CN108456736A - 牛脊髓dna鉴定试剂盒及鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药检测技术领域，是一种牛脊髓DNA鉴定试剂盒，其特征是由样本前处理液、线粒体DNA提取体系、PCR反应体系三部分体系组成。PCR反应体系总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL。一种牛脊髓DNA鉴定方法是设计牛脊髓特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：PCR扩增结果出现254bp条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，鉴定方法能够准确鉴定牛脊髓真伪。
Description
技术领域
本发明涉及使用生物技术鉴定牛脊髓与其易混品种（羊髓、猪髓、驴髓）DNA鉴定试剂盒及鉴定方法。
背景技术
牛脊髓是牛科动物黄牛或水牛的骨髓。牛脊髓含有蛋白质、脂肪、灰分、维生素B1、维生素B2、尼克酸，其脂肪酸含月桂酸、肉豆酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸等。牛脊髓滋肺补肾、填精益髓的功效始载于《神农本草经》“主治肾精不足，虚劳赢瘦，骨痿无力等；肺肾阴虚，口渴多饮，皮肤干燥，手足皲裂等”。
牛脊髓是吉林金复康药业有限公司的益血生胶囊（国药准字Z19983056，执行标准为中国药典2015年版一部）的生髓主要成分；也是血宝胶囊的主要成分（执行标准为卫生部药品标准中药成方制剂第八册），生产企业有吉林白山正茂药业股份有限公司，国药准字Z22024266；国药集团宜宾制药有限责任公司，国药准字Z51020067；山西华康药业股份有限公司，国药准字Z14020383；健民集团叶开泰国药(随州)有限公司，国药准字Z42021922。
市场上的混用品种有羊髓、驴髓和猪髓等。特别是近年由于资源严重减少，价格一直持上升趋势，使得一些伪品和混淆品大量出现，严重搅乱了正常的市场秩序，危害了患者的身体健康。
常用的牛脊髓鉴别方法有药材性状鉴别、显微鉴别和化学鉴别法。性状鉴别主要是指从牛脊髓的外形、颜色、质地、断面特征、气味等宏观特征来判断品种。方法虽然简单，但经验在这种方法中的影响很大，主观性较强。即使进行了很详细的性状描述，再由其他人来判断也比较难。而且作为药材，其形态通常是不完整的，因此鉴定难度较大。
应用分子遗传标记技术鉴定牛脊髓具有种属特异性强、准确性高，重复性好等优点，能从分子水平解决中药宏观鉴定的局限，利于中药鉴定的标准化和国际化。
线粒体是存在于真核细胞内的一种细胞器，线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）是一共价闭合的双链环状的遗传物质，具有分子量小、结构简单、易于分离、拷贝数高、突变率高、进化速度快、母性遗传、无组织特异性、高保守性等特点。分析种内和近缘种间遗传多样性和进化关系的适当DNA片段，可应用于生物的分类、系统发育和遗传多样性的研究。因此，以线粒体DNA分子特征为遗传标记的中药鉴定更为准确、可靠。
目前国家标准中尚无牛脊髓的法定鉴别方法，国内亦无牛脊髓真伪鉴定的相关文献报告。本发明专利基于选择牛的mtDNA特异位点用于牛脊髓鉴别。从牛类线粒体DNA的全部基因组进行筛选，采用高通量技术分析具有鉴别序列片段作为鉴别点，建立PCR反应体系，因无需对牛脊髓原药成分进行逐一分离，方法可快速、简便，在不失原药材本性的条件下直接判断牛脊髓的真伪。
发明内容
本发明专利采用生物信息学技术对黄牛的线粒体DNA基因组进行分析，利用Genbank中的相关信息，根据黄牛与其他相关动物的线粒体DNA序列的差异，选取特异性靶基因序列，应用primer 5.0设计软件，利用PCR技术在一个反应体系中加入一对特异性引物，针对一个模板可扩增一个具有差异的目的片段，可有效地区分黄牛和伪品的特异性DNA序列。使用方便的牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒，能够准确鉴别牛脊髓和伪品特异性分子标志，具有节省时间、降低成本和提高效率的特点，并提供其简便、快速、检测结果可靠的鉴定方法。
本发明的目的是由以下技术方案来实现的：
一种鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒，它包含：
1.样本前处理液
取待检样本（鲜品）新鲜牛脊髓50mg，于小烧杯中加约10mL冷生理盐水溶液浸泡20min，在平皿中用手术刀去除结缔组织后将组织切碎，每份按质量体积比1：20加入相应体积处理液（主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA）置于研钵中研磨。
线粒体DNA提取体系
（1）裂解液 向经过前处理的样品中加入5ml裂解液[10 mmol/LTris-HCl （pH 8.0）,10 mmol/LEDTA （pH 8.0），100 mmol/L NaCl，2% SDS，40μg/ml 蛋白酶K，0.039 mol/LDTT]，置于水浴锅中，56℃水浴过夜，转速100 r/min。
（2）沉淀液 直接向裂解后的样品中加入2ml沉淀液（主要含有NaAC），充分混匀，6000 r/min 4℃离心10min，吸取上清，弃沉淀。向上清中加入等体积的预冷的异丙醇，混匀后，低温放置20～30min，12000 r/min 4℃离心20min，弃上清，留沉淀。
（3）洗涤液 使用洗涤液（主要含有70%乙醇）洗涤沉淀2～3次，干燥沉淀，溶于灭菌双蒸水中，-80℃保存备用。
反应体系
鉴定反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阳性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，牛脊髓DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阴性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，无菌双蒸馏水9μL；
设计反应程序 分别将鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒的鉴定反应体系、阳性对照反应体系和阴性对照反应体系的总体系各20μL加入反应管中，置于PCR反应仪中按下列程序进行：94℃预变性5min，94℃ 30s，退火温度56℃30s，72℃30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃1h。
结果判定体系
制备1.5%琼脂糖凝胶（市场有售，可购买），电压85V电泳，DNA Marker为100bp DNALadder（标准分子量，市场有售）作参照，凝胶成像分析系统（市场有售，可购买）观察和分析结果。
牛脊髓DNA鉴定方法，它包含以下步骤：
1.样本前处理液
取待检样本（鲜品）新鲜牛脊髓50mg，于小烧杯中加约10mL冷生理盐水溶液浸泡20min，在平皿中用手术刀去除结缔组织后将组织切碎，每份按质量体积比1：20加入相应体积处理液（主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA）置于研钵中研磨。
线粒体DNA提取体系
（1）裂解液 向经过前处理的样品中加入5ml裂解液[10 mmol/LTris-HCl （pH 8.0），10mmol/LEDTA （pH 8.0），100 mmol/L NaCl，2% SDS，40μg/ml 蛋白酶K，0.039 mol/L DTT]，置于水浴锅中，56℃水浴过夜，转速100 r/min。
（2）沉淀液 直接向裂解后的样品中加入2ml沉淀液（主要含有NaAC），充分混匀，6000 r/min 4℃离心10min，吸取上清，弃沉淀。向上清中加入等体积的预冷的异丙醇，混匀后，低温放置20～30min，12000 r/min 4℃离心20min，弃上清，留沉淀。
（3）洗涤液 使用洗涤液（主要含有70%乙醇）洗涤沉淀2～3次，干燥沉淀，溶于灭菌双蒸水中，-80℃保存备用。
引物设计与合成
（1）设计牛脊髓线粒体DNA特异寡核苷酸引物：经过DNAStar7.0软件比对后，采用Premier5.0软件设计牛脊髓特异性引物，再利用NCBI中的在线软件Primer-BLAST 对设计的引物进行评估。设计特异性扩增牛脊髓DNA片段的引物如下：
Primer F：5′CATCAAACATCTCATCTTGATG3′
Primer R：5′AGTGTAAGACCCGTAATATAAG3′
（2）引物由深圳华大基因科技服务有限公司合成mtDNA特异性引物，预期扩增产物为254bp。
建立PCR反应
鉴定反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR MasterMix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阳性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR MasterMix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，牛脊髓DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阴性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR MasterMix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，无菌双蒸馏水9μL；
设计反应程序 分别将鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒的鉴定反应体系、阳性对照反应体系和阴性对照反应体系的总体系各20μL加入反应管中，置于PCR反应仪中，按下列程序进行: 94℃预变性5min，94℃ 30s，退火温度56℃ 30s，72℃30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃1h。
结果判定
制备1.5%琼脂糖凝胶（市场有售，可购买），电压85V电泳，DNA Marker为100bp DNALadder（标准分子量，市场有售）作参照，凝胶成像分析系统（市场有售，可购买）观察和分析结果。出现254bp 条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，参照图1。
本发明的鉴别牛脊髓和伪品鉴定试剂盒是利用鉴别牛脊髓和伪品线粒体DNA种属特异性位点，能够准确同时区别鉴别牛脊髓和伪品的特异性；建立PCR鉴定方法具有简便、快速、检测结果可靠等优点。
附图说明
图1为牛脊髓PCR试剂盒检测结果示意图，其中:M为100bpDNA Marker；1. 牛脊髓阳性对照，扩增出254bp；2-4是正品牛脊髓鲜样本结果，扩增出254bp； 5羊脊髓鲜样本，6猪脊髓鲜样本，7驴脊髓鲜样本，不出现扩增产物；8.空白对照，不出现扩增产物。
图2为实施例一牛脊髓试剂盒检测结果示意图，其中: M为100bpDNA Marker；1-5牛脊髓鲜样本，扩增出254bp；6-10 牛脊髓干样本，扩增出254bp；11-12羊脊髓样本，13-14猪脊髓样本，15-16驴脊髓样本，不出现扩增产物；17.空白对照，不出现扩增产物。
图3为实施例二对市售牛脊髓试剂盒检测结果示意图，其中：M为100bpDNAMarker；1-5 牛脊髓粉样本，扩增出254bp；6-10是牛脊髓样本，扩增出254bp；11-12羊脊髓样本，13-14猪脊髓样本，15-16驴脊髓样本，不出现扩增产物；12.空白对照，不出现扩增产物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，下面实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例一
1.检测样本前处理
检测样品两种，1-5为牛脊髓（鲜）正品，6-10为牛脊髓（干）正品，11-12羊脊髓样本，13-14猪脊髓样本，15-16驴脊髓样本，均由长春市食品药品检验中心提供并鉴定，每份各取1g，鲜品于小烧杯中加约10mL冷生理盐水溶液浸泡20min，在平皿中用手术刀去除结缔组织后将组织切碎，每份按质量体积比1：20加入相应体积处理液（主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA）置于研钵中研磨。干品去离子水浸泡30min后，室温干燥，使用研钵将样品研碎至2～3mm左右，置于离心管中，每份按质量体积比1:20加入相应体积处理液（主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA），56℃温浴振荡4h后，12000 r/min 离心10min弃上清，沉淀待用。
2.线粒体DNA提取
（1）样本裂解 向经过前处理的样品中加入5ml裂解液，置于水浴箱中，56℃水浴震荡4h。
（2）沉淀 直接向裂解后的样品中加入2ml沉淀液，充分混匀，6000 r/min 4℃离心10min，吸取上清，弃沉淀。向上清中加入等体积的预冷的异丙醇，混匀后，低温放置20～30min，12000 r/min 4℃离心20min，弃上清，留沉淀。
（3）洗涤 使用洗涤液洗涤沉淀2～3次，干燥沉淀，溶于灭菌双蒸水中，-80℃保存，作为检测DNA模板。
3.建立PCR反应
鉴定反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阳性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，牛脊髓DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阴性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，无菌双蒸馏水9μL；
设计反应程序 分别将鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒的鉴定反应体系、阳性对照反应体系和阴性对照反应体系的总体系各20μL加入反应管中，置于PCR反应仪中按下列程序进行: 94℃预变性5min，94℃ 30s，退火温度56℃30s，72℃ 30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃1h。
4.结果判定
产物用1.2%～1.5%琼脂糖凝胶电泳，分子量100bp DNA Marker作参照，凝胶成像分析系统观察和分析结果。出现254bp 条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，参照图2。
实施例二 对市售牛脊髓药材进行鉴定
1.材料
市售牛脊髓粉样品5种，牛脊髓正品5种，（由长春市食品药品检验中心提供并鉴定）；伪品羊脊髓、猪脊髓、驴脊髓（由长春市食品药品检验中心提供）。
2.方法
2.1 检测样本前处理 每份检测样品取1g，干品置于离心管中，每份按质量体积比1:20加入相应体积处理液（主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA），56℃温浴振荡4h后，12000 r/min 离心10min弃上清，沉淀待用。鲜品于小烧杯中加约10mL冷生理盐水溶液浸泡20min，在平皿中用手术刀去除结缔组织后将组织切碎，每份按质量体积比1：20加入相应体积处理液（主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA）置于研钵中研磨。
2.2线粒体DNA提取
（1）样本裂解 向经过前处理的样品中加入5ml裂解液，置于水浴箱中，56℃水浴震荡4h。
（2）沉淀 直接向裂解后的样品中加入2ml沉淀液，充分混匀，6000 r/min 4℃离心10min，吸取上清，弃沉淀。向上清中加入等体积的预冷的异丙醇，混匀后，低温放置20～30min，12000 r/min 4℃离心20min，弃上清，留沉淀。
（3）洗涤 使用洗涤液洗涤沉淀2～3次，干燥沉淀，溶于灭菌双蒸水中，-80℃保存，作为检测DNA模板。
2.3建立PCR反应
鉴定反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阳性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，牛脊髓DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阴性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，无菌双蒸馏水9μL；
设计反应程序 分别将鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒的鉴定反应体系、阳性对照反应体系和阴性对照反应体系的总体系各20μL加入反应管中，置于PCR反应仪中按下列程序进行: 94℃预变性5min，94℃ 30s，退火温度56℃ 30s，72℃ 30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃1h。
2.4结果判定
产物用1.2%～1.5 %琼脂糖凝胶电泳，分子量100bp DNA Marker作参照，凝胶成像分析系统观察和分析结果。出现254bp 条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，参照图3。
Claims (5)
1.一种鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒，它包含：
（1）样本前处理液
主要含有蔗糖，Tris-HCl，Na2EDTA；
（2）线粒体DNA提取体系
包括裂解液、沉淀液、洗涤液；
（3）PCR反应体系
鉴定反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阳性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，牛脊髓DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阴性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR Master Mix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，无菌双蒸馏水9μL；
设计反应程序 分别将鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒的鉴定反应体系、阳性对照反应体系和阴性对照反应体系的总体系各20μL加入反应管中，置于PCR反应仪中按下列程序进行：94℃预变性5min，94℃ 30s，退火温度56℃30s，72℃30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃1h；
（4）结果判定体系
制备1.5%琼脂糖凝胶，电压85V电泳，DNA Marker为100bp DNA Ladder（标准分子量，市场有售）作参照，凝胶成像分析系统观察和分析结果。
2.牛脊髓DNA鉴定方法，它包含以下步骤：
（1）样本前处理
（2）线粒体DNA提取
（3）PCR引物设计与合成
设计特异性扩增牛脊髓DNA片段的引物如下，引物由深圳华大基因科技服务有限公司合成mtDNA特异性引物，预期扩增产物为254bp；
Primer F：5′CATCAAACATCTCATCTTGATG3′
Primer R：5′AGTGTAAGACCCGTAATATAAG3′
（4）建立PCR反应
鉴定反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR MasterMix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，待测样品DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阳性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR MasterMix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，牛脊髓DNA1μL，无菌双蒸馏水8μL；
阴性对照反应体系 总体系为20μL，其中含有Taq Plus PCR MasterMix 10μL，10mM牛脊髓引物1μL，无菌双蒸馏水9μL；
设计反应程序 分别将鉴别牛脊髓和伪品PCR检测试剂盒的鉴定反应体系、阳性对照反应体系和阴性对照反应体系的总体系各20μL加入反应管中，置于PCR反应仪中，按下列程序进行: 94℃预变性5min，94℃ 30s，退火温度56℃ 30s，72℃30s，30个循环，72℃延伸10min，4℃1h；
（5）结果判定
制备1.5%琼脂糖凝胶，电压85V电泳，DNA Marker为100bp DNA Ladder（标准分子量，市场有售）作参照，凝胶成像分析系统观察和分析结果，出现254bp 条带为正品牛脊髓，出现多条或不出现均为伪品牛脊髓，参照图1。
3.如权利要求1所述的牛脊髓DNA鉴定试剂盒或权利要求2所述的牛脊髓DNA鉴定方法，其特征是，所述方法或试剂盒中的牛脊髓为牛科动物黄牛或水牛的骨髓。
4.如权利要求2 所述的牛脊髓DNA鉴定方法，其特征是，结果鉴定是利用比较样品PCR扩增片段DNA 大小与DNA 标准分子量的相同，根据出现判定标准完全一致对牛脊髓样品进行真伪鉴定。
5.如权利要求1所述的牛脊髓DNA鉴定试剂盒或权利要求2所述的牛脊髓DNA鉴定方法在牛脊髓样品的真伪鉴定中的应用。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1490609A (zh) * | 2002-10-15 | 2004-04-21 | 曹际娟 | 实时荧光pcr检测牛羊源性成分探针序列及试剂盒 |
| CN101363058A (zh) * | 2008-05-30 | 2009-02-11 | 南京大学 | 一种用巢式pcr鉴定肝素猪、牛、羊来源的方法 |
| CN101775436A (zh) * | 2009-12-23 | 2010-07-14 | 吉林大学 | 饲料中牛羊源成分检测方法及试剂盒 |
| CN102994637A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-03-27 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种检测肉及肉制品中牛源性成分的方法 |
| CN105238856A (zh) * | 2015-09-21 | 2016-01-13 | 北华大学 | 鹿胎dna鉴定试剂盒及鉴定方法 |
| CN105671157A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-06-15 | 河南农业大学 | 同步检测肉及肉制品中动物源性成分的试剂盒及其应用 |
| CN105734160A (zh) * | 2016-04-30 | 2016-07-06 | 江苏省家禽科学研究所 | 畜禽肉猪牛羊源性成分pcr鉴定用引物体系及pcr鉴定方法与试剂盒 |
-
2018
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1490609A (zh) * | 2002-10-15 | 2004-04-21 | 曹际娟 | 实时荧光pcr检测牛羊源性成分探针序列及试剂盒 |
| CN101363058A (zh) * | 2008-05-30 | 2009-02-11 | 南京大学 | 一种用巢式pcr鉴定肝素猪、牛、羊来源的方法 |
| CN101775436A (zh) * | 2009-12-23 | 2010-07-14 | 吉林大学 | 饲料中牛羊源成分检测方法及试剂盒 |
| CN102994637A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-03-27 | 中国肉类食品综合研究中心 | 一种检测肉及肉制品中牛源性成分的方法 |
| CN105238856A (zh) * | 2015-09-21 | 2016-01-13 | 北华大学 | 鹿胎dna鉴定试剂盒及鉴定方法 |
| CN105671157A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-06-15 | 河南农业大学 | 同步检测肉及肉制品中动物源性成分的试剂盒及其应用 |
| CN105734160A (zh) * | 2016-04-30 | 2016-07-06 | 江苏省家禽科学研究所 | 畜禽肉猪牛羊源性成分pcr鉴定用引物体系及pcr鉴定方法与试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 亏开兴: "应用线粒体DNA坚定动物源性饲料成分研究进展", 《黄牛杂志》 * |
| 陈宏等: "家畜线粒体DNA(mtDNA)的研究", 《黄牛杂志》 * |
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