CN105603106B - 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒 - Google Patents

基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN105603106B
CN105603106B CN201610160403.1A CN201610160403A CN105603106B CN 105603106 B CN105603106 B CN 105603106B CN 201610160403 A CN201610160403 A CN 201610160403A CN 105603106 B CN105603106 B CN 105603106B
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
peach kernel
amygdalate
sequence
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610160403.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105603106A (zh
Inventor
黄璐琦
袁媛
张夏楠
赵玉洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Resources Sanjiu Modern Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co ltd
Institute of Materia Medica of CAMS
Original Assignee
Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Materia Medica of CAMS filed Critical Institute of Materia Medica of CAMS
Priority to CN201610160403.1A priority Critical patent/CN105603106B/zh
Publication of CN105603106A publication Critical patent/CN105603106A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105603106B publication Critical patent/CN105603106B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6809—Methods for determination or identification of nucleic acids involving differential detection

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于ITS序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的PCR方法及试剂盒。本发明提供了一种鉴别桃仁或苦杏仁的引物，为能扩增出序列表中序列1所示的核苷酸和序列表中序列2所示的核苷酸的扩增产物的引物对。本发明的实验证明，通过引物筛选与条件优化，确定引物G4‑7可将桃仁与苦杏仁鉴别开，且其灵敏度高，稳定性好，可用于桃仁与苦杏仁的分子鉴别。相比于传统鉴别，其可信度较高，可用于桃仁药材分子鉴定的推广与应用，且为桃仁药材的快速现场鉴别提供了依据。

Description

基于ITS序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的PCR方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种基于ITS序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的PCR方法及试剂盒。
背景技术
桃仁为蔷薇科植物桃Prunus persica(L.)Batsch或山桃P.davidiana(Carr.)Franch.的干燥成熟种子，具有活血祛瘀、润肠通便、止咳平喘的功效。用于经闭痛经、症瘕痞块、肺痈肠痈、跌扑损伤、肠燥便秘、咳嗽气喘等症的治疗。苦杏仁为蔷薇科同属植物山杏P.armeniaca L.var.ansu Maxim.、西伯利亚杏P.sibirica L.、东北杏P.mandshurica(Maxim)Koehne、或杏P.armeniaca L.的干燥成熟种子。桃仁与苦杏仁在外观上非常相似，经脱皮、炮制加工后更难区分，但二者功效不同，桃仁主用于活血化瘀，而苦杏仁为止咳平喘药。由于桃仁货源较少，价钱较贵，市场上常掺以苦杏仁混充出售。苦杏仁中苦杏仁苷含量较高，苦杏仁苷会释放出含氰的有毒物质，具有较大毒性，混用容易引起潜在的用药风险。因此，建立一种快速、简易、准确鉴定桃仁和苦杏仁及其近缘种的分子鉴定体系，对于控制桃仁的药材质量以及用药安全都具有十分重要的意义。
由于科技的飞速发展，分子鉴定技术逐渐应用于中药鉴定中来。林韵涵等利用DNA条形码技术，通过序列拼接，数据处理，NJ树构建等方法对药材桃仁及其近缘种进行ITS2分子鉴定，结果显示桃种内变异位点为6个，山桃为3个，种内平均K2P距离均为0.009，种间平均K2P距离为0.021，说明桃仁药材的ITS2序列变异小，较为保守和稳定。桃仁药材的两个基原物种的种内平均K2P距离(0.009)小于其与近缘种的种间平均遗传距离(0.037)。表明ITS2序列作为DNA条形码可以有效地鉴定药材桃仁及其近缘种。而特异性PCR技术是一种错配扩增突变分析技术，是根据正品、伪品药材特定区域的DNA序列，设计有高度特异性的正品鉴别引物，此引物能有效扩增来自正品药材DNA模板中的特定区域。鉴定样品时，用鉴别引物对所提取样品的DNA进行PCR扩增经凝胶电泳检测鉴别样品真伪。特异性PCR技术具有以下优势：操作简单、成本低、重复性好；使用特异性引物可极大地降低PCR假阳性率，保证鉴定的准确性；对DNA质量要求不高，所需的DNA量少；PCR鉴定条带单一，真伪药材判定标准简单可靠，无需进行测序及软件分析。特别是近年来快速PCR技术迅速发展，使得中药材分子鉴定在现场快速鉴定上的应用成为了可能。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种鉴别桃仁或苦杏仁的引物。
本发明提供的引物，能扩增出DNA片段A的引物对；
所述DNA片段A是以桃仁为模板，用序列1和序列2所示引物对进行扩增得到的产物。
实际应用中，可能因为模板的不同，扩出的产物存在个别碱基或几个碱基的差异，但这都属于DNA片段A的范畴。
上述引物中，所述引物对由引物1和引物2组成；
所述引物1为如下1)或2)：
1)为序列1所示的单链DNA分子；
2)为序列1删除和/或增加和/或改变一个或几个核苷酸得到的单链DNA分子；
所述引物2为如下3)或4)：
3)为序列2所示的单链DNA分子；
4)为序列2删除和/或增加和/或改变一个或几个核苷酸得到的单链DNA分子。
上述引物中，所述引物1和所述引物2的摩尔比为1:1。
本发明另一个目的是提供一种用于鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁的PCR试剂。
本发明提供的PCR试剂，包括上述的引物；
所述引物中每条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.2μmol·L-1。
本发明第三个目的是提供一种鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁的试剂盒。
本发明提供的试剂盒，包括上述的引物或上述的PCR试剂。
上述的引物或上述的PCR试剂或权利要求5所述的试剂盒在如下(A1)或(A2)中的应用也是本发明保护的范围：
(A1)鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁；
(A2)鉴定或辅助鉴定待测样品是桃仁或苦杏仁。
本发明第四个目的是提供一种鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：检测待测样品中是否含有DNA片段A；如果含有，则待测样品为或候选为桃仁；如果不含有，则待测样品为或候选为苦杏仁；
所述DNA片段A是以桃仁为模板，用序列1和序列2所示引物对进行扩增得到的产物。
上述方法中，所述检测待测样品中是否含有DNA片段A的方法包括如下步骤：用上述的引物对待测样品进行PCR扩增，得到DNA片段A。
上述方法中，所述DNA片段A的大小为300-350bp。
上述方法中，所述PCR扩增的模板为待测样品的基因组DNA；
所述PCR扩增的退火温度为55℃-63℃。
本发明的实验证明，通过引物筛选与条件优化，确定引物G4-7可将桃仁与苦杏仁鉴别开，且其灵敏度高，稳定性好，可用于桃仁与苦杏仁的分子鉴别。相比于传统鉴别，其可信度较高，可用于桃仁药材分子鉴定的推广与应用，且为桃仁药材的快速现场鉴别提供了依据。
附图说明
图1为桃仁与苦杏仁样品性状图。
图2为桃仁与杏仁ITS2与G4-7的PCR扩增结果。
图3为基于ITS2序列构建的桃仁与杏仁药材的邻接(NJ)树。
图4为DNA模板浓度优化结果。
图5为退火温度考查结果。
图6为不同酶考查结果。
图7为不同PCR仪考查结果。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
PCR仪(Veriti,GENE)；PCR仪(6325YM00261,Eppendorf AG)；微量核酸定量仪(NO2000C,GENE)；台式离心机(SIGMA)；离心机(SCILOGEX D1008,IKA MS3basic)；漩涡混匀仪(SCILOGEX MX-E)；电热恒温水浴锅(DK-S220)；高级荧光化学发光系统(FUSION-SL)；电脑三恒多用电泳仪(DYY-12,北京六一仪器厂)。
植物基因组DNA提取试剂盒(离心柱型DP305-2TIANGEN)；2×EasyTaq PCRSuperMix(TRAN)；2×Taq PCR StarMix(A112GenStar)；Ex Taq DNA聚合酶(RR53AMTakaRa)；Phusion超保真PCR Master Mix(M0531,BioLaba)；2K DNA Marker(E110，TRAN)；5K DNA Marker(E110，TRAN)；6×DNA Loading Buffer(D026，TRAN)；10000×GeneGreenNucleic Dye(RT210，TIANFEN)，琼脂糖(G-10，BIOWEST)，其他试剂均为分析纯。
选取于河北安国药材市场购买，产于西藏、四川阿坝、河北安国、山西荷花池等地的8份桃仁，4份苦杏仁。实验材料信息见表1，部分样品性状见图1。
表1 实验材料
实施例1、鉴别桃仁或苦杏仁的引物设计及合成
取桃仁与苦杏仁约100mg，经粉碎后，采用植物DNA提取试剂盒提取各药材总DNA，用50μL无菌水溶解。用通用引物ITS2F和ITS3R以高保真酶扩增样品DNA并进行双向测序。基于ITS2序列，利用MEGA6通过邻接法(NJ)所构建的系统聚类树图(图3)表明，桃仁与苦杏仁序列分别聚集成枝。表明ITS2序列能把桃仁药材与苦杏仁药材明显区分开。
将所测得的序列与GenBank中的桃仁与杏仁ITS序列用BioEdit软件进行比对分析，找出具有稳定差异的特异性片段，筛选获得变异位点，通过该位点运用PremierPrimer5.0软件针对桃仁的特异性片段设计多对鉴别引物，设计的特异引物扩增后的片段大小为333bp,特异性引物G4-6F/G4-7R序列见表2。各引物由睿博兴科生物技术有限公司合成。
表2 引物及PCR反应条件
实施例2、引物在鉴别桃仁或苦杏仁中的应用
一、引物特异性鉴定
提取桃仁和苦杏仁的基因组DNA，稀释20倍，分别加入如下反应体系中进行PCR扩增，
反应体系为25μL，包括2×EasyTaq PCR SuperMix(TRAN)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(0.2μmol·L-1),DNA(终浓度为1ng/μL)1μL,用无菌水补足体积。
PCR反应条件如表2所示。以用通用引物ITS2F和ITS3R为对照。
结果如图2所示，1-8为表1对应所示的桃仁，9-12为表1对应所示的苦杏仁；可以看出，桃仁样品扩增呈阳性，条带整齐、清晰明亮，大小333bp，而苦杏仁均呈阴性，无条带扩增。由此证明该引物具有良好的特异性。
鉴别桃仁和苦杏仁的PCR试剂由2×EasyTaq PCR SuperMix、G4-6F、G4-7R和水组成。
含有G4-6F和G4-7R或鉴别桃仁和苦杏仁的PCR试剂的试剂盒可用来鉴别桃仁和苦杏仁。
二、灵敏度检测
将桃仁和苦杏仁的基因组DNA分别进行稀释加入如下反应体系中进行PCR扩增，
反应体系为25μL，包括2×EasyTaq PCR SuperMix(TRAN)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(终浓度为0.2μmol·L-1),基因组DNA浓度分别为0.05ng/μL-2ng/μL(1ng/μL)1μL,用无菌水补足体积。
PCR反应条件见表2。
结果如图4所示，1-8为表1对应所示的桃仁，9-12为表1对应所示的苦杏仁；可以看出，确定DNA模板浓度为0.05ng/μL-2ng/μL，DNA模板浓度在2ng/μL时苦杏仁出现假阳性条带，而在0.02ng/μL时桃仁并不能出现清晰、明亮条带，且其引物二聚体明显增多，灵敏度为0.05ng/μLDNA模板。
三、退火温度的考察
将桃仁和苦杏仁的基因组DNA分别进行稀释加入如下反应体系中进行PCR扩增，
反应体系为25μL，包括2×EasyTaq PCR SuperMix(TRAN)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(终浓度为0.2μmol·L-1),基因组DNA浓度为1ng/μL1μL,用无菌水补足体积。
在如下不同退火温度的PCR反应条件下反应，与表2基本相同，不同的是退火温度分别为55℃-63℃。
结果如图5所示，1-8为表1对应所示的桃仁，9-12为表1对应所示的苦杏仁；退火温度在55℃-63℃时桃仁均出现整齐、清晰条带，而苦杏仁均无条带；表明退火温度对其无明显影响，建议可将退火温度设为55-63℃。
四、DNA聚合酶的广谱性
将桃仁和苦杏仁的基因组DNA分别进行稀释加入如下反应体系1)和2)中进行PCR扩增，
1)：反应体系为25μL，包括Ex Taq DNA聚合酶(RR53AM TakaRa)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(终浓度为0.2μmol·L-1),基因组DNA浓度为1ng/μL1μL,用无菌水补足体积。
2)：反应体系为25μL，包括2×Taq PCR StarMix(A112GenStar)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(终浓度为0.2μmol·L-1),基因组DNA浓度为1ng/μL(终浓度为1ng/μL)1μL,用无菌水补足体积。
3)：反应体系为25μL，包括2×EasyTaq PCR SuperMix(TRAN)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(终浓度为0.2μmol·L-1),基因组DNA浓度为1ng/μL 1μL,用无菌水补足体积。
PCR反应条件见表2。
结果如图6所示，1-8为表1对应所示的桃仁，9-12为表1对应所示的苦杏仁；a为ExTaq DNA聚合酶，b为2×Taq PCR StarMix，c为2×EasyTaq PCR SuperMix；可以看出，结果桃仁均出现整齐、明亮清晰的条带，苦杏仁均无条带出现；表明DNA聚合酶对其无明显影响。
五、PCR仪的广谱性
将桃仁和苦杏仁的基因组DNA分别进行稀释加入如下反应体系中进行PCR扩增，
反应体系为25μL，包括2×EasyTaq PCR SuperMix(TRAN)12.5μL,G4-6F和G4-7R各0.5μl(终浓度为0.2μmol·L-1),基因组DNA浓度为1ng/μL1μL,用无菌水补足体积。
PCR反应条件见表2。
PCR扩增选用了三台不同PCR仪器(Life Technologies公司，型号Veriti；德国Eppendorf AG 22331Hamburg；德国Eppendorf Mastercycler pro)及同一仪器多次实验。
结果如图7所示，1-8为表1对应所示的桃仁，9-12为表1对应所示的苦杏仁；a为Eppendorf AG PCR仪(6325YM00261)，b为GENE PCR仪(Veriti)；结果桃仁均出现整齐、明亮清晰的条带，苦杏仁均无条带出现，表明PCR仪不影响桃仁及苦杏仁的鉴定。
<110>中国中医科学院中药研究所
<120>基于ITS序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的PCR方法及试剂盒
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223>
<400> 1
ggggccctgc ggctcctt 18
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223>
<400> 2
aggcgtgccc tcggcctag 19

Claims (8)

1.一种鉴别桃仁或苦杏仁的引物，为由引物1和引物2组成；
所述引物1为序列1所示的单链DNA分子；
所述引物2为序列2所示的单链DNA分子。
2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：所述引物1和所述引物2的摩尔比为1:1。
3.一种用于鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁的PCR试剂，包括权利要求1或2所述的引物；
所述引物中每条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.2 µmol•L-1。
4.一种鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁的试剂盒，包括权利要求1或2所述的引物或权利要求3所述的PCR试剂。
5.权利要求1或2所述的引物或权利要求3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在如下（A1）或（A2）中的应用：
（A1）鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁；
（A2）鉴定或辅助鉴定待测样品是桃仁或苦杏仁。
6.一种鉴别或辅助鉴别桃仁或苦杏仁的方法，包括如下步骤：检测待测样品中是否含有DNA片段A；如果含有，则待测样品为或候选为桃仁；如果不含有，则待测样品为或候选为苦杏仁；所述DNA片段A是以桃仁为模板，用序列1和序列2所示引物对进行扩增得到的产物；
所述检测待测样品中是否含有DNA片段A的方法包括如下步骤：用权利要求1或2所述的引物对待测样品进行PCR扩增，如果扩增产物为DNA片段A，则待测样品为或候选为桃仁；如果扩增产物不为DNA片段A，则待测样品为或候选为苦杏仁；
所述PCR扩增的模板为待测样品的基因组DNA；
所述基因组DNA的浓度为0.05 ng/μL-1 ng/μL。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：
所述DNA片段A的大小为333bp。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：
所述PCR扩增的退火温度为55℃-63℃。
CN201610160403.1A 2016-03-21 2016-03-21 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒 Active CN105603106B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610160403.1A CN105603106B (zh) 2016-03-21 2016-03-21 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610160403.1A CN105603106B (zh) 2016-03-21 2016-03-21 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105603106A CN105603106A (zh) 2016-05-25
CN105603106B true CN105603106B (zh) 2019-06-25

Family

ID=55983441

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610160403.1A Active CN105603106B (zh) 2016-03-21 2016-03-21 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105603106B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106544438A (zh) * 2016-11-29 2017-03-29 塔里木大学 一种遗传标记在紫杏鉴定中的应用
CN110760510B (zh) * 2018-07-25 2021-08-03 中国科学院植物研究所 用于进行蔷薇科植物物种鉴定的片段组合、特异引物及其应用
CN110205358A (zh) * 2019-05-10 2019-09-06 河北医科大学第一医院 一种鉴别杏仁的试剂盒及鉴别方法
CN112708692A (zh) * 2021-01-29 2021-04-27 珠海天禾食品有限公司 一种用于鉴定芥辣调味品中山葵、辣根和芥末组分的引物对、试剂盒及其应用
CN115029473B (zh) * 2022-06-21 2024-06-18 湖北省药品监督检验研究院 一种基于mlpa技术对中药材桃仁与苦杏仁进行鉴别的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104762381A (zh) * 2015-03-30 2015-07-08 中国中医科学院中药研究所 一种用于鉴定菟丝子的引物对及其应用
CN104946730A (zh) * 2014-03-28 2015-09-30 中国中医科学院中药研究所 鉴定鹿茸的pcr特异引物及其检测方法
CN105200140A (zh) * 2015-10-14 2015-12-30 中国中医科学院中药研究所 一种用于鉴定蛤蚧的pcr方法及其特异引物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104946730A (zh) * 2014-03-28 2015-09-30 中国中医科学院中药研究所 鉴定鹿茸的pcr特异引物及其检测方法
CN104762381A (zh) * 2015-03-30 2015-07-08 中国中医科学院中药研究所 一种用于鉴定菟丝子的引物对及其应用
CN105200140A (zh) * 2015-10-14 2015-12-30 中国中医科学院中药研究所 一种用于鉴定蛤蚧的pcr方法及其特异引物

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中药材 DNA 条形码鉴定的基因序列比较;韩建萍等;《中国中药杂志》;20120430;第37卷(第8期);第1056-1061页 *
中药材DNA条形码分子鉴定指导原则;陈士林等;《中国中药杂志》;20130131;第38卷(第2期);第142页第1.2.3节 *
基于ITS2序列鉴定桃仁及其近缘种;林韶涵等;《世界科学技术-中医药现代化》;20130620;第15卷(第3期);摘要，表1，图1 *
桃仁、苦杏仁及其混伪品微性状鉴别研究;崔田等;《海峡药学》;20160215;第28卷(第2期);第41-43页 *
苦杏仁与桃仁的鉴别与应用;叶会洲等;《海峡药学》;20080815;第20卷(第8期);第85-86页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105603106A (zh) 2016-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105603106B (zh) 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒
CN103898235A (zh) 一种水蛭的dna条形码分子鉴定方法
JP2018201501A (ja) 生薬鑑別用プライマーセット及びそれを用いた生薬鑑別方法
CN103898234A (zh) 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法
CN101265500B (zh) 源自真核生物的中药及中药材的pcr鉴定方法
CN105002272B (zh) 一种rapd标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法
CN106282373A (zh) 一种霍山石斛与河南石斛的对比鉴定方法
CN104862415A (zh) 基于lamp实时荧光法的猪等孢球虫卵囊检测方法及其引物
CN105543373B (zh) 乌拉尔甘草、光果甘草、胀果甘草及其杂交品种的快速分子鉴定方法
CN104388569B (zh) 一组pcr鉴别引物及以其鉴别白及、黄花白及的方法
CN102643912B (zh) 一种检测水貂源性成分的扩增引物
CN112322768B (zh) 一种沙棘枝干枯萎病诊断及病原菌的快速rpa检测方法
CN105695620A (zh) 一种快速检测冬虫夏草的方法
CN108517372A (zh) 一种用于鉴定人参配方颗粒的引物组及鉴定方法
CN108950088A (zh) 一种鉴别葡萄卷叶病毒3和葡萄茎痘病毒的双重pcr引物及方法
CN102373283A (zh) 用于石斑鱼成分鉴别的引物、试剂盒及检测方法
CN105274245B (zh) 一种鉴定多花黄精的方法及其专用引物对
Jiang et al. Conventional octaplex PCR for the simultaneous identification of eight mainstream closely related Dendrobium species
CN107130032A (zh) 基于多条dna条形码的6个鳗鱼物种鉴别方法
CN103436612A (zh) 一种常见鲟鱼类的pcr-rflp快速检测方法
CN104962656A (zh) 一种快速鉴别金钱白花蛇的TaqMan探针引物混合物、试剂盒和荧光定量PCR检测方法
CN105176988A (zh) 一种基于pcr-rflp鉴定中药材鹿茸的方法
CN105039584A (zh) 西洋参dna检测试剂盒及鉴定方法
CN107365766A (zh) 机械破碎法提取霉菌孢子rna的方法
CN104593365B (zh) 一种用于鱼腥草分子鉴定的dna条形码，引物、试剂盒和鉴定方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20221102

Address after: 516007 No.199 Nan'an Road, Huicheng District, Huizhou City, Guangdong Province

Patentee after: China Resources Sanjiu modern traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Co.,Ltd.

Patentee after: INSTITUTE OF CHINESE MATERIA MEDICA, CHINA ACADEMY OF CHINESE MEDICAL SCIENCES

Address before: 100700 Beijing City, Dongcheng District Dongzhimen Nanxiaojie No. 16

Patentee before: INSTITUTE OF CHINESE MATERIA MEDICA, CHINA ACADEMY OF CHINESE MEDICAL SCIENCES