CN108449999B - 使用色酰胺-tRNA合成酶诊断感染病或其并发症的组合物以及检测诊断标记物的方法 - Google Patents

使用色酰胺-tRNA合成酶诊断感染病或其并发症的组合物以及检测诊断标记物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种通过使用色酰胺‑tRNA合成酶(WRS)诊断感染性疾病的组合物以及一种检测诊断标记物的方法，更具体而言，本发明涉及：一种用于诊断感染性疾病的组合物，其含有用于测定WRS蛋白或mRNA表达水平的制剂；一种诊断试剂盒；一种检测WRS以用于提供诊断感染性疾病所需信息的的方法；以及一种使用WRS确定感染性疾病的死亡风险的方法。根据本发明，WRS仅在感染诱发的感染性疾病中增加，从而区分非感染性疾病，并且在感染早期迅速增加。此外，WRS的水平与感染引起的疾病或并发症的严重程度和预后密切相关。因此，与用于感染性疾病或其并发症的常规标记物相比，WRS可作为一种标记物用于更快速和准确的诊断。

Description

使用色酰胺-tRNA合成酶诊断感染病或其并发症的组合物以 及检测诊断标记物的方法
技术领域
本申请要求于2015年9月1日提交的韩国专利申请KR10-2015-0123743以及于2016年3月2日提交的韩国专利申请KR10-2016-0025329的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
本发明涉及一种使用色氨酰-tRNA合成酶（WRS）来诊断感染性疾病的组合物以及一种用于检测诊断标记物的方法。更具体而言，本发明涉及一种用于诊断感染性疾病的组合物，其包含用于测定WRS的蛋白或mRNA表达水平的试剂；涉及一种诊断试剂盒；还涉及一种用于检测WRS以提供诊断感染性疾病所需信息的方法；以及涉及一种使用WRS确定感染性疾病死亡风险的方法。
背景技术
感染性疾病是指当例如细菌、真菌和病毒等异物出现在血液，体液和组织中时发生的疾病。除非被正确识别和正确处理，否则它们可能会成为威胁生命的疾病。 尽管随着卫生水平的提高，感染病的患病率普遍下降，但由于滥用抗生素，可能致命的感染病威胁正在增加，移植后使用免疫抑制剂的次数增加，化学疗法造成的免疫力降低，以及患有糖尿病和高血压等基础疾病的患者数量增加。
目前，感染病的诊断工具是用于鉴别感染器官并指导患者血液和尿液中的微生物培养的聚合酶链式反应（PCR），以及根据患者症状的临床医生的经验性判断。然而，实验室微生物培养的结果多为阴性，且PCR方法存在时间限制。在大多数细菌和真菌感染的感染的头3-4个小时内，降钙素原（PCT）的激素原升高，但其变化的更高水平是由革兰氏阴性菌引起的，而不是其他病原体。目前尚未可知的是，这种激素水平是否可能因病毒感染而升高。因此，尽管通过以前的研究在检测感染病中的多种微生物方面已经取得了相当大的进展，但目前使用的诊断方法仍然需要大量的劳动力，但灵敏度和特异性差。
特别是，感染性疾病多伴有感染部位的炎症反应，其中一部分可能引起全身炎症反应，从而导致致命的后果。取决于其成因，这种全身性炎症反应在其治疗方法上有所不同。因此，对于正确治疗是非常重要的，以快速鉴别和诊断由非感染性原因引起的各种全身性炎症反应和由病原体感染引起的炎症反应。尽快开始实施适当的抗生素治疗很重要，尤其是因为感染性疾病引起的感染性炎症可能会导致死亡。因此，这种诊断对于急性感染性炎症患者的生存至关重要。
目前，C-反应蛋白（CRP）被用作多种炎症疾病的常见诊断标记物。然而，CRP水平不能明确地用于鉴定感染性炎症，因为其水平在非感染性和感染性炎性疾病中均增加。因此，有必要开发一种能快速鉴别感染引起的炎症的诊断试剂。
发明内容
技术问题
因此，本申请发明人发现由于细菌、病毒或真菌感染，色氨酸-tRNA合成酶（TrpRS或WRS，以下称为“WRS”）的表达水平从感染的早期阶段迅速增加，从而完成了本发明，特别是涉及感染性炎性疾病时，WRS水平与健康受试者的水平相比显著增加，并且非感染性炎性疾病与WRS水平无关，这表明WRS水平可作为快速准确诊断感染性疾病及其并发症的标记物。
因此，本发明的一个方面是提供一种用于诊断感染性疾病的组合物，所述组合物包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
本发明的另一方面是提供一种用于诊断感染性疾病的试剂盒，所述试剂盒包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
本发明的另一方面是提供一种在需要获得诊断感染性疾病所需信息的受试者中检测色氨酰-tRNA合成酶的方法，所述方法包括：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）将受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平与健康受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平进行比较，若该受试者相较于该健康受试者具有增加的色氨酰-tRNA合成酶的表达水平，则该受试者已经感染了感染性疾病。。
本发明的又一方面是提供一种用于确定感染病的死亡风险的组合物，所述组合物包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
本发明的又一方面是提供一种用于确定患有感染病的受试者的死亡风险的方法，所述方法包括：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）确定受试者的死亡风险随色氨酰-tRNA合成酶水平的增加成比例地增加。
本发明的再一方面是提供一种用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂在制备诊断感染病的试剂的应用。
本发明的再一方面是提供一种用于在有需要的受试者中诊断感染性疾病的方法，所述方法包括测定有需要的受试者的样本中的色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平。
本发明的再一方面是提供一种用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂在制备用于确定患有感染病的受试者的死亡风险的试剂的应用。
技术方案
根据本发明的一个方面的实施方式提供了一种用于诊断感染性疾病的组合物，所述组合物包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
此外，根据本发明的另一个实施方式提供了一种用于诊断感染性疾病的组合物，所述组合物由用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酸-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂组成。
此外，根据本发明的另一个实施方式提供一种用于诊断感染性疾病的组合物，所述组合物基本上由用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂组成。
根据本发明另一方面的实施方式提供了一种用于诊断感染性疾病的试剂盒，所述试剂盒包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂。
此外，根据本发明的另一个实施方式提供了一种用于诊断感染性疾病的试剂盒，所述试剂盒由用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂组成。
此外，根据本发明的另一实施方式提供了一种用于诊断感染性疾病的试剂盒，所述试剂盒基本上由用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂组成。
根据本发明的又一方面的实施方式提供了一种在需要获得诊断感染性疾病所需信息的受试者中检测色氨酰-tRNA合成酶的方法，所述方法包括：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）将受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平与健康受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平进行比较，若该受试者相较于该健康受试者具有增加的色氨酰-tRNA合成酶的表达水平，则该受试者已经感染了感染性疾病。
另外，根据本发明的另一实施方式提供了一种在需要获得诊断感染性疾病所需信息的受试者中检测色氨酰-tRNA合成酶的方法，所述方法由以下组成：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）将受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平与健康受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平进行比较，若该受试者相较于该健康受试者具有增加的色氨酰-tRNA合成酶的表达水平，则该受试者已经感染了感染性疾病。
此外，根据本发明的另一实施方案提供了一种在需要获得诊断感染性疾病所需信息的受试者中检测色氨酰-tRNA合成酶的方法，所述方法基本上由以下组成：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）将受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平与健康受试者中色氨酰-tRNA合成酶的水平进行比较，若该受试者相较于该健康受试者具有增加的色氨酰-tRNA合成酶的表达水平，则该受试者已经感染了感染性疾病。
根据本发明的又一方面的实施方式提供了一种用于确定感染病的死亡风险的组合物，所述组合物包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
此外，根据本发明的另一实施方式提供了一种用于确定感染病的死亡风险的组合物，所述组合物由用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂组成。
此外，根据本发明的另一个实施方式提供了一种用于确定感染病的死亡风险的组合物，所述组合物基本上由用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂组成。
根据本发明的又一方面的实施方式提供了一种确定患有感染病的受试者的死亡风险的方法，所述方法包括：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）确定受试者的死亡风险随色氨酰-tRNA合成酶水平的增加成比例地增加。
此外，根据本发明的又一实施方式提供了一种确定患有感染病的受试者的死亡风险的方法，所述方法基本上由以下组成：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）确定受试者的死亡风险随色氨酰-tRNA合成酶水平的增加成比例地增加。
此外，根据本发明的又一实施方式提供了一种确定患有感染病的受试者的死亡风险的方法，所述方法由以下组成：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）确定受试者的死亡风险随色氨酰-tRNA合成酶水平的增加成比例地增加。
根据本发明另一方面的实施方式提供了一种用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂在制备用于诊断感染性疾病的试剂中的应用。
根据本发明的又一方面的实施方式提供了一种用于在有需要的受试者中诊断感染性疾病的方法，所述方法包括测定有需要的受试者的样本中的色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平。
根据本发明的又一方面的实施方式提供一种用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂在制备用于确定患有感染病的受试者的死亡风险的试剂的应用。
在下文中，将详细描述本发明。
本发明提供一种用于诊断感染性疾病的组合物，所述组合物包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂。
本申请发明人首次证实，由于细菌、病毒或真菌感染，WRS的表达水平从感染的早期阶段迅速增加，并且当症状如肺炎或脓毒症表现为感染性并发症时，其显著高于健康对照。
此外，脓毒症患者的WRS表达水平与脓毒症的严重程度和预后高度相关，并且因为WRS仅在感染性炎症中增加，所以其可以快速且准确地区分感染性炎性疾病和非感染性炎性疾病。因此，本发明证实诊断标记物在感染性并发症中的价值非常高。
关于WRS和感染性疾病的诊断，本发明的发明人明确证实了了以下内容。
根据本发明的一个实施方式，已经证实在由细菌、病毒或真菌引起的感染中，WRS大大增加。
当人外周血单核细胞（PBMC）感染鼠伤寒沙门氏菌Salmonella Typhimurium或RSV或PR8病毒时，感染后1小时内从这些PBMC释放到细胞外的WRS水平迅速增加。另外，与健康对照相比，存在于病毒性肺炎患者血清中的WRS的量增加。
在本发明的另一个实施方式中已经证实与健康对照的血清相比，由于细菌或真菌感染引起的脓毒症或感染性休克患者的血清中的WRS量显著增加。
GRS和KRS是在细胞外分泌的不同类型的氨酰-tRNA合成酶（ARS），其在脓毒症患者和健康对照之间没有差异，并且由于感染引起的WRS的增加被发现对于WRS来说是特异性的，而不是ARS的普遍现象。
由于革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌的感染，各脓毒症患者中WRS的增加趋势没有统计上的显著差异，因此证实WRS可有效用于诊断由革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌感染引起的脓毒症。另外，单次感染和多次感染患者血液中WRS水平无显著差异，这表明WRS可用于诊断单次感染或多次感染导致的脓毒症。
特别是，与健康对照相比，患有自身免疫性疾病（例如全身炎症反应症状（SIRS），非感染性慢性炎症性疾病如哮喘和类风湿性关节炎，以及干燥综合征）的患者血清中的WRS量没有统计上的显著性差异。因此，WRS的表达水平在所有炎症反应中均未增加，但已证实的是，其仅在由细菌、病毒或真菌感染诱导的炎症反应中特异性增加。此外，感染性休克患者的WRS水平比脓毒症患者的WRS水平进一步增加，因此，可证实的是，WRS表达水平也与脓毒症的严重程度相关。也就是说，可以确定WRS的表达水平越高，脓毒症的症状就越严重。
在本发明的另一个实施方式中，通过WRS的ROC曲线分析证实WRS在诊断由感染引起的炎症方面具有优异的敏感性和特异性。关于用SOFA评分标记的脓毒症严重程度相关性，WRS也被发现具有比CPR（一种现存的炎症诊断标记物）更高的相关性。换句话说，WRS的表达水平越高，SOFA评分越高。因此，可以预测由脓毒症导致的器官衰竭的概率很高。
脓毒症诊断28天后死于脓毒症的患者的WRS水平显著高于存活的脓毒症患者，这进一步证实WRS与脓毒症的严重程度和预后密切相关。也就是说，随着WRS表达水平的增加，可以预测脓毒症的严重程度更高，预后更差。
另外，对来自120名健康人、18名SIRS患者（由于非感染性疾病的原因）、166名脓毒症患者和160名感染性休克患者的血清样本进行临床研究，并将其与常规使用的标记物-降钙素原进行比较。因此，尽管WRS的结果与降钙素原的结果相关，但WRS只是专门针对感染性疾病的并发症进行检测，并且证实的是WRS可选择关心死亡的患者。
利用上述WRS的表达水平与肺炎和脓毒症的严重程度之间的密切相关性，WRS可用作脓毒症的诊断标记物，其比现有的脓毒症的诊断标记物更有效。尤其是，由于WRS在脓毒症中特异性地增加，且在感染的早期阶段迅速增加，因此可以防止由于未知的炎症原因导致的初始治疗的延迟，并且允许患者通过快速区分感染性炎性疾病（如脓毒症）和非感染性炎性疾病以接受最合适的治疗。
基于本申请发明人的发现，本发明提供了一种用于诊断感染性疾病的组合物，所述组合物包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
在本发明中，“WRS”是指色氨酰-tRNA合成酶，其也被称为色氨酸-tRNA连接酶、TrpRS和WARS。 WRS是介导色氨酸和tRNA的氨酰化反应的酶。 WRS由人类中的WARS基因编码，并且该蛋白质的氨基酸序列和mRNA核苷酸序列被认为是基因库检索号NP_004175.2（蛋白质）和基因库检索号NM_004184.3（mRNA核苷酸序列）。 WRS具有两种亚型：细胞质形式（WARS或色氨酰-tRNA合成酶，细胞质）和线粒体形式（WARS2或色氨酰-tRNA合成酶，线粒体）。本发明中的WRS优选为细胞质形式。
在本发明中，“表达”是指在细胞中产生蛋白质或核酸。“蛋白质”可与“多肽”或“肽”互换使用，例如，其指在天然状态蛋白质中常见的氨基酸残基聚合物。“多核苷酸”或“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸（DNA）或核糖核苷酸（RNA）。除非另有限制，否则它还包括以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交的天然核苷酸的已知类似物。“mRNA”是一种将遗传信息（基因特异性核苷酸序列）转移至核糖体的RNA，该核糖体在蛋白质合成期间指定来自特定基因的氨基酸序列。
“诊断”是指鉴别病理状态的存在或特征。本发明的诊断是确定WRS基因的表达水平，即测定WRS蛋白或WRS mRNA的水平以确定感染性疾病的病理存在或疾病。
当本发明的诊断组合物用于测定WRS蛋白的表达水平时，用于测定WRS蛋白表达水平的试剂可以是特异性结合WRS蛋白的抗体。
WRS蛋白可以源自包括人在内的哺乳动物，优选由SEQ ID No：1所代表的氨基酸序列。
“抗体”是指特异性结合抗原位点的免疫球蛋白。本发明的抗体不与包含WRS以外的该合成酶的其他蛋白质反应，是仅与WRS蛋白质特异性结合的抗体。 WRS抗体可以通过将WRS基因克隆到表达载体中以获得由该基因编码的蛋白质而产生，并且可以根据本领域常规方法从获得的蛋白质进行制备。包含WRS抗原位点的WRS蛋白片段可用于制备WRS蛋白特异性抗体。本发明抗体的形式没有特别限制，包括多克隆抗体或单克隆抗体。另外，如果它具有抗原-抗体结合性质，则全部抗体中的一些也包含在本发明的抗体中，并且包括与WRS特异性结合的各种免疫球蛋白抗体。例如，它包括具有两条全长轻链和两条全长重链的完整形式的抗体以及抗体分子的功能片段，即具有抗原结合功能的(Fab)，F(ab')2，F(ab')2和Fv。此外，本发明的抗体只要能够与WRS蛋白质特异性结合的特异性抗体，例如人源化抗体、嵌合抗体和重组抗体。
在本发明中，WRS蛋白优选包含由SEQ ID NO：1表示的人WRS氨基酸序列。本发明中与WRS蛋白特异性结合的抗体可优选为与具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白质进行特异性结合的抗体。本发明的诊断用组合物包含作为用于测定WRS表达水平的试剂的WRA特异性抗体，还进一步包含检测蛋白质的常规方法中所需的制剂，可不受限制地使用本领域已知的用于检测已知蛋白质的方法来测定受试者中的WRS蛋白水平。
同时，当本发明的诊断组合物用于测定WRS mRNA的表达水平时，用于测定WRSmRNA表达水平的试剂可以是特异性结合WRS mRNA的探针或引物组。
WRS mRNA可以源自包括人的哺乳动物，并且优选可包括如SEQ ID NO：2所示的人WRS的mRNA序列。本发明的诊断组合物包含使用WRS mRNA特异性探针或特异性引物组来测定WRS表达水平的试剂，还可以进一步包含用于检测RNA的常规方法中所必需的制剂。使用该组合物检测已知RNA的方法可以不受限制地用于测定受试者中WRS mRNA的水平。
“引物”是短单链寡核苷酸，其作为DNA合成的起始点。引物在合适的缓冲液和温度条件下特异性结合作为模板的多核苷酸，并且通过DNA聚合酶添加具有与模板DNA互补的碱基的核苷三磷酸来合成DNA。引物通常由15至30个核苷酸序列组成，并且解链温度（Tm）根据碱基结构和长度而变化。
引物的序列不需要具有与模板的部分核苷酸序列完全互补的序列，并且互补核苷酸在能够与模板杂交并充当引物的范围内具有足够的互补性就足够了。因此，本发明中用于测定WRS mRNA表达水平的引物不需要具有与WRS基因序列完全互补的序列，但是通过DNA扩增WRS mRNA或WRS cDNA的特定长度以具有一长度和互补性用于测定WRS mRNA量就足够了。用于扩增反应的引物分别由互补结合至待扩增的WRS mRNA特定区域末端的模板（或正义）和相对区域（反义）的1组（对）引物组成。参考WRS mRNA或cDNA序列，本领域技术人员可以容易地设计引物。
本发明的引物优选为与SEQ ID NO：2所示的WRS mRNA的核苷酸序列特异性结合的一组或一对引物，引物对最优选为如由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。
“探针”是指多核苷酸的片段，例如具有数至数百个碱基对长度的RNA或DNA，其可特异性结合特定基因的mRNA或cDNA（互补DNA）。而且，探针被标记以便可以确认待结合的mRNA或cDNA的存在或表达水平。为了本发明的目的，通过与受试者的样本进行杂交来测定WRS mRNA的表达水平，可以将与WRS mRNA互补的探针用于感染性炎性疾病的诊断。探针的选择和杂交条件可以根据本领域已知的技术适当选择。
本发明的引物或探针可以使用亚磷酰胺固体载体合成法或其他公知的方法进行化学合成。另外，可以根据本领域已知的方法以各种方式修饰引物或探针，只要它不干扰与WRS mRNA的杂交即可。这种修饰的实例包括但不限于甲基化、加帽，用一个或多个天然核苷酸类似物取代，以及核苷酸如不带电的连接子（例如甲基膦酸酯，磷酸三酯，氨基磷酸酯和氨基甲酸酯）或带电缀合物（例如硫代磷酸酯和二硫代磷酸酯）之间的修饰，以及使用荧光或酶标记材料的组合。
在本发明中，感染是指一种或两种或更多种外来细菌（包括细菌、革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌）、病毒和真菌进入体内以定居、繁殖和寄生。感染性疾病可以是由于病原体感染而在活体内发生反应而引起的任何疾病。感染性疾病引起的反应可能包括炎症，疼痛，发热，疲劳，水肿和低血压。优选地，本发明的感染性疾病包括沙门氏菌病，食物中毒，伤寒，副伤寒，肺炎，肺结核，结核，脓毒症，感染性休克，尿路感染，膀胱炎，肾盂肾炎，尿道炎，前列腺炎，上呼吸道感染，中耳炎，更优选沙门氏菌病，食物中毒，肺炎，脓毒症和感染性休克。
在本发明中，脓毒症是一种全身性炎症反应综合征，它是一种感染性疾病的并发症。当无法快速准确地诊断脓毒症的原因时，其会导致引起死忙的致命的疾病，包括严重的脓毒症，感染性休克，引起肺、肾、肝、循环系统等功能障碍的多器官功能障碍综合征（MODS），弥散性血管内凝血（DIC），急性呼吸窘迫综合征（ARDS）或急性肾损伤（AKI）。
如本文所用，脓毒症包括以下疾病的最后阶段相关的脓毒症，所述以下疾病包括脓毒症，重症脓毒症，感染性休克和多器官功能障碍综合征（MODS），弥散性血管内凝血综合征（DIC），急性呼吸窘迫综合征（ARDS）或急性肾损伤（AKI），但不限于此。
本发明还提供了一种用于诊断感染性疾病的试剂盒，所述试剂盒包含用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂。
本发明的诊断试剂盒可以包括一种或多种适用于测定方法中的其他组分组合物、溶液或装置，以及包括作为选择性识别WRS蛋白的标记物的抗体或作为识别WRS mRNA的标记物的引物和探针。
在具体的实施方式中，诊断试剂盒可以是包含进行逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）所需的必需要素的诊断试剂盒。RT-PCR试剂盒含有一对用于标记基因的特异性引物。引物是具有一序列的核苷酸，该序列特异性对应于每个标记基因核苷酸序列，并且其长度为约7bp至50bp，更优选为约10bp至30bp。它也可能含有特异于对照基因核酸序列的引物。其他RT-PCR试剂盒包括试管或其他合适的容器，反应缓冲液（pH和各种镁浓缩液），脱氧核苷酸（dNTP），酶如Taq聚合酶和逆转录酶，DNAse，RNA酶抑制剂，DEPC水（DEPC-水）和无菌水。
本发明的另一方面可以是一种诊断试剂盒，其特征在于包括用于执行DNA芯片所需的必需元件。 DNA芯片试剂盒可由其上附着有对应于基因或其片段的cDNA或寡核苷酸的平板，以及用于产生荧光标记探针的试剂、制剂和酶组成。该平板还可以包含对应于对照基因或其片段的cDNA或寡核苷酸。最优选地，其可以为一种试剂盒，其特征在于包含进行ELISA所需的必需元件。ELISA试剂盒含有对标记蛋白具有特异性的抗体。抗体包括对每种标记蛋白具有高特异性和亲和力的单克隆抗体，多克隆抗体或重组抗体，并且与其他蛋白几乎没有交叉反应性。 ELISA试剂盒还可以包括对对照蛋白具有特异性的抗体。其他ELISA试剂盒包括能够检测结合抗体的试剂，例如标记的第二抗体，发色团，酶（与抗体缀合的形式）及其底物或能够结合抗体的其他物质。另外，本发明的试剂盒可以去除用酶和未结合的蛋白质显色的底物，并且可以包括只能保留结合的蛋白标记物的洗涤液或洗脱液。
用于分析的样本包括能够鉴别感染性炎性疾病特异性蛋白的生物样本，该特异性蛋白可从健康状态（例如血液，血清，尿液，泄漏物和唾液）区分。优选地，其可以从生物液体样本如血液，血清和血浆中测定。样本可被制备以提高蛋白标记物的检测灵敏度。例如，可以使用诸如阴离子交换色谱法，亲和色谱法，尺寸排阻色谱法，液相色谱法，顺序提取或凝胶电泳等方法对从患者获得的血清样本进行预处理。
本发明还提供了一种在需要获得诊断传染病所需信息的受试者中检测色氨酰-tRNA合成酶的方法，所述方法包括：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）将受试者的色氨酰-tRNA合成酶的水平与健康受试者的色氨酰-tRNA合成酶的水平进行比较，并确定与健康受试者相比，具有增加的色氨酰-tRNA合成酶的表达水平的受试者已经感染了感染性疾病。
发明人首先发现WRS可以作为新型感染性疾病的标记物，并提供了测定WRS表达水平的方法，以提供诊断感染性疾病所需的信息。以下，将描述本发明的方法。
本发明的方法的（a）步骤是提供测试对象的样本。
样本可以没有限制地使用，只要它是从被诊断为患有感染性疾病的受试者收集即可。例如，样本可以是通过活检获得的细胞或组织，血液，全血，血清，血浆，唾液，脑脊液，各种分泌物，尿液和粪便。优选血液，血浆，血清，唾液，鼻粘液，痰，荚膜液，羊水，腹水，宫颈或阴道分泌物，尿液和脑脊液。最优选血液，血浆或血清。
本发明的方法的（b）步骤是测定（a）步骤中提供的样本中WRS的表达水平。WRS的表达水平可以是WRS蛋白或WRS mRNA的表达水平。
WRS蛋白水平可以使用特异性结合WRS蛋白的抗体来检测或测定。WRS蛋白特异性抗体如本发明的诊断组合物中所述。
本领域已知用于测定WRS蛋白表达水平的方法可以没有限制地使用，其实例包括Western蛋白免疫印迹，点印迹，酶联免疫吸附测定（ELISA），放射免疫测定（RIA），放射免疫扩散，触变免疫扩散，火箭免疫电泳，免疫组织化学染色，免疫沉淀分析，补体结合分析，FACS和蛋白质芯片，但不限于此。优选地，可以使用ELISA方法。
WRS mRNA水平可通过使用特异性结合WRS mRNA的引物组或探针扩增来自受试者样本的WRS的mRNA或cDNA或通过与探针杂交以扩增样本中的WRS mRNA来确定。 WRS的引物和探针与本发明的诊断组合物中所述的相同。 WRS mRNA的表达水平的测定可以通过本领域已知的方法进行而没有任何限制。例如，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），竞争性RT-PCR，实时RT-PCR，RNA酶保护测定（RPA），northern免疫印迹，DNA微阵列芯片，RNA测序，使用纳米串的杂交和原位组织切片的杂交，但不限于此。
（c）将受试者的色氨酰-tRNA合成酶的水平与健康受试者的色氨酰-tRNA合成酶的的水平进行比较，并确定与健康受试者相比，具有增加的色氨酰-tRNA合成酶的表达水平的受试者已经感染了感染性疾病。
上述步骤（b）的方法测量的受试者的WRS的表达水平与通过相同方法测量的健康人的WRS水平进行比较。如果与正常健康人相比，WRS表达水平增加，则确定受试者患有感染性疾病。此外，如果感染性疾病是脓毒症，WRS表达水平越高，则脓毒症可能越严重。至于作为诊断基础的WRS表达水平的增加程度，根据本领域已知的用于测量所选择的WRS的表达水平的方法的技术，分析了WRS的表达水平和脓毒症的严重程度之间的相关性，以及适当的诊断标准可被提供以根据WRS表达水平的范围预示脓毒症的严重程度。在本发明的一个实施方式中，已显示具有以下的密切相关性：WRS的表达水平越高，通过使用各种指标，脓毒症的严重程度越高，所述指标如严重脓毒症，感染性休克，SOFA评分以及脓毒症诊断28天后的存活率。
在本发明的一个实施方式中，在研究者的临床试验中，与存活患者相比，在死亡患者血清中表达的WRS的量显著增加。已经证实常规使用的标记物降钙素原无法区分上述特征。
因此，本发明提供了一种用于确定感染性疾病的死亡风险的组合物，所述组合物包含用于测量色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂。
在本发明中，死亡风险是指感染性疾病的死亡风险。由于感染导致的死亡显示出炎症、高热、疼痛、呼吸困难、体温过低和低血压中的一些或全部症状，并且这意味着死亡是由休克、部分或多个器官衰竭引起的。
此外，本发明提供了一种确定患有感染性疾病的受试者的死亡风险的方法，所述方法包括：
（a）提供受试者的样本；
（b）测定样本中色氨酰-tRNA合成酶的表达水平；和
（c）确定受试者的死亡风险随色氨酰-tRNA合成酶水平的增加而成比例地增加。
本发明的鉴别方法中的样本如上所述。
本发明提供了一种用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂在制备用于诊断感染性疾病的试剂中的应用。
本发明提供了一种用于在有需要的受试者中诊断感染性疾病的方法，所述方法包括测量有需要的受试者的样本中的色氨酰-tRNA合成酶蛋白质或mRNA表达水平。
本发明提供了一种用于测定色氨酰-tRNA合成酶蛋白或mRNA表达水平的试剂在制备用于确定患有感染性疾病的受试者的死亡风险的试剂中的应用。
本发明的受试者可以是需要诊断的动物，优选动物，包括哺乳动物，特别是人，更优选人或患者。
在本发明中，用于诊断感染性疾病的方法是比较测得的测试样本与健康人的WRS水平，并确定与健康人相比，WRS表达水平增加的受试者感染了该疾病。与此类健康人的比较如上所述。
本发明的术语“包含”与“含有”或“特征是”同义使用，并且不排除组合物或方法中未提及的其他组分或方法。术语“由...组成”排除未另外提及的其他元素、步骤或组件。术语“基本上由......组成”是指除上下文中提及的组合物或方法外，基本上不影响其基本性质的物质或步骤。
技术效果
因此，根据本发明，在本发明中，WRS仅在感染诱导的炎性疾病中增加，由此可区分非感染性疾病，并且其在感染早期迅速增加。此外，WRS的水平与感染引起的疾病或并发症的严重程度和预后密切相关。因此，与用于感染性疾病或其并发症的常规标记物相比，WRS可作为一种标记物以更快速和准确的诊断。
附图说明
图1显示了在腹腔内注射106，107或108CFU的鼠伤寒沙门氏菌S. Typhimurium (ST)的小鼠的腹膜灌洗液内通过ELISA测量的感染后WRS随时间的变化。横坐标表示ST感染后（ST接种后的时间（小时））后获得的腹部渗出液的时间。
图2显示了用于测定病毒感染后WRS分泌方式的ELISA测试结果。
图2A显示了在用RSV（MOI = 2）或PR8病毒（MOI = 2）感染的外周血单核细胞（PBMC）的培养基中存在的WRS水平的时程。
图2B显示了测定存在于健康（HC，n = 20）和病毒性肺炎（n = 5）患者血清中的WRS水平的ELISA结果。统计显著性采用Mann Whitney检验，*表示的p值为0.04。
图3A显示了测定存在于健康对照（H.C），严重脓毒症和感染性休克患者的血清中的WRS水平的ELISA结果。
图3B和3C分别显示了测定存在于健康对照（HC）和脓毒学症患者的血清中的GRS或KRS水平的ELISA结果（图3A中的统计显著性通过Kruskal Wallis检验后的Dunn's比较试验来确定。图3B和3C通过双尾Mann-Whitney检验确定，***表示p <0.001，*表示p <0.05，ns表示统计差异不显著）。
图4A显示了测定存在于健康对照（H.C.）和真菌感染的脓毒症患者的血清中的WRS水平的ELISA结果。
图4B和4C分别显示了测定存在于健康对照（HC）和脓毒症患者的血清中的GRS或KRS水平的ELISA结果（通过双尾Mann-Whitney检验确定统计学显著性，***表示p <0.001，*表示p <0.05，ns表示统计差异不显著）。
图5A显示了测定存在于革兰氏阳性菌感染患者和真菌感染患者的血清中的WRS水平的ELISA结果。
图5B显示了测定存在于单一感染和多重感染患者的血清中的WRS水平的ELISA结果（统计学显著性通过Kruskal Wallis检验后的dunn's比较测验确定。***指示p <0.001，*指示p <0.05， ns表示统计差异不显著）。
图6显示了与健康对照（Hc）相比，具有全身炎症反应综合征（SIRS，图6A），哮喘（ASA，图6B，如无菌慢性炎性疾病），类风湿性关节炎（RA，图6C）以及干燥综合征（SS，图6C）的患者的WRS水平的结果图。
图7显示了WRS的ROC曲线。
图8显示了CRP的WRS和SOFA评分之间的相关性图，其中r是皮尔逊相关系数，p是概率值。
图9显示了在脓毒症诊断28天后存活和死亡的患者的WRS水平。 mann whitney检验用于统计学显著性， ***表示p值是0.0007。
图10通过Spearman's关联分析证实了血清中的WRS水平和降钙素原水平。
具体实施方式
在下文中，将详细描述本发明。
然而，以下实施例是对本发明的说明，并且本发明不限于以下实施例。
临床实验
实验方法经首尔大学机构审查委员会许可（许可号1502-001-010）进行。从首尔国立大学健康中心收集健康对照的血清样本。来自99例脓毒症患者的血清样本是通过严重脓毒症或感染性休克重症监护室获得的。提供本实验中使用的血清的患者是那些被收入首尔大学附属医院重症监护室（ICU）的患者。只有确认细菌感染的患者参与了本实验。根据ACCP/SCCM共识会议（1992年）对严重脓毒症或感染性休克进行诊断。根据审查委员会的政策，在参与实验的所有患者的知情同意下进行实验。该实验也得到了首尔牙山医学中心审查委员会的批准。2014年1月至2015年7月，共有35名入住首尔西富兰斯医院过敏性哮喘门诊的患者参加了实验。根据症状和肺功能测试结果（使用支气管扩张剂后第1秒用力呼气容积（FEV1）增加12％以上），该实验包括26名健康对照和35名稳定哮喘患者。稳定型哮喘定义为在过去一个月内维持常规剂量的药物而不增加给药的哮喘患者。临床试验由西富兰斯医院和延世大学健康系统批准（许可号4-2013-0397）。收集42例原发性干燥综合征（pSS）患者、35例类风湿关节炎（RA）患者和20例健康对照的血清。根据PSS的美国-欧洲共识小组的标准诊断或2012年美国风湿病学会标准来诊断原发性干燥综合征。根据1987年修订的类风湿性关节炎分类标准或2010年类风湿性关节炎分类标准来诊断类风湿性关节炎。根据赫尔辛基宣言的原则，参与实验的所有患者和健康对照都获得了实验的知情同意。该实验得到了首尔圣玛丽医院评审委员会（KC13ONMI0646）的批准。
临床实验-与降钙素原比较
根据各机构的审查委员会政策，获得参与实验的所有患者（包括120名健康人，18名SIRS患者（由于感染性疾病以外的原因），166名脓毒症患者和160名毒血性休克患者）的知情同意。根据ACCP/SCCM共识会议（1992年），对首尔国立大学附属医院ICU患者获得的全身炎症反应综合征（SIRS）、脓毒症和感染性休克进行诊断。
使用ELISA试剂盒测顶血清中降钙素原（RayBiotech，美国目录号：ELH-PROCALC）和WRS（CUSABIO，中国目录号：CSB-E11789h）的水平。
细胞培养
使用含有柠檬酸钠的细胞制备管（CPTTM，becton dickinson）分离人外周血单核细胞（PBMC）。
细菌菌株和感染
鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium（ATCC 14028）从韩国首尔的微生物保存中心获得。使用BD生物科学的营养肉汤常规培养细菌。感染前将细菌温育过夜并以1×108 CFU的密度获得。使用600nm处的吸光度和校准曲线估计细菌密度。对于PBMC或小鼠感染实验，用PBS洗涤细菌并将其再分散于无血清培养基或PBS中。
酶联免疫吸附试验，ELISA
为了定量分析小鼠和人的WRS和KRS，通过ELISA试剂盒测定培养基或血清中分泌的蛋白质的量。WRS ELISA试剂盒购自Cusabio（中国武汉，目录号CSB-E11789h），KRS购自USCN（中国武汉，目录号SED002 Hu）。
统计
当可证性值（p值）小于0.05时确定统计显著性。所有统计计算均使用Graphpadprism 5.0（GraphPad Software）进行。
实施例1> 由于细菌或病毒感染引起的WRS水平增加
<1-1> 沙门氏菌感染的WRS分泌
将沙门氏菌Salmonellatypimurium注射到小鼠腹腔中以确认存在于腹膜渗出物中的WRS的量。
在9-10周龄时将106，107或108CFU的沙门氏菌腹膜内注射入雌性C57BL / 6，并且在细菌感染后每小时直至4小时从5只至11只小鼠获得腹膜渗出物，以通过ELISA测定存在于腹膜渗出物中的WRS的量（图1）。由腹膜渗出物分泌的WRS从沙门氏菌感染后的最初阶段分泌，并且根据沙门氏菌浓度而增加。感染后1小时几乎达到WRS的量。
<1-2> 由病毒感染引起的WRS的分泌
除了细菌之外，我们使用人外周血单核细胞和病毒性肺炎的血清通过病毒感染来检测WRS的分泌。
当人外周血单核细胞（PBMC）感染呼吸道合胞病毒（RSV）和PR8病毒（如流感病毒）时，WRS在感染后30分钟时在细胞培养基中显著增加，并且证实在实施实验的感染后4小时维持分泌的WRS（图2中的A）。另外，证实与健康对照（H.C）相比，病毒性肺炎患者血清中WRS的量显著增加（图2中的B）
这些结果表明WRS的水平因病毒感染而增加。
实施例2> WRS特异性分泌在感染性炎性疾病中的作用
<2-1> 脓毒症和感染性休克患者的WRS增加
将由于感染引起的脓毒症和感染性休克患者的WRS水平与健康对照进行比较。
参加本次实验的脓毒症患者为首尔牙山医疗中心ICU入院的严重脓毒症和感染性休克患者。在患者中检测到的细菌和真菌如表1中所述。
与健康对照（H.C）相比，严重脓毒症患者和感染性休克患者的WRS水平显著增加（图3A）。与在健康对照中为0.18±0.06ng/ml（n = 20）相比，在脓毒症患者为2.63±0.62ng/ml（n = 37），其测得的WRS值增加约20倍。另外，感染性休克患者的WRS水平为6.35±0.90ng/ml（n = 63），比健康对照高约50倍。感染性休克患者的WRS水平远高于严重脓毒症患者，说明WRS水平与脓毒症的严重程度密切相关。
与健康对照组相比，脓毒症患者的WRS水平显著增加，而分泌到不同类型的甘氨酰-tRNA合成酶（GRS）和赖氨酰-tRNA合成酶（KRS）（如氨酰tRNA合成酶（ARS））没有显著变化（图3B和3C）。
表1
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同时，如图4所示，在患有细菌感染和真菌感染脓毒症的患者的血清中WRS的水平增加（n = 84.52±1.83ng/ml，Mann-Whitney检验）。血清GRS和KRS水平没有显著变化。
在上述脓毒症患者中，革兰氏阴性菌感染患者（n = 625.98±0.93 ng/ml），革兰氏阳性菌感染患者（n = 252.87±0.72 ng/ml）和真菌感染患者（n = 84.52±1.83 ng/ml）均没有显著差异，多重病原体患者（n = 11，3.53±1.22 ng/ml）和单一病原体患者（n =945.01±0.67 ng/ml）也没有显著差异（图5）。
<2-2> 非感染性炎性疾病中的WRS水平
将与非感染性炎症反应综合征（全身炎症反应综合征，SIRS），哮喘（例如无菌慢性炎症性疾病），类风湿性关节炎和干燥综合征患者中的WRS水平与健康对照进行比较。
存在于这些非感染性炎性疾病患者血清中的WRS水平与健康对照没有显著差异（图6）。在全身性炎症反应综合征（图6A），哮喘患者（图6B），类风湿性关节炎患者（图6C）和干燥综合征患者（图6C）的血清中检测到的WRS均为无统计学显著性差异。
实施例3> WRS作为感染性炎性疾病的诊断标记物的功效
<3-1> WRS作为感染性炎性疾病标记物的性能
为了确认WRS作为感染性炎性疾病标记物的性能，制得受试者工作特征曲线（ROC曲线）。
100位细菌感染的脓毒症患者的ROC曲线上的wrs的AUC为0.90（p <0.0001），截止值为0.28ng/ml，灵敏度为82％，特异性为80％（图7）。
<3-2> WRS水平、感染性炎性疾病严重程度与预后之间的相关性
为了进一步证实WRS作为感染性炎性疾病标记物的性能，我们研究了WRS水平、脓毒症严重程度和脓毒症预后之间的相关性。
序贯器官衰竭估计评分（SOFA评分），表示脓毒症患者预后、患者血清中检测到的WRS或CRP水平，其以图形显示，并计算皮尔逊相关系数（图8）。
WRS的皮尔逊相关系数为0.43，明显高于CRP的0.15，并显示出统计学显著的相关性。换句话说，WRS水平与脓毒症患者的SOFA评分之间的相关性高于作为现有炎症指标的CRP。
另外，测定脓毒症诊断28天后的WRS的存活率和水平作为脓毒症患者的预后的其他指标，通过Whitney检验（图9）确定统计学显著性。在脓毒症诊断28天后死亡的患者（死亡，n = 27，WRS 9.14 + 1.63 ng/ml；存活，n = 72，WRS 3.36 + 0.49 ng/ml）中WRS水平存在统计学显著差异。因此，WRS水平越高，脓毒症的生存预后越差。
实施例4> 与降钙素原比较
<4-1> 血清中的含量的比较
根据制造说明书，采用ELISA测定存在于120名健康受试者、18名SIRS患者（非感染引起）、166名脓毒症患者以及160名感染性休克患者的血清中的WRS（CUSABIO，中国目录号：CSB-E11789h）和已知作为主要炎症标记物的降钙素原（RayBiotech，美国目录号：ELH-PROCALC）的量。
结果如表2所示，与正常人相比，降钙素原可从非感染性全身炎症症状SIRS中加以区分，并且在感染性疾病的并发症即脓毒症或感染性休克中检测到更多量的降钙素原。但是，WRS被发现仅限于感染性疾病的并发症。
表2 WRS和降钙素原在健康对照和患者中的比较
Figure DEST_PATH_IMAGE002
<4-2> 存活量的比较
根据28天后的存活情况，将脓毒症和感染性休克患者分为幸存组和死亡组。 按照上面的实施例<4-1>定量测定各组患者血清中WRS和降钙素原的含量。
如下表3所示，在降钙素原的情况下，存活着者与死亡者之间没有区别，但WRS被分类为具有统计学意义，并且证实可以选择患有死亡恐惧的患者。
表3 WRS与降钙素原在存活和死亡患者中的比较
Figure DEST_PATH_IMAGE003
<4-3> 降钙素原的相关性分析
为了证实降钙素原与WRS的常规诊断之间的相关性，使用WRS和降钙素原测量值对脓毒症患者进行斯皮尔曼相关性分析。
如图10所示，证实了斯皮尔曼的rho值（r）为0.127，WRS与降钙素原之间的p值为0.022。
工业实用性
正如我们所看到的，WRS仅在感染引起的感染性疾病中增加，从而区分非感染性疾病，并且在感染早期迅速增加。此外，WRS的水平与感染引起的疾病或并发症的严重程度和预后密切相关。因此，与用于感染性疾病或其并发症的常规标记物相比，WRS可作为一标记物以更快速和准确的诊断。
序列表
<110> JW生物科学股份有限公司
<120> 使用色酰胺-tRNA合成酶诊断感染病或其并发症的组合物以及检测诊断标记物的方法
<150> KR 10-2015-0123743
<151> 2015-09-01
<150> KR 10-2016-0025329
<151> 2016-03-02
<150> PCT/KR2016/009802
<151> 2016-09-01
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 471
<212> PRT
<213> human WRS protein (tryptophan-tRNA ligase, cytoplasmic isoform a, NP_004175.2)
<400> 1
Met Pro Asn Ser Glu Pro Ala Ser Leu Leu Glu Leu Phe Asn Ser Ile
1 5 10 15
Ala Thr Gln Gly Glu Leu Val Arg Ser Leu Lys Ala Gly Asn Ala Ser
20 25 30
Lys Asp Glu Ile Asp Ser Ala Val Lys Met Leu Val Ser Leu Lys Met
35 40 45
Ser Tyr Lys Ala Ala Ala Gly Glu Asp Tyr Lys Ala Asp Cys Pro Pro
50 55 60
Gly Asn Pro Ala Pro Thr Ser Asn His Gly Pro Asp Ala Thr Glu Ala
65 70 75 80
Glu Glu Asp Phe Val Asp Pro Trp Thr Val Gln Thr Ser Ser Ala Lys
85 90 95
Gly Ile Asp Tyr Asp Lys Leu Ile Val Arg Phe Gly Ser Ser Lys Ile
100 105 110
Asp Lys Glu Leu Ile Asn Arg Ile Glu Arg Ala Thr Gly Gln Arg Pro
115 120 125
His His Phe Leu Arg Arg Gly Ile Phe Phe Ser His Arg Asp Met Asn
130 135 140
Gln Val Leu Asp Ala Tyr Glu Asn Lys Lys Pro Phe Tyr Leu Tyr Thr
145 150 155 160
Gly Arg Gly Pro Ser Ser Glu Ala Met His Val Gly His Leu Ile Pro
165 170 175
Phe Ile Phe Thr Lys Trp Leu Gln Asp Val Phe Asn Val Pro Leu Val
180 185 190
Ile Gln Met Thr Asp Asp Glu Lys Tyr Leu Trp Lys Asp Leu Thr Leu
195 200 205
Asp Gln Ala Tyr Ser Tyr Ala Val Glu Asn Ala Lys Asp Ile Ile Ala
210 215 220
Cys Gly Phe Asp Ile Asn Lys Thr Phe Ile Phe Ser Asp Leu Asp Tyr
225 230 235 240
Met Gly Met Ser Ser Gly Phe Tyr Lys Asn Val Val Lys Ile Gln Lys
245 250 255
His Val Thr Phe Asn Gln Val Lys Gly Ile Phe Gly Phe Thr Asp Ser
260 265 270
Asp Cys Ile Gly Lys Ile Ser Phe Pro Ala Ile Gln Ala Ala Pro Ser
275 280 285
Phe Ser Asn Ser Phe Pro Gln Ile Phe Arg Asp Arg Thr Asp Ile Gln
290 295 300
Cys Leu Ile Pro Cys Ala Ile Asp Gln Asp Pro Tyr Phe Arg Met Thr
305 310 315 320
Arg Asp Val Ala Pro Arg Ile Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Leu Leu His
325 330 335
Ser Thr Phe Phe Pro Ala Leu Gln Gly Ala Gln Thr Lys Met Ser Ala
340 345 350
Ser Asp Pro Asn Ser Ser Ile Phe Leu Thr Asp Thr Ala Lys Gln Ile
355 360 365
Lys Thr Lys Val Asn Lys His Ala Phe Ser Gly Gly Arg Asp Thr Ile
370 375 380
Glu Glu His Arg Gln Phe Gly Gly Asn Cys Asp Val Asp Val Ser Phe
385 390 395 400
Met Tyr Leu Thr Phe Phe Leu Glu Asp Asp Asp Lys Leu Glu Gln Ile
405 410 415
Arg Lys Asp Tyr Thr Ser Gly Ala Met Leu Thr Gly Glu Leu Lys Lys
420 425 430
Ala Leu Ile Glu Val Leu Gln Pro Leu Ile Ala Glu His Gln Ala Arg
435 440 445
Arg Lys Glu Val Thr Asp Glu Ile Val Lys Glu Phe Met Thr Pro Arg
450 455 460
Lys Leu Ser Phe Asp Phe Gln
465 470
<210> 2
<211> 1416
<212> DNA
<213> human WRS mRNA (tryptophanyl-tRNA synthetase (WARS), transcriptvariant 1, NM_004184.3)
<400> 2
atgcccaaca gtgagcccgc atctctgctg gagctgttca acagcatcgc cacacaaggg 60
gagctcgtaa ggtccctcaa agcgggaaat gcgtcaaagg atgaaattga ttctgcagta 120
aagatgttgg tgtcattaaa aatgagctac aaagctgccg cgggggagga ttacaaggct 180
gactgtcctc cagggaaccc agcacctacc agtaatcatg gcccagatgc cacagaagct 240
gaagaggatt ttgtggaccc atggacagta cagacaagca gtgcaaaagg catagactac 300
gataagctca ttgttcggtt tggaagtagt aaaattgaca aagagctaat aaaccgaata 360
gagagagcca ccggccaaag accacaccac ttcctgcgca gaggcatctt cttctcacac 420
agagatatga atcaggttct tgatgcctat gaaaataaga agccatttta tctgtacacg 480
ggccggggcc cctcttctga agcaatgcat gtaggtcacc tcattccatt tattttcaca 540
aagtggctcc aggatgtatt taacgtgccc ttggtcatcc agatgacgga tgacgagaag 600
tatctgtgga aggacctgac cctggaccag gcctatagct atgctgtgga gaatgccaag 660
gacatcatcg cctgtggctt tgacatcaac aagactttca tattctctga cctggactac 720
atggggatga gctcaggttt ctacaaaaat gtggtgaaga ttcaaaagca tgttaccttc 780
aaccaagtga aaggcatttt cggcttcact gacagcgact gcattgggaa gatcagtttt 840
cctgccatcc aggctgctcc ctccttcagc aactcattcc cacagatctt ccgagacagg 900
acggatatcc agtgccttat cccatgtgcc attgaccagg atccttactt tagaatgaca 960
agggacgtcg cccccaggat cggctatcct aaaccagccc tgctgcactc caccttcttc 1020
ccagccctgc agggcgccca gaccaaaatg agtgccagcg accccaactc ctccatcttc 1080
ctcaccgaca cggccaagca gatcaaaacc aaggtcaata agcatgcgtt ttctggaggg 1140
agagacacca tcgaggagca caggcagttt gggggcaact gtgatgtgga cgtgtctttc 1200
atgtacctga ccttcttcct cgaggacgac gacaagctcg agcagatcag gaaggattac 1260
accagcggag ccatgctcac cggtgagctc aagaaggcac tcatagaggt tctgcagccc 1320
ttgatcgcag agcaccaggc ccggcgcaag gaggtcacgg atgagatagt gaaagagttc 1380
atgactcccc ggaagctgtc cttcgacttt cagtag 1416
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> human WRS forward primer (hTrpRS forward)
<400> 3
atgcccaaca gtgagccc 18
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> human WRS reverse primer (hTrpRS reverse)
<400> 4
ctaccctgga ggacagtcag cctt 24

Claims (9)

1.一种用于测定人的色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂在制备用于诊断脓毒症或感染性休克的试剂中的应用；
所述人的色氨酰-tRNA合成酶蛋白包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
2.一种用于测定人的色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂在制备用于确定患有脓毒症或感染性休克的受试者的死亡风险的试剂中的应用；
所述人的色氨酰-tRNA合成酶蛋白包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述脓毒症或感染性休克是由选自病毒、细菌和真菌中的一种或多种感染引起。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂为特异性结合至所述人的色氨酰-tRNA合成酶蛋白的抗体。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂为特异性结合至所述人的色氨酰-tRNA合成酶mRNA的探针或引物组。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述人的色氨酰-tRNA合成酶mRNA包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述引物组的序列如SEQ ID NO：3和SEQID NO：4所示。
9.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，用于测定人的色氨酰-tRNA合成酶蛋白或色氨酰-tRNA合成酶mRNA表达水平的试剂包含在组合物或试剂盒中。
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