻再悬浮。
16、通过使用流式细胞仪对板进行读取。
实施例16:使用可溶性scFv制剂的scFv流式细胞术
本实施例测试scFv与CEM7和U937细胞(
CRL1593.2
TM)的结合水平,并且使用在大肠杆菌周质中表达的可溶性scFv,并且设计用于通过流式细胞术进行scFv细胞结合分析。
方法:
第1天:克隆接种
1、起动培养板:
a.200μL的2YT(2×酵母提取物)+5%(w/v)葡萄糖+氨苄青霉素填充到96孔培养板中。
b.将可作为比较组的scFv与所需克隆(抗CD43(mJL1)scFv编码DNA:SEQ ID NO:49;Sh741-112scFv编码DNA:SEQ ID NO:51;Sh145-112 scFv编码DNA:SEQ ID NO:SEQ IDNO:53;Sh146-112:SEQ ID NO:55;或Sh434-112 scFv编码DNA:SEQ ID NO:57)接种到孔中。
2、在650rpm和37℃的条件下摇动,培养过夜。
第2天:scFvs的表达
周质提取物培养物:
3、根据接种表达板的最终用途:周质提取物,每个试样可以接种一个或多个孔。
a.将1.0mL/孔的2YT+Amp(无葡萄糖)填充到96深孔板中。
b.在将起动培养物稀释至在OD600下具有0.1值之后,将它们接种到96孔板中。在30℃和650rpm的条件下摇动,将它们培养2~4小时。定期地,通过收集试样来测量在OD600下的浊度。将细胞培养至具有0.7~1.0的OD600值。
4、在表达板中诱导scFv表达:
a.为了诱导周质提取培养物的表达,将100μL的2YT+Amp(其中IPTG(以1:100稀释储液IPTG))加入到各表达板中。
b.在650rpm和22℃的条件下摇动,培养过夜。
第3天:周质提取物的制备和流式细胞术
周质提取物:
5、周质提取物的制备:
a.以2000×g离心10分钟,使细胞丸化。
b.将表达板中的上清液撒到装有漂白剂的容器,并且通过放在纸巾上来去除留在板中的培养基。
c.将75μL的冷PPB(磷酸钾缓冲液)+蛋白酶抑制剂(每50mL 1片;完全;Roche,目录号:04693116001)加入到每个孔中,并通过移液4次而使其再悬浮,然后在1000rpm和4℃的条件下培养10分钟。
d.置于每个孔中,并通过移液4次来再悬浮,然后在1000rpm和4℃的条件下于振荡下培养1小时。
e.使板在3000×g下离心10分钟。
f.转移周质提取物(约270μL)并将滤器放入堆叠中(确保对应A1取向)。
i.顶部:1.2μm的96孔滤板
ii.中部:100K的96孔滤板
iii.底部:96孔平底标准板。
g.以4000rpm离心该板20分钟。
h.(如果必要的话)收集每个克隆的试样来用于准备流式细胞术分析。
6、流式细胞术:
a.scFv试样:使用周质提取物
b.细胞的收集:
i.将细胞放入50mL Falcon管中并且以500×g离心5分钟(丸化),来使细胞丸化。
ii.用10mL的PBS洗涤细胞丸一次并以500×g离心5分钟,来使细胞丸化。
iii.在使细胞再悬浮于1mL的PBS中后,对细胞进行计数(计数细胞)。
iv.以0.5×105个细胞/孔(2.5×106个细胞/mL)对细胞进行稀释。
v.将20μL/孔的细胞储液加入到V型底96孔板中。
c.加入20μL/孔的周质提取物一式两份(scFv)。
并且通过移液约4次来使试样轻轻混合。
d.将它们在室温下放置30分钟。
e.加入180μL阻断缓冲液。
f.以500×g离心5分钟,来使细胞丸化。
g.通过将板内翻或进行抽吸,来除去上清液。
h.加入200μL阻断缓冲液并轻轻洗涤细胞,然后通过移液约4次进行均匀混合。
i.以500×g离心5分钟,来使细胞丸化。
j.除去介质。
k.通过向容易制备的结合缓冲液中加入50μL的5μg/mL抗标签PE-偶联抗体(BioLegend,目录号:637310),使细胞轻轻再悬浮。由于抗体对光敏感,因此应尽量避免光照。在避光条件下,使它们在冰上静置30分钟。
l.以500×g离心5分钟,来使细胞丸化。
m.除去介质。
n.加入200μL阻断缓冲液并轻轻洗涤细胞,然后通过移液约4次进行均匀混合。
o.以500×g离心5分钟,来使细胞丸化。
p.加入200μL阻断缓冲液并使细胞轻轻再悬浮。
q.通过使用Guava流式细胞仪(Merckmillipore)读取板。应预先准备流式细胞术以识别黄色荧光。
实施例17:鼠抗CD43抗体作为模板的功能特性
进行本实验以证明适用于抗体处理(JL-1)的靶表位。在本实验中,使用结合表位(重链:SEQ ID NO:34;重链编码DNA:SEQ ID NO:33;重链表达载体(基于pTT5):SEQ ID NO:35;轻链:SEQ ID NO:37,轻链编码DNA:SEQ ID NO:36;轻链表达载体(基于pTT5):SEQ IDNO:37)的小鼠抗CD43单克隆抗体。
证实了:当JL-1抗原(CD43)在37℃下培养4小时时,没有从细胞中分离出显著量的抗原。证明了:当通过蛋白质印迹分析对混合到缓冲液的抗CD43抗体与混合到实际Molt-4(CD43+急性淋巴细胞性白血病细胞系;ATCC,CRL-1582)或HL-60(ATCC)上清液的抗CD43抗体进行比较时,在尺寸方面没有很大差异。
另外,证实了在正常人血清中循环的JL-1抗原(CD43)的量不足以显著干扰抗CD43抗体与靶标的结合。在体外评估50%人血清对结合白血病细胞的抗CD43抗体的影响(测量IF(免疫荧光)反应性)。所得结果示于表2。
[表2]
*ND:未测定
如表2所示,证实了血清并不干扰抗CD43抗体与Molt-4细胞或HL-60细胞的结合。
另外,经测试,未偶联的裸抗CD43抗体对分离的靶细胞没有直接细胞毒性效果。为此,分别以40000个细胞/孔的量将CD43+CEM7细胞(以CEM7-高抗原表示)和CCRF-CEM细胞(原始CEM细胞(ATCC);以CEM7-中抗原表示)加入到96-孔板中,并连续稀释并处理小鼠CD43抗体(预先制备的小鼠抗CD43单克隆抗体),并且在培养第3天通过使用Cell Titer Glo(PromegaTM)测定细胞毒性。为了比较,对低浓度的表达CD43的H9K细胞(H9K-低抗原)进行相同实验。
所得结果示于图18。如图18所示,证实了小鼠CD43抗体对CD43+CEM7(CEM7-高抗原)或CCRF-CEM细胞(CEM-中等抗原;与CEM7细胞相比CD43表达较少)没有表现出细胞毒性。
诸如CEM7、CCRRF-CEM、Nalm6(ATCC,CRL-3273)和HL-60(ATCC,CCL-240)等细胞系表现出独立地不同的JL-1抗原(CD43)表达水平(按描述顺序从高表达到低表达)。以20μg/ml至每个细胞(20000个细胞)的稀释浓度来处理皂草素结合的抗CD43抗体(参照实施例3-1的偶联物的构建;抗CD43抗体是预先制备的小鼠抗CD43单克隆抗体)或同种型对照,并且在培养的第3天时使用Cell Titer Glom测量细胞存活率。使用小鼠IgG1作为用于比较的同种型对照。
所得结果示于图19。如图19所示,观察到当处理皂草素偶联物抗CD43抗体(图19中表示为mJL-1)时,CEM7的细胞存活率降低最大,随后是CEM和NALM6细胞。观察到最低细胞毒性出现在不表达靶标的HL-60中(最小的细胞存活率降低)。如图19所示,毒素连接的抗CD43抗体诱导了靶细胞的死亡。与细胞中存在的抗原的表达水平相比,抗CD43抗体处理的CEM7、CCRF-CEM、NALM6和HL-60细胞显示出有效杀死细胞的活性。皂草素仅在胞内诱导的情况下显示出细胞毒性效果。
测试了抗CD43抗体的内化。将小鼠抗CD43抗体(预先制备的小鼠抗CD43单克隆抗体)在冷藏条件下处理细胞(CEM7)30分钟,并转移至37℃的条件下,然后在图20的X轴中表示的各个时间点收集106个细胞,并且抗小鼠IgG-PE第二抗体(Santa cruz生物技术,目录号:SC3738)在冷藏温度下处理10分钟,并且洗涤并固定细胞,然后通过流式细胞仪进行分析(参照实施例15)。
所得结果示于图20。如图20所示,抗CD43抗体在与抗原结合时进入细胞,并且相应数据表明细胞表面上的抗体进入细胞并随时间流逝而消失的水平。如图19所示,该数据证明了用于凋亡分析的抗CD43抗体(小鼠抗体和人源化抗体二者)的内化。
另一方面,测试了表达抗原的细胞中由抗CD43抗体诱导的同型聚集现象。为此,抗CD43抗体(预先制备的小鼠抗CD43单克隆抗体)以40μg/mL的起始浓度处理300000个细胞(CEM7、CCRRF-CEM或HL-60)并在37℃和5%CO2的条件下培养,然后通过在设定的时间点(抗体处理后2小时)拍摄显微照片来获得图像。所得图像示于图21。图21是示出由抗CD43抗体(表示为抗JL-1抗体)诱导的同型聚集现象的图像,这表明抗CD43抗体在体外诱导了表达CD43的细胞的同型聚集,并且同型聚集的水平与抗原(CD43)的表达水平有关。
另外,测试了人正常骨髓细胞中的CD43表达。正常骨髓的单核细胞用鼠抗CD43抗体(预先制备的鼠抗CD43单克隆抗体)对进行染色,然后用山羊抗鼠IgG F(ab)2-PE(Jackson,目录号:115-035-072)进行染色,并且通过实施例15中公开的方法进行观察。
所得结果示于图22。在图22中,直方图叠加表示有限的淋巴细胞。如图22所示,通过抗CD43抗体(表示为JL1)染色在各种正常骨髓试样中证实了异源CD43表达的低水平,并且在几种外周血细胞中也得到证实。换言之,该结果示出了正常骨髓细胞中异源CD43表达水平低。
另一方面,通过流式细胞术在来自各种人正常骨髓试样(首尔国立大学医院)的CD34+CD38-细胞(造血细胞通过FACS检测分选为CD43表达和CD38非表达细胞;下文相同)中测量CD43表达,并且证实了在造血干细胞和骨髓中形成集落的前体细胞中缺乏CD43蛋白表达。证实方法简单描述如下:在第0天,将脐带造血干细胞接种到30只NSG小鼠(NOD/SCID×普通g链缺陷)。在12周后,用最终分化的免疫细胞分析所有小鼠的PBL(外周血淋巴细胞)。对测试中使用的所有小鼠的免疫系统进行移植(ingraft),并且施用抗CD43抗体(预先制备的小鼠抗CD43单克隆抗体)-毒素(皂草素)偶联物或载体(PBS),持续4周。在处理4周后,在免疫动物中分析人免疫细胞的存在。为了比较,使用小鼠IgG1-毒素(皂草素)偶联物替换抗CD43抗体进行相同的测试。
所得结果示于下面的表3。
[表3]
(在该表中,JL1代表CD43;PMN:多形核白细胞;LN:淋巴结)
如表3所示,当NSG小鼠移植有从脐血干细胞获得的正常人造血干细胞(HSC)并且抗CD43抗体-毒素(皂草素)偶联物处理4周时,没有观察到任何造血细胞部分的缺失。该结果表明抗CD43抗体-毒素(皂草素)偶联物不杀死造血干细胞或中间祖细胞。
在各种人正常组织中使用小鼠抗CD43抗体进行免疫组织化学染色(IHC),并且所得结果示于下面的表4。
[表4]
组织 |
#阳性 |
强度 |
小脑 |
0/3 |
|
肾上腺 |
0/3 |
|
卵巢 |
0/3 |
|
胰腺 |
0/3 |
|
甲状旁腺 |
0/3 |
|
睾丸 |
0/3 |
|
甲状腺 |
0/3 |
|
乳腺 |
0/3 |
|
扁桃体 |
0/3 |
|
胸腺 |
3/3 |
+++ |
骨髓 |
0/3 |
|
肺 |
0/3 |
|
心 |
0/3 |
|
食管 |
0/3 |
|
胃 |
0/3 |
|
小肠* |
0/3 |
|
结肠* |
0/3 |
|
肝 |
0/3 |
|
涎腺 |
0/3 |
|
肾 |
0/3 |
|
前列腺 |
0/3 |
|
*粘蛋白染色 |
|
|
如表4所示,在胸腺以外的其他组织中未发现CD43特异性染色。
通过用小鼠抗人CD43(表示为JL-1:(d))对两种正常人PBMC(外周血单核细胞)进行染色来测量CD43抗原的表达率(参见实施例15(FACS),并且结果示于图23。如图23所示,证实了CD43的低表达率。
用皂草素偶联的小鼠抗CD43抗体(10μL/mL)预先处理正常骨髓细胞(JL1+),以及未处理(JL1-)的情况,并且测量这些骨髓亚群的集落形成水平。从人白血细胞中分离出骨髓,并且通过分成JL-1(CD43)阳性和阴性来分离并收获CD34+细胞。然后将收获的细胞与细胞因子一起放入Methocult中,并且测量集落的形成。所得结果示于图24。如图24所示,证实了在预先处理皂草素偶联的小鼠抗CD43抗体(10μL/mL)(JL1+)的情况下,未形成骨髓亚群的集落。
另一方面,在使用细胞系的白血病ALL异种移植物小鼠模型(通过将CEM7细胞移植到小鼠而获得的急性白血病小鼠模型)中测试了抗CD43抗体本身(裸抗)和毒素结合的抗CD43抗体-毒素(debouganin)偶联物的治疗效果。使用预先制备的小鼠抗CD43单克隆抗体作为抗CD43抗体。所得结果示于图25。在图25中,抗CD43抗体表示为JL1。在图25中,(A)示出了CEM7白血病模型中的结果,(b)示出了NALM-6模型(细胞系:NALM6(B-ALL))中的结果,并且测试在以下条件下进行:小鼠:NOD-SCID(8/组);接种:在第0天时为107个细胞;给药:从第8天开始15μg/注射+100μg散装的IgG i.v.1×/周;终点:瘫痪状态。如图25所示,当用裸(非偶联)抗CD43抗体处理CEM7或NALM-6细胞接种的ALL异种移植物模型小鼠时,该疾病未发生或延迟。
另一方面,测量了主要AML(急性骨髓性白血病)母细胞和亚群中的CD43表达水平。结果示于图26。如图26所示,在原发性AML母细胞和普遍存在特定亚群中分析CD43蛋白(表示为JL-1)表达。AML群中约60%表达了CD43。
实施例18:人源化抗CD43单克隆抗体的构建
基于维持小鼠CD43抗体并编码人抗体基因的Gremlin序列(重链:SEQ ID NO:34;重链编码DNA:SEQ ID NO:33;重链表达载体:SEQ ID NO:35,轻链:SEQ ID NO:37;轻链编码DNA:SEQ ID NO:36;轻链表达载体(基于pTT5):各自为SEQ ID NO:38的重链和轻链的CDR区序列)(CDRH1:SEQ ID NO:111(GYFMN);CDRH2:SEQ ID NO:114(RINPNNGDSFYNQKFQG);CDRH3:SEQ ID NO:118(EGYYGGRGYALDY);CDRL1:SEQ ID NO:119(RTSQDISNYLN);CDRL2:SEQID NO:121(NTSRLHS);CDRL3:SEQ ID NO:125(QQSNMFPY)),构建了scFv型的重组人源化抗体库,其中将框架区的序列区域重组。
通过常规噬菌体展示方法表达并筛选构建的scFv抗体库,并将构建的阳性克隆作为表达在除CDR之外的区或CDR中的部分区序列被替换的变体的子库,由此重复筛选。
通过重复这些库构建的各种循环和展示方法,确保了抗原亲和力与亲本克隆非常相似的人源化抗体变体序列。
确保的人源化抗CD43抗体的重链序列示于SEQ ID NO:40、42、44和46,轻链序列示于SEQ ID NO:48,并且重链可变区和轻链可变区分别示于SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30和83(重链可变区),以及SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32和83(轻链可变区)。
另外,来自修饰的SEQ ID NO:83(重链可变区)和SEQ ID NO:95(轻链可变区)的突变型人源化抗CD43抗体的重链可变区和轻链可变区分别示于SEQ ID NO:84至94(重链可变区)和SEQ ID NO:96至106(轻链可变区)。
通过将所获得的重链可变区和轻链可变区与GGGASGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:127)或GGGGSGGGGSGGGAS(SEQ ID NO:128)连接来制备scFv型抗体。
实施例19:人源化或嵌合抗CD43单克隆抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。
测试了制备的嵌合抗CD43抗体(DNP001;实施例2-1-3)的凋亡效应(ADCC和CDC)。首先,使CEM7细胞系效应细胞(PBMC;外周血单核细胞)与抗CD43嵌合体或对照抗体(人IgG1)共培养4小时,然后通过使用Cell Titer Glo来测量细胞毒性,并且结果示于图27A。使CEM7细胞系与培养基和抗CD43嵌合抗体一同与兔补体(cedarlane,目录号:CL3051)一起培养,然后使用Cell Titer Glo来测量细胞毒性,并且结果示于图27B。抗CD43嵌合抗体在图27中表示为JL-1。如图27所示,与人IgG1对照抗体相比,证实了嵌合抗CD43抗体诱导了在体外水平上的效应子介导杀死(ADCC和CDC)。
图28示出了去糖基化(通过用几夫碱处理抗体进行去糖基化)的嵌合抗CD43抗体(表示为JL-1)增强了在体外水平上对CEM7的ADCC活性。
图29是示出体内CEM7细胞系中的不与任何物质结合的裸-嵌合抗体的效果的曲线图。如图29所示,证实了裸(非偶联的)和去色素偶联的嵌合抗CD43抗体增强了CEM7细胞接种的动物(ALL(急性淋巴细胞性白血病)白血病模型)的存活。
测试了白血病干细胞(LSC)亚群中的CD43表达。用CD45抗体(BD)、CD34抗体(BD)、CD38抗体(BD)、CD43抗体(DNP001)或具有Alexa488的mIgG1(对照)对AML(急性骨髓性白血病)患者骨髓进行染色,并且通过分选CD34+CD38-白血病干细胞来评估CD43的表达水平,并将它们与对照组进行比较。结果示于图30(JL1:CD43)。如图30所示,CD43抗原在白血病起始细胞(LSC)亚群(CD34+/CD38-)中表达。
体外测量用与毒素(皂草素:SAP)偶联的嵌合抗CD43抗体(CCC)处理的集落的平均数量,并且将其示于图31。该结果表明了抗原阳性AML的凋亡效应,其中抗原阳性AML与CD43抗体-皂草素偶联物或小鼠IgG1-皂草素偶联物一起添加到干细胞集落基质。
此外,体外测量了与毒素(皂草素:SAP)(CCC)偶联的嵌合抗CD43抗体对抗原阳性主要AML增殖的影响,并且将其示于图32。该结果表明CCC降低了主要AML的增殖。通过将主要AML母细胞放入含有CD43抗体-皂草素偶联物或小鼠IgG1-皂草素偶联物的培养基中并在3天后测量细胞增殖水平来获得结果,并且由结果证实了在包含JL1-皂草素的培养基中培养时细胞生长减慢(A),并且死细胞的比例(B)增加。
如图31和图32所示,当通过体外集落分析(图31)和增殖分析(图32)进行确认时,毒素偶联的人源化嵌合抗体对CD43阳性原发性AML具有细胞毒性。
测试了在NSG小鼠(体内)中毒素偶联的抗体对主要AML癌细胞生长的抑制效果。从CD43+AML患者中收获5×107骨髓细胞,并且将它们静脉注射到30只经辐射的NSG小鼠,并且在8周后,将嵌合CD43抗体-三角梅核糖体失活蛋白(DB)偶联物(表示为JL1-DB)、hIgG1-DB偶联物(表示为Isotype-DB)或PBS(载体)以每周45μg的剂量施用给这些小鼠,持续4周。然后从那些小鼠中收集血液、骨髓和脾脏,并且观察植入和肿瘤生成。所得结果示于图33。如图33所示,毒素偶联抗CD43人源化嵌合抗体在体内水平上抑制了NSG小鼠的原发性AML癌细胞的生长。
图34和图35证实了:各种人源化/优化的修饰抗体显示出与模板(小鼠)CD43抗体相比等同的结合特征。CEM7细胞用亲本模板CD43抗体(ART140 JL1;小鼠抗CD43抗体;重链:SEQ ID NO:34;轻链:SEQ ID NO:37)和3种人源化抗体(257-10(SEQ ID NO:(SEQ ID NO:6和105);456-D10(SEQ ID NO:94和106);联合体A(SEQ ID NO:2和4))进行染色,由此测量荧光强度,并且结果示于图34。如图34所示,证实了修饰的“联合体A”显示出最好的轮廓,但是所有其他测试抗体显示出了在CEM7细胞中显著水平的细胞毒性。为了测试与细胞毒性物质偶联的抗体的细胞内化,用3种与抗人IgG-皂草素预复合的人源化抗体处理CEM7细胞,并且在3天后测量细胞毒性,并将其示于图35。如图35所示,当使用3种修饰抗体与皂草素的偶联物时,细胞毒性显著高。
如图34和图35所示,各种人源化抗CD43抗体变体的结合水平和细胞毒性水平与体外鼠类CD43抗体(ART140 JL1)相比是相当的。对照组使用了Synagis(Medimmune公司),即,RSV F蛋白的抗原性位点上的抗原决定簇的人源化单克隆抗体(IgG)。
图37a和图37b示出了通过流式细胞术对许多与细胞表面上的CD43抗原结合的人源化抗CD43抗体变体(参见图36)与鼠CD43抗体(ART140 JL1)的比较。使用U937细胞(CD43抗原在表面上的表达缺乏)来作为阴性对照。
图38a和图38b示出了通过酶联免疫吸附测定(ELISA)对许多与细胞表面上的CD43抗原结合的人源化抗J CD43抗体变体(参见图36)与鼠CD43抗体(ART140JL1)的比较。使用U937细胞(CD43抗原在表面上的表达缺乏)来作为阴性对照。
图39a和图39b示出了通过流式细胞术对与细胞表面上的CD43结合的Quikchange突变人源化抗CD43抗体变体(联合体A(SEQ ID NO:91(重链可变区);SEQ ID NO:103(轻链可变区))、联合体B(SEQ ID NO:91(重链可变区);SEQ ID NO:103(轻链可变区))、联合体C(SEQ ID NO:85(重链可变区);SEQ ID NO:97(轻链可变区)))与鼠CD43抗体(ART140 JL1)和第3轮亲本框架的比较。
图41a至图41c示出了与细胞表面上的JL1抗原结合的Quikchange突变人源化抗CD43抗体变体(联合体A、联合体B、联合体C)与鼠CD43抗体(ART140 JL1)和第3轮亲本框架的比较。
实施例20:移除人源化抗体的糖基化区的氨基酸残基的修饰抗体的制备
据发现,从实施例18中获得的人源化抗CD43抗体(257-10;包含SEQ ID NO:6(重链可变区)+SEQ ID NO:105(轻链可变区)+轻链可变区(SEQ ID NO:105))的轻链可变区(SEQID NO:105)存在可能糖基化的氨基酸序列,并且通过制备突变抗体来移除该氨基酸序列。
由于轻链可变区的糖基化很可能对抗体的抗原结合能力和物理性质造成负面影响并且可能影响随后大量生产中的产率降低,所以通过将具有糖基化潜能的氨基酸替换为其他氨基酸来提高抗体发展成治疗剂的可能性。
选择第50位的氨基酸残基天冬酰胺(Asn,N)和第52位的氨基酸残基丝氨酸(Ser,S)作为人源化抗CD43抗体的轻链可变区(SEQ ID NO:105)能糖基化的氨基酸(参见图43)。通过将SEQ ID NO:8的第50位氨基酸残基天冬酰胺(Asn,N)替换为谷氨酰胺(Gln,Q)或丙氨酸(Ala,A),和/或将第52位氨基酸残基丝氨酸(Ser,S)替换为丙氨酸(Ala,A),来制备突变体抗体;并且上述获得的突变抗体的轻链可变区示于SEQ ID NO:107(S52A)、108(N50Q)和109(N50A)。
[SEQ ID NO 107(S52A)]
[SEQ ID NO 108(N50Q)]
[SEQ ID NO 109(N50A)]
制备了包含所得的修饰抗体55的重链可变区(SEQ ID NO:6)和轻链可变区的IgG1型抗体,并且使用与糖基化区结合的伴刀豆球蛋白A-HRP(Sigma-Aldrich)来进行蛋白质印迹。
所得结果示于图44。如图44所示,证实了伴刀豆球蛋白A结合到糖基化区的氨基酸未被修饰的抗体中全部轻链区和重链区(包含SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:105;野生型),但在3种修饰的抗体(scFv)中未发生轻链区的结合。这个结果意味着除去了抗体轻链区的糖基化。
另外,通过测量抗体与CD43阳性细胞CEM7细胞的结合能力,分析了抗原结合能力。所得结果示于图45。如图45所示,修饰的抗体示出了与野生型等同的抗原结合能力。
将嵌合抗体(DNP001)和移除糖基化的修饰人源化抗体(重链可变区;SEQ ID NO:6;轻链可变区:SEQ ID NO:109)结合到抗原(CD43)阳性细胞CEM7细胞,并且通过流式细胞术对它们进行分析。所得结果示于图46。如图46所示,证实了修饰的人源化抗体示出了比嵌合抗体增强的CD43表达细胞结合能力。
<110> APROGEN 柱式会社
<120> 抗CD43抗体及其在癌症治疗中的应用
<130> OPP20162379KR
<150> US 62/240,276
<151> 2015-10-12
<150> AU 2016901555
<151> 2016-04-28
<160> 134
<170> KopatentIn 2.0版
<210> 1
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Quickchange突变组合体 A重链可变区(VH)核苷酸序列
<400> 1
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctactaca tgaactgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggccgg atcaacccca acagcggcga cagcttctac 180
aaccagaaat tcaagggcag ggtgaccacg acccgcgaca ccagcaccag caccatgtac 240
atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tattacggcg gcagaggcta cgccctggat tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 2
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Quickchange突变组合体 A VH 氨基酸序列
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Thr Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Met Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Quickchange突变组合体 A 轻链可变区(VL)核苷酸序列
<400> 3
gacatccaga tgacccggag ccctagcagc gtgtccgcca gcgtgggcgg cagagtgccc 60
atcacctgtc ggaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctacaac accagccggc tgcacagcgg cgtgccaagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggtatcaagc tggagatcaa gcgt 324
<210> 4
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Quickchange突变组合体 A VL氨基酸序列
<400> 4
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Pro Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 5
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 257-10 (第2轮变体) VH 核苷酸序列
<400> 5
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcaac ggctacttca tgaactgggt gaggcaggcc 120
cctgggcagg gactggagcg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tccagggccg cgtcaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggagctgc ccagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 6
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 257-10 (第2轮变体) VH 氨基酸序列
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Arg Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Pro Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 7
<211> 325
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 257-10 (第2轮变体) VL核苷酸序列
<400> 7
gacacccaga tgacccagag cccttcttct gtctccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accagcaggc tccactctgg agtccccagc 180
cgcttctccg gctccgggtc tggaaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcgggcag 300
gggaccaagc tggagatcaa gcgta 325
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 257-10 (第2轮变体) VL氨基酸序列
<400> 8
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 9
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 456-D10 VH 核苷酸序列
<400> 9
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcaac ggctacttca tgaactgggt gaggcaggcc 120
cctgggcagg gactggagcg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tccagggccg cgtcaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggagctgc ccagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 10
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 456-D10 VH 氨基酸
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Arg Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Pro Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 11
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 456-D10 VL 核苷酸序列
<400> 11
gacacccaga tgacccagag cccttcttct gtctccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcaggagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accagcaggc tccactctgg agtccccagc 180
cgcttctccg gctccgggtc tggaaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcgggcag 300
gggaccaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 12
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 456-D10 VL 氨基酸序列
<400> 12
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Glu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 13
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 324-B10 VH核苷酸序列
<400> 13
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctactaca tgaactgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggccgg atcaacccca acagcggcga cagcttctac 180
aaccagaaat tcaagggcag ggtgaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tattacggcg gcagaggcta cgccctggat tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 14
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 324-B10 VH 氨基酸序列
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 15
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 324-B10 VL 核苷酸序列
<400> 15
gacattcaga tgacccggag ccctagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga cagagtgtcc 60
atcacctgtc ggaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctacaac accagccggc tgcacagcgg cgtgccaagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggtatcaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 16
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 324-B10 VL 氨基酸序列
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 17
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-C11 VH 核苷酸序列
<400> 17
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctacttca tgaactgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggccgg atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaaat tcaagggcag ggtgaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tattacggcg gcagaggcta cgccctggat tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 18
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-C11 VH 氨基酸序列
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-C11 VL 核苷酸序列
<400> 19
gacattcaga tgacccggag ccctagcagc gtgtccgcca gcgtgggcgg cagagtgtcc 60
atcacctgtc ggaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctacaac accagccggc tgcacagcgg cgtgccaagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggtatcaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 20
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-C11 VL 氨基酸序列
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 21
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 368-G07 VH 核苷酸序列
<400> 21
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcntgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctacttca tgaactgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggccgg atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaaat tcaagggcag ggtgaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tattacggcg gcagaggcta cgccctggat tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 22
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 368-G07 VH 氨基酸序列
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 23
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 368-G07 VL 核苷酸序列
<400> 23
gacattcaga tgacccggag ccctagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga cagagtgccc 60
atcacctgtc ggaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctacaac accagccggc tgcacagcgg cgtgccaagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggtatcaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 24
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 368-G07 VL 氨基酸序列
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Pro Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 25
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 369-F05 VH 核苷酸序列
<400> 25
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctacttca tgaactgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggccgg atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaaat tcaagggcag ggtgaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccatgtac 240
atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tattacggcg gcagaggcta cgccctggat tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 26
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 369-F05 VH 氨基酸序列
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Met Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 369-F05 VL 核苷酸序列
<400> 27
gacattcaga tgacccggag ccctagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga cagagtgtcc 60
atcacctgtc ggaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctacaac accagccggc tgcacagcgg cgtgccaagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggtatcaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 28
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 369-F05 VL 氨基酸序列
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 29
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-H05 VH 核苷酸序列
<400> 29
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaac ctggcgccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctacttca tgaactgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggccgg atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaaat tcaagggcag ggtgaccacg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tattacggcg gcagaggcta cgccctggat tactggggcc agggcaccct ggtgactgtg 360
tcctcc 366
<210> 30
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-H05 VH 氨基酸序列
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Thr Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 31
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-H05 VL 核苷酸序列
<400> 31
gacattcaga tgacccggag ccctagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga cagagtatcc 60
atcacctgtc ggaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctacaac accagccggc tgcacagcgg cgtgccaagc 180
agattcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggtatcaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 32
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-H05 VL 氨基酸序列
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 33
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗-CD43 (mJL-1) IgG重链 (HC) DNA 序列
<400> 33
gaggttcagc tgcagcagtc tggtcctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatt 60
tcctgcaagg cctctggtta ctcaattggt ggctacttta tgaactgggt gaagcagagc 120
cacggcaaga gccctgagtg gattgggcgt attaatccta acaatggtga ttctttctac 180
aaccagaaat tcaagggcac ggccacattg actgttgacc gctcttctga cacagtccac 240
atggaggtcc tgagcctgac atctgaggac tctgcagtct attattgtgg ccgcgaaggt 300
tactacggtg ggcgaggcta tgctttggac tactggggtc aaggcacctc ggtcaccgtc 360
tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 34
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗-CD43 (mJL-1) IgG HC 氨基酸序列
<400> 34
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Asp Thr Val His
65 70 75 80
Met Glu Val Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 35
<211> 5734
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于表达的鼠抗-CD43 (mJL-1) IgG HC 完全载体(基于pTT5 )
<400> 35
gtacatttat attggctcat gtccaatatg accgccatgt tgacattgat tattgactag 60
ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt 120
tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac 180
gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg 240
ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag 300
tccgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat 360
gaccttacgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat 420
ggtgatgcgg ttttggcagt acaccaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt 480
tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga 540
ctttccaaaa tgtcgtaata accccgcccc gttgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg 600
gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcctca ctctcttccg 660
catcgctgtc tgcgagggcc agctgttggg ctcgcggttg aggacaaact cttcgcggtc 720
tttccagtac tcttggatcg gaaacccgtc ggcctccgaa cggtactccg ccaccgaggg 780
acctgagcga gtccgcatcg accggatcgg aaaacctctc gagaaaggcg tctaaccagt 840
cacagtcgca aggtaggctg agcaccgtgg cgggcggcag cgggtggcgg tcggggttgt 900
ttctggcgga ggtgctgctg atgatgtaat taaagtaggc ggtcttgaga cggcggatgg 960
tcgaggtgag gtgtggcagg cttgagatcc agctgttggg gtgagtactc cctctcaaaa 1020
gcgggcatta cttctgcgct aagattgtca gtttccaaaa acgaggagga tttgatattc 1080
acctggcccg atctggccat acacttgagt gacaatgaca tccactttgc ctttctctcc 1140
acaggtgtcc actcccaggt ccaagtttgc cgccaccatg gcttggatga tgcttctcct 1200
cggactcctt gcgtacggat caggagaggt tcagctgcag cagtctggtc ctgagctggt 1260
gaagcctggg gcttcagtga agatttcctg caaggcctct ggttactcaa ttggtggcta 1320
ctttatgaac tgggtgaagc agagccacgg caagagccct gagtggattg ggcgtattaa 1380
tcctaacaat ggtgattctt tctacaacca gaaattcaag ggcacggcca cattgactgt 1440
tgaccgctct tctgacacag tccacatgga ggtcctgagc ctgacatctg aggactctgc 1500
agtctattat tgtggccgcg aaggttacta cggtgggcga ggctatgctt tggactactg 1560
gggtcaaggc acctcggtca ccgtctcctc agctagcacc aagggcccat cggtcttccc 1620
cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa 1680
ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca ggcgccctga ccagcggcgt 1740
gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac tccctcagca gcgtggtgac 1800
cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc aacgtgaatc acaagcccag 1860
caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc 1920
accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc 1980
caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag 2040
ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc 2100
caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac 2160
cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc 2220
cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca 2280
ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgacctg 2340
cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc 2400
ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta 2460
cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt 2520
gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa 2580
ataggatccc ccgacctcga cctctggcta ataaaggaaa tttattttca ttgcaatagt 2640
gtgttggaat tttttgtgtc tctcactcgg aaggacatat gggagggcaa atcatttggt 2700
cgagatccct cggagatctc tagctagagg atcgatcccc gccccggacg aactaaacct 2760
gactacgaca tctctgcccc ttcttcgcgg ggcagtgcat gtaatccctt cagttggttg 2820
gtacaacttg ccaactgaac cctaaacggg tagcatatgc ttcccgggta gtagtatata 2880
ctatccagac taaccctaat tcaatagcat atgttaccca acgggaagca tatgctatcg 2940
aattagggtt agtaaaaggg tcctaaggaa cagcgatgta ggtgggcggg ccaagatagg 3000
ggcgcgattg ctgcgatctg gaggacaaat tacacacact tgcgcctgag cgccaagcac 3060
agggttgttg gtcctcatat tcacgaggtc gctgagagca cggtgggcta atgttgccat 3120
gggtagcata tactacccaa atatctggat agcatatgct atcctaatct atatctgggt 3180
agcataggct atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt 3240
agtatatgct atcctaattt atatctgggt agcataggct atcctaatct atatctgggt 3300
agcatatgct atcctaatct atatctgggt agtatatgct atcctaatct gtatccgggt 3360
agcatatgct atcctaatag agattagggt agtatatgct atcctaattt atatctgggt 3420
agcatatact acccaaatat ctggatagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagca 3480
tatgctatcc taatctatat ctgggtagca taggctatcc taatctatat ctgggtagca 3540
tatgctatcc taatctatat ctgggtagta tatgctatcc taatttatat ctgggtagca 3600
taggctatcc taatctatat ctgggtagca tatgctatcc taatctatat ctgggtagta 3660
tatgctatcc taatctgtat ccgggtagca tatgctatcc tcatgataag ctgtcaaaca 3720
tgagaattaa ttcttgaaga cgaaagggcc tcgtgatacg cctattttta taggttaatg 3780
tcatgataat aatggtttct tagacgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa 3840
cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac 3900
cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg 3960
tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc 4020
tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg 4080
atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga 4140
gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tgttgacgcc gggcaagagc 4200
aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag 4260
aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga 4320
gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg 4380
cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga 4440
atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgcagcaatg gcaacaacgt 4500
tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact 4560
ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt 4620
ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg 4680
ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta 4740
tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac 4800
tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 4860
aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 4920
tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 4980
tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 5040
gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 5100
agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 5160
tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 5220
ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt 5280
cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 5340
tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 5400
acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 5460
gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 5520
ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 5580
tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 5640
attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 5700
cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagc 5734
<210> 36
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗-CD43 (mJL-1) IgG 轻链(LC) DNA 序列
<400> 36
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggcga ccgcgtcacc 60
atcagctgcc ggacaagtca ggacattagc aattatttga actggtatca gcagaaacca 120
gatggtactg ttaaactcct gatctataac acatcacgct tgcactcagg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagcgggtc tggtacagat tattccctca ccattcgcaa cctggaacaa 240
aaagatattg ccacttactt ttgccaacag agcaatatgt ttccgtacac gttcgggggg 300
gggaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagttcac cggtgacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 37
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗-CD43 (mJL-1) IgG LC 氨基酸序列
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Arg Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Lys Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 38
<211> 5038
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于表达的鼠抗-CD43 (mJL-1) IgG LC 完全载体(基于pTT5 )
<400> 38
gtacatttat attggctcat gtccaatatg accgccatgt tgacattgat tattgactag 60
ttattaatag taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt 120
tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac 180
gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg 240
ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag 300
tccgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat 360
gaccttacgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat 420
ggtgatgcgg ttttggcagt acaccaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt 480
tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga 540
ctttccaaaa tgtcgtaata accccgcccc gttgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg 600
gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcctca ctctcttccg 660
catcgctgtc tgcgagggcc agctgttggg ctcgcggttg aggacaaact cttcgcggtc 720
tttccagtac tcttggatcg gaaacccgtc ggcctccgaa cggtactccg ccaccgaggg 780
acctgagcga gtccgcatcg accggatcgg aaaacctctc gagaaaggcg tctaaccagt 840
cacagtcgca aggtaggctg agcaccgtgg cgggcggcag cgggtggcgg tcggggttgt 900
ttctggcgga ggtgctgctg atgatgtaat taaagtaggc ggtcttgaga cggcggatgg 960
tcgaggtgag gtgtggcagg cttgagatcc agctgttggg gtgagtactc cctctcaaaa 1020
gcgggcatta cttctgcgct aagattgtca gtttccaaaa acgaggagga tttgatattc 1080
acctggcccg atctggccat acacttgagt gacaatgaca tccactttgc ctttctctcc 1140
acaggtgtcc actcccaggt ccaagtttgc cgccaccatg gatatgaggg taccagcaca 1200
acttctcgga ttactattgt tatggctgcg aggtgcgcgc tgtgatatcc agatgacaca 1260
gactacatcc tccctgtctg cctctctggg cgaccgcgtc accatcagct gccggacaag 1320
tcaggacatt agcaattatt tgaactggta tcagcagaaa ccagatggta ctgttaaact 1380
cctgatctat aacacatcac gcttgcactc aggcgtccca tcacggttca gtggcagcgg 1440
gtctggtaca gattattccc tcaccattcg caacctggaa caaaaagata ttgccactta 1500
cttttgccaa cagagcaata tgtttccgta cacgttcggg ggggggacca agctggaaat 1560
caagcgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa 1620
atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag aggccaaagt 1680
acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca 1740
ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta 1800
cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagtt caccggtgac 1860
aaagagcttc aacaggggag agtgttagga tcccccgacc tcgacctctg gctaataaag 1920
gaaatttatt ttcattgcaa tagtgtgttg gaattttttg tgtctctcac tcggaaggac 1980
atatgggagg gcaaatcatt tggtcgagat ccctcggaga tctctagcta gaggatcgat 2040
ccccgccccg gacgaactaa acctgactac gacatctctg ccccttcttc gcggggcagt 2100
gcatgtaatc ccttcagttg gttggtacaa cttgccaact gaaccctaaa cgggtagcat 2160
atgcttcccg ggtagtagta tatactatcc agactaaccc taattcaata gcatatgtta 2220
cccaacggga agcatatgct atcgaattag ggttagtaaa agggtcctaa ggaacagcga 2280
tgtaggtggg cgggccaaga taggggcgcg attgctgcga tctggaggac aaattacaca 2340
cacttgcgcc tgagcgccaa gcacagggtt gttggtcctc atattcacga ggtcgctgag 2400
agcacggtgg gctaatgttg ccatgggtag catatactac ccaaatatct ggatagcata 2460
tgctatccta atctatatct gggtagcata ggctatccta atctatatct gggtagcata 2520
tgctatccta atctatatct gggtagtata tgctatccta atttatatct gggtagcata 2580
ggctatccta atctatatct gggtagcata tgctatccta atctatatct gggtagtata 2640
tgctatccta atctgtatcc gggtagcata tgctatccta atagagatta gggtagtata 2700
tgctatccta atttatatct gggtagcata tactacccaa atatctggat agcatatgct 2760
atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt agcataggct 2820
atcctaatct atatctgggt agcatatgct atcctaatct atatctgggt agtatatgct 2880
atcctaattt atatctgggt agcataggct atcctaatct atatctgggt agcatatgct 2940
atcctaatct atatctgggt agtatatgct atcctaatct gtatccgggt agcatatgct 3000
atcctcatga taagctgtca aacatgagaa ttaattcttg aagacgaaag ggcctcgtga 3060
tacgcctatt tttataggtt aatgtcatga taataatggt ttcttagacg tcaggtggca 3120
cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata 3180
tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga 3240
gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc ttattccctt ttttgcggca ttttgccttc 3300
ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga aagtaaaaga tgctgaagat cagttgggtg 3360
cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca acagcggtaa gatccttgag agttttcgcc 3420
ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt ttaaagttct gctatgtggc gcggtattat 3480
cccgtgttga cgccgggcaa gagcaactcg gtcgccgcat acactattct cagaatgact 3540
tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat 3600
tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc caacttactt ctgacaacga 3660
tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc 3720
ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga 3780
tgcctgcagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac tggcgaacta cttactctag 3840
cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa agttgcagga ccacttctgc 3900
gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaatc tggagccggt gagcgtgggt 3960
ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct 4020
acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag acagatcgct gagataggtg 4080
cctcactgat taagcattgg taactgtcag accaagttta ctcatatata ctttagattg 4140
atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt gataatctca 4200
tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga 4260
tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa 4320
aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact ctttttccga 4380
aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt tcttctagtg tagccgtagt 4440
taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt 4500
taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat 4560
agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct 4620
tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca 4680
cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag 4740
agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc 4800
gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga 4860
aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca 4920
tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc tttgagtgag 4980
ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagc 5038
<210> 39
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh741JLH IgG HC DNA 序列
<400> 39
caggtgcagc tggtgcagag cggcagcgag ctgaagaagc ccggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacttca tgaactgggt gcggcaggcc 120
cctgggcagg gactggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagggct tcaccggccg cttcgtgttc agcctggaca ccagcgtgtc caccgcctac 240
ctgcagatca gcagcctgaa ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 40
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh741JLH IgG HC 氨基酸序列
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 41
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh145JLH IgG HC DNA 序列
<400> 41
cagatgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaaa ccggcagcag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacttca tgaactgggt gcgccaggcc 120
cccggccagg ccctggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tccaggaccg cgtcaccatc acccgcgacc gcagcatgag caccgcctac 240
atggagctgt ccagcctgcg cagcgaggac accgccatgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 42
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh145JLH IgG HC 氨基酸序列
<400> 42
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 43
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh146JLH IgG HC DNA 序列
<400> 43
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcaac ggctacttca tgaactgggt gaggcaggcc 120
cctgggcagg gactggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tccagggccg cgtcaccatg acccgcgaca ccagcaccag caccgtgtac 240
atggagctgt ccagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 44
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh146JLH IgG HC 氨基酸序列
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 45
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh434JLH IgG HC DNA 序列
<400> 45
caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagccagac cctgagcctg 60
acctgcgccg tctacggagg aagcttcagc ggctacttca tgaactggat caggcagccc 120
cccggcaagg gcctggagtg gatcggccgc atcaacccca acaacggcga cttcagctac 180
aaccagagcc tgaagagccg cgtgaccatc agcgtggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240
ctgaagctgt ccagcgtgac cgccgccgac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 46
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh434JLH IgG HC 氨基酸序列
<400> 46
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Phe Ser Tyr Asn Gln Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 47
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh112JLL IgG LC DNA 序列
<400> 47
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accagccgcc tgcacagcgg cgtgccctcc 180
agattctccg gcagcggatc tggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagttcac cggtgacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 48
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh112JLL IgG LC 氨基酸序列
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 49
<211> 751
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗-CD43 (mJL1) scFv DNA 序列
<400> 49
ccatggccga ggttcagctg cagcagtctg gtcctgagct ggtgaagcct ggggcttcag 60
tgaagatttc ctgcaaggcc tctggttact caattggtgg ctactttatg aactgggtga 120
agcagagcca cggcaagagc cctgagtgga ttgggcgtat taatcctaac aatggtgatt 180
ctttctacaa ccagaaattc aagggcacgg ccacattgac tgttgaccgc tcttctgaca 240
cagtccacat ggaggtcctg agcctgacat ctgaggactc tgcagtctat tattgtggcc 300
gcgaaggtta ctacggtggg cgagggtatg ctttggacta ctggggtcaa ggcacctcgg 360
tcaccgtctc ctcaggcggc ggagctagcg ggggaggagg atccggaggc gggggatctg 420
atatccagat gacacagact acatcctccc tgtctgcctc tctgggcgac cgcgtcacca 480
tcagctgccg gacaagtcag gacattagca attatttgaa ctggtatcag cagaaaccag 540
atggtactgt taaactcctg atctataaca catcacgctt gcactcaggc gtcccatcac 600
ggttcagtgg cagcgggtct ggtacagatt attccctcac cattcgcaac ctggaacaaa 660
aagatattgc cacttacttt tgccaacaga gcaatatgtt tccgtacacg ttcggggggg 720
ggaccaagct ggaaatcaag cgggcggccg c 751
<210> 50
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠抗-CD43 (mJL1) scFv 氨基酸序列
<400> 50
Met Ala Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro
1 5 10 15
Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly
20 25 30
Gly Tyr Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Pro Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln
50 55 60
Lys Phe Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Asp Thr
65 70 75 80
Val His Met Glu Val Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Gly Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ala
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Ser Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Ser Arg
180 185 190
Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Arg Asn Leu Glu Gln Lys Asp Ile Ala Thr
210 215 220
Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 51
<211> 751
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh741-112 scFv DNA 序列
<400> 51
ccatggccca ggtgcagctg gtgcagagcg gcagcgagct gaagaagccc ggcgccagcg 60
tcaaggtgtc ctgcaaggcc agcggctaca ccttcaccgg ctacttcatg aactgggtgc 120
gccaggcccc tgggcaggga ctggagtgga tgggccgcat caaccccaac aacggcgaca 180
gcttctacaa ccagggcttc accggccgct tcgtgttcag cctggacacc agcgtgtcca 240
ccgcctacct gcagatcagc agcctgaagg ccgaggacac cgccgtgtac tactgcgcca 300
gggagggcta ctacggaggg agagggtacg ccctggacta ctggggccag ggcaccctgg 360
tgaccgtgtc ctccggcggc ggaggatccg gaggcggggg atctggggga ggagctagcg 420
acatccagat gacccagagc ccttcttctg tctccgccag cgtgggcgac cgcgtgacca 480
tcacctgccg caccagccag gacatcagca actacctgaa ctggtatcag cagaagcccg 540
gcaaggcccc caagctgctg atctacaaca ccagcaggct ccactctgga gtccccagcc 600
gcttctccgg ctccgggtct ggaaccgact tcaccctgac catcagctcc ctgcagcccg 660
aggacttcgc cacctactac tgccagcaga gcaacatgtt cccctacacc ttcgggcagg 720
ggaccaagct ggagatcaag cgggcggccg c 751
<210> 52
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh741-112 scFv 氨基酸序列
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 53
<211> 751
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh145-112 scFv DNA 序列
<400> 53
ccatggccca gatgcagctg gtgcagagcg gcgccgaggt gaagaaaacc ggcagcagcg 60
tcaaggtgtc ctgcaaggcc agcggctaca ccttcaccgg ctacttcatg aactgggtgc 120
gccaggcccc cggccaggcc ctggagtgga tgggccgcat caaccccaac aacggcgaca 180
gcttctacaa ccagaagttc caggaccgcg tcaccatcac ccgcgaccgc agcatgagca 240
ccgcctacat ggagctgtcc agcctgcgca gcgaggacac cgccatgtac tactgcgcca 300
gggagggcta ctacggcggc agaggctacg ccctggacta ctggggccag ggcaccctgg 360
tgaccgtgtc ctccggcggc ggaggatccg gaggcggggg atctggggga ggagctagcg 420
acatccagat gacccagagc ccttcttctg tctccgccag cgtgggcgac cgcgtgacca 480
tcacctgccg caccagccag gacatcagca actacctgaa ctggtatcag cagaagcccg 540
gcaaggcccc caagctgctg atctacaaca ccagcaggct ccactctgga gtccccagcc 600
gcttctccgg ctccgggtct ggaaccgact tcaccctgac catcagctcc ctgcagcccg 660
aggacttcgc cacctactac tgccagcaga gcaacatgtt cccctacacc ttcgggcagg 720
ggaccaagct ggagatcaag cgggcggccg c 751
<210> 54
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh145-112 scFv 氨基酸序列
<400> 54
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 55
<211> 751
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh146-112 scFv DNA 序列
<400> 55
ccatggccca ggtgcagctg gtgcagagcg gcgccgaggt gaagaagccc ggcgccagcg 60
tcaaggtgtc ctgcaaggcc agcggctaca ccttcaacgg ctacttcatg aactgggtga 120
ggcaggcccc tgggcaggga ctggagtgga tgggccgcat caaccccaac aacggcgaca 180
gcttctacaa ccagaagttc cagggccgcg tcaccatgac ccgcgacacc agcaccagca 240
ccgtgtacat ggagctgtcc agcctgcgca gcgaggacac cgccgtgtac tactgcgcca 300
gggagggcta ctacggcggc agaggctacg ccctggacta ctggggtcaa ggcaccctgg 360
tgaccgtgtc cagcggcggc ggaggatccg gaggcggggg atctggggga ggagctagcg 420
acatccagat gacccagagc ccttcttctg tctccgccag cgtgggcgac cgcgtgacca 480
tcacctgccg caccagccag gacatcagca actacctgaa ctggtatcag cagaagcccg 540
gcaaggcccc caagctgctg atctacaaca ccagcaggct ccactctgga gtccccagcc 600
gcttctccgg ctccgggtct ggaaccgact tcaccctgac catcagctcc ctgcagcccg 660
aggacttcgc cacctactac tgccagcaga gcaacatgtt cccctacacc ttcgggcagg 720
gtacaaagct ggagatcaag cgggcggccg c 751
<210> 56
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh146-112 scFv 氨基酸序列
<400> 56
Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
1 5 10 15
Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn
20 25 30
Gly Tyr Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Met Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln
50 55 60
Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr
65 70 75 80
Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Ser Arg
180 185 190
Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 57
<211> 751
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh434-112 scFv DNA 序列
<400> 57
ccatggccca ggtgcagctg caggagagcg gccccggcct ggtgaagccc agccagaccc 60
tgagcctgac ctgcgccgtc tacggaggaa gcttcagcgg ctacttcatg aactggatca 120
ggcagccccc cggcaagggc ctggagtgga tcggccgcat caaccccaac aacggcgact 180
tcagctacaa ccagagcctg aagagccgcg tgaccatcag cgtggacacc agcaagaacc 240
agttcagcct gaagctgtcc agcgtgaccg ccgccgacac cgccgtgtac tactgcgcca 300
gggagggcta ctacggcggc agaggctacg ccctggacta ctggggccag ggcaccctgg 360
tgaccgtgtc cagcggcggc ggaggatccg gaggcggggg atctggggga ggagctagcg 420
acatccagat gacccagagc ccttcttctg tctccgccag cgtgggcgac cgcgtgacca 480
tcacctgccg caccagccag gacatcagca actacctgaa ctggtatcag cagaagcccg 540
gcaaggcccc caagctgctg atctacaaca ccagcaggct ccactctgga gtccccagcc 600
gcttctccgg ctccgggtct ggaaccgact tcaccctgac catcagctcc ctgcagcccg 660
aggacttcgc cacctactac tgccagcaga gcaacatgtt cccctacacc ttcgggcagg 720
gtacaaagct ggagatcaag cgggcggccg c 751
<210> 58
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh434-112 scFv 氨基酸序列
<400> 58
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Phe Ser Tyr Asn Gln Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 59
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh741JLHP45 IgG HC DNA 序列
<400> 59
caggtgcagc tggtgcagag cggcagcgag ctgaagaagc ccggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacttca tgaactgggt gcgccaggcc 120
cccggacagg ggcccgagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagggct tcaccggccg cttcgtgttc agcctggaca ccagcgtgtc caccgcctac 240
ctgcagatca gcagcctgaa ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 60
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh741JLHP45 IgG HC 氨基酸序列, 其中第45个氨基酸残基被P代替
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 61
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh145JLHP45 IgG HC DNA 序列
<400> 61
cagatgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaaaa ccggcagcag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacttca tgaactgggt gaggcaggcc 120
cctggacagg cccccgagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tccaggaccg cgtcaccatc acccgcgacc gcagcatgag caccgcctac 240
atggagctgt ccagcctgcg cagcgaggac accgccatgt actactgcgc cagggagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 62
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh145JLHP45 IgG HC 变体 (残基 45被P代替 )
氨基酸序列
<400> 62
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 63
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh112JLV44 IgG LC 变体 DNA 序列
<400> 63
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccg tgaagctgct gatctacaac accagccgcc tgcacagcgg cgtgccctcc 180
agattctccg gcagcggatc tggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagttcac cggtgacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 64
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Sh112JLV44 IgG LC 变体(残基44被V代替)
氨基酸序列
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 65
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhRZ7VHKb (Conv.人源化突变体 IgG)
<400> 65
gaggtgcagc tggtccagag cggcgccgag gtcaagaagc ctggcgccac cgtcaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcagc ggctacttca tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccaggcaagg gactggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tcaagggccg cgtcaccatc accgccgaca ccagcaccga caccggctac 240
ctggagctgt ccagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cgccgagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgtccgtg 360
agcagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 66
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhRZ7VHKb (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 67
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhRZ7VH_KbR73 (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 67
gaggtgcagc tggtccagag cggcgccgag gtcaagaagc ctggcgccac cgtcaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcagc ggctacttca tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccaggcaagg gactggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tcaagggccg cgtcaccatc accgccgacc gcagcaccga caccggctac 240
ctggagctgt ccagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cgccgagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgtccgtg 360
agcagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 68
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhRZ7VH_KbR73 (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Thr Asp Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 69
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhL7IVHKb (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 69
gaggtgcagc tggtcgagag cggcgggggc ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcacc ggctacttca tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccagggaaag gcctggagtg ggtggcccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tcaagggccg cttcaccctg agcgtggacc gcagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtcaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 70
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhL7IVHKb (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 71
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhRZ7VHAM (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 71
gaggtgcagc tggtccagag cggcgccgag gtcaagaagc ctggcgccac cgtcaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta cagcatcggc ggctacttca tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccaggcaagg gactggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tcaagggccg cgtcaccatc accgccgaca ccagcaccga caccggctac 240
ctggagctgt ccagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cgccgagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgtccgtg 360
agcagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 72
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhRZ7VHAM (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 73
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhRZ7VHAMR73 (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 73
gaggtgcagc tggtccagag cggcgccgag gtcaagaagc ctggcgccac cgtcaagatc 60
agctgcaagg ccagcggcta ctccatcggc ggctacttca tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccaggcaagg gactggagtg gatgggccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tcaagggccg cgtcaccatc accgccgacc gcagcaccga caccggctac 240
ctggagctgt ccagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cgccgagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtgtccgtg 360
agcagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 74
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhRZ7VHAMR73 (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 74
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Arg Ser Thr Asp Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 75
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhL7IVHAM (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 75
gaggtgcagc tggtcgagag cggcgggggc ctggtgcagc ctggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgccg ccagcggcta ctccatcggc ggctacttca tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccagggaaag gcctggagtg ggtggcccgc atcaacccca acaacggcga cagcttctac 180
aaccagaagt tcaagggccg cttcaccctg agcgtggacc gcagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagagggc 300
tactacggcg gcagaggcta cgccctggac tactggggcc agggcaccct ggtcaccgtg 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 76
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhL7IVHAM (Conv. 人源化变体 IgG)
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 77
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhRZ7Vk (轻链变体)
<400> 77
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accagccgcc tgcacagcgg cgtgccctcc 180
agattctccg gcagcggatc tggcaccgac ttcagcctga ccatcaatag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggcggc 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagttcac cggtgacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 78
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhRZ7Vk (轻链变体)
<400> 78
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 79
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhRZ7VkFS (轻链变体)
<400> 79
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc gtgtccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accagccgcc tgcacagcgg cgtgccctcc 180
agattctccg gcagcggatc tggcaccgac ttcagcctga ccatccgcag cctgcagccc 240
aaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggcggc 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagttcac cggtgacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 80
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhRZ7VkFS (轻链变体)
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Lys Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 81
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 序列 CDhL7IVk (轻链变体)
<400> 81
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtccgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcaccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacaac accagccgcc tgcacagcgg cgtgccctcc 180
agattctccg gcagcggatc tggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcaacatgt tcccctacac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagttcac cggtgacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 82
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氨基酸序列 CDhL7IVk (轻链变体)
<400> 82
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 83
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> sh146-112重链可变区 (VH)
<400> 83
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 84
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36-10 Q6R重链可变区(VH)
<400> 84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Arg Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 85
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 153-28重链可变区(VH)
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 86
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 324-B10重链可变区(VH)
<400> 86
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Arg Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 87
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-C11重链可变区 (VH)
<400> 87
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 88
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 368-G07重链可变区(VH)
<400> 88
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 89
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 369-F05重链可变区(VH)
<400> 89
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Met Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 90
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-H05重链可变区(VH)
<400> 90
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Thr Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Quikchange 突变重链可变区(VH)
<400> 91
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Thr Thr Arg Asp Arg Ser Thr Ser Thr Met Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 92
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 45-37 VH重链 可变区(VH)
<400> 92
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Arg Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 93
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 257-10重链可变区(VH)
<400> 93
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Pro Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 94
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 456-D10重链可变区(VH)
<400> 94
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Arg Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Pro Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 95
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> sh146-112 轻链可变区(VL)
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 96
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 36-10 Q6R 轻链可变区(VL)
<400> 96
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 97
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 153-28 轻链可变区(VL)
<400> 97
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 98
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 324-B10 轻链v可变区(VL)
<400> 98
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 99
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-C11 轻链可变区(VL)
<400> 99
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 100
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 368-G07 轻链可变区(VL)
<400> 100
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Pro Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 101
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 369-F05 轻链可变区(VL)
<400> 101
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 102
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 361-H05 轻链可变区(VL)
<400> 102
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 103
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Quikchange 突变轻链可变区(VL)
<400> 103
Asp Ile Gln Met Thr Arg Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Pro Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 104
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 45-37 轻链可变区(VL)
<400> 104
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 105
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 257-10 轻链可变区 (VL)
<400> 105
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 106
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 456-D10 轻链可变区 (VL)
<400> 106
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Glu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链v可变区 (VL)变体 (去糖基化)
<400> 107
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Ala Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 108
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区(VL)变体(去糖基化)
<400> 108
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gln Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区(VL) 变体(去糖基化)
<400> 109
Asp Thr Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)
<223> Xaa 为Phe (F)或Tyr (Y)
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH1
<400> 110
Gly Tyr Xaa Met Asn
1 5
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH1
<400> 111
Gly Tyr Phe Met Asn
1 5
<210> 112
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH1
<400> 112
Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 113
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)
<223> Xaa为 Asn (N) 或Ser (S)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)
<223> Xaa 为Gln (Q) 或Lys (K)
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH2
<400> 113
Arg Ile Asn Pro Asn Xaa Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Xaa
1 5 10 15
Gly
<210> 114
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH2
<400> 114
Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 115
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH2
<400> 115
Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 116
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH2
<400> 116
Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 117
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH2
<400> 117
Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asp Ser Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 118
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRH3
<400> 118
Glu Gly Tyr Tyr Gly Gly Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 119
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL1
<400> 119
Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 120
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)
<223> Xaa 为Asn(N)或Gln (Q)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)
<223> Xaa为 Ser (S)或Ala (A)
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL2
<400> 120
Xaa Thr Xaa Arg Leu His Ser
1 5
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL2
<400> 121
Asn Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL2
<400> 122
Asn Thr Ala Arg Leu His Ser
1 5
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL2
<400> 123
Gln Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL2
<400> 124
Ala Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 125
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD43抗体或其抗原结合片段的CDRL3
<400> 125
Gln Gln Ser Asn Met Phe Pro Tyr
1 5
<210> 126
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)
<223> Xaa为Gly (G)或Ala (A)
<220>
<223> 连接子
<400> 126
Gly Gly Gly Xaa Ser
1 5
<210> 127
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<400> 127
Gly Gly Gly Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 128
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<400> 128
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser
1 5 10 15
<210> 129
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 含表位的肽, DN2
<400> 129
Glu Gly Ser Pro Leu Trp Thr Ser Ile Gly Ala Ser Thr Gly Ser Cys
1 5 10 15
<210> 130
<211> 400
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD43
<400> 130
Met Ala Thr Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Val Val Ser Pro Asp
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ser Thr Thr Ala Val Gln Thr Pro Thr Ser Gly Glu Pro
20 25 30
Leu Val Ser Thr Ser Glu Pro Leu Ser Ser Lys Met Tyr Thr Thr Ser
35 40 45
Ile Thr Ser Asp Pro Lys Ala Asp Ser Thr Gly Asp Gln Thr Ser Ala
50 55 60
Leu Pro Pro Ser Thr Ser Ile Asn Glu Gly Ser Pro Leu Trp Thr Ser
65 70 75 80
Ile Gly Ala Ser Thr Gly Ser Pro Leu Pro Glu Pro Thr Thr Tyr Gln
85 90 95
Glu Val Ser Ile Lys Met Ser Ser Val Pro Gln Glu Thr Pro His Ala
100 105 110
Thr Ser His Pro Ala Val Pro Ile Thr Ala Asn Ser Leu Gly Ser His
115 120 125
Thr Val Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Asn Ser Pro Glu Thr Ser Ser
130 135 140
Arg Thr Ser Gly Ala Pro Val Thr Thr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Thr
145 150 155 160
Ser Arg Gly Thr Ser Gly Pro Pro Leu Thr Met Ala Thr Val Ser Leu
165 170 175
Glu Thr Ser Lys Gly Thr Ser Gly Pro Pro Val Thr Met Ala Thr Asp
180 185 190
Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Gly Pro Pro Val Thr Met Thr
195 200 205
Thr Gly Ser Leu Glu Pro Ser Ser Gly Ala Ser Gly Pro Gln Val Ser
210 215 220
Ser Val Lys Leu Ser Thr Met Met Ser Pro Thr Thr Ser Thr Asn Ala
225 230 235 240
Ser Thr Val Pro Phe Arg Asn Pro Asp Glu Asn Ser Arg Gly Met Leu
245 250 255
Pro Val Ala Val Leu Val Ala Leu Leu Ala Val Ile Val Leu Val Ala
260 265 270
Leu Leu Leu Leu Trp Arg Arg Arg Gln Lys Arg Arg Thr Gly Ala Leu
275 280 285
Val Leu Ser Arg Gly Gly Lys Arg Asn Gly Val Val Asp Ala Trp Ala
290 295 300
Gly Pro Ala Gln Val Pro Glu Glu Gly Ala Val Thr Val Thr Val Gly
305 310 315 320
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Gly Ser Gly Phe Pro Asp Gly Glu Gly Ser
325 330 335
Ser Arg Arg Pro Thr Leu Thr Thr Phe Phe Gly Arg Arg Lys Ser Arg
340 345 350
Gln Gly Ser Leu Ala Met Glu Glu Leu Lys Ser Gly Ser Gly Pro Ser
355 360 365
Leu Lys Gly Glu Glu Glu Pro Leu Val Ala Ser Glu Asp Gly Ala Val
370 375 380
Asp Ala Pro Ala Pro Asp Glu Pro Glu Gly Gly Asp Gly Ala Ala Pro
385 390 395 400
<210> 131
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位
<400> 131
Pro Leu Trp Thr Ser Ile
1 5
<210> 132
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位
<400> 132
Ser Pro Leu Trp Thr Ser Ile
1 5
<210> 133
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位
<400> 133
Gly Ser Pro Leu Trp Thr Ser Ile
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位
<400> 134
Glu Gly Ser Pro Leu Trp Thr Ser Ile
1 5