CN108469486A - 分散液液微萃取气相色谱联用检测发酵酒中的主要高级醇 - Google Patents

分散液液微萃取气相色谱联用检测发酵酒中的主要高级醇 Download PDF

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Abstract

本发明公开了分散液液微萃取气相色谱联用检测发酵酒中的主要高级醇，属于分析化学技术领域。本发明选用适当的萃取剂和分散剂，将一定量的萃取剂、分散剂和内标混合后快速注入酒样中形成乳浊液进行萃取，离心收集萃取相，进行气相色谱‑质谱分析，并通过外标法进行定量，从而得到发酵酒中更高级醇含量的分析结果。利用DLLME方法进行样品前处理具有有机溶剂用量少快速，简便，同时有机溶剂用量小且检测结果精确度高，回收率令人满意。考虑到低成本和环保的优点，该方法在实践中易于使用，尤其适合大批量样品分析，并能运用于多种发酵酒中主要高级醇含量的检测。

Description

分散液液微萃取气相色谱联用检测发酵酒中的主要高级醇
技术领域
本发明涉及分散液液微萃取气相色谱联用检测发酵酒中的主要高级醇，属于分析化学技术领域。
背景技术
酒类饮料中风味的形成主要依赖于各种风味化合物。风味是影响酒精饮料质量最重要的因素之一。高级醇(HAs)是发酵酒精饮料中重要的风味贡献物之一。酒精饮料中的高级醇主要包括正丙醇，2-甲基-1-丙醇(异丁醇)，3-甲基-1-丁醇(异戊醇)和β-苯乙醇，占高级醇总量的70％-80％。虽然，高级醇对酒精饮料的香气和味道有着重要的影响。但是，高浓度高级醇会产生类似于杂醇油味的不好的气味，影响酒精饮料的品质。据报道，酒精饮料中高浓度的高级醇能使神经系统充血，使人感觉上头。因此，对发酵酒精饮料的风味质量来说适当含量的高级醇非常重要。
目前主要通过气相色谱检测高级醇，样品制备方法主要包括液液萃取(LLE)，顶空(HS)，固相萃取(SPE)，固相微萃取(SPME)和顶空固相微萃取(HS-SPME)。SPE和HS-SPME 由于其灵敏度高，操作简单已经得到了广泛的应用。LLE作为传统的样品前处理萃取方法，常应用于酒精饮料中挥发性成分的分析。LLE的主要优点是简单快速的样品制备程序和低廉的成本。然而，由于有机溶剂用量大对身体健康和环境有害的缺点不能得到广泛应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速、灵敏度高、环境友好型的发酵酒中主要高级醇(正丙醇、异丁醇、异戊醇、β-苯乙醇)的检测方法，特别是一种分散液液微萃取的样品前处理方法结合气相色谱检测发酵酒中的高级醇的方法。
所述方法选用适当的萃取剂和分散剂，将一定量的萃取剂、分散剂和内标混合后快速注入酒样中形成乳浊液进行萃取，离心收集萃取相，进行气相色谱-质谱分析，并通过外标法进行定量。具体包括如下步骤：
(1)标准曲线溶液的制备
正丙醇、异丁醇、异戊醇、2,3-丁二醇和β-苯乙醇均用乙醇配成浓度梯度为110mg/mL， 70mg/mL，180mg/mL，60mg/mL和100mg/mL的储备液，-20℃保存。将储备液用模拟溶液(10％无水乙醇，用乳酸调节pH至4.00)分别稀释50、100、200、500、1000、2000倍来制备工作溶液。
(2)样品前处理
将0.00～2.00mL分散剂，200～1000μL萃取剂和30μL内标(18640mg/L 4-甲基-2-戊醇乙醇溶液)置于2.5mL离心管中混合均匀得到混合有机相。用微量注射器将所得混合有机相快速注入3～10mL置于15mL的带帽尖底玻璃离心管的酒样中。旋涡振荡器振荡0.5～3min， 5000rpm(2655G)离心5min。将下层有机相用带有长针头注射器吸出，进样GC/MS分析。
GC/MS的具体条件如下：
色谱柱：TG-WAXMS(30m×0.25mm I.D.,0.25μm d.f.)毛细管色谱柱；进样口温度：230℃；载气：He；流速：1mL/min；进样量：1μL；升温程序：40℃保持2min，以5℃ /min升温到230℃保持3min；电离方式：电子轰击离子源(EI)；离子源温度：230℃；电离能量：70eV；传输线温度：250℃；溶剂延迟5min。目标峰的鉴定是基于保留时间和质谱碎片的比较。选择离子监测(SIM)模式用于定量分析，m/z59和60为正丙醇的目标碎片离子， m/z43和42为异丁醇的目标碎片离子，m/z55和70为异戊醇的目标碎片离子，m/z91和92 为β-苯乙醇的目标碎片离子，m/z41和69为4-甲基-2-戊醇的目标碎片离子。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述萃取剂为二氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、四氯乙烯、正己烷、甲苯和三氯甲烷中的一种。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述分散剂为甲醇、乙腈和丙酮的一种。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述酒样酒精度在5～20vol％之间。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述酒样pH值在2.0～10.0的范围内。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述萃取剂体积为600μL。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述分散剂体积为1mL。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述酒样体积为7mL。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述离子强度在0～10％w/v之间。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，所述萃取时间为2min。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵酒包括葡萄酒、黄酒或啤酒。
本发明的有益效果：
(1)采用本发明测定发酵酒中的高级醇，灵敏度高，检测限为0.09～0.75mg/L；
(2)本发明只需要少量的萃取剂和分散剂，相比于传统的液液萃取，有机溶剂用量大大减少且回收率令人满意；
(3)本发明的利用DLLME方法进行样品前处理的总时间约为7min，快速，简便，在实践中易于使用，尤其适合大批量样品分析。
附图说明
图1.在黄酒模拟液中乙醇含量对DLLME萃取效率的影响
图2.在黄酒样品中pH对DLLME萃取效率的影响
图3.在黄酒样品中萃取剂对DLLME萃取效率的影响
图4.在黄酒样品中萃取剂体积对DLLME萃取效率的影响
图5.在黄酒样品中分散剂对DLLME萃取效率的影响
图6.在黄酒样品中分散剂体积对DLLME萃取效率的影响
图7.萃取剂对DLLME萃取效率的影响
图8.萃取剂体积对DLLME萃取效率的影响
图9.分散剂对DLLME萃取效率的影响
图10.分散剂体积对DLLME萃取效率的影响
图11.在啤酒样品中pH对DLLME萃取效率的影响
图12.在啤酒样品中萃取剂对DLLME萃取效率的影响
图13.在啤酒样品中萃取剂体积对DLLME萃取效率的影响
图14.在啤酒样品中分散剂对DLLME萃取效率的影响
图15.在啤酒样品中分散剂体积对DLLME萃取效率的影响
图16.在啤酒样品中离心时间对DLLME萃取效率的影响
具体实施方式
以下是本发明的具体实施案例，对本发明的技术方案进一步描述。
实施例1：
利用分散液液微萃取气相色谱联用技术检测黄酒中的主要高级醇含量方法如下：
样品酒度的确定：乙醇是黄酒中最丰富的成分之一。市售黄酒的酒度在8-17vol％之间，考虑到乙醇也是一种良好的溶剂，可能会影响DLLME的萃取效率。因此，使用不同乙醇含量的模拟酒样，结果如图1所示，乙醇含量应不超过12vol％，乙醇含量高于12vol％的样品应进行适当的稀释。乙醇也是一种常见的分散剂，若样品乙醇含量超过12vol％，样品的DLLME萃取效率会降低，影响萃取剂的富集。
样品pH的确定：样品的pH值决定了极性化合物的解离度，从而影响非极性化合物的稳定性。本实验研究了样品pH值在2.0～10.0的范围内对DLLME萃取效率的影响。结果如图2 所示，初始样品pH对于DLLME是最佳的。
萃取剂及萃取剂体积的确定：用于DLLME方法的萃取溶剂必须具有4个特性：比水更高或更低的密度、在水中的溶解度低、对目标化合物的萃取能力高和良好的气相色谱行为。基于以上几个特性，本实验选择了二氯甲烷，四氯化碳，三氯乙烯，四氯乙烯，正己烷，甲苯和三氯甲烷七种萃取剂进行研究，结果表明二氯甲烷为最佳萃取溶剂。同时萃取剂体积是影响DLLME萃取目标化合物效率的另一个因素。随着萃取剂体积的增加，目标化合物的萃取含量也会增加。但是由于稀释效应，在萃取剂体积达到某个程度时，目标化合物的浓度可能会随着萃取剂体积的增加而降低。图3和图4展示了二氯甲烷体积200～1000μL对DLLME萃取效率的影响，结果表明二氯甲烷体积为600μL为最佳。
分散剂及分散剂体积的确定：选择合适的分散剂有助于目标化合物的萃取和预浓缩。分散剂应当具备能与萃取剂和样品水溶液良好的混溶性的特性。本发明选择了三种有机溶剂：甲醇、乙腈和丙酮作为分散剂时对DLLME萃取效率的影响。同时比较了0.00，0.20，0.50， 1.00，1.50和2.00mL体积梯度的乙腈对DLLME萃取效率的影响。结果如图5和图6所示，表明1.5mL乙腈可以获得最佳的萃取效率。
样品体积的确定：样品体积是影响目标化合物浓度的另一个因素。随着样品体积的增加，目标化合物转移到萃取剂中的质量也会增加，从而提高了目标化合物的浓度。结果显示，在 3，4，5，6，7，8和10mL七个体积梯度里，随7mL为最佳的样品体积。
离子强度的确定：0～10％w/v的NaCl溶液对DLLME萃取效率的影响。结果表明高级醇的浓度随着离子强度的改变没有显著变化。因此，本发明不调节样品的离子强度。
萃取时间的确定：本实验中将萃取时间定义为有机相液滴分散在样品中的时间。在0-3min 范围内结果显示，最佳萃取时间为1.0min。
样品检测具体步骤如下：
(1)标准曲线溶液的制备
储备溶液用无水乙醇制备，-20℃保存。正丙醇，异丁醇，异戊醇和β-苯乙醇的浓度分别为110mg/mL，70mg/mL，180mg/mL，100mg/mL。将储备液用模拟溶液(10％无水乙醇，用乳酸调节pH至4.00)分别稀释50、100、200、500、1000、2000倍来制备工作溶液。
(2)样品前处理
将1.5mL乙腈，600μL二氯甲烷和30μL内标(18640mg/L 4-甲基-2-戊醇乙醇溶液)置于2.5mL离心管中混合均匀。用微量注射器将混合有机相快速注入7mL置于15mL的带帽尖底玻璃离心管的酒样中。旋涡振荡器振荡1min，5000rpm(2655G)离心5min。将下层有机相用带有长针头注射器吸出，进样GC/MS分析。
为了评估样品基质效应，建立了基于模拟溶液和黄酒酒样的两个标准曲线。结果如表1 显示了两条标准曲线的性能参数，包括定量离子，线性范围，校准曲线，线性系数(r)，检测限(LOD)，定量限(LOQ)，相对标准偏差(RSD)和富集因子(EF)。线性系数(r)在线性范围内都高于0.9907，线性良好。LOD定义为检测器产生的响应信号为噪声值三倍时的量，约为3倍S/N。LOD为0.14～1.04mg/L。LOQ定义为检测器产生的响应信号为噪声值十倍时的量，对应约为10倍的S/N。LOQ为0.47～3.45mg/L，低于黄酒中的浓度含量。RSD低于10％。此外，将EF定义为萃取溶剂目标化合物浓度与提取前初级样品中浓度的比例。根据标准曲线的富集因子成对样本T检验结果显示，模拟溶液和黄酒标准曲线的置信区间为 95％，没有观察到显着差异。因此，模拟溶液标准曲线可用于定量黄酒中的正丙醇、异丁醇、异戊醇、β苯乙醇。
通过对加标的四个不同甜型的黄酒样本重复检验，黄酒的回收率在80.1％to124.1％之间，相对标准偏差(RSD)的范围为0.1％to 5.8％。表2给出了四种不同甜型的黄酒加标回收率。
表1在黄酒体系中建立的DLLME-GC-MS方法分析五种醇的相关参数
注：a LOD,检测限，单位mg/L
b LOQ,定量限，单位mg/L
c相对标准偏差(n＝6)
d富集因子，(其中Csed为目标物在沉积相中的浓度，C0为目标物在原样品溶液中的浓度)
表2利用DLLME-模拟液标曲定量的不同甜型黄酒样品的加标回收率a
注：an＝3
实施例2：
利用分散液液微萃取气相色谱联用技术检测葡萄酒中的主要高级醇含量方法如下：
葡萄酒是发酵酒的一类典型代表，利用DLLME测定葡萄酒中主要高级醇。由于在DLLME萃取中萃取剂快速的分散到样品中形成乳浊液，从而可以在短时间内完成萃取。这也是DLLME的一个优势。所以在优化DLLME萃取葡萄酒中高级醇的实验条件时不再对萃取时间进行优化，萃取时间定为1min。本实验对酒度、样品pH、萃取剂及其体积、分散剂及其体积、样品体积和离子强度进行了优化。
样品酒度的确定：乙醇是葡萄酒中最丰富的成分之一。市售葡萄酒的酒度在7-16vol％之间，考虑到乙醇也是一种良好的溶剂，可能会影响DLLME的萃取效率。因此，使用不同乙醇含量的模拟酒样，结果表明，乙醇含量应不超过12vol％，乙醇含量高于12vol％的样品应进行适当的稀释。
样品pH的确定：样品的pH值决定了极性化合物的解离度，从而影响非极性化合物的稳定性。本实验研究了样品pH值在2.0～10.0的范围内对DLLME萃取效率的影响。结果表明初始样品pH对于DLLME是最佳的。
萃取剂及萃取剂体积的确定：通过比较二氯甲烷体积200～1000μL对DLLME萃取效率的影响，结果如图7、8所示，表明最佳的条件为800μL的二氯甲烷。
分散剂及分散剂体积的确定：比较了0.00，0.20，0.50，1.00，1.50和2.00mL体积梯度的乙腈对DLLME萃取效率的影响。结果表明0.5mL乙腈可以获得最佳的萃取效率。
样品体积的确定：根据黄酒萃取条件的优化结果，本实验探究了3，5，6，7，8和10mL六个体积梯度。结果显示，在3，4，5，6，7，8和10mL七个体积梯度里，随7mL为最佳的样品体积。
离子强度的确定：0～10％w/v的NaCl溶液对DLLME萃取效率的影响。结果表明高级醇的浓度随着离子强度的改变没有显著变化。因此，本发明不调节样品的离子强度。
样品检测具体步骤如下：
(1)标准曲线溶液的制备
储备溶液用无水乙醇制备，-20℃保存。正丙醇，异丁醇，异戊醇，β-苯乙醇的浓度分别为40mg/mL，70mg/mL，200mg/mL40mg/mL。将储备液用模拟溶液(10％无水乙醇，用乳酸调节pH至4.00)分别稀释50、100、200、500、1000、2000倍来制备工作溶液。
(2)样品前处理
将1.0mL乙腈，800μL二氯甲烷和20μL内标(18640mg/L 4-甲基-2-戊醇乙醇溶液)置于2.5mL离心管中混合均匀。用微量注射器将混合有机相快速注入7mL置于15mL的带帽尖底玻璃离心管的葡萄酒样中。旋涡振荡器振荡1min，5000rpm(2655G)离心5min。将下层有机相用带有长针头注射器吸出，进样GC/MS分析。
为了评估样品基质效应，建立了基于模拟溶液和葡萄酒的两个标准曲线。结果如表3显示了两条标准曲线的性能参数，包括定量离子，线性范围，校准曲线，线性系数(r)，检测限(LOD)，定量限(LOQ)，相对标准偏差(RSD)和富集因子(EF)。线性系数(r)在线性范围内都高于0.9909，线性良好。LOD定义为检测器产生的响应信号为噪声值三倍时的量，约为3倍S/N。LOD为0.09～0.75mg/L。LOQ定义为检测器产生的响应信号为噪声值十倍时的量，对应约为10倍的S/N。LOQ为0.32～2.49mg/L，低于葡萄酒中的浓度含量。RSD低于 10％。此外，将EF定义为萃取溶剂目标化合物浓度与提取前初级样品中浓度的比例。根据标准曲线的富集因子成对样本T检验结果显示，模拟溶液和葡萄酒标准曲线的置信区间为95％，没有观察到显着差异。因此，从模拟样品标准曲线可用于定量葡萄酒中的正丙醇、异丁醇、异戊醇、β苯乙醇。
通过对加标的四个不同甜型的葡萄酒样本重复检验，葡萄酒的回收率在81.57％～111.15％之间，相对标准偏差(RSD)的范围为0.12％～6.57％。表4给出了四种不同甜型的葡萄酒主要高级醇含量。
表3建立的DLLME-GC-MS方法分析五种醇的相关参数
注：a LOD,检测限，单位mg/L
b LOQ,定量限，单位mg/L
c相对标准偏差(n＝6)
d富集因子，(其中Csed为目标物在沉积相中的浓度，C0为目标物在原样品溶液中的浓度。
实施例3：
利用分散液液微萃取气相色谱联用技术检测啤酒中的主要高级醇含量方法如下：
啤酒与黄酒同属于谷物发酵酒的一种。以啤酒样品基质，探究利用DLLME测定啤酒中主要高级醇的方法，进一步推广DLLME测定高级醇的方法的样品前处理方法。
啤酒与黄酒和葡萄酒不同之处是其含有大量的二氧化碳，因此啤酒样品在进行DLLME 萃取前需先去除泡沫。在采用DLLME富集啤酒中的高级醇的初步实验时没有发现2,3-丁二醇的色谱峰，可能是由于啤酒中的2,3-丁二醇的含量较低。另一方面，在初步实验阶段乳浊液离心5min后，在样品溶液和有机相中间还有一层肉眼可见的浑浊相。考虑到离心可以促进分相，离心时间决定了分相的彻底与否；而离心时间过长，易产生热效应，造成有机相分解。因此在优优化萃取条件时对离心时间也进行了优化。同时，由于啤酒的乙醇含量较低 (3.3～3.8vol％)，因此在优化啤酒中的DLLME萃取条件时不考虑乙醇含量对萃取效率的影响。所以在本实验对样品pH、萃取剂及其体积、分散剂及其体积、样品体积、离子强度和离心时间进行了优化。
样品pH的确定：样品的pH值决定了极性化合物的解离度，从而影响非极性化合物的稳定性。通过比较样品pH值在2.0～10.0的范围内对DLLME萃取效率的影响。结果表明初始样品pH对于DLLME是最佳的。
萃取剂及萃取剂体积的确定：通过比较二氯甲烷体积200～1000μL对DLLME萃取效率的影响，结果表明二氯甲烷体积为400μL为最佳。
分散剂及分散剂体积的确定：比较了0.00，0.20，0.50，1.00，1.50和2.00mL体积梯度的乙腈对DLLME萃取效率的影响。结果表明0.5mL乙腈可以获得最佳的萃取效率。
样品体积的确定：样品体积是影响目标化合物浓度的另一个因素。随着样品体积的增加，目标化合物转移到萃取剂中的质量也会增加，从而提高了目标化合物的浓度。结果显示，在 3，4，5，6，7，8和10mL七个体积梯度里，随7mL为最佳的样品体积。
离子强度的确定：0～10％w/v的NaCl溶液对DLLME萃取效率的影响。结果表明高级醇的浓度随着离子强度的改变没有显著变化。因此，本实施例不调节样品的离子强度。
离心时间的确定：离心的目的是促进有机相和样品溶液的分离。离心时间太短，容易造成有机相和样品溶液分离不彻底；离心时间过长，可能会产生热效应导致有机相的再溶解。本实验考察了5～10min之间5个时间梯度对萃取效率的影响。结果如图3-3-8所示，综合考虑所有高级醇的萃取效率，最终选择8min为最佳的离心时间。
样品检测具体步骤如下：
(1)标准曲线溶液的制备
储备溶液用无水乙醇制备，-20℃保存。异丁醇，异戊醇和β-苯乙醇的浓度分别为5mg/mL， 50mg/mL和20mg/mL。将储备液用模拟溶液(10％无水乙醇，用乳酸调节pH至4.00)分别稀释50、100、200、500、1000、2000倍来制备工作溶液。
(2)样品前处理
将0.5mL乙腈，400μL二氯甲烷和10μL内标(18640mg/L 4-甲基-2-戊醇乙醇溶液)置于2.5mL离心管中混合均匀。用微量注射器将混合有机相快速注入7mL置于15mL的带帽尖底玻璃离心管的啤酒样中。旋涡振荡器振荡1min，5000rpm(2655G)离心8min。将下层有机相用带有长针头注射器吸出，进样GC/MS分析。
为了评估样品基质效应，建立了基于模拟溶液和啤酒的两个标准曲线。结果如表5显示了两条标准曲线的性能参数，包括定量离子，线性范围，校准曲线，线性系数(r)，检测限 (LOD)，定量限(LOQ)，相对标准偏差(RSD)和富集因子(EF)。线性系数(r)在线性范围内都高于0.9905，线性良好。LOD定义为检测器产生的响应信号为噪声值三倍时的量，约为3倍S/N。LOD为0.08～0.67mg/L。LOQ定义为检测器产生的响应信号为噪声值十倍时的量，对应约为10倍的S/N。LOQ为0.28～2.23mg/L，低于啤酒中的浓度含量。RSD低于10％。此外，将EF定义为萃取溶剂目标化合物浓度与提取前初级样品中浓度的比例。根据标准曲线的富集因子成对样本T检验结果显示，模拟溶液和啤酒标准曲线的置信区间为95％，没有观察到显着差异。因此，从模拟样品标准曲线可用于定量啤酒中的异丁醇、异戊醇、β苯乙醇。
通过对加标的四个不同甜型的啤酒样本重复检验，啤酒的回收率在80.67％～101.28％之间，相对标准偏差(RSD)的范围为0.85％～6.69％。表6给出了四种啤酒主要高级醇含量。
表5建立的DLLME-GC-MS方法分析四种高级醇的相关参数
注：a LOD,检测限，单位mg/L
b LOQ,定量限，单位mg/L
c相对标准偏差(n＝6)
d富集因子，(其中Csed为目标物在沉积相中的浓度，C0为目标物在原样品溶液中的浓度)
表6啤酒实际样品的加标回收率a
注：an＝3
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (9)

1.一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，采用分散液液微萃取的样品前处理方法结合气相色谱-质谱联用检测高级醇；所述方法选用适当的萃取剂和分散剂，将一定量的萃取剂、分散剂和内标混合后快速注入酒样中形成乳浊液进行萃取，离心收集萃取相，进行气相色谱-质谱分析，并通过外标法进行定量。
2.根据权利要求1所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，分散液液微萃取的样品前处理方法具体包括如下步骤：将0.00～2.00mL分散剂，200～1000μL萃取剂和30μL内标混合均匀得到混合有机相，用微量注射器将所得混合有机相快速注入3～10mL酒精度在5～20vol％之间、pH值在2.0～10.0之间的酒样中，旋涡振荡器振荡0.5～3min，离心，将下层有机相吸出，用于GC/MS分析。
3.根据权利要求2所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，所述内标是18640mg/L 4-甲基-2-戊醇乙醇溶液。
4.根据权利要求1～3任一所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，GC/MS的具体条件如下：
色谱柱：TG-WAXMS(30m×0.25mm I.D.,0.25μm d.f.)毛细管色谱柱；进样口温度：230℃；载气：He；流速：1mL/min；进样量：1μL；升温程序：40℃保持2min，以5℃/min升温到230℃保持3min；电离方式：电子轰击离子源(EI)；离子源温度：230℃；电离能量：70eV；传输线温度：250℃；溶剂延迟5min。
5.根据权利要求4所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，目标峰的鉴定是基于保留时间和质谱碎片的比较，选择离子监测(SIM)模式用于定量分析，m/z59和60为正丙醇的目标碎片离子，m/z43和42为异丁醇的目标碎片离子，m/z55和70为异戊醇的目标碎片离子，m/z91和92为β-苯乙醇的目标碎片离子，m/z41和69为4-甲基-2-戊醇的目标碎片离子。
6.根据权利要求1～5任一所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，还包括制作标准曲线的步骤，其中，用于制作标准曲线的溶液的制备方法是：正丙醇、异丁醇、异戊醇、2,3-丁二醇和β-苯乙醇均用乙醇配成浓度梯度为110mg/mL、70mg/mL、180mg/mL，60mg/mL和100mg/mL的储备液，-20℃保存；将储备液用模拟溶液(10％无水乙醇，用乳酸调节pH至4.00)分别稀释50、100、200、500、1000、2000倍来制备工作溶液；气相色谱-质谱联用检测工作溶液中各种高级醇的含量，制作出标准曲线。
7.根据权利要求1～6任一所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，所述萃取剂为二氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、四氯乙烯、正己烷、甲苯和三氯甲烷中的一种。
8.根据权利要求1～7任一所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，所述分散剂为甲醇、乙腈和丙酮的一种。
9.根据权利要求1～7任一所述的一种检测发酵酒中的高级醇的方法，其特征在于，所述发酵酒包括黄酒、葡萄酒、啤酒。
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